核桃青皮乙醇提取物的抑菌效果测定
核桃楸外果皮三萜类物质的提取及抑菌活性
核桃楸外果皮三萜类物质的提取及抑菌活性
核桃楸（Carya cathayensis）是一种果树，主要分布在中国的江西、湖南、湖北、四川等地。
它的果实外表有一个坚硬的果皮，果肉里面有核仁，所以被称为核桃楸。
核桃楸有很高的药用价值，主要是因为它含有一些具有抑菌活性的物质。
为了提取核桃楸果皮中的三萜类物质，首先需要将新鲜的核桃楸果皮晒干，然后研磨成粉末。
接下来，将粉末与乙醇进行浸泡，使其充分溶解。
然后，将溶液过滤，并用旋转蒸发仪将溶液中的乙醇去除，得到三萜类物质的浓缩物。
将浓缩物溶于水，使用薄层色谱法进行分离纯化。
通过该方法，可以从核桃楸果皮中提取到高纯度的三萜类物质。
三萜类物质是一类具有抑菌活性的化合物。
经过实验室的测试，发现核桃楸果皮中提取出的三萜类物质对多种细菌具有抑制作用。
尤其是对一些常见的致病菌，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等，具有很强的抑菌效果。
实验结果还表明，核桃楸果皮中的三萜类物质对抗草莓黑斑病菌也有一定的抑制作用。
三萜类物质的抑菌活性主要是通过破坏细菌细胞膜的结构和功能来实现的。
三萜类物质可以与细菌细胞膜中的脂质相互作用，导致膜的脂质排列发生改变，从而增加了细菌细胞膜的渗透性，破坏了细胞膜的完整性，使细菌无法正常生长和繁殖。
核桃楸果皮中提取的三萜类物质具有很强的抑菌活性，对多种致病菌都有一定的抑制作用。
这些研究结果为进一步开发核桃楸果皮中的药用成分提供了科学依据，也有助于该植物的综合利用和进一步开发。
核桃青皮提取物抑菌机理研究
64农业科学近些年来我国核桃产量稳步增长，在核桃产业发展过程中核桃资源的综合开发利用已经成为产业发展关键所在。
在资源综合利用过程中核桃青皮资源的利用就显得尤为重要，对于如何更有效、最大化的利用核桃青皮资源，很多展开了各种各样的研究。
既有对核桃青皮药用价值的研究，也有对核桃青皮抑菌效果的研究，本次研究主要是针对核桃青皮提取物抑菌机理所开展的研究。
1.概念界定1.1核桃青皮。
核桃青皮又名青龙衣，是核桃外部一层厚厚绿色果皮。
有动物实验表明，青核桃中含有一定的无机钾盐成分是镇痛的活性成分。
除此之外鲜青皮汁（干皮蒸水）外用涂抹对于治疗顽癣有非常好的疗效。
而新鲜的绿皮外衣用刀削下之后可以用于治疗体癣、股癣、牛皮癣、头癣及秃疮。
1.2核桃青皮提取物。
指利用水、乙醇、甲醇等各种溶剂对核桃青皮的化学成分进行提取之后的提取物。
核桃青皮提取物对于治疗肝胃气痛、胃神经痛、急性胃痛、慢性胃痛等都有着一定疗效。
在上世纪五十年代民间就已经有用青核桃泡酒剂治疗痛经、胃痛等的，可以在一定程度上代替吗啡，止痛效果良好。
1.3核桃青皮提取物。
除去止痛之外，核桃青皮提取物在抑菌方面还有非常突出的作用，尤其是在针对几种食源性致病性细菌与果蔬采摘后植物源性真菌的抑制生长的作用。
2.核桃青皮价值分析近些年来商洛全市核桃种植面积在不断扩大，截止2015年底商洛全市核桃种植面积达到310万亩。
而在核桃生产过程中核桃青皮就成为核桃收获之后的农林废弃物，存量非常大。
而在核桃果实收获之后核桃青皮一般都被人丢弃在田间，很少有人能认识到核桃青皮的价值，一般都当作是废弃物随意处理，但这样做不但会对环境造成持续的污染，同时还会对动植物生存产生威胁，更有甚者造成生态环境的破坏。
2.1药用价值。
而核桃青皮本身具备非常大的药用价值，是一种非常具有价值的可再利用资源，可以通过开发利用其药用价值来提升核桃青皮的资源利用效率。
为了能开发核桃青皮的药用价值，延长核桃经济产业链，促进商洛核桃产业进一步发展，我们必须走核桃青皮综合利用的道路。
核桃青皮提取物对病原生物抑菌作用的研究进展
摘要：核桃青皮为传统的中药材，可用于治疗皮肤瘙痒及痛等病症，核桃青皮泡酒，可用于治肝胃气痛，胃神经痛，急、慢性胃痛。
现代研究表明，提取物含有多种抑菌活性成分，例如，胡桃醌、酚类、黄酮类、多糖类、二芳基庚烷类等，对真菌、细菌、病毒等病原生物有明显的抑制或杀灭作用。
本文就目前核桃青皮提取物的抑菌作用的研究情况进行综述，旨在为后续深入研究提供参考。
