诺唯赞反转录试剂盒 说明书
逆转录试剂盒( transcriptor first strand cdna synthesis kit ) 说明书
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04 379 012 001
Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit y Version 6.0
1. What this Product Does, continued
Vial/ Cap
Label
Store the kit at ؊15 to ؊25°C N Store Control RNA (vial 7 in
Cat. No 04 379 012 001) at —70°C or below.
y Version 6.0
Content version: September 2010
9 (7 for b,c) colorless
Water, PCR-grade
Content
a) Cat. No. 04 379 012 001 b) Cat. No. 04 896 866 001 c) Cat. No. 04 897 030 001
a) 1 vial, 1 ml b) 2 vials, each 1ml c) 3 vials, each 1 ml
L In Cat. No. 04 896 866 001 and Cat. No. 04 897 030 001 the control reagents (vial 7 and 8) are not included. Therefore, in these kits vial 7 is Water, PCR Grade.
Random Hexamer Primer
a) 1 vial, 100 l (600 M) b) 1 vial, 200 l (600 M) c) 2 vials, each 200 l (600 M)
takara反转录试剂盒说明书
Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。
为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。
但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。
在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。
而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。
Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。
同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。
使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。
诺唯赞C112说明书
诺唯赞C112说明书
非连接酶依赖型单片段快速克隆试剂盒
产品优势：
•简单、快速、高效，适用于任何载体
•无需考虑插入片段携带的酶切位点
•可高效克隆 50 bp-10 kb 的 DNA 片段
•线性化克隆载体和 PCR 产物可不纯化直接克隆
•无连接酶，无自连，阳性率 >95%
•提供在线引物设计软件CE Design
产品描述：
ClonExpress®技术是一种简单、快速并且高效的 DNA 无缝克隆技术，可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。
ClonExpress®II 是新一代重组克隆试剂盒，包含增强的重组酶 Exnase®II。
使用任意方式将载体进行线性化；在插入片段正 / 反向 PCR 引物5’ 端引入线性化载体的末端序列，使得 PCR 产物5’ 和3’ 最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列 (15 bp-20 bp)。
这种两端带有载体末端序列的 PCR 产物和线性化载体按一定比例混合后，在Exnase®II 重组酶的催化下，仅需反应 30 min 即可进行转化，完成定向克隆，阳性率可达 95% 以上。
实验案例：
1.克隆效率高
图1
重组产物转化后平板上一般可形成数千个单克隆，而无插入片段的阴性对照反应转化后只有数个单克隆形成。
因此ClonExpress®系统的自连背景会大大降低连接酶依赖的克隆方式。
2.克隆阳性率95%以上
图2
鉴定酶切结果表明，克隆阳性率可达95%以上。
贮存条件：
- 30℃～-15℃保存。
本氏烟NbHSP90基因的克隆及初步功能分析
山东农业大学学报(自然科学版),2021,52(2):163-167VOL.52NO.22021 Journal of Shandong Agricultural University(Natural Science Edition)doi:10.3969/j.issn.1000-2324.2021.02.001本氏烟NbHSP90基因的克隆及初步功能分析杨磊1,盛慧2,张金凤2,田辉2,张修国2*,孙文秀1*1.长江大学生命科学学院,湖北荆州4340252.山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018摘要:辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）通过与植物互作调节植物的免疫反应，进而引起植物感病。
前期实验证明辣椒疫霉效应分子RxLR19781与本氏烟（Nicotiana benthamiana）热激蛋白90（NbHSP90）可以发生相互作用。
利用RT-PCR技术从本氏烟中克隆得到基因NbHSP90，通过农杆菌介导的瞬时表达技术，验证NbHSP90在辣椒疫霉侵染本氏烟过程中的作用。
研究结果表明：NbHSP90基因的cDNA序列全长1005bp，编码含334个氨基酸的蛋白质，不含信号肽，无跨膜结构，具有典型的HATPase保守结构域和C端基序MEEVD。
瞬时表达结果表明，NbHSP90能显著减弱辣椒疫霉在本氏烟中的定殖。
研究结果为进一步阐明辣椒疫霉效应分子RxLR19781靶向本氏烟HSP90促进自身侵染的分子机制提供了依据。
