凝集反应
临床免疫检验：凝集反应
概述
早在1896年，Widal就利用伤寒 病人的血清与伤寒杆菌发生特异 性凝集的现象，有效地诊断伤寒 病。至1903年，Landsteiner在 特异性血凝现象的基础上发现了 人类ABO血型， 并于1930年获
得了诺贝尔医学奖
凝集反应定义
细菌、红细胞等颗粒性抗原，或 者可溶性抗原(或抗体)与载体颗 粒结合成致敏颗粒后，与相应抗 体(或抗原)发生特异性反应，在 适当电解质存在的情况下，形成
试验
所用载体既非天然的红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒 而是菌体细胞壁含有葡萄球菌A蛋白即SPA的金黄色葡萄球菌
SPA具有与人和动物血清中IgG的Fc段结合的特性 因此当金黄色葡萄球菌与IgG连接时，就成为了抗体致敏的载体颗粒
如果与相应抗原相遇，就出现了特异凝集现象 协同凝集试验适用于细菌的直接检测
小
结
01 凝 集 反 应 的 定 义
02
凝集反应的方法类型
03 凝 集 反 应 的 结 果 判 断 方 法
思考题
试分析免疫凝集类实验的发展趋势。
谢谢观看！
肉眼可见的凝集现象
主要技术类型
直接凝集反应 凝集反应
间接凝集反应
玻片法 试管法 正向间接凝集试验 反向间接凝集试验 胶乳凝集试验 协同凝集抑制试验
直接凝集反应
玻片法
+
直接凝集反应
试管法
间接凝集反应
正向间接凝集试验 用抗原致敏载体--检测抗体
直接凝集反应
反向间接凝集试验 用抗体致敏载体----检测抗原
第四章 凝集反应
第四章凝集反应内容一、玻片凝集反应二、试管凝集反应三、血型鉴定当颗粒性抗原与其相应抗体混合时，在电解质存在的环境下，相应的抗原抗体结合产生大小不等的凝集块，这种现象称为凝集。
凝集反应有直接与间接凝集两种。
直接凝集反应是颗粒性抗原与相应抗体直接结合出现的凝集现象;间接凝集反应是指将可溶性抗原吸附于一类与免疫无关的载体微球上，形成人工的免疫微球（或致敏载体），再与相应抗体结合出现的凝集现象。
在操作方法上，凝集反应又可分为玻片凝集与试管凝集。
一、玻片凝集反应将已知的抗体与未知的颗粒性抗原物质（如细菌、钩端螺旋体或细胞等）混悬于载玻片上，摇匀后经数分钟出现可见的凝集颗粒为阳性反应。
该法为定性试验，常用于细菌的种类及分型鉴定、血型鉴定等。
【材料】1、抗体：1∶10稀释伤寒杆菌抗血清。
2、抗原：伤寒杆菌菌液、大肠杆菌菌液。
3、生理盐水。
4、蜡笔、载玻片，毛细血管，吸头或吸球等。
【方法】1、取洁净载玻片一张，用蜡笔分为三格，并在边上标明1、2、3。
2、用毛细吸管于第1、3格内各加1滴伤寒杆菌菌液，第2格加1滴大肠杆菌菌液。
3、用毛细吸管于第1、2格内各加1滴1∶10倍稀释的伤寒杆菌抗血清，第3格加生理盐水1滴作为对照。
4、轻摇动玻片，数分钟后观察结果。
如果不够清晰，可将玻片放于低倍镜下观察。
【结果观察与判定】若上述混合悬液由均匀状变为澄清透明，并出现大小不等的乳白色凝集块者即为阳性，若混合物仍呈均匀混浊状则为阴性。
二、试管凝集反应该法常用已知的颗粒性抗原来检测未知抗体及其相对含量，属定量（半定量）试验。
方法是用生理盐水将待测血清在试管中作倍比稀释，然后于各管中加入等量的已知抗原悬液，37℃恒温箱过夜或56℃水浴2h后，观察有无凝集，并根据凝结情况判定血清抗体的效价。
临床上主要用于诊断伤寒与副伤寒（如肥达反应）、斑疹伤寒及恙虫病（如外斐反应）等。
【材料】1、血清：抗伤寒杆菌H血清或病人血清。
2、抗原：伤寒杆菌H菌液。
凝集反应的操作方法
凝集反应的操作方法凝集反应是一种常见的化学反应，它能够将分散的物质聚集在一起形成较大的聚集体。
在实际的操作过程中，我们需要遵循一定的步骤和条件来完成凝集反应。
下面将介绍凝集反应的操作方法。
1. 准备实验器材和试剂在进行凝集反应之前，首先需要准备好实验所需的器材和试剂。
一般来说，我们需要玻璃容器、搅拌棒、移液管等基本的实验器材，以及所需的化学试剂。
2. 调节溶液的pH值pH值是影响凝集反应的重要因素之一。
在进行凝集反应之前，需要调节溶液的pH值，使其处于适宜的范围。
通常情况下，pH值的调节可以通过加入酸或碱来实现。
3. 加入凝集剂凝集剂是促使物质发生凝集反应的关键。
在操作过程中，我们需要将凝集剂逐渐加入溶液中，并进行充分的搅拌，以确保凝集剂均匀分散在溶液中。
4. 控制搅拌速度和时间搅拌速度和时间的控制对凝集反应的效果有着重要的影响。
