生物化学实验
生物化学实验原理和方法
生物化学实验原理和方法
生物化学实验是研究生物体内化学反应的实验方法，主要用于研究生物体内分子结构、代谢途径、蛋白质结构和功能等方面的问题。
生物化学实验的基本原理是利用生物体内的生物分子（如蛋白质、核酸、酶等）进行化学反应或与其他物质相互作用，从而检测、分离或定量这些分子。
生物化学实验主要包括以下几个方面的原则和方法：
1. 分离与纯化：将某一特定生物分子从其他组分中分离出来，获得纯净的样品。
常用方法包括离心、电泳、柱层析、过滤等。
2. 分析与测定：对生物分子的含量、结构和性质进行定量或定性的研究。
常用方法包括分光光度法、荧光法、比色法、拉曼光谱等。
3. 酶反应：酶是生物体内催化生物化学反应的一类蛋白质，其活性与底物浓度、温度、pH值等因素有关。
通过测定底物转化率来研究酶的活性。
常见的酶反应方法有酶解反应、酶促进反应等。
4. 蛋白质分析：蛋白质是生物体内最为重要的分子之一，可以通过电泳、质谱、Western blot等方法进行分析，从而了解蛋白质的结构、含量和功能。
5. 核酸分析：核酸是生物体内遗传信息的主要载体，可以通过PCR、凝胶电泳、
Southern blot等方法进行分析，用于检测基因的突变、限制性片段长度多态性等。
以上是一些常用的生物化学实验原理和方法，实际的生物化学实验会根据具体的研究目的和问题而选择适合的方法和技术。
生物化学课内实践教学(3篇)
第1篇一、前言生物化学作为一门研究生物体内化学反应及其调控规律的学科，在生命科学领域具有极其重要的地位。
为了让学生更好地理解和掌握生物化学的理论知识，提高学生的实验技能和科学素养，我们开展了生物化学课内实践教学活动。
本文将对本次实践教学进行总结和分析。
二、实践内容1. 蛋白质鉴定实验（1）实验目的：掌握蛋白质的鉴定方法，了解蛋白质在生物体内的作用。
（2）实验原理：蛋白质具有特定的氨基酸序列，通过特定的化学反应，可以产生具有特定颜色的化合物，从而实现对蛋白质的鉴定。
（3）实验步骤：①制备蛋白质样品；②加入双缩脲试剂，观察颜色变化；③加入Folin-酚试剂，观察颜色变化；④计算蛋白质含量。
2. 酶活性测定实验（1）实验目的：掌握酶活性测定的方法，了解酶在生物体内的作用。
（2）实验原理：酶活性是指酶催化特定反应的能力，通过测定酶催化反应的速度，可以评估酶的活性。
（3）实验步骤：①制备酶反应体系；②测定酶催化反应的速度；③计算酶活性。
3. 核酸提取实验（1）实验目的：掌握核酸提取的方法，了解核酸在生物体内的作用。
（2）实验原理：核酸是生物体内的重要遗传物质，通过特定的方法可以将核酸从细胞中提取出来。
（3）实验步骤：①破碎细胞；②提取核酸；③检测核酸。
4. 脂质分离实验（1）实验目的：掌握脂质分离的方法，了解脂质在生物体内的作用。
（2）实验原理：脂质具有不同的极性，可以通过特定的方法将其分离。
（3）实验步骤：①制备脂质样品；②加入氯仿，观察分层现象；③分离脂质。
三、实践总结1. 通过本次实践教学，我们掌握了蛋白质、酶、核酸和脂质的鉴定、提取和分离方法，提高了我们的实验技能。
2. 在实验过程中，我们学会了如何设计实验方案、操作实验仪器和记录实验数据，为今后的科研工作打下了基础。
3. 通过实验，我们深入了解了生物体内化学反应及其调控规律，增强了我们对生物化学理论知识的理解。
四、实践反思1. 实验过程中，我们发现部分同学对实验原理掌握不牢固，导致实验结果不准确。
生物化学实验报告
生物化学实验报告实验目的，通过本次实验，掌握生物化学实验的基本方法和技能，了解生物化学实验的原理和应用，提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理，生物化学实验是利用生物化学原理和方法，对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器，本次实验所需材料包括，蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品；试剂，酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等；仪器，分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤：1. 蛋白质的定性实验，取少量蛋白质样品，加入蛋白质定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验，取少量核酸样品，加入核酸定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验，取少量酶样品，加入酶定性试剂，观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验，取少量碳水化合物样品，加入酚酞试剂，观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析，利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器，对生物分子进行定量分析。
实验结果分析，根据实验结果，可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析，从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论，通过本次实验，掌握了生物化学实验的基本方法和技能，了解了生物分子的定性和定量分析方法，提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义，生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节，通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解，为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中，我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法，还培养了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验，我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解，提高了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