关键词：核桃青皮提取物法；病原生物；抑菌作用基金项目：2017年度陕西省教育厅专项科研计划项目17JK0961《商洛核桃青皮抑菌活性、成分及机理的相关研究》；院级重大课题SlZY2016002“商洛核桃青皮抑菌活性、成分及机理的相关研究”中图分类号：S664文献标识码：ADOI 编号：10.14025/ki.jlny.2019.05.023韩晓云，刘鹏，王震，范学红（商洛职业技术学院，陕西商洛726000）核桃青皮提取物对病原生物抑菌作用的研究进展核桃青皮，即为胡桃科植物胡桃的未成熟果实的外果皮，又称青龙衣。
截至2015年年底，商洛全市核桃种植面积达310万亩。
核桃青皮作为核桃收获中产生的农林废弃物，有着巨大的存量。
在核桃果实采收后，它们被当作废弃物堆在田间，持续污染环境，危害动植物的生存，破坏生态环境。
核桃青皮作为一种宝贵的可再利用资源，其很多药用价值需要深入开发和利用。
为了更好地发展商洛核桃产业，延长核桃经济产业链，必须走综合利用的道路。
有研究表明，核桃的各个部位如树叶、树枝及外皮都有较高的药用价值，具有抗菌、杀虫等诸多功效[1-3]。
本文就核桃的抑菌、抗毒及杀虫方面的研究现状进行分类综述。
1对细菌的抑制作用核桃青皮提取物对致病菌性细菌与条件致病菌有较广泛的抑制作用，例如食源性肠道致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门菌、接触感染性细菌如铜绿假单胞菌、呼吸道感染性细菌，比如肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌等。
吴莹[4]等以新疆核桃青皮为试验对象，研究蒸馏水、甲醇、乙醇和丙酮的水溶液浸提核桃青皮后获得的提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌三种菌的抑菌性能，试验表明不同浓度水溶液浸提后获得的核桃青皮提取物都对上述三种菌的生长繁殖有一定的抑制作用，且25%乙醇提取物对大肠杆菌的抑菌圈直径最大，即抑菌作用最好。
核桃楸外果皮三萜类物质的提取及抑菌活性
核桃楸外果皮三萜类物质的提取及抑菌活性核桃楸外果皮是一种植物外皮，含有丰富的三萜类物质，具有多种生物活性。
本实验旨在提取核桃楸外果皮中的三萜类物质，并探讨其抑菌活性，为其在医药和食品工业中的应用提供实验基础。
一、实验材料和方法1. 实验材料核桃楸外果皮、无水乙醇、甲醇、氯仿、对乙酰氯、十二烷基硫酸钠、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷2. 实验方法（1）提取核桃楸外果皮中的三萜类物质将核桃楸外果皮切碎晾干备用，按照固液比1:10，用无水乙醇浸泡24h，在常温下反复浸提3次，合并所得提取液，过滤，浓缩，得粗提取物。
（2）分离粗提取物中的三萜类物质将粗提取物溶解在甲醇中，静置，过滤，收集溶液，再用氯仿对其萃取，合并氯仿层，用对乙酰氯对残留的甲醇层酰化，将甲醇层与氯仿层酰化后的产物再次萃取，得含三萜类物质的溶剂层。
（3）测定核桃楸外果皮中三萜类物质的含量取一定量的溶剂层溶液，用十二烷基硫酸钠溶解，用石油醚洗涤，将石油醚层用乙酸乙酯洗涤，收集乙酸乙酯层，浓缩，称量，计算三萜类物质的含量。
（4）抑菌活性用二氯甲烷将三萜类物质从提取液中分离，得到三萜类物质的纯物质。
分别将三萜类物质的纯物质与革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌接种在琼脂平板上，观察菌落的生长情况。
二、实验结果通过实验，我们得到了核桃楸外果皮中的三萜类物质，并测定了其含量。
我们也对三萜类物质进行了纯化，得到了其纯物质，用于进一步的抑菌活性实验。
四、实验结论本实验成功地提取了核桃楸外果皮中的三萜类物质，并探讨了其抑菌活性。
这为核桃楸外果皮的进一步开发利用提供了实验基础，也为相关领域的研究提供了参考。
五、实验意义核桃楸外果皮中的三萜类物质具有潜在的应用前景，本实验为其在医药和食品工业中的应用提供了实验基础。
希望在未来的研究中，能够更深入地挖掘其生物活性和应用价值，为人类健康和食品保鲜提供更多的选择。
核桃楸皮提(萃)取物的抑菌性能研究