一般来说，适当增加搅拌速度和延长搅拌时间可以增加凝集的程度，但过高的搅拌速度和过长的搅拌时间可能会导致溶液的不稳定性。
5. 控制温度温度是影响凝集反应速率的因素之一。
在操作过程中，我们需要根据具体的反应条件来控制反应体系的温度。
一般来说，提高温度可以加快凝集反应的进行，但过高的温度可能会导致反应失控或产生副反应。
6. 观察和记录反应结果在进行凝集反应的过程中，我们需要仔细观察和记录反应的结果。
这包括观察凝集物的形态、颜色和大小等方面的变化，并记录下来以备后续分析和研究。
7. 分离和纯化凝集物在凝集反应完成后，我们需要对凝集物进行分离和纯化。
这可以通过离心、过滤、洗涤等方法来实现。
分离和纯化的目的是获取纯净的凝集物，并进一步进行后续的分析和应用。
总结：凝集反应是一种重要的化学反应，它能够将分散的物质聚集在一起形成较大的聚集体。
在进行凝集反应的操作过程中，我们需要准备实验器材和试剂，调节溶液的pH值，加入凝集剂，控制搅拌速度和时间，控制温度，观察和记录反应结果，以及分离和纯化凝集物。
凝集反应的操作方法
凝集反应的操作方法凝集反应是一种化学反应，通过凝结剂将分散的物质聚集在一起形成凝胶或固体的过程。
它在许多领域中都有着广泛的应用，如制备材料、制药、环境保护等。
本文将介绍凝集反应的操作方法。
凝集反应的操作方法可以分为溶液法和凝胶法两种。
溶液法是最常见的凝集反应方法之一。
在这种方法中，首先需要将反应物溶解在溶剂中，形成均匀的溶液。
然后，加入凝集剂，通过凝集剂的作用使溶液中的分散物聚集在一起，形成凝胶或固体。
溶液法中，选择合适的溶剂对于凝集反应的成功至关重要。
溶剂的选择应考虑溶剂与反应物的相容性、反应速率以及后续处理的便利性等因素。
常用的溶剂有水、有机溶剂（如乙醇、二甲基亚砜等）以及混合溶剂。
根据反应物的特性，可以选择单一溶剂或混合溶剂进行反应。
凝胶法是另一种常用的凝集反应方法。
在这种方法中，首先需要将反应物悬浮在溶剂中，形成均匀的悬浮液。
然后，加入凝胶剂，通过凝胶剂的作用使悬浮液中的颗粒聚集在一起，形成凝胶或固体。
凝胶法中，选择合适的凝胶剂对于凝集反应的成功同样很重要。
凝胶剂的选择应考虑凝胶剂与反应物的相容性、凝胶速率以及后续处理的便利性等因素。
常用的凝胶剂有硅酸盐、聚合物凝胶剂等。
根据反应物的特性，可以选择适合的凝胶剂进行反应。
在凝集反应中，温度、pH值、反应时间等因素也会对反应结果产生影响。
合理调控这些因素，可以控制凝集反应的速率和产物的性质。
温度的选择应根据反应物的热稳定性和反应速率来确定。
pH值的调节可以通过加入酸碱或缓冲溶液来实现。
反应时间的控制可以通过调整反应物的浓度和反应条件来实现。
为了提高凝集反应的效率和产物的纯度，常常会采取一些辅助措施。
例如，可以采用搅拌、超声波处理等方法来促进反应物的混合和凝集过程。
还可以通过过滤、离心、干燥等方法对产物进行后处理，得到所需的固体产物。
总结起来，凝集反应是一种将分散物聚集成固体的化学反应。
在操作上，可以采用溶液法或凝胶法进行。
溶液法是将反应物溶解在溶剂中，加入凝集剂使其凝结。
凝集反应
凝集程度：
凝集物 全部凝集 上清液 澄清 凝集程度 ++++
大部份凝集
有明显凝集 很少凝集 不凝集
基本透明
半透明 基本混浊 混浊
+++
++ + -
效价（滴度）判定： 首先观察对照管为阴性，说明结果可信，
再观察各实验管以判断效价。
效价判断:以产生明显凝集现象（2+）的
最高血清稀释度为该血清的抗体效价。
1：160
2.5ml N.S
1：320
1：640
稀释血清 1/20
1/40
1/80
1/160
1/320
1/640
N.S
每管加0.5ml
O抗原 H抗原 每管加0.5ml 甲-H抗原 乙-H抗原 丙-H抗原 稀释倍数 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280
37℃过夜，观察
概念：
颗粒性抗原 + 相应抗体
↓(适量电解质)
凝集现象 可溶性抗原（或抗体) + 载体颗粒 ↓ 致敏颗粒+相应抗体（或抗原）
↓(适量电解质)
凝集现象
特点：
1.抗原为颗粒性抗原或可溶性抗原致敏颗粒； 2.反应时间较短，需几到十几分钟； 3.反应产物为凝集块； 4.凝集反应抗原分子大，反应面积小，为使抗 体分子不致过多，试验时需稀释抗体 。
肥达氏反应
