细胞和分子生物学实验。。。复习。。自己一个一个字手打的。。与君共勉。。

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细胞和分子生物学实验重点知识点汇总

细胞和分子生物学实验重点知识点汇总

细胞和分子生物学实验重点知识点汇总Experiment1细胞有丝分裂间期:有明显的细胞核,染色质分布较均均,由于染色质易与碱性染料结合,故细胞核的染色比细胞质深。

核中可见1~3个染色较浅的呈球状的核仁前期:细胞核膨大,染色质逐渐螺旋化为丝状的染色丝,其后染色丝进一步缩短变粗,形成一定形态和书目的染色体(这时候的每条染色体由两条染色单体组成,但在光镜下一般不易看清),核膜、核仁逐渐消失中期:每条染色体中的成对染色单体逐渐分开(但着丝粒仍未分离)全部染色体(2n=16)移向细胞中央的赤道面上,形成赤道板。

在赤道板到两面有许多纺锤丝连接细胞两极和染色体的着丝点,成为纺锤体,但不易观察到,此时染色体形态最典型后期:着丝粒纵裂为二。

这是,每条染色体的两条染色单体已完全分开,由于纺锤丝的牵引,分别向细胞的两极移动,形成了数目相等的两组染色体(这是所观察到的染色体数目比原来增加1倍,是由于S期内DNA含量倍增的结果)末期:染色体移到两极并解旋为染色质,细胞中部出现细胞板,并逐渐向边缘发展。

当染色质构成核网时,核膜、核仁重新出现。

细胞板达到两边,分裂结束,形成两个子细胞,细胞又进入间期状态。

Experiment2动物染色体的制备原理:染色体只有在分裂期的细胞,特别是中期细胞中表现出典型形态便于观察和计数,所以必须采取特殊的技术方法,从发生有丝分裂的组织和细胞悬液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备。

骨髓细胞数量多、分裂旺盛,不需体外培养和无菌操作,便于取材。

秋水仙素的作用:抑制纺锤体的形成,使细胞停留在分裂中期KCl低渗溶液:使细胞膨胀,促使中期染色体散开固定液:有固定作用,对染色体还有一定的分散作用Giemsa染色液:染色结果:低倍镜下,可见到许多大笑不等被染成紫红色呈圆形的间期细胞核以及分散在它们之间的中期分裂象。

小鼠染色体一般呈“U”形,染色体2n=40Experiment3蟾蜍血细胞的体外融合原理:细胞融合又称体细胞杂交,通过培养和诱导,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。

(硕士)分子细胞生物学复习资料介绍

(硕士)分子细胞生物学复习资料介绍

(三) 胞内容 1. 膜性结构:细胞膜、内质网、高尔基体、线粒体、核膜、溶酶体、过氧化物酶体等。 2. 非膜性结构:核糖体、中心体、微管等。 (四) 细胞骨架 1. 形态结构:弥散性、整体性、变动性与其功能相适应。 2. 生理活动:细胞运动、膜泡运输、信息传递、细胞分裂等。
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2009~2010 学年度分子细胞生物学复习资料
由于科学技术的发展使得对受体的分离和鉴定成为可能,这样可以直接认识受体,例如 通过超速离心等技术分离细胞及其亚细胞结构;以放射性同位素标记和放射自显影技术对受 体进行提纯、鉴定或定位,再以化学方法确定其立体分子结构等。
受体主要分为以下几种类型,即神经递质类受体(如乙酰胆碱、去甲肾上腺素等儿茶酚 胺类)、激素类受体(如胰岛素、甲状腺素、胰高血糖素、催乳素、肾上腺皮质激素类等), 自身调节物质受体(如前列腺素、组胺、5-HT 等)以及中枢神经系统中的某些受体(如吗 啡、苯二氮卓、GABA 受体等)。
受体的性质如下:①灵敏性:只要很低的药物浓度就能产生显著的效应。②选择性:不
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2009~2010 学年度分子细胞生物学复习资料
09 药理 宋秀明Fra bibliotek同化学异构体的反应可以完全不同,激动剂的选择性强于阻断剂。③专一性:同一类型的激 动剂与同一类型的受体结合时产生的效应类似。例如普萘洛尔为 β-受体阻断剂,它阻断肾 上腺能 β-受体而起到降压、抗心绞痛、抗心律失常的作用。
(二) 生理功能 4,5-二磷酸磷脂酰肌醇在磷脂酶C的作用下可以生成三磷酸肌醇和二酰甘油。即:
PIP 2 在PLC作用下成成IP 3 和DAG。 膜磷脂在磷脂酶A 2(PLA 2 )作用下生成花生四烯酸(AA),进一步生成血小板活
化因子PAF、白三烯(LT)、前列腺素(PG)、血栓素(TXA)等。 1. 1,4,5-三磷酸肌醇(Inositol,1,4,5-trisphosphate) 1) 细胞内Ca2+释放通道; 2) 膜磷脂降解释放IP 3 ,进入胞液作用于肌浆网,迅速使其中贮存的Ca2+大量释 放到胞浆中,细胞内的Ca2+浓度迅速升高(第一阶段),接着大部分Ca2+被泵 出细胞,使细胞内Ca2+浓衰减到静息水平。