生物化学实验报告
生物化学实验报告生物化学是一门研究生命体系中化学成分和物质转换过程的科学，其实验研究对于揭示生命的本质、改善人类生命质量具有重要意义。
本文将以实验报告的形式，介绍一次生物化学实验的设计、过程和结果。
一、实验目的本次实验的目的旨在从多个方面探究某种生物化学物质的结构、性质及功能，以及探索该物质在生命体系中的作用。
具体的实验目标包括：1. 通过化学方法及相关仪器对该化合物的分子结构进行分析和测定；2. 对该化合物的氧化还原性进行测定，并探究其可能的氧化还原反应机制；3. 通过光谱分析、酶活性测定等方法，确定该化合物在生命体系中的作用及其机制；4. 总结实验结果，探讨该化合物在生物化学领域中的应用及前景。
二、实验步骤本次实验主要包括以下步骤：1. 提取目标化合物。
选用某一生物体组织作为原料，在适当的化学反应条件下，经过酶促反应、液液抽提、柱层析等步骤，旨在获得目标化合物的高纯度样品。
2. 分析结构。
使用核磁共振(NMR)、高效液相色谱(HPLC)、紫外可见光谱(UV-vis)等现代科学仪器和技术，对提取的化合物进行结构分析和测定，以揭示化合物分子结构，及其性质和可能的反应机制。
3. 氧化还原性测定。
利用常用的氧化还原滴定法，对化合物的氧化还原性进行测定，及探究其可能的氧化还原反应机制。
4. 酶活性测定。
通过对该化合物活性酶的特定底物的催化反应，测定其反应速率及相关动力学参数，以推测该化合物在生命体系中的作用方式及机制。
5. 总结实验结果。
根据所测得的实验数据和分析结果，对该化合物的结构、性质及功能进行总结，即探讨其在生物化学领域中的应用及未来前景。
三、实验结果及分析根据实验数据和分析结果，我们可以得出以下结论：1. 通过化学反应及柱层析等步骤，我们从生物体组织中获得了目标化合物，并通过核磁共振(NMR)等技术分析，揭示了化合物的结构；2. 通过常用的氧化还原滴定法，我们测定了化合物的氧化还原性，并推测了其可能的氧化还原反应机制；3. 通过酶活性测定等方法，我们推测了该化合物在生命体系中的作用机制及性质，具体表现为一定的生物活性及催化能力；4. 综合以上实验结果，我们总结了该化合物在生物化学领域中的应用前景，并探讨了可能的发展方向及挑战。
生物化学实验(整理版)
生物化学实验（整理版）一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能，提高实验技能。
3. 培养科学探究能力，提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作：了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项：严格按照实验步骤进行操作，注意实验安全，保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式：包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
2. 实验报告的要求：内容完整、条理清晰、数据准确、分析深入、讨论充分、结论明确。
五、实验拓展1. 结合实验内容，查阅相关文献，了解生物化学领域的最新研究进展。
2. 尝试设计新的实验方案，对生物化学现象进行深入探究。
3. 参加学术讲座、研讨会等活动，拓宽生物化学知识面。
生物化学实验（整理版）一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能，提高实验技能。
3. 培养科学探究能力，提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作：了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项：严格按照实验步骤进行操作，注意实验安全，保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式：包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
生物化学的实验技术有哪些
生物化学的实验技术有哪些生物化学是一门研究生物体化学组成和生命过程中化学变化的学科，实验技术在生物化学的研究中起着至关重要的作用。
以下为您介绍一些常见的生物化学实验技术。
一、分光光度法分光光度法是一种基于物质对光的吸收特性来定量分析物质浓度的方法。
在生物化学中，常用于测定蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度。
例如，通过测量蛋白质在 280nm 处的吸光度，可以估算蛋白质的浓度。
分光光度法操作简便、快速，且灵敏度较高。
二、电泳技术电泳是指带电粒子在电场中向与其所带电荷相反的电极移动的现象。
在生物化学中，常用的电泳技术有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
琼脂糖凝胶电泳常用于分离和分析 DNA 片段，根据 DNA 片段的大小不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳则常用于分离蛋白质，能够分辨分子量差异较小的蛋白质。
三、层析技术层析技术是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离的方法。
常见的层析技术有凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
凝胶过滤层析根据分子大小进行分离，大分子先流出，小分子后流出。
离子交换层析基于分子所带电荷的不同来分离物质。
亲和层析则利用生物分子之间的特异性亲和力进行分离，具有很高的选择性。
四、离心技术离心是利用离心机旋转产生的离心力，使不同密度、大小的颗粒分离的技术。
在生物化学实验中，常用于分离细胞器、细胞组分、蛋白质复合物等。
差速离心通过逐渐提高离心速度，分步沉淀不同大小的颗粒。