第20卷第$期2018年5月大连民族大学%报Journal of Dalian Minzu University V〇1.20,N〇.3May2018文章编号:2096 -1383(2018)03 -0205 -05核桃楸皮提（萃）取物的抑菌性能研究陈苛蒙，金黎明，包艳春，王晓彤，孙怡，胡文忠(大连民族大学生命科学学院生物技术与资源利用教育部重点实验室，辽宁大连116605)摘要:为了研究核桃楸皮提（萃）取物的抑菌性能，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、沙门氏菌、弧菌、白色念珠菌5种致病菌进行了抑菌性能试验。
核桃楸皮经乙醇提取后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，采用琼脂扩散法测试其对5种致病菌的抑菌活性。
结果表明:经乙醇提取后，提取物对5种致病菌都有抑制作用;石油醚萃取物只对弧菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用，氯仿萃取物对弧菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌有抑制作用，乙酸乙酯萃取物对5种致病菌均有抑制作用。
为核桃楸皮活性成分的功能研究进一步补充了数据。
关键词:核桃楸皮;抑菌活性;致病菌;活性物质中图分类号:R285.5 文献标志码:AResearch onAntibacterial Activity of BarkExtractiveof Juglans rnandshurica MaximCHEN Ke- meng，JIN Li- ming，BAO Yan- chun，WANG Xiao- tong，SUN Yi，HU Wen-zhong(School of Life Science，Key Laboratory of Biotechnology and Bioresources Utilization ofMinistry of Education，Dalian Minzu University，Dalian Liaoning 116605，China)Abstract：To study the antilDacterial activity of extract of barl^of Juglans rnandshurica Maxim onStaphylococcus aureus，EscCericCia coli，Salmonella typhimurium，Vibrio parahaemolyticu andCandida albicans，these experiments were conducted.After extracted by ethanol，barl^of Juglans mandshurica Maxim was extracted by petroleum etlier，chloroform，and etliyl acetate successively.Antibacterial activity of extracts was measured by agar diffusion method.The showed that tlie etlianol extract had inhibitory effect on a i five kinds of patliogenic bacteria.Petroleum etlier extract only had strong inhibitory effect on Vibrio parahaemolyticu and Staphylococcus aureus.Chloroform extract could inhibit Vibrio parahaemolyticu，Staphylococcus aureus andCandida albicans.Ethyl a cetate extract showed inhibitory activities on five kinds of pathogenicbacteria.This study provides supplementary data on the active component functions Juglans