生物复习细胞结构与生物分子

生物复习细胞结构与生物分子

生物复习细胞结构与生物分子生物复习:细胞结构与生物分子细胞是生物界最基本的结构和功能单位。

了解细胞结构与生物分子是理解生物学的基础。

本文将重点介绍细胞的结构组成以及其中的生物分子。

一、细胞的组成与结构1.1 细胞膜细胞膜是细胞的外层边界,由磷脂双分子层和蛋白质构成。

它起到了细胞与外部环境之间的物质交换和细胞内外物质平衡的调节作用。

1.2 细胞质细胞质位于细胞膜与细胞核之间,包含细胞器、细胞骨架以及胞浆等。

细胞质中有丰富的胶体溶液,其中包含着生物分子的合成与代谢所需的各种物质。

1.3 细胞核细胞核是细胞的控制中心,含有遗传物质DNA。

细胞核内还有核膜、染色质和核仁等结构。

核膜区分了细胞核与细胞质的边界,染色质是DNA与蛋白质的复合物,核仁则参与到蛋白质合成的过程中。

1.4 细胞器细胞器是细胞内的功能结构体,根据其结构和功能可以分为多种类型,如:线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体等。

这些细胞器在细胞内承担各自的生物学功能,合作共同完成细胞的正常代谢活动。

二、生物分子的组成与功能2.1 蛋白质蛋白质是生物分子中最为重要的一类,具有多种功能,包括结构支持、运输传导、酶催化、免疫防御等。

蛋白质由氨基酸链构成,不同的氨基酸组合形成了不同结构和功能的蛋白质。

2.2 核酸核酸包括DNA和RNA,它们是存储和传递遗传信息的重要分子。

DNA是双螺旋结构,包含了细胞的遗传信息;RNA则参与到蛋白质的合成过程中,传递DNA中的遗传信息。

2.3 碳水化合物碳水化合物是细胞中的能量来源,也参与到细胞外的物质交换中。

常见的碳水化合物包括单糖、双糖和多糖,它们在细胞内被分解为葡萄糖供能。

2.4 脂类脂类是构成细胞膜的重要成分,同时也是能量储存的形式。

脂类包括甘油三酯、磷脂和类固醇等,它们分别在细胞膜的结构稳定性、物质传递以及激素的合成等方面发挥重要作用。

三、细胞结构与生物分子的相互关系细胞结构与生物分子之间存在着密切的相互关系。

考研生物学复习细胞生物学与分子生物学的重点

考研生物学复习细胞生物学与分子生物学的重点

考研生物学复习细胞生物学与分子生物学的重点在考研生物学复习过程中,细胞生物学与分子生物学作为基础学科的重点内容扮演着至关重要的角色。

本文将着重介绍这两个领域的核心知识点及其相互关系,以供考生们进行有针对性的复习。

一、细胞生物学的重点1. 细胞的基本结构与组成细胞是生命的基本单位,了解细胞的结构与组成对于深入理解生命的基本过程至关重要。

细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体、高尔基体等细胞器官的结构与功能是细胞生物学的重要内容。