密度梯度离心则是在离心管中形成密度梯度，使不同密度的颗粒在相应的密度区带中沉降，从而实现分离。
五、PCR 技术（聚合酶链式反应）PCR 技术是一种用于扩增特定 DNA 片段的分子生物学技术。
通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环过程，使 DNA 片段呈指数级扩增。
PCR 技术在基因诊断、基因克隆、基因突变检测等方面有着广泛的应用。
六、酶联免疫吸附测定（ELISA）ELISA 是一种利用抗原抗体特异性结合进行检测的技术。
大学生物化学实验报告
一、实验名称：蛋白质分子量测定——凝胶层析法二、实验目的：1. 了解凝胶层析法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用凝胶层析法测定蛋白质的分子量。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
三、实验原理：凝胶层析法是一种利用凝胶作为固定相，通过分子大小不同的物质在凝胶孔径中的移动速度差异来实现分离的方法。
在凝胶层析中，大分子物质不能进入凝胶内部的孔径，而小分子物质可以进入孔径，从而在洗脱过程中，大分子物质先流出，小分子物质后流出。
通过测量不同分子量蛋白质的洗脱体积，可以计算出其分子量。
四、实验材料与试剂：1. 凝胶层析柱（直径1.5cm，长30cm）2. 凝胶（聚丙烯酰胺凝胶）3. 蛋白质样品（已知分子量）4. 标准样品（已知分子量）5. 洗脱液（Tris-HCl缓冲液）6. 显色剂（考马斯亮蓝G-250）7. 移液器8. 旋转混匀器9. 分光光度计五、实验步骤：1. 准备凝胶层析柱：将凝胶倒入层析柱中，用洗脱液充分浸泡凝胶，直至凝胶膨胀并固定在层析柱中。
2. 准备样品：将蛋白质样品和标准样品分别稀释至适当浓度。
3. 加样：将蛋白质样品和标准样品分别加入凝胶层析柱中，用洗脱液洗脱，收集不同洗脱体积的洗脱液。
4. 显色：将收集到的洗脱液加入考马斯亮蓝G-250显色剂，室温下显色10分钟。
5. 测量：用分光光度计测定显色液在595nm处的吸光度值。
6. 数据处理：以标准样品的分子量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
根据蛋白质样品的吸光度值，从标准曲线上查得蛋白质的分子量。
六、实验结果：（此处插入实验数据表格，包括标准样品和蛋白质样品的分子量、洗脱体积、吸光度值等）七、实验分析：通过凝胶层析法，成功分离了蛋白质样品，并测定了其分子量。
实验结果表明，蛋白质样品的分子量与标准样品的分子量相符，说明实验操作正确。
八、讨论与心得：1. 凝胶层析法是一种简单、有效的蛋白质分离方法，可用于测定蛋白质的分子量。
2. 在实验过程中，要注意凝胶层析柱的制备、样品的加入和洗脱液的收集等操作步骤，以保证实验结果的准确性。
生物化学实验指导
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段，通过实验操作，我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验，提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备（一）了解实验目的在进行每个实验之前，务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注，并理解实验结果的意义。
（二）预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料，熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方，可以向老师或同学请教。
（三）准备实验用品根据实验要求，准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好，试剂是否过期，并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全（一）个人防护在实验过程中，要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品，以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性，遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂，如果不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。
（三）生物安全对于涉及生物样本的实验，要遵循生物安全操作规范，防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时，要在无菌条件下进行，并妥善处理废弃物。
（四）防火防爆实验室中严禁烟火，要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体，要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用（一）移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头，并进行校准。
移液时要保持垂直，缓慢按下和释放按钮，避免产生气泡。
（二）离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品，选择合适的转速和离心时间。
离心结束后，要等离心机完全停止转动后再打开盖子，以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准，选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁，溶液无气泡和杂质。
（四）pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
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实验一1、糖类的颜色反应1. α-萘酚反应糖在浓无机酸（硫酸或盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