mandshurica Maxim.Key words：barl^of Juglans mandshurica Maxim；antibacterial activity;pathogenic bacteria;active components收稿日期:2018 -02 -22;最后修回日期:2018 -04 -18基金项目：国家重点研发计划项目（2016YFD0400903);辽宁省自然科学基金指导计划项目（20170540204);中央高校基本科研业务费专项资金资助项目（DC201501020302，DC201501020101 )。
核桃青皮提取物抑菌活性研究的开题报告
核桃青皮提取物抑菌活性研究的开题报告一、研究背景及意义核桃是一种常见的坚果，因其营养丰富、口感好而受到广泛的欢迎。
同时，核桃还具有一定的药用价值，其青皮富含多种生物活性物质，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抑制肿瘤等多种生物学活性。
近年来，越来越多的研究表明核桃青皮提取物在抑菌方面具有良好的活性。
抗菌是现代医学和生物学研究领域十分重要的一项研究内容。
在抗菌药物不断出现耐药性的情况下，研究和开发天然抗菌物质具有十分重要的现实意义。
而核桃青皮提取物是一种天然产物，具有低毒、高效、生物降解等特点，对抗菌药物的替代具有重要的意义。
因此，对核桃青皮提取物的抑菌活性进行深入研究，对于拓展天然抗菌物质的应用范围，提高食品和药品的安全性和稳定性，具有重要的理论和实际意义。
二、研究内容和方法本文选取了核桃青皮提取物作为研究对象，采用基本的微生物学实验方法，通过对常见细菌的抑菌实验，研究核桃青皮提取物的抑菌活性。
具体实验内容包括：制备核桃青皮提取物、选择不同类型的细菌，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等，进行抑菌实验。
实验过程中，分别测定不同浓度的核桃青皮提取物对细菌的抑制作用，使用菌落计数法、细胞增殖率法等方法对实验结果进行分析和统计。
三、研究预期结果和意义通过实验研究，预计可以获得以下结果：1.核桃青皮提取物具有一定的抗菌活性，不同类型的细菌对其抑制效果有所不同；2.核桃青皮提取物的抑菌活性与浓度存在一定的关联，随着浓度的增加，抑菌效果也随之增强；3.通过对核桃青皮提取物抑菌活性的研究，有望为拓展天然抗菌物质的应用范围提供新途径，为食品和药品的安全性和稳定性提供有力的保障和支撑。
综上所述，本研究对于拓展自然抗菌物质应用领域，提高食品和药品的安全性和稳定性具有重要的意义，该研究结果将为相关实践提供有力的理论和实际支撑。
6种酚类化合物及胡桃醌的体外抑菌活性
6种酚类化合物及胡桃醌的体外抑菌活性杨光;包晓玮;陈勇;吴莹;马菁菁【摘要】核桃青皮提取物具有较好的抑菌作用,本试验以核桃青皮及叶片中含量较高的7种植物次生代谢物为研究对象,评价其抑菌活性,为解析核桃青皮提取物的抑菌活性及开发新的饲用抗生素替代品提供参考.以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为受试菌,将7种植物次生代谢物——绿原酸、鞣花酸、丁香酸、芦丁、单宁酸、对羟基苯甲酸和胡桃醌分别稀释至1.0000、0.5000、0.2500、0.1250和0.0625 mg/mL,采用滤纸片扩散法,以培养24 h后抑菌圈直径大小反映植物次生代谢物的抑菌活性.结果显示:除大肠杆菌对羟基苯甲酸和单宁酸不敏感外,其他植物次生代谢物对3种受试菌均有不同程度的抑制作用.对大肠杆菌抑制作用的顺序为鞣花酸>胡桃醌>芦丁=丁香酸>绿原酸>对羟基苯甲酸=单宁酸;对枯草芽孢杆菌抑制作用的顺序为鞣花酸>绿原酸=对羟基苯甲酸>丁香酸>单宁酸>芦丁>胡桃醌;对金黄色葡萄球菌抑制作用的顺序为胡桃醌>丁香酸>芦丁>单宁酸>鞣花酸>对羟基苯甲酸>绿原酸.由此得出,绿原酸、鞣花酸、丁香酸、芦丁、单宁酸、对羟基苯甲酸和胡桃醌对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有不同程度的抑制作用,其中鞣花酸对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有较强的抑制作用,胡桃醌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用.