2. 细胞膜运输细胞膜的运输过程是细胞内外物质交换的重要途径。

复习时需要重点关注胞吞作用、胞吐作用、离子通道和载体蛋白等与细胞膜运输相关的机制。

3. 细胞分裂与有丝分裂细胞分裂是细胞生物学中的重要过程,有丝分裂是细胞分裂的一种形式。

包括有丝分裂的准备期、前期、中期、后期和末期,复习时需要了解各个阶段的特点及重要事件。

4. 胞内信号传导胞内信号传导是维持细胞内稳态及响应外界刺激的关键过程。

细胞膜受体、第二信使、蛋白激酶等是胞内信号传导的重要组成部分,需要重点复习它们的结构和功能。

二、分子生物学的重点1. DNA结构与复制DNA是遗传物质,对于理解遗传信息的传递和复制机制具有重要意义。

复习时需要关注DNA的双螺旋结构、碱基配对规律以及DNA 复制的过程和酶的作用。

2. RNA与蛋白质合成RNA是DNA的转录产物,参与蛋白质合成过程。

mRNA、rRNA 和tRNA在蛋白质合成中发挥重要作用,需要了解它们的结构和功能。

3. 基因调控与表达基因调控与表达是分子生物学中的核心内容,包括转录、剪接、翻译和转录后修饰等过程。

复习时需要了解这些过程的关键分子和调控机制。

4. 基因工程与重组DNA技术基因工程与重组DNA技术是当代分子生物学的热点领域,包括DNA克隆、PCR、Southern印迹等技术。

复习时需要熟悉这些技术的原理和应用。

三、细胞生物学与分子生物学的关系细胞生物学和分子生物学作为生物学的两个重要分支,在很大程度上相互依存、相互补充。

初中生物中的分子生物学知识点汇总

初中生物中的分子生物学知识点汇总

初中生物中的分子生物学知识点汇总分子生物学是生物学中的一个重要分支,研究生物体内生命活动的最基本单位——分子。

在初中生物教育中,学习分子生物学知识有助于学生理解生命的起源和发展、遗传信息的传递以及生物技术的应用等方面。

下面,我将为大家汇总一些初中生物中的分子生物学知识点。

1. 细胞的基本组成细胞是生物体的最基本单位,其主要由细胞膜、细胞质和细胞核组成。

细胞膜由磷脂双分子层构成,起到保护细胞内部并调控物质进出的作用。

细胞质包括细胞器和液体基质,其中包含多种细胞器,如线粒体、内质网和高尔基体等。

细胞核则存放了细胞的遗传物质DNA。

2. DNA的结构和功能DNA是生物体中的遗传物质,它主要由磷酸、糖和碱基组成。

碱基包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和鸟嘌呤四种。

DNA的双螺旋结构是由两条互补的DNA链以氢键相互连接形成的,其中腺嘌呤与胞嘧啶之间形成两个氢键,鸟嘌呤与胞嘧啶之间形成三个氢键。

DNA的主要功能是存储和传递遗传信息,通过蛋白质的合成控制了生物体的生命活动。

3. RNA的结构和功能RNA是由核苷酸组成的核酸分子,在细胞中起着多种重要功能。

与DNA不同,RNA是单链结构。

RNA的主要类型包括信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)和核糖体RNA(rRNA)。

mRNA将DNA的遗传信息转录为编码蛋白质的模板,tRNA将氨基酸运输到核糖体上形成多肽链,rRNA则是核糖体的主要组成部分。

4. 基因和基因突变基因是DNA上的一个功能片段,它指导了蛋白质的合成。

基因突变是指在基因序列中发生的小规模改变,常见的包括点突变、插入和缺失等。

突变可能会导致基因功能的改变,甚至引起遗传病等问题。

5. 蛋白质的合成蛋白质是生物体内的重要大分子,它是由氨基酸通过蛋白质合成机制合成的。

蛋白质的合成过程包括转录和翻译两个主要步骤。

转录是指将DNA上的基因信息转录成mRNA的过程,翻译是指将mRNA上的遗传信息翻译成蛋白质的过程。

天津市考研生物学硕士复习资料分子生物学和细胞生物学重点知识总结

天津市考研生物学硕士复习资料分子生物学和细胞生物学重点知识总结

天津市考研生物学硕士复习资料分子生物学和细胞生物学重点知识总结生物学作为一门研究生命起源、结构和功能的学科,涉及到许多不同的领域。