注意：因糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，不是糖类的特异反应。
2. 间苯二酚反应在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反应是酮糖的特异反应。
因为醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
2、还原作用许多糖类由于其分子中含有自由的或潜在的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等金属离子还原，同时糖类本身被氧化成糖酸及其他产物。
糖类这种性质常被利用于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。
本实验所用的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。
它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还原糖氧化而本身被还原成红色（颗粒大）或黄色（颗粒小）的Cu2O沉淀。
实验二脂肪碘值的测定碘值（价）是指100g脂肪在一定条件下吸收碘的克数。
碘值是鉴别脂肪的一个重要常数，可用以判断脂肪所含脂肪酸的不饱和程度。
脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸具有一个或多个双键，能与卤素起加成作用而吸收卤素。
常用碘与脂肪中不饱和脂肪酸的双键起加成作用。
脂肪的不饱和程度越高，所含的不饱和脂肪酸越多，与其双键起加成作用的碘量就越多，碘值就越高。
故可用碘值表示脂肪的不饱和度。
I2+－CH=CH－－CHI－CHI－本实验用溴化碘(Hanus试剂)代替碘。
用一定量(必须过量)溴化碘和待测的脂肪作用后，用硫代硫酸钠滴定的方法测定溴化碘的剩余量，然后计算出待测脂肪吸收的碘量，求得脂肪的碘值。
加成作用：IBr+－CH=CH－－CHI－CHBr－剩余溴化碘中碘的释放：IBr + KI KBr + I2再用硫代硫酸钠滴定释放出来的碘：I2 +2Na2S2O3 2Na2S4O6+2NaI思考题：何谓空白溶液和空白实验？空白实验有何意义？在各种分析方法中，为消除干扰，用与测定试样时完全一致的条件进行测定的溶液。
意义：去除一些杂质的影响，使实验结果更有说服力实验三氨基酸的分离鉴定--纸层析法纸层析原理：在纸上，水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相，由于纤维素与水的氢键作用，使水不易扩散，并能与跟水混合的溶剂(有机相)形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相移动而进入无溶质的区域，这时又重新进行分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断进行分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移值）来表示的：原点到层析点中心的距离Rf＝____________________原点到溶剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数，Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量、展层方式、层析温度和pH等因素有关。
本实验利用纸层析法分离氨基酸。
思考题1．何谓纸层析法？2．何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？3．怎样制备扩展剂？将20ml正丁醇和5ml冰醋酸放入分液漏斗中，与15ml水混合充分振荡静置后分层，放出下层水层，上层即为扩展剂实验四蛋白质及氨基酸的呈色反应（一）双缩脲反应双缩脲反应:尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，能发生双缩脲反应。
这可用于蛋白质的定性或定量测定。
注意:①双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所特有，许多含有一个肽键和一个氨基的物质也能发生此反应如–CS-NH2，-CH2-NH2，O=C C=O 等。
NH2 NH2②NH3也干扰此反应，因为NH3与Cu2+可生成暗蓝色的络离子( Cu(NH3)42+ ，四氨合铜)。
因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
（二）茚三酮反应除脯氨酸，羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反应(尿素、马尿酸和肽键上的亚氨基不呈现此反应。
)因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定是蛋白质或氨基酸。
在定性定量测定中，应严防干扰物存在。
该反应十分灵敏，1：1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步：第一步是氨基酸被氧化形成二氧化碳，氨和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮。
第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
(此反应的适宜pH为5-7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同的pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
)（三）黄色反应含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。
(多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，注意苯丙氨酸不易硝化，需加入少量的浓硫酸才有黄色反应，该反应非常灵敏。
