玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌PPT课件
玻璃器皿的清洗包扎和高压蒸汽灭菌(2)课件
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2、吸管应在管口约0.5厘米
以下的地方塞入少许长约 1.5厘米的棉花，以拉直的 曲别针一端放在棉花的中 心，轻轻捅入管口，松紧 必须适中，松紧程度以吹 气时通气顺畅而不致下滑 为准，管口外露的棉花纤 维统一通过火焰烧去。然 后，将吸管尖端放在4-5厘 米宽的长条纸的一端约与 纸条成45°角，折叠纸条， 包住吸管尖端，然后将吸 管卷入纸条内，末端剩余 纸条折叠打结，待灭菌。
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（2）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽 ？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀 ，开盖取物？
• 其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽 菌锅，电烘箱，线绳,毛刷等
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四、操作方法
（一）、玻璃器皿的清洗包扎
• 玻璃器皿在灭菌前必 须经正确包裹和加塞 ，以保证玻璃器皿于 灭菌后不被外界杂菌 所污染。
1. 将平皿用纸包扎好， 以5～8个为一包；
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（3）干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微 生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌 的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤， 即加热至160～170℃维持1～2h。
（4）火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅速 彻底。对于接种环，接种针或其它金属用 具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行 灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角 瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的 。
常用玻璃器皿的洗涤、包装及灭菌
须高压蒸气灭菌后，倒去内容物，用热肥皂水刷去污 物，然后用清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3次，晾干或 烘干。
（5）对污染有病原微生物的吸管
用后投入盛有消毒液（2％～3％来苏儿或5％石炭酸 ）的玻璃筒内（筒底必须垫有棉花，消毒液要淹没吸管） ，经1～2d后取出，浸入2％肥皂粉液中1～2h（或煮沸） 取出，再用一根橡皮管，使一端接于自来水龙头，另一端 与吸管口相接，用自来水反复冲洗 ，最后用蒸馏水冲洗。 （6）如遇玻璃器皿用上述方法不能洗净者，可用下列清 洗液浸泡后洗刷。重铬酸钾（工业用）80g，粗硫酸100ml ，水1000ml。
3．玻璃器皿的灭菌
常用干热灭菌法
将包装的玻璃器皿放入干燥箱内，为使空气流 通，堆放不宜太挤，也不能紧贴箱壁，以免烧焦
。一般160℃，维持2h。
也可用高压蒸汽灭菌，即121.3℃ ，103.42千帕 经30分钟。
练习（每人）：
1. 包装一包平皿（5套） 2. 包装一支吸管 3. 制作两个棉塞（试管2个）
dhanyavaad
达尼阿瓦德
接种工具
• 接种环 • 接种针 • 接种钩
• 接种铲
常用器具
微量吸管
常用器具
试管
• 大试管
18mm×180mm
• 中试管
13~15mm×100~180mm
• 小试管
10~12mm×100mm
常用器具
ห้องสมุดไป่ตู้
烧杯
常用器具
空玻璃器皿的包装
培养皿的包装
吸管的包装
试管的包装
三角瓶的包装
棉塞的制作
棉塞的制作
2．玻璃器皿的包装
• 试管 • 三角烧瓶 • 培养皿 • 吸管 • 注射器 • 载玻片与盖玻片 • 接种工具
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌玻璃器皿的清洗、包扎和干热灭菌一、目的要求掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌的操作方法。
二、实验材料玻璃器皿、烘箱、牛皮纸、纱布、纱绳三、操作步骤(一)清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。
1. 新玻璃器皿的洗涤方法新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时，酸溶液一般用2%的盐酸或洗涤液，浸泡后用自来水冲洗干净。
2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。
但是，洗衣粉和去污粉较难冲洗干净，常在器壁上附有次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。
一层微小粒子，故要用水多次甚至10若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。
(2) 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。
带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液(来苏尔)或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤 (3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10 min，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗。
然后在稀洗涤液中浸泡0.5—2 h，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95%酒精中保存备用。
3. 洗涤液的配制与使用(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下:浓溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 150mL浓硫酸(工业用) 800mL稀溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 850mL浓硫酸(工业用) 100mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。
清洗消毒及灭菌技术操作规范 ppt课件
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4.3清洗、消毒、灭菌效果的监测应符合WS 310. 3的规定
条款规定根据WS 310. 3的规定 建立无菌物品质量追溯和召回制度 设专人负责质量监测工作 实施全过程监测包括： • 清洗监测 • 消毒效果监测 • 灭菌效果监测 • 外来手术器械和植入物手术器械的专项监测 • 设备安装和使用中的监测
• 防止湿包发生 • 有效地去除空气和冷凝水，以达到灭菌效果
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灭菌物品的装载（ 5.8.1.4.2 ）
• 为有效的蒸汽穿透和防止湿包的发生，以及防止灭 菌“小装量效应”，严格规定了灭菌物品的装载量
• 下排气压力蒸汽灭菌器的装载量不应超过柜室容积 80%。
• 预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器的装载量不应超 过柜室容积的90%
油等非水溶性的产品作为润滑剂。
应使用医用器械润滑剂 光学电子器材密封圈不能用，软化密封圈
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• 5.7 包装 • 5.7.1 包括装配、包装、封包、注明
