坏死性小肠结肠炎动物模型具体方法及步骤
结肠炎动物模型具体步骤及方法
结肠炎动物模型具体步骤及方法预览说明:预览图片所展示的格式为文档的源格式展示,下载源文件没有水印,内容可编辑和复制结肠炎动物模型具体步骤及方法原型物种人来源三硝基苯磺酸钠(TNBS)导致的结肠炎模式动物品系SPF级SD大鼠，健康，6~8W，雄性，体重为180g-200g。
实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期4-6 weeks建模方法模型制作方法：动物造模当日计为实验第1天，各组动物造模前禁食不禁水24 h，乙醚吸入麻醉，将一直径2.0 mm、长约12 cm的塑胶管由肛门轻缓插入大鼠体内深约8 cm，缓慢注入一定浓度的TNBS的乙醇溶液，1 min之内完成。
灌药完毕后，缓慢拔出塑胶管，用手捏住肛门，提起大鼠尾部，持续倒置3min，避免造模试剂流出，使造模剂充分渗入大鼠肠腔内。
对照组动物使用等体积的生理盐水，按上述同样操作进行灌肠。
各组动物均正常饲养。
TNBS的乙醇溶液（将体积分数为5%的TNBS水溶液与无水乙醇以体积2:1混合）现配现用。
应用用于结肠炎药物的研发和机理的研究1. 一般情况观察及体重记录一般观察：观察各组动物的情况，若出现意外症状，记录情况并及时反馈；记录可能出现的死亡率。
体重：从给药前一天开始，每三天称量并记录各组动物体重，直至给药结束，绘制体重变化曲线。
实验过程中体重共记录10次体重统计、变化曲线作图。
2. 肠组织取材及大体评分：各组动物安乐死后，解剖时截取自肛门向上的整段结肠组织测量结肠长度进行宏观评价：各个结肠组织带标尺拍照，记录原始的大体形态，依照评分标准进行评分。
结肠组织大体评分标准如下：0分无损伤1分充血但没有溃疡2分充血而且肠壁变厚但没有溃疡3分有一处小溃疡，最长径约0-1cm4分溃疡较大，最长径约1-2cm5分溃疡较大，最长径>2cm对应以上评分标准，记录每份结肠组织的具体评分。
评分标准参考文献：Wallace JL, Keenan CM. An orally active inhibitro of leukotriene synthesis accelerates healing in a rat model of colitis. Am J Physiol,1990 258:G527-G5343.3 结肠组织病理染色：组织做以下处理：每个结肠均分成3段，每个动物取材的位置要尽量一致（不管剪切位置是否有病理损伤尽量保持一致）。
新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的建立与评价
摘要：目的研究坏死性小肠结肠炎（NEC ）大鼠模型的简易制作方法。
方法3日龄SD 大鼠30只，雌雄不限，随机分2组（每组15只），即正常对照组与NEC 模型组，采用肠内配方喂养、低氧高氧暴露和冷刺激的综合应激方法造模，成功后取肠管组织，HE 染色光镜下观察并行Shiou 评分，Elisa 法检测炎性因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）的水平。
结果NEC 模型组实验中死亡1只，对照组无死亡；与正常对照组相比，NEC 模型组HE 染色光镜下可见炎症反应明显，病理学检测Shiou 评分明显增高（P <0.01）；Elisa 法检测炎性因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）含量明显升高，差异有统计学意义（P <0.01）。
结论肠内配方喂养、低氧高氧暴露和冷刺激的综合应激方法能成功建立NEC 大鼠模型，且建模可重复性好，成功率高。
关键词：坏死性小肠结肠炎；Shiou 评分；炎性因子；大鼠中图分类号：R725.7文献标识码：A文章编号：1671-3699（2018）03-0083-04DOI ：10.3969/j.issn.1671-3699.2018.03.018新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的建立与评价李小兵1，梁淑霞1，赖盼建1，徐洁1，包云光1，丁明星2，方远书3（1.金华市中心医院，浙江金华321000；2.金华职业技术学院，浙江金华321007；3.金华市实验动物中心，浙江金华321000）坏死性小肠结肠炎（necrotizing enterocolitis ，NEC ）为新生儿常见胃肠道急诊，与NEC 相关的病死率高达20%～30%[1]，常见诱因如早产、肠内喂养和感染等目前已确定，但其发病机制的不确定，临床仍然缺乏明确而有效的治疗策略[2]，还缺乏早期手术干预控制病程的足够证据，NEC 早期监测与预防极为关键[3]。