在天津市的考研生物学硕士复习资料中,分子生物学和细胞生物学是重要且必须掌握的两个知识领域。

本文将对这两个领域的重点知识进行总结,以帮助考生有针对性地进行复习。

一、分子生物学1. DNA的结构与功能:DNA是生物体内携带遗传信息的重要分子,由核苷酸基对组成。

DNA结构的核心是双螺旋结构,包括磷酸基团、脱氧核糖和碱基。

DNA的功能包括遗传信息传递和遗传信息的表达。

2. DNA复制:DNA复制是分子生物学的关键过程,它确保基因组在细胞分裂中的准确传递。

DNA复制的过程包括解旋、合成和连接三个步骤。

3. RNA的类型和功能:RNA是DNA的转录产物,可以分为mRNA、tRNA和rRNA等不同类型。

mRNA负责将DNA的信息转化为蛋白质,tRNA负责将氨基酸运输到合成蛋白质的位置,rRNA则与蛋白质结合形成核糖体。

4. 蛋白质合成:蛋白质合成是基因表达的重要过程,包括转录和翻译两个阶段。

转录将DNA的信息转化为mRNA,然后通过翻译将mRNA的信息转化为蛋白质。

二、细胞生物学1. 细胞的结构与功能:细胞是生物体的最基本结构单位,包括质膜、细胞质、细胞核和细胞器等组成部分。

细胞的功能包括细胞代谢、细胞分裂和细胞分化等。

2. 细胞信号传导:细胞通过信号传导网络进行信息的传递和调控。

信号传导方式包括内分泌方式和神经传递方式。

细胞膜上的受体、信号转导分子和效应因子是信号传导的关键组成部分。

3. 细胞增殖与凋亡:细胞增殖是细胞生物学中的重要过程,包括细胞周期和细胞分裂。

细胞凋亡是程序性细胞死亡的一种形式,对于维持机体内各种细胞群体的平衡至关重要。

4. 细胞运动:细胞运动是细胞生物学中的重要现象,包括细胞内运动和细胞间运动。

细胞内运动由细胞骨架和细胞器的协同作用完成,细胞间运动通常涉及到胞吞、胞吐和细胞迁移等过程。

生物科学实训课程学习总结细胞培养与分子生物学实验的实践掌握

生物科学实训课程学习总结细胞培养与分子生物学实验的实践掌握

生物科学实训课程学习总结细胞培养与分子生物学实验的实践掌握在生物科学实践课程中,我学习了细胞培养与分子生物学实验的理论知识,并进行了实际操作。

通过这门课程的学习,我对细胞培养和分子生物学实验的基本原理和技术手段有了更深入的了解,同时也掌握了一些操作技巧和实验设计的方法。

下面是我对这门课程的学习总结。

一、细胞培养的学习与实践细胞培养是生物科学研究中重要的实验手段,通过对细胞的培养和观察,我们可以了解细胞的结构和功能特点。

在课程的学习中,我了解了细胞培养的基本原理,包括培养基的配制、细胞的传代和观察等。

通过实际操作,我掌握了培养箱的使用方法和无菌操作的技巧。

在细胞培养实验中,我成功培养了多种细胞系并观察了它们的生长状态。

通过细胞培养的实践,我了解了不同细胞系的特点和要求,并学会了如何选择适当的培养条件。

同时,我也注意到了细胞培养中可能出现的问题,如细胞感染、污染等,并学会了相应的解决方法。

二、分子生物学实验的学习与实践分子生物学是研究生物分子结构和功能的科学领域,它是现代生物学研究的基础和重要手段。

在课程中,我学习了基本的分子生物学实验方法,包括DNA的提取、PCR扩增、凝胶电泳等。

在实验中,我充分运用了分子生物学实验技术,成功进行了DNA提取和PCR扩增实验。

通过这些实验,我对分子生物学实验的操作流程和数据分析有了更具体的了解。

同时,我也了解到了实验中可能出现的问题,如PCR反应体系的优化、杂交实验的条件优化等,并熟悉了解决这些问题的方法。

三、学习总结与感悟通过这门课程的学习,我对生物科学实验的基本原理和技术手段有了更清晰的认识,并通过实际操作掌握了一些实验技巧和解决问题的方法。

在实验过程中,我不仅提高了自己的动手实验能力,还培养了观察和分析问题的能力。

这门课程的学习让我更深入地了解了生物科学领域的一些基础实验技术,为日后的学习和科研打下了坚实的基础。

总之,通过对细胞培养和分子生物学实验的学习,我不仅掌握了相关的理论知识,还培养了实际操作的能力。

高三生物分子与细胞知识点

高三生物分子与细胞知识点