标识等步骤。器械与敷料应分室包装。
• 5.7.2 包装前应依据器械装配的技术规程或图示，核对器械 的种类、规格和数量，拆卸的器械应进行组装。
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常用灭菌方法
高温灭菌
低温灭菌
• 压力蒸汽灭菌 • 快速压力灭菌 • 干热灭菌
• 环氧乙烷灭菌 • 过氧化氢等离子体灭菌 • 低温甲醛灭菌
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灭菌方法选择
• 根据物品的性质和类别选择合适的灭菌方 法
• 应遵循以下原则： • 保护被消毒灭菌物品不受损坏 • 确保消毒灭菌的可靠性
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3－6倍放大镜
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清洗-消毒-干燥流程
常用玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌技术
实验五常用玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌技术一、实验目的1.熟悉微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品；2.掌握实验室常用玻璃器皿的清洗和包扎方法；3.了解干热灭菌、蒸汽灭菌原理，掌握玻璃器皿干热灭菌及高压蒸汽灭菌操作技术。
二、实验原理（一）微生物常用器皿、物品微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品介绍，见表2-1。
表2-1微生物实验常用玻璃器皿的名称和规格名称常用规格及配套使用物品烧杯50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL，5000mL配套烧杯刷：大号，中号，小号三角瓶100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL配套三角瓶刷：大号，中号，小号容量瓶无色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL量筒5mL，10mL，25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL移液管1mL（分度0.01mL），2mL（分度0.02mL），5mL（分度0.05mL），10mL（分度0.1mL），20mL（分度0.1mL），50mL（分度0.5mL）配套洗耳球：大号，中号，小号培养皿35mm，75mm，90mm，120mm，150mm配套封口膜：12*12mm，16*16mm 酒精灯150mL配套：火柴漏斗60mL，80mL配套滤纸、漏斗架定性滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm 定量滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm滴定管酸式滴定管：50mL碱式滴定管：50mL 配套滴定台、蝴蝶夹滴瓶（小口瓶）无色：30mL，60mL，120mL 棕色：30mL，60mL，120mL广口瓶无色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL试管10*100mm，12*100mm，15*100mm，15*150mm，18*180mm，20*200mm 配套试管刷：大号，中号，小号配套试管架：12.5mm，15.5mm，18.5mm，20.5mm载玻片25*75mm，30*60mm，100*100mm，500*500mm，900*600mm盖玻片18*18mm，20*20mm，22*22mm，24*24mm，24*32mm，24*50mm温度计0-100℃，0-200℃，0-300℃坩埚30mL，50mL配套坩埚钳研钵80mm，100mm，120mm，150mm（二）常用玻璃器皿用途：1.烧杯：用于盛装、转移、配制、加热培养基及试剂。
玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌 18页PPT文档
基本原理
（一）实验室中使用的玻璃器皿简介
微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌 和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一 定的要求。玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃，才能承受高 温和短暂灼烧而不致破坏；玻璃器皿的游离碱含量要少，否 则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的性状和包装方法的 要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤玻璃器皿的方法不当也 会影响实验的结果。目前微生物学实验室中，有些玻璃器皿 （如培养皿、吸管等）已被一次性塑料制品所代替，但玻璃 器皿仍是重要的实验室用具。
• 清洗 • 包装 • 灭菌
洗涤剂、试管刷等 报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等 干热灭菌 湿热灭菌 紫外灭菌 过滤
玻璃器皿的清洗 器皿包扎
二、基本原理
（二）培养基简介
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、 保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很 多。
培养基的成分和pH
不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、 氮源、无机盐和生长因子等。不同微生物对pH要求 不一样，霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的， 而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性的 （嗜碱细菌和嗜酸细菌例外）。所以配制培养基时， 都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适 的范围。
此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线 灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3—5％ 的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘 埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室 内的桌面，凳子可用2—3％的来苏尔擦洗，然后再 开紫外线灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目 的。
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌实验
（3） 试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。
目前，国内已开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和试验要求来选择和采用合适的塑料试管塞。
灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。
3、 带菌载玻片及盖玻片，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有3～5%来苏尔或5%石炭酸或0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸（筒）内消毒24h后，用夹子取出经清水冲干净。
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌实验
五、思考题
1、干热灭菌和高压蒸汽法适用范围如何?
2、电热烘箱和高压锅如何操作? 各有哪些使用注意事项?