因而需要建立NEC 的可靠动物模型进行深入研究，而目前常见的建模方法均存在一定的不足。
SIRT1对LPS诱导的坏死性小肠结肠炎小鼠模型的保护作用
ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆＳＩＲＴ１ｏｎＬＰＳｉｎｄｕｃｅｄｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓｉｎｍｉｃｅ ＺＨＡＮＧＬａｎ，ＢＡＩＢｏｌｉａｎｇ，ＷＡＮＧＬｉ，ＧＡＯＱｉｏｎｇ，ＸＩＺｈａｏｘｉａ，ＧＵＩＹａｎｈｏｎｇ，ＷＡＮＧＨｕｉｐｉｎｇ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ，Ｓｅｃｏｎｄ ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｉ’ａｎＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ７１０００４，Ｃｈｉｎａ；Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，Ｅｍａｉｌ：ｇｑｚ９２６６＠１６３．ｃｏｍ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆＳＩＲＴ１ｏｎｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）ｉｎｄｕｃｅｄｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ （ＮＥＣ）ｉｎｍｉｃｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ＳｉｘｔｙＣ５７ＢＬ／６ｍｉｃｅａｇｅｄ３－４ｄａｙｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ．ＴｈｅｍｉｃｅｉｎＮＥＣｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐａｎｄＳＩＲＴ１ａｇｏｎｉｓｔｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｉｒｍｏｔｈｅｒｓａｔ２４ｈａｆｔｅｒｂｉｒｔｈ，ａｎｄｔｈｅｎｐｌａｃｅｄｉｎｉｎｃｕｂａｔｏｒａｎｄａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙｒｅａｒｅｄ ｗｉｔｈｒａｔｍｉｌｋｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｓ．Ａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ＮＥＣｍｏｄｅｌｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｅｄｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉａ．Ｔｈｅｍｉｃｅｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅ ｆｅｄｉｎｔｈｅｓａｍｅｃａｇｅｗｉｔｈｔｈｅｉｒｍｏｔｈｅｒｓｗｉｔｈｏｕｔａｎｙｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｆａｓｔｉｎｇｆｏｒ１２ｈａｆｔｅｒｍｏｄｅｌｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄｔｏｃｏｌ ｌｅｃｔｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｕｂｅｆｒｏｍ ｔｈｅｌｏｗｅｒｄｕｏｄｅｎｕｍ ｔｏｉｌｅｏｃｅｃｕｍ．