高三生物分子与细胞知识点高三阶段对于生物课程而言,其中一个重要的模块就是分子与细胞知识点。

这个知识点的掌握是理解生命科学的基础,也是理解进化、物种形成以及人类疾病等重要现象的关键。

1. DNA与RNADNA(脱氧核糖核酸)是生物体内最重要的遗传物质,它以双螺旋的结构存在于细胞核中。

DNA的核苷酸由磷酸、脱氧核糖和氮碱基组成。

其中,四种碱基为腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)。

RNA(核糖核酸)与DNA结构类似,但在核糖中没有脱氧糖,另外胸腺嘧啶(T)被尿嘧啶(U)取代。

2. 基因与蛋白质合成基因是DNA的一段特定序列,它含有编码蛋白质的信息。

在基因表达过程中,首先发生转录,即DNA的信息被转录成RNA。

这个过程由RNA聚合酶负责完成。

然后,RNA通过核膜孔离开细胞核,在细胞质中进行翻译。

翻译过程中,RNA通过三个碱基一组的密码子与氨基酸对应,从而合成特定的蛋白质。

3. 细胞膜与细胞器细胞膜是细胞的外包膜,它由磷脂双层组成,其中嵌入有多种蛋白质。

细胞膜具有选择性渗透性,可以控制物质的进出。

而细胞器则是细胞内的结构,包括细胞核、内质网、高尔基体、溶酶体等。

细胞核是DNA的储存和复制中心;内质网在蛋白质合成过程中起到运输和折叠的作用;高尔基体是合成和包装细胞内物质的地方;溶酶体则负责分解细胞内的废物和吸收营养物质。

4. 呼吸与光合作用呼吸是生物体获得能量的过程,通过氧化葡萄糖分解产生三磷酸腺苷(ATP)。

呼吸可以分为无氧呼吸和有氧呼吸两种形式,其中有氧呼吸是最常见的方式,它需要氧气参与,并在线粒体内进行。

光合作用是植物细胞中发生的重要反应,通过光合作用,植物将太阳能转化为化学能,储存在化学物质中,同时释放出氧气。

5. 遗传与变异遗传是生物种群中个体间遗传信息传递的过程。

遗传的基本规律是孟德尔遗传定律,包括显性和隐性基因的遗传、基因的分离和重新组合等。

变异则是指遗传物质发生的突变或重组,导致生物个体的遗传信息发生改变。

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其实都是实验报告上面的。

就是整理了下。

拿去用吧~~Experiment1细胞有丝分裂间期:有明显的细胞核,染色质分布较均均,由于染色质易与碱性染料结合,故细胞核的染色比细胞质深。

核中可见1~3个染色较浅的呈球状的核仁前期:细胞核膨大,染色质逐渐螺旋化为丝状的染色丝,其后染色丝进一步缩短变粗,形成一定形态和书目的染色体(这时候的每条染色体由两条染色单体组成,但在光镜下一般不易看清),核膜、核仁逐渐消失中期:每条染色体中的成对染色单体逐渐分开(但着丝粒仍未分离)全部染色体(2n=16)移向细胞中央的赤道面上,形成赤道板。

在赤道板到两面有许多纺锤丝连接细胞两极和染色体的着丝点,成为纺锤体,但不易观察到,此时染色体形态最典型后期:着丝粒纵裂为二。

这是,每条染色体的两条染色单体已完全分开,由于纺锤丝的牵引,分别向细胞的两极移动,形成了数目相等的两组染色体(这是所观察到的染色体数目比原来增加1倍,是由于S期内DNA含量倍增的结果)末期:染色体移到两极并解旋为染色质,细胞中部出现细胞板,并逐渐向边缘发展。

当染色质构成核网时,核膜、核仁重新出现。

细胞板达到两边,分裂结束,形成两个子细胞,细胞又进入间期状态。

Experiment2动物染色体的制备原理:染色体只有在分裂期的细胞,特别是中期细胞中表现出典型形态便于观察和计数,所以必须采取特殊的技术方法,从发生有丝分裂的组织和细胞悬液中得到。

最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备。

骨髓细胞数量多、分裂旺盛,不需体外培养和无菌操作,便于取材。

秋水仙素的作用:抑制纺锤体的形成,使细胞停留在分裂中期KCl低渗溶液:使细胞膨胀,促使中期染色体散开固定液:有固定作用,对染色体还有一定的分散作用Giemsa染色液:染色结果:低倍镜下,可见到许多大笑不等被染成紫红色呈圆形的间期细胞核以及分散在它们之间的中期分裂象。