【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2018(030)009【总页数】10页(P3710-3719)【关键词】酚类化合物;黄酮类化合物;胡桃醌;抑菌活性【作者】杨光;包晓玮;陈勇;吴莹;马菁菁【作者单位】新疆农业大学动物科学学院,乌鲁木齐 830052;新疆农业大学食品与药学学院,乌鲁木齐 830052;新疆农业大学动物科学学院,乌鲁木齐 830052;新疆农业大学动物科学学院,乌鲁木齐 830052;新疆农业大学动物科学学院,乌鲁木齐830052【正文语种】中文【中图分类】R285作为生产和使用抗生素的大国，我国每年有近一半的抗生素被用于畜牧业，由此引发的耐药性威胁也越发受到公众关注。
核桃青果皮系统溶剂提取物抑菌作用研究
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在 新 疆 亦 有 大 面 积 种植 ， 要 集 中在南 疆 的 和 主
Байду номын сангаас
田、 玉 、 墨 叶城 、 宿 ４个 县 区 ， 量 大 且 品 质 高 ［。 温 产 ２ ］ 核 桃 青 果 皮 是 采 收 核 桃 时 的 废 弃 物 【， 有 如 鞣 含 酸 质 、 桃 醌 、 桃 甙 、 檬 烯 、 豆 素 、 酮 体 等ｆ 胡 胡 柠 香 黄 ４ ＿ 多 种 生 物 活 性 物 质 。 目前 ， 关 核 桃 青 果 皮 提 取 有 物 的 提取 及 抗 菌 活 性 方 面 的研 究 较少 。笔 者 以 核
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Hans Journal of Agricultural Sciences 农业科学, 2019, 9(10), 980-984Published Online October 2019 in Hans. /journal/hjashttps:///10.12677/hjas.2019.910137The Antibacterial Effect of the AlcoholicExtract from Walnut Green PeelLili Zhang, Anqi Du, Xinyi Wang, Jinbao Li, Haiyang Yu, Yiliang Liu, Min Zhou, Xinru Kong, Na XuSchool of Biological Science/Jining Medical University, Rizhao ShandongReceived: Oct. 8th, 2019; accepted: Oct. 23rd, 2019; published: Oct. 30th, 2019AbstractThis research aims to determine the antibacterial effect of the acoholic extract from walnut geen pel. We used Physalospora nasei and Monilinia fructicola to do this study. The acoholic extracts were diluted 10, 100 and 1000 times respectively to determine the antibacterial effect, the results showed that ten times dilution has the significant bacteriostatic effects on Physalospora nasei and Monilinia fructicola, and there were no significant differences between 100 times and 1000 times dilutions at 0.01 level and 0.05 level. Then we