) （四）考马斯亮蓝反应考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。
在酸性溶液中，其以游离态存在呈棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。
(它染色灵敏度高，比氨基黑高3倍，反应速度快，约在2分钟达到平衡，在室温1小时内稳定，常用来定量测定蛋白质含量)通过本实验你掌握了几种鉴定蛋白质和氨基酸的方法？它们的原理是什么？实验五蛋白质的等电点测定和沉淀反应（一）蛋白质的等电点(pI)：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液酸碱度的影响，当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。
不同蛋白质各有其特异的等电点(pI)。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低(或沉淀量最多)时的溶液pH值。
本实验借观察不同pH缓冲液中溶解度以测定酪蛋白的等电点(二)蛋白质的沉淀及变性在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。
蛋白质的沉淀反应可以分为两类：(1)可逆的沉淀反应(不变性，如盐析作用或低温作用下用乙醇或丙酮短时间作用)(2)不可逆的沉淀反应(变性，如加热沉淀与凝固、与重金属离子或某些有机酸反应等)（变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性)思考题：何谓蛋白质的等电点和沉淀反应？有何实用意义？实验六酶的特性（一）温度对酶活力的影响：酶的催化作用受温度的影响。
在最适温度下，酶的反应速度最高。
(大多数动物酶的最适温度37℃-40℃，植物酶的最适温度为50-60℃。
)高温可以使酶失活，低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。
酶对温度的稳定性与其存在形式有关。
有些酶的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显改变，但在100℃的溶液中却很快地完全失去活性。
淀粉被唾液淀粉酶水解的产物有糊精和麦芽糖。
淀粉遇碘呈蓝色。
糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色、不呈色。
麦芽糖遇碘也不呈色。
因此，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
（二）pH对酶活性的影响：酶的活力受环境pH的影响极为显著。
不同酶的最适pH值不同。
本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。
(三)唾液淀粉酶的活化和抑制：酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。
氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为唾液淀粉酶的抑制剂。
(四)酶的专一性：酶具有高度的专一性。
本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。
(淀粉和蔗糖无还原性。
唾液淀粉酶水解淀粉最终生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。
蔗糖酶能催化蔗糖水解生成还原性的葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解。
用本尼迪克特试剂检查糖的还原性。
)思考题：1、什么是酶的最适温度和最适pH？答：相同条件下，酶活性最高时对应的PH值2、什么是酶的活化剂？、什么是酶的抑制剂？与变性剂有何区别？答：能加快酶促反应速率的物质为活化剂；抑制酶促反应速率的物质为抑制剂；使酶变性失活的物质为变性剂；活化剂与抑制剂只影响酶促反应速率，不影响酶的活性，但变性剂会使酶彻底失活实验七米氏常数的测定米氏方程Km值是酶的一个特征常数，测定Km值是酶学研究中的一个重要方法。
双倒数作图法是实验方法测定Km值的最常用的比较方便的方法。
实验时选择不同的[S]，测定相对应的V，求出两者的倒数，以1/V对1/[S]作图，则得到一斜率为Km/Vmax的直线。
将直线外推与横轴相交，由1/Km=-1/[S]求出Km。
本实验以胰蛋白酶消化酪蛋白为例，采用Lineweaver-Burk双倒数作图法测定Km值。
胰蛋白酶是胰液中的一个酶，它催化蛋白质中碱性氨基酸（L-精氨酸和L-赖氨酸）的羧基所形成的肽键水解。
水解时生成自由氨基，因此可以用甲醛滴定法(原理参见P148)判断自由氨基增加的数量来追踪反应。
思考题：1、如何正确测定酶促反应速度？答：1.底物必须要保证要足够的底物，使酶能完全发挥其催化功能。
2.时间的控制根据酶促反应曲线可以看出，最开始曲线斜率比较大，然后趋于平缓（这种原因可能是生成的产物促进逆反应或是酶失活），由此，如果测定的时间选择不当的话，测的速度也不是初速度，所以在测定的时间必须掌握在曲线斜率比较大的那段时间内。
当然，除这些之外，需给酶提供最适温度、最适PH，保证没有抑制剂存在。
2、由实验所得曲线可以看出底物浓度对酶反应的影响有何特殊规律？答：由实验观察到，在酶浓度不变时，不同的底物浓度与反应速度的关系为一矩形双曲线，即当底物浓度较低时，反应速度的增加与底物浓度的增加成正比（一级反应）；此后，随底物浓度的增加，反应速度的增加量逐渐减少（混合级反应）；最后，当底物浓度增加到一定量时，反应速度达到一最大值，不再随底物浓度的增加而增加实验八维生素C的定量测定还原型维生素C(抗坏血酸)能还原染料2,6-二氯酚靛酚钠盐，本身则被氧化成脱氢维生素C。
2,6-二氯酚靛酚钠盐的水溶液呈蓝色，在酸性环境中为玫瑰色，被还原后则脱成无色。
本实验用2,6-二氯酚靛酚在酸性环境中滴定含有维生素C的样品溶液。
滴定开始时，样品液中的维生素C立即将滴入的2,6-二氯酚靛酚还原脱色，当样品液中维生素C全部被氧化时，再滴入的2,6-二氯酚靛酚就不再被还原脱色而呈浅玫瑰色，达到滴定终点。