总抗氧化能力测定(FRAP法)

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小麦叶片总抗氧化能力测定（FRAP法）

一、实验原理

FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-

tri-pyridyl-tria-zine（Fe 3+-TPTZ）产生蓝色的 Fe2+-TPTZ,随后在 593nm测定蓝

色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10側，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样

品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显著影响检测反应。

Antioxidant

Fe3+-TPTZ （橘黄色）---------- >Fe2+-TPTZ （蓝色）

二、实验步骤

1. FRAPT作液配制：

0.3 M pH 3.6醋酸缓冲液：0.364g无水醋酸钠+3.2mL冰乙酸定容至200mL 用1M HCl

调节pH至3.6 ;

10mmol/L TPTZ溶液25mL 0.078g TPTZ 用40mM盐酸溶液定容至25mL 20mmol/L FeCl

3溶液 50mL 2.78g 用 RO水定容至 50mL

上述溶液以 10:1:1 的比例混合（现配现用）。

2. 取叶片0.1g，加入2.5mL蒸馏水研磨稍沉淀后取 1.5mL 12000g离心10min

（4°C）,取上清液。

3. 在反应管中加入100uL上清液，再加入2.4mL工作液，37°C条件下水浴10min, 于593nm

处测定吸光度，

4. 标准曲线绘制：以0.1-1.6mmol/L的FeSQ的标准液替代样品绘制标准曲线。

三、结果计算

以1.0mmol/L的FeSQ为标准，样品抗氧化活性以达到同样吸光度值为一个FRAP fi，

计算结果。

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2.8.2. Ferric Reducing/Antioxidant Power (FRAP) assay

Briefly, the FRAP reagent contained 2.5 mL 10 mM L_1

TPTZ solution in 40 mM L1HCI plus 2.5 mL 20 mM L1 FeCI^ and 25 mL 0+3 M L1acetate buffer, pH 3*6 was prepared freshly and warmed at 37°C?After addition of root ethanol extracts (prepared as in section 2.7) and incubation at 37°Cfor 5 min, absorbance of the reaction mixture was measured at 593 nm. The final result was expressed as the concentration of antioxidants having a ferric reducing ability equivalent to that of 1 mM L_1 FeSO4based on the standard curve for FeSO4 x 7H.0 at a concentration range between 100 and 1000 pM L_1 [3 口

[1] Benzie I F F, Strain J J. The Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) as a

Measure of “ntioxidant Power”： The FRAP Assay[J]. Analytical Biochemistry, 1996, 239(1):70-6.

[2] Katarz yna Szafra nska, Rafa? Szewczyk, Kryst yna Maria Jan as. In volveme nt of

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Central European Journal of Biology, 2014, 9(11):1117-1126.