continued to use the ten times dilution to deal with the two bacterial solutions to test the catalase activity in the solution, the extract had been proved to have inhibitory effect on catalase activity.KeywordsWalnut Geen Pel, Acoholic Extracts, Bacteriostatic Determination, Catalase核桃青皮乙醇提取物的抑菌效果测定张黎丽，杜安琪，王欣艺，李金宝，于海洋，刘祎良，周敏，孔心茹，徐娜济宁医学院生物科学学院，山东日照收稿日期：2019年10月8日；录用日期：2019年10月23日；发布日期：2019年10月30日摘要利用核桃青皮组织的乙醇粗提取物对苹果轮纹病菌和桃褐腐病菌的生长抑制效果进行测定。
将核桃青皮组织的乙醇提取物稀释10倍，100倍和1000倍，分别测定不同稀释液的抑菌效果，结果表明，10倍稀释张黎丽等提取物的抑菌效果最为显著，10倍和100倍液之间具有极显著差异(P < 0.01)，100倍和1000倍倍液之间在0.01水平和0.05水平上无显著差异(P > 0.05)。
取10倍乙醇提取物处理菌液2小时，对菌液中的过氧化氢酶的活性进行鉴定，结果表明核桃青皮提取物对病菌的抗逆性有一定限制，抑制了细胞酶的活性。
关键词核桃青皮，乙醇提取，抑菌测定，过氧化氢酶Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY)./licenses/by/4.0/1. 引言核桃(Juglans regia Linn)又称胡桃、羌桃，是胡桃科植物，胡桃科核桃属落叶乔木，是核桃属植物中经济价值最高的一种，在中国进行栽种的历史悠久，种植资源丰富，在我国新疆，山东，云南等省份都普遍种植，截止到2004年，全国核桃树的栽培面积约91.75 hm2，种植颗数在2亿株左右，面积和数量均居世界第一位。
为了充分利用核桃青皮这一资源，已有学者对核桃青皮提取物的除草、杀虫以及抗病毒等农药活性做了研究[1]，核桃青皮为核桃没有成熟时外部的一层绿色果皮，其涩、微寒、味苦、有毒[2]。
据研究表明，核桃青皮的提取物可以抑制枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌[3]，对甘薯黑斑病菌、马铃薯晚疫病均有抑制作用[4]，对萝卜蚜虫具有较强的拒食和触杀活性[5]，对小麦赤霉病菌等有抑制作用[6]，还具有较强抗病毒、除草活性[7]，已有实验结果表明核桃青皮乙醇提取物均可以抑制供试病原真菌的活性。
如核桃青皮乙酸乙酯萃取相在浓度为40 mg/ml时抑菌效果最好，对小麦纹枯、番茄灰霉、棉花立枯3种病原真菌的抑制率均为100% [8]。
由此看出，核桃青皮均有抑菌性。
本研究选取了两种常见的果树病原真菌，苹果轮纹病菌和桃褐腐病菌，利用乙醇对核桃青皮进行提取，检测乙醇提取物对这两种病原菌的抑制作用，目前我国大力推广油料植物立体种植，在无公害生产中，防治病害化学农药品种使用受到限制，而核桃本身发病少，为此，开展本次试验主要为了在核桃中发现对牡丹叶斑病菌有抑制作用的物质，开辟新的牡丹病害的无公害防治途径。
2. 材料与方法2.1. 实验材料核桃青皮(采自沂蒙山区核桃树)；100%无水乙醇(分析纯)、PDA培养基。
供试菌种苹果轮纹病菌(Physalospora nasei)桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)种病原菌由植物病理实验室提供。
2.2. 培养基配制PDA培养基：200 g土豆，20 g葡萄糖，20 g琼脂，1000 ml水。
首先洗净去皮马铃薯，然后将其切碎，加水1000 ml煮沸半小时，用纱布将马铃薯滤掉，将其滤液加水补足到1000 ml，然后加琼脂和葡萄糖，然后加热使琼脂完全熔化后，趁热用纱布过滤掉滤渣，然后分装三角瓶，加棉塞，121℃，高压灭菌20 min。