用已知的伤寒沙门菌O、H抗原，甲、乙、 丙型副伤寒沙门菌的H抗原与患者血清做 半定量试管凝集试验； 以出现“++”凝集的最高血清稀释度作为抗 体的效价，测定相应抗体的含量，用以辅
助诊断肠热症。
凝集反应
直接凝集试验（试管法）本法是一种半定量的凝集反应。
常用已知抗原测定受检血清中有无相应抗体及其含量，以辅助临床诊断或供流行病学调查分析，传染病诊断中常用的肥达反应、布氏凝集反应和外斐反应等均属此类。
本试验以 1% 绵羊红细胞（抗原）与羊溶血素（抗体）为例进行试管凝集试验操作实践。
材料1. 1%SRBC 悬液。
2. 1 ： 10 稀释（据血清效价决定起始稀释度）的绵羊红细胞抗体（羊红细胞凝集素）。
3. 试管、吸管、生理盐水、试管架等。
方法排列 7 支小试管于管架上，其中 1~6 管为实验管，第七管为盐水对照管，作好标记。
1. 稀释血清：以 1ml 吸管向第 1 管内加生理盐水 0.9ml ，第 2~7 管各加 0.5ml 。
然后取绵羊红细胞溶血素0.1ml 加入第 1 管，连续吹吸三次，使血清与盐水充分混匀成 10 倍稀释（注意勿吹起气泡，勿使液体外溢），然后吸取 0.5ml 注入第 2 管，同上法混匀后，取 0.5ml 注入第 3 管，以下依次以 2 倍稀释法稀释至第 6 管，第 6 管混匀后，吸取 0.5ml 弃去。
各管血清的稀释度分别为 1 ： 10 、 1 ： 20 、 1 ： 40 、 1 ： 80 、 1 ：160 、 1 ： 320 ，第 7 管为对照管不加血清（图 12-16 ）。
2. 加抗原：另取一支 1ml 吸管吸取摇匀的 1% 绵羊红细胞悬液分别加入 1~7 管内，每管 0.5ml 。
此时各管血清稀释度又增加一倍，即 1 ： 20 、 1 ： 40 、 1 ： 80 、 1 ： 160 、 1 ： 320 、 1 ： 640 。
3 . 双手举起试管架，振荡混匀各管内容，置 37?C 温箱，次日观察结果。
结果结果观察要点：1. 观察对照管：对照管应无凝集，即上层液基本清澈透亮，管底可见红细胞沉积物，呈圆形，边缘整齐，轻轻振摇试管后，可见红细胞浮起又分散仍呈悬液。
2. 观察各试验管：从第 1 管看起。
凝集反应
凝集反应名词解释
凝集反应名词解释凝集反应是一种集聚反应，是一种微生物学上重要的反应，主要是描述一种由特定蛋白质结合在一起形成类聚体的物理现象，或者用于控制多个分子之间的相互作用。
该反应可以激活或增强特定的生物反应，如催化、促肥、保护等，广泛存在于生命系统中，为多种生物活动提供稳定的支持。
当有适当的分子存在于液体中，这种分子将通过结合和细胞膜受体的作用形成簇，且会表现特定的物理和化学行为，这种结合称为凝集反应。
凝集反应可以用于控制多个分子之间的相互作用，以构建分子簇，例如一些活性核酸分子在液体中称为聚合物，它们的聚合可以增强其生物活性和受体结合性。
此外，凝集反应还可以控制具有有害作用的分子的聚集，从而作用于抑制特定的病原体的生长。
此外，凝集反应还可以通过调节液体的通量来维持细胞的酸碱平衡，并促进细胞内外的活性物质的交换，从而使细胞能够适应某种环境条件，从而保证细胞的生存机制。
另外，凝集反应还能够增强生物反应物的发挥功效，例如促肥、催化、保护等，广泛用于细胞水解、脱氢反应、抗病毒感染反应等。
凝集反应在生物学上具有十分重要的意义，凝集反应能够维持细胞内环境的稳定性，有效地促进受体的配体结合及识别，并可以调控特定的生物反应，如催化、促肥、保护等，使生物活动有效而稳定。
凝集反应的发生也能够控制病原体的聚集，从而阻止细菌病发生，以保护细胞。
因此，凝集反应是一种十分重要的生命现象，为生物系统的正常运作提供了稳定的支持。
从化学的角度来看，凝集反应是一种基于氢键的原子、分子或集聚都能发生的结合反应，可以用来制备均质的类聚体，代替反应溶液中的分子组装。
凝集反应伴随着质子的转移或共价键的构建，它们构建或破坏分子之间的双氧水网络，从而控制分子簇的大小、组成和活性，进而能够影响分子间的相互作用。
总之，凝集反应是一种重要的反应，它在生物学和化学上都有着广泛的应用，其中一个重要的用途是控制细胞内外环境的稳定，通过氢键的发生维持质子的转移，能够发挥催化、保护、促肥等特性，在细胞水解，脱氢，病原体的抗感染反应等过程中都起着至关重要的作用，为细胞活动提供了有效和稳定的支持。