小鼠染色体一般呈“U”形,染色体2n=40Experiment3蟾蜍血细胞的体外融合原理:细胞融合又称体细胞杂交,通过培养和诱导,两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。

是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞,随后异核体同步进入有丝分裂,核膜崩溃,来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞,此杂交细胞具有很强的生命力,增殖旺盛。

细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段,也是制备单克隆细胞株的重要技术。

肝素:血液抗凝PEG溶液:促进细胞凝集Hanks溶液:终止PEG作用,平衡缓冲溶液使PEG的浓度降低至诱导融合的要求。

詹纳斯绿:染液Experiment4 AKP Km测定原理:在温度pH和酶浓度一定时,酶促反应初速度与底物浓度的关系满足米-曼氏方程式(公式自己补充)Km是酶的特征常数,反映了酶与特定底物的亲和力大笑。

测定Km值通常用双倒数法,推导上述米-曼氏方程式可得一直线方程:(公式自己补充),在横坐标上的截距即可算出Km 值。

AKP最适pH为10,而酶蛋白最稳定pH为8,测定其Km值时反应体系选择其最适pH。

本实验取pH为10。

Experiment5葡萄糖定量方法─标准管法测定葡萄糖含量原理:在葡萄糖氧化酶的催化作用下β-D葡萄糖样化成过氧化氢和葡萄糖酸,在过氧化酶的存在下,过氧化氢与苯酚、4-氨基安替比林与偶联酚缩合成可被分光光度计测定的红色醌类化合物。

其红色在510nm波长处有最大吸收峰,颜色的深浅在一定范围内与血葡萄糖浓度成正比。

结果:人体正常血糖:3.9~5.8 m mol/ LExperiment6蛋白质定量测定方法─标准曲线法测定蛋白质含量原理:双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物,在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络合物,此反应即为双缩脲反应。

含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。

蛋白质含有多个肽键,在碱性溶液中能与铜离子络合成紫红色化合物。

其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比,可以用比色法进行鉴定。

Experiment7酶联免疫吸附试验(ELISA)─双抗体夹心法原理:酶联免疫吸附试验是一种固相酶免疫测定的方法,目前广泛应用于各种抗原和抗体的检测。

其基本原理是将抗原或抗体固定在固相载体表面,并保持其免疫活性,再与酶标记抗体或抗原联结,并保留酶的活性,然后加入酶反应的底物,后者被酶催化变为有色产物,反应颜色的深浅可与相应抗原或抗体的量相关。

在本实验中(1)用一直抗体包被固相载体;(2)加入受检的标本(含待测抗原),使抗原与固相上的抗体结合;(3)加入以辣根过氧化物酶标记的已知抗体,使之与抗原结合。

标记的酶可催化底物(四甲基联苯胺)起显色反应,从而指示特异性抗原抗体反应的存在。

Experiment8血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳原理:血清蛋白的pI都在7.5一下,在pH8.6的巴比妥缓冲液中以负离子的形式存在,分子大小,形状也各有差异,所以在电场作用下,可在醋酸纤维薄膜上分离成A、α1、α2、β、γ五条区带。

电泳结束后,讲醋酸纤维薄膜置于染色液,使蛋白质固定并染色,再脱色结果:A、α1、α2、β、γExperiment9免疫电泳与对流免疫电泳原理:免疫电泳是将电泳与双向琼脂扩散相结合的一种抗原分析方法。

首先根据抗原中各种蛋白质组分的电荷和分子量大小的不同,在电场作用下有不同的迁移率,从而可将抗原混合物中的各种不同组分愤慨,然后使其与特异性抗体进行双向扩散,发生免疫学沉淀反应。

对流免疫电泳是电泳技术与双向琼脂扩散技术相融合而形成的一种定向加速的凝胶内免疫沉淀反应。

与双向琼脂扩散技术中抗原与抗体分别向四周自由扩散不同,对流免疫电泳在凝胶中加一直流电场,抗原和抗体受到电泳和电渗两种力量的综合作用而向某一方向定向加速移动,因此可以提高灵敏度,明显缩短反应时间。

Experiment10小鼠脾单个核细胞的分离─密度梯度离心法:原理:本次实验根据颗粒沉降原理,将不同密度的小鼠脾脏细胞置于淋巴细胞分离液上进行水平式离心,使单个核细胞在其沉降运动中位于分离液洁面上;达到分离小鼠脾单个核细胞的目的。