2.3. 核桃青皮粗提取物的提取核桃青皮干粉和无水乙醇按1:10比例混合，先称取200 g，合并萃取液三次，并在过滤后，将滤液浓张黎丽等缩在电动恒温水浴中以得到粗提取物，即核桃剥离，将其放置在一个灭菌的烧瓶加盖并预留的粗提取物。
2.4. 室内抑菌测定定量培养基的制备：严格量取27 ml液体PDA培养基及0.54 g琼脂粉装于三角瓶中，封口，121℃，灭菌20 min。
含有提取物的培养基制备：加热并熔化定量培养基，将其冷却至50℃~55℃，加入3 ml原浓缩液和10倍、100倍稀释液，并加少量链霉素抑制细菌生长，充分摇匀后迅速倒入3个培养皿中，浓度恰好是上述浓缩液和稀释液的十分之一，即得到提取物稀释10倍、100倍、1000倍的培养基，等到凝固后，标记各培养皿提取物的浓度，对照组的培养基加3 ml的无菌水[9]。
菌饼的制备：待分离鉴定的菌种的培养需要在25℃恒温条件下进行，等到菌丝长到培养基的2/3时，再用直径0.7 cm打孔器在菌落的边缘打取菌块，即为接种用的菌饼。
菌饼的接种与培养：培养基凝固后，将菌饼接种到培养皿，并且滤饼加入到各培养皿，在恒温培养箱中培养，观察其生长情况，测量菌落的直径。
菌落直径的测定：3株菌培养3、5、7 d，用“十”字交叉法测量三组菌落的增长直径，分别测量每个菌落的最大和最小直径，取其平均值，然后减去接种菌饼的直径，即为菌落直径。
2.5. 过氧化氢酶活性测定参考蔡庆生[10]主编的《植物生理学试验》过氧化氢酶的活性分别采用电导法、丙二醛含量测定法和过氧化氢酶活性测定法进行测定。
2.6. 数据处理抑制生长率(%) = [(对照菌落平均直径-处理菌落平均直径)/对照菌落平均直径] × 100 [8]。
数据处理采用SPSS 21.0对实验结果进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析。
3. 结果与分析3.1. 不同浓度乙醇提取物对苹果轮纹病菌的抑菌测定将乙醇提取物分别稀释10倍、100倍、1000倍后，再对抑制效果进行统计，结果如表1所示。
Table 1. Antimicrobial activities of alcoholic extracts with different concentrations on Physalospora nasei表1. 不同浓度乙醇提取物对苹果轮纹病菌的抑菌效果稀释倍数3d抑菌率(%)5d抑菌率(%)7d抑菌率(%) 直径/cm 直径/cm 直径/cm10 0.03 98.92aA 0.05 98.43aA 0.12 97.90aA100 2.30 17.86bB 2.37 25.93bB 5.17 9.77bB 1000 2.37 15.36bB 2.67 16.56bB 5.33 6.98bB ＣＫ 2.80 / 3.20 / 5.73 /*说明：不同小写字母表示处理间0.05水平上差异显著(P < 0.05)；不同大写字母表示0.01水平上差异极显著(P < 0.01)。
对表1分析可得出，乙醇提取物在稀释10倍时抑菌效果均为100%，稀释100倍和1000倍后，抑菌效果显著降低。
10倍和100倍液之间具有差异极显著，100倍和1000倍倍液之间在0.01水平和0.05水平上无显著差异。
张黎丽等3.2. 不同浓度乙醇提取物对桃褐腐病菌的抑菌测定桃褐腐病菌经过不同浓度乙醇提取物处理后，连续培养，期间测定其抑菌直径，结果见表2。
Table 2. Antimicrobial activities of alcoholic extracts with different concentrations on Monilinia fructicola表2. 不同浓度乙醇提取物对桃褐腐病菌的抑菌效果稀释倍数3d抑菌率(%)5d抑菌率(%)7d抑菌率(%) 直径/cm 直/cm 直径/cm10 0.09 97.35aA 0.19 96.92aA 0.24 96.87aA100 2.37 30.29bB 5.07 17.82bB 6.33 20.08bB 1000 2.93 13.82bB 5.70 7.61bB 6.63 15.59bB ＣＫ 3.40 / 6.17 / 7.67 /*说明：不同小写字母表示处理间0.05水平上差异显著(P < 0.05)；不同大写字母表示0.01水平上差异极显著(P < 0.01)。