Ｔｈｅｅｌａｓｔｉｃｉｔｙａｎｄｃｏｌｏｒｏｆｉｌｅｏｃｅｃｕｍ，ａｎｄｐｎｅｕｍａｔｏｓｉｓ，ｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ， ｎｅｃｒｏｓｉｓｃｈａｎｇｅｓｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｃａｖｉｔｙｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ．ＴｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙＨＥｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓｏｆＩＬ６，ＩＬ１０ａｎｄＴＮＦαｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＩＬ６，ＩＬ１０，ａｎｄＴＮＦαｍＲ ＮＡｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｑＲＴＰＣＲ．ＳＩＲＴ１ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｍｉｃｅ ｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｓｈｏｗｅｄａｂｄｏｍｉｎａｌｄｉｓｔｅｎｓｉｏｎ，ｙｅｌｌｏｗｉｓｈｇｒｅｅｎｌｏｏｓｅｓｔｏｏｌ，ｌｅｔｈａｒｇｙ，ｇａｓｔｒｉｃｒｅｔｅｎｔｉｏｎ，ｓｈｏｒｔｎｅｓｓｏｆｂｒｅａｔｈａｎｄｏｔｈｅｒ ｓｙｍｐｔｏｍｓｉｎｖａｒｙｉｎｇｄｅｇｒｅｅｓ．ＴｈｅｓｙｍｐｔｏｍｓｗｅｒｅｌｉｇｈｔｅｒｉｎＳＩＲＴ１ａｇｏｎｉｓｔｇｒｏｕｐｔｈａｎｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｎｏａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ＳｅｖｅｎｍｉｃｅｄｉｅｄｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄｎｏｏｎｅｉｎＳＩＲＴ１ａｇｏｎｉｓｔｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｓ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍａｎｄｖｉｌｌｉｗｅｒｅｉｎｔａｃｔｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｗｉｔｈｏｕｔｖａｓｏｄｉｌａｔａｔｉｏｎ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｓｕｂｍｕｃｏｓａｌｈｅｍｏｒｒｈａｇｅａｎｄｅ ｄｅｍａｗｅｒｅｏｂｖｉｏｕｓｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅｓｕｂｍｕｃｏｓａｌａｎｄｌａｍｉｎａｐｒｏｐｒｉａｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄａｎｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｖｉｌｌｕｓｓｔｒｕｃｔｕｒｅｗａｓｉｎ ｃｏｍｐｌｅｔｅｗｉｔｈｓｏｍｅｏｆｔｈｅｍ ｂｅｉｎｇｅｘｆｏｌｉａｔｅｄａｎｄｎｅｃｒｏｔｉｃ．ＴｈｅｉｎｊｕｒｙｉｎＳＩＲＴ１ａｇｏｎｉｓｔｇｒｏｕｐｗａｓｌｉｇｈｔｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ． ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳＩＲＴ１ｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｉｓｓｕｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｉｎｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐａｎｄＳＩＲＴ１ａｇｏｎｉｓｔ ｇｒｏｕｐｔｈａｎｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ＳＩＲＴ１ｌｅｖｅｌｉｎＳＩＲＴ１ａｇｏｎｉｓｔｇｒｏｕｐｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