关键词:辣椒疫霉菌;本氏烟;基因克隆中图法分类号:R379文献标识码:A文章编号:1000-2324(2021)02-0163-05 Cloning and Primary Functional Analysis of NbHSP90Gene from Nicotiana benthamianaYANG Lei1,SHENG Hui2,ZHANG Jin-feng2,TIAN Hui2,ZHANG Xiu-guo2*, SUN Wen-xiu1*1.College of Life Science/Yangtze University,Jingzhou434025,China2.College of Plant Protection/Shandong Agricultural University,Tai’an271018,ChinaAbstract:Phytophthora capsici pathogen interacts with plant to manipulate plant immune responses and promote infection.Previous experiments demonstrated that the effector RxLR19781of P.capsici could interact with heat shock protein90(NbHSP90)of Nicotiana benthamiana.NbHSP90was cloned from N.benthamiana by RT-PCR.NbHSP90of transient expression mediated by Agrobacterium on N.benthamiana to explore the role of NbHSP90in the pathogenesis of P.capsici.The results showed that the full-length cDNA of NbHSP90was1005bp,encoding a protein with334amino acids,no signal peptide,no transmembrane structure,with typical conserved HA TPase domain and C-terminal MEEVD motif.The results of transient expression illustrated that NbHSP90could significantly reduce the colonization of P.capsici on N.benthamiana.The results provide a basis for further elucidating the molecular mechanism of RxLR 19781targeting HSP90to promote infection.Keywords:Phytophthora capsici;Nicotiana benthamiana;gene cloning疫霉菌属于卵菌，是危害大豆、番茄、辣椒等经济作物的毁灭性病原菌。
ClonExpress
使用说明书Version 22.101/产品概述 02/产品组分03/保存条件04/适用范围05/自备材料06/注意事项07/实验原理与流程概要08/实验流程08-1/线性化载体制备08-2/插入片段获得08-3/线性化载体与插入片段的使用量08-4/重组反应08-5/重组产物转化08-6/重组产物鉴定09/常见问题与解决方案.....................................................................................................02 .................................................................................................... 02.................................................................................................... 02..................................................................................................... 02.................................................................................................... 02.................................................................................................... 03.................................................................................. 04.................................................................................................... 04.. (04) (04) (06) (07) (07) (07).................................................................................. 09目 录 Contents*所有商标均属于各自商标所有者的财产。
D2639A[1]反转录试剂盒说明书
![D2639A[1]反转录试剂盒说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/9235daa6dd3383c4bb4cd25a.png)
2．PCR 反应 ① 按下列组成配制 PCR 反应液，全量 50 μl。
试剂名称 上述 cDNA 溶液 dNTP Mixture（各 2.5 mM） Forward Primer（10 μΜ） Reverse Primer（10 μΜ） 10×LA PCR Buffer II（Mg2＋ Plus） TaKaRa LA Taq®（5 U/μl） dH2O
-2-
④ 在上述 Microtube 管中配制下列反转录反应液。 试剂名称
上述模板 RNA/引物变性溶液 5×M-MLV Buffer dNTP Mixture（各 10 mM） RNase Inhibitor（40 U/μl） RTase M-MLV（RNase Hˉ）（200 U/μl） Total Volume
6. 70℃保温 15 分钟后冰上冷却，得到的 cDNA 溶液可直接用于 2nd-Strand cDNA 的合成或者 PCR 扩增等，PCR 扩增时 cDNA 溶液的使用量建议使用 1 μl～5 μl。
●使用λRNA 进行 RT-PCR 反应的实验例
本实验中使用的λRNA 为带有 Poly(A)的λDNA 的转录产物。本实验中分别扩增了 1 kbp、3 kbp、 5 kbp、8 kbp 和 10 kbp 的目的 DNA 片段。
50 % 0.01 %
●起 源： Purified from an E.coli strain expressing a recombinant enzyme.