已知小鼠淋巴细胞和单核细胞的密度约为1.088,而红细胞与粒细胞的密度均大于1.088。

因此,用密度为1.088±0.001的淋巴细胞分离液通过密度梯度离心方法,可从小鼠脾脏细胞分离得到单个核细胞。

而分离人单个核细胞的淋巴细胞分离液密度为1.077±0.001.Experiment11凝胶柱层析分离鉴定蛋白质原理:利用交联葡聚糖凝胶G-50的凝胶过滤作用,将脲酶和胰岛素分开,以Folin-Denis反应检查流出液中的蛋白质。

此反应主要靠蛋白质中的酪氨酸和色氨酸与含磷鉬钨酸的酚试剂生成蓝色鉬蓝,蓝色深浅与蛋白质含量成正比关系。

以纳氏试剂检查脲酶活性,此反应是先将脲酶流出液分解尿素产生胺,而氨可与纳氏试剂作用生成黄色的碘代双汞胺。

脲酶试剂:分子筛层析结果:先分离出脲酶,再分离出胰岛素,出现两个峰值Experiment12DNS-氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析原理:聚酰胺薄膜层析是一类较特殊的吸附分配层析。

混合物随流动相通过聚酰胺薄膜时,由于被分离的物质与聚酰胺薄膜上的酰胺基团形成氢键,各种物质形成氢键能力强弱不同,决定了吸附力的差异,吸附力强展层速度较慢,吸附力弱展层速度较快,同时展层溶剂与被分离物质在聚酰胺粒子表面竞争形成氢键,选择适当的展层溶剂,使被分离物质在溶剂与聚酰胺薄膜表面之间分配系数产生最大差异。

一般讲,易溶于展层剂的所受到的动力作用大,展层速度块,反之速度就慢。

通过各物质的吸附力和分配系数不同,使得被分离的物质在聚酰胺薄膜层析中得到分离。

结果:聚酰胺薄膜上出现9~10个点。

Experiment13鼠肝DNA的提取和纯化原理:DNA是染色体的主要组成成分,是遗传的物质基础。

DNA在生物组织中往往以核蛋白的形式主要存在于细胞核中,分子量甚大,人的染色体DNA(单倍体23条染色体)平均分子量约为6×10(10)道尔顿,约相当于1.3×10(5)kb。

提取DNA最基本的要求是保持DNA大分子的完整性及纯度,避免机械张力(剪切)引起DNA分子的降解,注意对杂质及蛋白质的去除,防止细胞内存在的DNA酶对DNA的酶解。

苯酚-氯仿混合液:使蛋白质变性,混合液分层冰无水乙醇及70%乙醇:乙醇吸收DNA分子周围的水分,DNA失水形成白色絮状沉淀RNase:降解RNA蛋白酶K:裂解细胞,消化蛋白质,使核蛋白解聚并使细胞内存在的DNA酶失活。

结果:A260/A280接近1.80说明样品纯度越高。

Experiment14PCR技术检测β-actin基因原理:PCR的原理类似于天然DNA的复制,主要利用DNA聚合酶依赖于DNA模板的特性,模仿体内的复制过程,在附加的一对引物(人工合成的寡核苷酸片段,它与待扩增片段两条链的两段DNA序列分别互补)之间引发聚合酶反应。

DNA样品:提供DNA合成的模板引物:提供3’-OH末端,特异性扩增,界定扩增范围4种dNTP:双链合成的原料TaqDNA聚合酶:5’→3’聚合,3’→5’内切其他试剂:Mg2+:Taq酶活性中心需要Tris-HCl:提供最适pH:6.8~7.8KCl:促进引物退火(使引物加到DNA链上)明胶:稳定酶的作用Experiment15琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段原理:在pH8.0-8.3的缓冲液中,核酸分子带负电荷,向正极移动。

由于不同大小和构象的核酸分子电荷密度大致相同(忽略碱基上的部分电荷,每个核苷酸残基都带二个负电荷),因此在自由泳动时,各种核酸分子的迁移率相似,无法分开。

然而,在浓度适当的琼脂糖凝胶中,由于分子筛效应,使大小和构象不同的核酸迁移率出现差异,从而把它们分开。

溴乙锭:染色剂(吖啶橙)结果:在紫外灯下可以看见220bp的荧光带出现在溴酚蓝的后面。

DNA片段的荧光强弱由DNA含量决定,而DNA的迁移率反映了DNA片段的大小。

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