JNK通路在新生鼠坏死性小肠结肠炎模型中的表达及其意义
ＸＩ ｕ ｎ ｌ，Ｌ Ｕ Ｘｉｎ ｚ ｏ ａ－ Ｊ ｉ Ｉ ａ —ｈ ｕ
（ ｕ ａ ｎｖｍ ｔ ｄｃｌ ｃｏｌＷｕ ａ ｕ ｅ ４ ０ ７ ，Ｃ ｉａ Ｗ ｈ ｎＵ ｉ ｉ Ｍｅｉ ｈ ｏ， ｈ ｎＨ ｂｉ ３ ０ １ ｈｎ ） ｅ ｙ ａＳ
Ａ Ｓ Ｒ Ｔ： ｊｃｉｅＴ ｖｓｇ ｔ ｔｅｉｔ ｃｌ ｌｒ ｉ ｒ ｕｉ ｎ ｏｅｏ － ｎＮ ｔ ｍｉａ Ｋｎ ｓ Ｂ Ｔ ＡＣ Ｏｂｅ ｔ ｏｉ ｅｔ ａ ｒ ｅｌ ａ ｓ ｉ ｔ ｎ ａ ｄｒｌ ｆ Ｊ — ｒ ｎｌ ｉａｅ ｖ ｎ ｉ ｅ ｈ ｎ ａ ｕ ｄ ｔｂ ｏ ｃｕ ｅ
立即固定 ， 常规石蜡 包埋 ， 分别作组 织形 态学检查和 免疫组织化学检测 Ｊ Ｋ的表达。结果 新生大 鼠 Ｎ Ｃ模型 Ｎ Ｅ
中 Ｊ Ｋ在肠道细胞 的胞 浆 中黄棕色染 色颗粒表 达并 伴有 向核 转移 ， 阳性 表达 明显高 于正 常对 照组。结论 Ｎ 其 Ｊ Ｋ信号通路可能参 与了 Ｎ Ｃ发病过程 ， Ｎ Ｅ 并起 着信号传 导作用。 关键词 ：— ｎ氨基末端激酶 ； ｃＪ ｕ 坏死性小肠结肠炎 ； 新生儿 ； 急腹症 中图分类号 ： ５ ４ Ｒ ７ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：０ ８０ ３ （ ０ ０ ０ －０ ９０ １０ －６ ５ ２ １ ）１ ０ －３ ０
ｄ ｖｄ ｄ ｒｎ ｏ ｙ ｉ ｔ ｘ ｅ ｉ ｎ ａ ｒ ｕ ｄ ｃ ｎ ｒｌｇ ｏ ｐ，１ ａｓ ｉ ａ ｈ ｇｏ ｐ ｉｉ ｅ ａ ｄ ｍｌ ｎ ｏ ｅ ｐ ｒ ｍｅ ｔ ｇ ｏ ｐ ａ ｏ ｔ ｒ ｕ ｌ ｎ ｏ ｒ ｔ ｎ ｅ ｃ ｒ ｕ ．Ａｆ ｒ Ｎ ｄ ｌｗａ ｓ ０ ｔ ＥＣ ｍｏ ｅ ｓ ｅ — ｅ
Ｎ ｔ ｍ ｎｌ ｎｓ ， Ｎ 的激化及胞 内分布规律 ， 讨其在 Ｎ Ｃ发病 机制 中的作用。方法 新生 鼠随机分 为正 — ｒ ｉａ ｅ ａｅ Ｊ Ｋ） 探 Ｅ
常见新生儿疾病动物模型的特点与比较
常见新生儿疾病动物模型的特点与比较荣箫周伟近年来，随着产科和新生儿重症监护治疗技术的发展，我国早产儿、低出生体重儿、多胎儿的出生率有明显增高趋势，新生儿疾病一直是儿科疾病中研究的热点。
建立合适的动物模型是研究新生儿疾病的关键，可以避免在人身上进行实验所带来的风险，本文就目前常见新生儿疾病的各种动物模型的特点作一综合介绍和比较。
一、实验动物的选择：迄今为止，用于建立新生儿疾病动物模型和进行各种相关研究的动物主要包括大鼠、小鼠、豚鼠、新西兰白兔、绵羊、狗、猪和灵长类动物。
大鼠、小鼠、豚鼠、绵羊和新西兰白兔是常规的实验动物，其中啮齿类动物由于其遗传背景清晰，容易获得，操作简单，重复性好，价格经济，使用最为广泛，可用于发病机制、药理学及神经行为学等的研究。
实验动物的选择通常以实验目的和动物各自的特点来决定。
若实验中需要每天抽取子代血液作为标本，就应选择体形大一些的动物如绵羊，以使用留置导管，为实验提供方便；若进行以形态学和分子生物学检测技术为基础的实验，则适宜选择体形较小的动物；当需要设窝内对照时，新西兰白兔则是最佳的考虑对象，因为子兔在孕兔子宫内有着各自的羊膜腔；选用灵长类动物如恒河猴或猕猴作研究对象的价值在于：此类动物有与人类极其相似的生物学特性和解剖结构；猪的解剖和生理学与人类较为相似，也成为近年的研究热点。
此外，为确保实验结果的准确性和可重复性，应尽量选用与研究内容相匹配的经遗传学、微生物学、环境及营养控制的标准化实验动物，才能排除微生物的干扰和潜在疾病对实验结构的影响，排除遗传污染造成的个体差异。
二、常见的新生儿疾病动物模型（一）胎儿生长受限(fetal growth restriction , FGR)模型1.子宫血管结扎法：早期的做法是于孕晚期完全结扎妊娠动物的双侧子宫动脉以减少胎儿营养素和氧的供给[1]，但这种做法在短时间内完全阻断了子宫动脉的血流，死胎率高，建模成功率相对较低。
目前常用的做法是部分结扎子宫动脉[2]或部分结扎子宫动脉和子宫静脉[3]。
脂多糖联合人工喂养诱导新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的建立与评价