●活性定义 以Poly（rA）·Oligo（dT）为模板/引物，在 37℃、10 分钟条件下，掺入 1 nmol的 [3H] dTTP所需
要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。
使用量 7 μl 2 μl
BioRT逆转录扩增（RT-PCR）试剂盒说明书（一步法）
b、按以下条件进行PCR反应94℃3m i n94℃30s25-35循环***37℃-65℃**30s72℃****45s-7min72℃5min注：*RT产物可增加至5μl 。
**退火温度根据引物Tm值调整，一般为Tm-5℃。
Control引物退火温度为55℃。
*** 当实验样品RNA特别稀少时，可将循环数增加至40-45循环。
**** 延伸时间根据PCR产物大小确定，一般1kb/min 。
Control引物延伸时间45s。
c、反应结束后，取3-5 μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，确认PCR反应产物。
如果此PCR产物需用于以后实验，应将PCR产物冷冻保存。
RNA control反应时，退火温度55度，30个循环，扩增片段大小为500bp。
使用提示1. RNA模板可以采用总RNA或mRNA，建议使用Biozol(BSC51M1)制备高质量RNA；2. RT实验应避免RNase污染，可采用以下措施：1）因人的皮肤表面和唾液都有RNase，因此实验中应戴一次性手套和口罩；2） RT实验应使用专门的仪器和耗材，建议在专门区域操作RNA；3） RT实验相关耗材应使用干热灭菌（180℃，60分钟）或用0.1％ DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时后在121℃高压灭菌30分钟；3. AMV逆转录酶，DNA聚合酶和RNase抑制剂在取用之前应离心后再吸取，吸取时动作要慢，使用后应尽快放回-20℃；4. dNTP应避免反复冻融以免失效；5. 引物的选择可根据具体情况，Oligo-dT适用于具有PolyA尾的RNA(一般是真核生物的mRNA)，Random Hexamer Primer适用于所有RNA(包括mRNA,rRNA,tRNA等)，尤其适用于有复杂二级结构的RNA，特异性引物适用于已知模板序列的RNA；6. PCR反应中MgCl2浓度可依据不同条件进行调整，当目的片段长度大于2kb时，我们建议增加MgCl2浓度，以0.5mM间隔梯度增加。
Vazyme RC401 使用说明书
使用说明书Version 20.1目 录 Contents *所有商标均属于各自商标所有者的财产,某些商标并未在全部行政区注册01/产品概述 02/产品组分03/保存条件04/适用范围05/自备材料06/注意事项07/实验原理与流程概要08/实验流程 08-1/样本处理 08-2/RNA 提取09/常见问题及解决方案................................................................................................... 02................................................................................................... 02................................................................................................... 03................................................................................................... 03................................................................................................... 03 (03) (04) (04) (04) (05) (06)01/ 0201/产品概述本试剂盒适用于植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织（如棉花叶片、成熟水稻叶片、松针、杨树、枇杷叶片、马铃薯块茎、棉叶根、香蕉、葡萄、苹果、梨、月季、荞麦种子、拟南芥种子、烟草等）中快速提取总RNA ，可同时处理大量不同样品。
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•Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明
•Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit是一套用于以RNA为模板高效合成第一链cDNA的完整系统，可合成长达13kb 的cDNA。
试剂盒配套提供的RiboLockRNase Inhibitor，可有效防止RNA模板的降解。
试剂盒配套提供oligo(dT)18引物和随机六聚体引物。
oligo(dT)18引物可以选择性地与mRNA中的poly (A)尾结合。
随机六聚体引物无需poly (A)尾，因此可转录mRNA 5’-端区域，也可以无poly
(A)尾的RNA (如micoRNA)为模板合成cDNA。
该试剂盒也可使用基因
特异性引物。
•Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明优点：
•合成全长的第一链cDNA，最长可合成13kb的cDNA
•最佳反应温度为42℃
•完全一提供RT反应所需的所有组分
•应用:
•第一链cDNA合成，作为RT-PCR和实时RT-qPCR的模板
•构建全长cDNA文库
•反义RNA合成
•Thermo 反转录试剂盒K1622使用说明
•RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit合成全长cDNA
• 1 μg小鼠心脏总RNA作为模板，用oligo(dT)18 引物进行逆转录反应。
由此合成的cDNA，再作为Taq DNA Polymerase后续PCR扩增的模板。
末端2024 bp片段的成功扩增，表明长度为13.8 kb的全长RN***段得到成功的逆转录。
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