（3） 试管和三角瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。
目前，国内已开始采用塑料试管塞，可根据所用的试管的规格和试验要求来选择和采用合适的塑料试管塞。
（2） 吸管：洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头塞入少许脱脂棉花，以防在使用时造成污染。塞入的棉花量要适宜，多余的棉花可用酒精灯火焰烧掉。每支吸管用一条宽约4~5cm的纸条，以30~50℃的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，另一端用剩余的纸条打成一结，以防散开，标上容量，若干支吸管包扎成一束进行灭菌。使用时，从吸管中间拧断纸条，抽出试管。
高压蒸汽灭菌法
1、 关好排水阀门，放入纯净水或蒸馏水至标度。注意水量一定要加足，否则容易造成事故。
2、 将须要灭菌的器材、培养基等装入灭菌锅中，加盖密封。旋紧螺旋时，先将每个螺旋旋转到一定程度（不要太紧），然后再旋紧相对的两个螺旋，以达到平衡旋紧，否则易造成漏气，达不到彻底灭菌的目的。
若干支试管用绳扎在一起，在棉花部分外包裹油纸或牛皮纸，再用绳扎紧。三角瓶加棉塞后单个用油纸包扎。
（四）、玻璃器材的灭菌
灭菌:干热灭菌:160～165℃烘箱中灭菌2h；或湿热灭菌:121 ℃ 20～30min
u 干热灭菌法
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曲别针一端放在棉花的中
心，轻轻捅入管口，松紧
必须适中，松紧程度以吹
气时通气顺畅而不致下滑
为准，管口外露的棉花纤
维统一通过火焰烧去。然
后，将吸管尖端放在4-5
厘米宽的长条纸的一端约
与纸条成45°角，折叠纸
条，包住吸管尖端，然后
将吸管卷入纸条内，末端
剩余纸条折叠打结，待灭
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（2）高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广 ，效率高，是微生物学实验中最常用的灭 菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随 着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。 当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的 温度升高到121℃，经15～30min，可全部 杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢 子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传 染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。
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包扎试管
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包扎完成
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• 3、三角瓶在棉塞与瓶 口外再包以厚纸，用 棉绳以活结扎紧，以 防灭菌后瓶口被外部 杂菌所污染；
• 4、试管塞上棉花塞， 多支扎成一捆外用牛 皮纸或两层旧报纸与 细线包。
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高压蒸汽灭菌锅
• 升压、保压和降压 ：当锅内冷空气排净时，即可关闭排 气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电 压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（ 一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止 加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能 过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内 慢而造成瓶内液体冲出容器之外。
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三、实验器材
• 器皿：平皿（10个/组），1ml吸管（9支/组）， 试管18×180（10支/组），试管（15×150）（ 12/组），三角锥瓶500ml（3个/组）、三角锥瓶 500ml（内装蒸馏水250ml），10ml吸管
• 其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽 菌锅，电烘箱，线绳,毛刷等
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（二）、干热灭菌
• 将包扎好的试管、平皿、三角锥瓶放入干燥烘箱 内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不 得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的 温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温 度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花 会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度 为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时 方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤 冷而爆裂。
玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌
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组员： 孙中涛17 孙洋20
19 戚望平21
徐州18 刘彩云
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一、实验目的
1.掌握玻璃器皿的清洗与包扎技术。 2.学习并掌握高压蒸汽灭菌、干热灭菌的基
本原理和操作方法。
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二、实验原理
（1）灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生 物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实 验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌 体内 蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白 质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高， 其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的 杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下菌体吸收水 分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可 增加灭菌效力。
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17ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（2）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽 ？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀 ，开盖取物？
答：冷空气未排尽，压力虽然升高而温度达不到要求，
无法达到灭菌要求，影响灭菌效果。
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谢谢观赏
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五、思考题
（1）吸管在灭菌前应如何处理？
答：吸管应在管口约0.5厘米以下的地方塞入少许长
约1.5厘米 的棉花，以拉直的曲别针一端放在棉花的中心 ，轻轻捅入管口，松紧必须适中，松紧程度以吹气时通气 顺畅而不致下滑为准，管口外露的棉花纤维统一通过火焰 烧去。然后，将吸管尖端放在4-5厘米宽的长条纸的一端 约与纸条成45°角，折叠纸条，包住吸管尖端，然后将吸 管卷入纸条内，末端剩余纸条折叠打结，待灭菌。
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（3）干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭 微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭 菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤 ，即加热至160～170℃维持1～2h。
（4）火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅 速彻底。对于接种环，接种针或其它金属 用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进 行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三 角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目 的。
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（三）、高压蒸汽灭菌
• 加水：打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅 最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意 水要加够，防止灭菌过程中干锅。
• 装料、加盖 ：将待灭菌物品放好后，关闭灭菌器盖，采 用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏 气。
• 排气：打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸 后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出 时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。
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四、操作方法
（一）、玻璃器皿的清洗包扎
• 玻璃器皿在灭菌前必 须经正确包裹和加塞， 以保证玻璃器皿于灭 菌后不被外界杂菌所 污染。
1. 将平皿用纸包扎好， 以5～8个为一包；
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2、吸管应在管口约0.5厘米
以下的地方塞入少许长约
1.5厘米的棉花，以拉直的