脂多糖联合人工喂养诱导新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的建立与评价李美雪;周伟;吕回;陶莉;黄龙光;袁伟明【期刊名称】《发育医学电子杂志》【年(卷),期】2014(000)001【摘要】目的：探讨脂多糖(内毒素，LPS)联合人工喂养诱导新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型的方法并评价其效果。
方法出生当日 SD 新生大鼠，按不同的造模方式随机分为9组（每组8只）：A 组大鼠人工喂养；B1、B2、B3、B4、B5、B6组为人工喂养+LPS 灌胃，LPS 的剂量分别为5、10、15、20、30、40mg/kg，以筛选 LPS 诱导新生大鼠 NEC 模型的最佳剂量；C 组大鼠采取鼠乳喂养+LPS(30 mg/kg)灌胃；D 组大鼠为鼠乳喂养，作为正常对照组。
每日定时称量体重。
3天后禁食24小时取回肠末端组织 HE 染色，光镜下观察肠道组织病理损伤情况，并进行病理评分，评分≥2分确定为NEC。
按B5组造模条件，重复两次，每次8只，分别为 B5a、B5b 组。
结果 A、B4、B5、B6组新生大鼠均出现不同程度的活动减少，倦怠，进而可见腹胀及粪便颜色性状发生改变。
实验结束 A、B 组体重不增或下降，C、D 组体重增加，A、B 组体重分别与 D 组比较，差异均有显著性(P ＜0.05)。
各组病理评分分别为 A 组：1.78±0.52，B1组：1.76±0.32，B2组：1.83±0.1，B3组：1.87±0.33，B4组：2.16±0.11，B5组：3.34±0.37，B6组：3.78±0.51，C 组：0.52±0.42，D 组：0.3±0.48。
B5a、B5b 组评分分别为3.3±0.17、3.35±0.44。
B5、B6模型组分别与对照组比较，差异均有显著性(P<0.05)；模型组内 B5、B6组分别与 B1、B2、B3、B4组比较，差异均有显著性(P<0.05)；B5、B6组分别与 A 组比较，差异均有显著性(P<0.05)。
N-乙酰半胱氨酸对新生鼠坏死性小肠结肠炎保护作用
N-乙酰半胱氨酸对新生鼠坏死性小肠结肠炎保护作用蒋月娟;陈霞【摘要】目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对坏死性小肠结肠炎(NEC)SD新生大鼠模型肠道损伤的保护作用.方法3日龄SD大鼠40只随机分为4组:NEC模型组、NAC对照组、生理盐水对照组、NEC模型+NAC组,每组10只.通过缺氧复氧冷刺激5d制备NEC模型,此后,除NEC模型组外,其余3组给予NAC(100 mg欣)或生理盐水(5 mJ/次)灌胃,1次/d,共5d.各组在实验第5、10 d分别处死5只大鼠,解剖回盲部近端肠管行病理学检查,静脉血测定血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物酶(SOD)水平.结果 NEC模型组实验中共死亡2只,其余组无死亡.NEC模型+NAC组和NEC模型组第10 d肠道组织病理评分均高于生理盐水对照组和NAC对照组(P＜0.05),NEC模型+NAC组评分低于NEC模型组(P＜0.05).在实验后第5d及第10 d,NEC模型组血清抗氧化活显著低于NAC对照组、生理盐水对照组(P＜0.05),也显著低于NEC模型+NAC组(P＜0.05),提示NAC可明显提高血清抗氧化活性(P＜0.05).结论 NAC可以减轻NEC大鼠模型肠道组织病理损伤,提高机体抗氧化水平,具有良好的肠道保护作用.【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2016(026)012【总页数】3页(P1416-1418)【关键词】小肠结肠炎;坏死性;N-乙酰半胱氨酸;抗氧化;大鼠【作者】蒋月娟;陈霞【作者单位】643000四川自贡,自贡市第二人民医院儿科;解放军324医院儿科【正文语种】中文【中图分类】R516.1坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis，NEC)是新生儿阶段严重的胃肠道疾病，虽然近年来新生儿救治技术不断提高，但该病死亡率仍居高不下，因此，寻求对NEC安全、有效的干预措施，已成为全世界新生儿科医师研究的热点之一[1]。
结肠炎模型
结肠炎（UC）模型的建立及药物的治疗测定DSS是一种有蔗糖合成的，有抗止血和抗凝血作用的肝素样硫酸多醣体。
BALB/c鼠的遗传背景为近交系，由亲兄弟姐妹遗传繁殖，因而它们之间的个体差异就小，遗传基因更纯，整体素质更好。
采用在蒸馏水中加入DSS制成5%DSS 溶液给予小鼠自由饮用造模。
一、确定DSS的最适浓度实验材料：BALB/c小鼠6只，全是雌性。
8-10周左右，体重约为25-30g.实验试剂：葡聚糖硫酸钠（DSS）（MW=40000），配制成4%的浓度溶液。
实验仪器：电子天平，生物显微镜，微量移液器，枪头。
实验方法：将小鼠随机分为3组，每组2只。
分别为正常对照组，4%DSS浓度组。
二．实验步骤1.将6只小鼠正常喂养5天。
2. 5天以后，正常对照组继续正常饲养，但4%DSS浓度组分别喂养配置好的4% 溶液10ml。
（一日/一次，连续7天，7天内每天同一时间测量小鼠体重，粪便，便血情况，并进行活动指数评分。
）建模期间控制小鼠的食量。
疾病活动指数（DAI）的评估每日观察小鼠的体重、大便性状和隐血情况，按表1进行评分。
将体重下降、大便性状和隐血情况的评分相加，得出每只小鼠的DAI，以评估疾病活动情况。
表1 DA I 评分标准*正常大便：成形大便；松散大便：不黏附于肛门的糊状、半成形大便；稀便：可黏附于肛门的稀水样便。
硫酸甲氨基酚法进行大便隐血试验（试剂:①10g/l硫酸甲氨基酚乙酸溶液:称取硫酸甲氨基酚1g，溶于40ml 蒸馏水中，加冰乙酸30ml溶解，蒸馏水加至100ml混匀。
放入棕色瓶中避光保存，如有变色则应重新配制。
②3% 过氧化氢溶液。
方法:取少许粪便涂于玻片中央，滴加10g/l硫酸甲氨基酚乙酸溶液3滴，及3% 过氧化氢溶液3滴混匀，立即观察结果。
阴性(-):3分钟后不出现玫瑰红色或樱红色;(+):30~60秒钟内显玫瑰红色或樱红色;强阳性(++):立即显玫瑰红色或樱红色;最强阳性(+++):立即显深玫瑰红色或深樱红色;隐血试验注意事项:1、3%过氧化氢易失效，用前滴加在血膜上，有气泡产生方可应用。
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坏死性小肠结肠炎动物模型具体方法及步骤原型物种人
来源人工喂养以及缺氧和冷刺激诱导的新生儿坏死性小肠结肠炎
模式动物品系SPF级新生SD大鼠，2日龄
实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组
实验周期1~2 weeks
建模方法雌雄不限，体重约5~10g。
新生大鼠出生48h内母乳喂养，自由摄食，与母鼠同笼；出生后48h随机分成模型组和对照组。
对照组新生大鼠出生48h后继续与母鼠同笼，鼠乳喂养，不进行缺氧冷刺激。
模型组新生大鼠出生48h后与母鼠分开，置入保育箱中并采用鼠乳代用品人工喂养，并定期给与缺氧冷刺激，以建立新生鼠坏死性小肠结肠炎动物模型；
NEC模型组：
1.新生大鼠与母鼠分离，放置在保育箱内(控制保育箱内温度28~30℃，湿度45%~65%)，采用鼠乳代用品喂养。
采用5号静脉留置针定时经口插管喂养，第1天给予0.2ml/次，每4小时1次，随后每24h增加0.2ml/次,48h后逐渐增至0.4ml。
2.缺氧及冷刺激：将新生SD大鼠置入缺氧箱中，5%氧气+95%氮气10分钟，随即打开缺氧箱，取出新生鼠，随后将其置入冰箱冷藏室中，给予4℃刺激，持续10分钟，结束后放回保育箱。
每日2次，分别进行一次缺氧+冷刺
激，连续3d，最后一次缺氧+冷刺激后24h空腹断头处死大鼠，打开腹腔取出十二指肠下端至直肠上端的肠道组织。
应用疾病模型
1.外观表现及生长情况模型组新生大鼠在开始造模后相继岀现不冋程度地排黄绿色黏液稀便、消瘦,体重减轻,随后出现胃潴留、腹胀、腹泻、进奶量下降、嗜睡常卷缩而卧、活动度下降、反应迟钝，行动缓慢，且逐渐加重。
对照组新生大鼠进食及排使均正常，无腹胀及胃潴留，活动度良好，皮下脂肪丰满；
2. 小肠肉眼观改变进行拍照；
3. 记录每只小鼠每天体重，进食情况。
4. 标本制作白片，电镜固定标本，western blot , PCR标本以用户后续检测。
肠道组织病理学检查
取盲部近端肠管1cm置于固定液中固定，石蜡包埋，取冠状切面，HE染色在光镜下观察肠组织形态学改变。
新生大鼠回盲部病理切片，HE染色，光学显微镜病理观察显示:对照组回肠部结构完整，肠黏膜完好，上皮完整、连续，腺体排列规则,组织结构清楚、分泌功能活跃、固有层血管无扩张,肌层无异常，无炎性细胞浸润及溃疡。
模型组出
现绒毛脱落、坏死，绒毛结构消失，甚至肠穿孔；固有层多量淋巴细胞、噬细胞及中性粒细胞浸润。