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【实验方法】 1．用微量移液器吸取稀释液加于微量反应板的第1－ 9孔内，每孔50微升，第10孔加50微升阳性对照血清。 2. 在第1孔中加50微升待检血清，混匀后吸出50微升 加于第2孔内，以此倍比稀释第8孔，并从第8孔中吸出50 微升弃去。 3. 将致敏红细胞混匀，从第9孔起以此向前各孔内加 入50微升致敏红细胞悬液，第10孔加50微升致敏红细胞悬 液。 4. 将反应板置于微量振荡器上，振荡1分钟，37度静 置30分钟后观察结果。
【实验结果】 记录受检者红细胞凝集情况，根 据凝集情况，判断受检者的血型。
二、间接凝集反应
将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小 的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关）， 然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质 存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集 反应。 根据载体的不同可将间接凝集反应分为： 间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及 间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协 同凝集试验等。
【实验结果】 观察孔中红细胞凝集现象及其强弱程度， 记录结果。
协同凝集试验：细菌鉴定
【实验原理】 金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白 （SPA）能与人及多种哺乳动物IgG 的Fc段结 合。IgG的Fc段与SpA结合后，两个Fab段暴 IgG Fc SpA Fab 露在葡萄球体表面，仍保持其抗体活性和特异 性，当其与特异性抗原相遇时，出现特异凝集 现象。根据这一特性，将已知的特异性抗体吸 附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的 凝集反应即为协同凝集试验。
【实验材料】 1．ABO标准血清：抗A分型试剂和 抗B分型试剂各1支。 2．1ml生理盐水的试管1支 3. 一次性采血针1枚、白瓷板1块、 一次性毛细吸管1支、75％酒精棉球和 灭菌干棉球
【实验方法】 1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针 刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。滴1至2滴血液 于含有生理盐水的试管内，摇匀，制成血球悬液。 用干棉球止血。 2．取洁净载玻片1块，将抗A、B分型试剂分别 加1滴于白瓷板的两个圆孔内。 3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两 个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置5－10分钟。 4.观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见 红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。 5.记录凝集情况，判定受检者的血型。
凝集反应
【实验目的】 1．了解凝集反应的原理、基本类型及其 临床意义。 2．掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的 实验方法和结果分析。
【概述】 在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗 原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集 块，称为凝集反应。凝集反应是一种定性的 检测方法，也可以进行半定量检测。凝集反 应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。由 于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍 被广泛应用。
• 中性粒细胞的吞噬作用 • 巨噬细胞的吞噬作用
ห้องสมุดไป่ตู้
【实验结果】 观察格子中是否呈现凝集现象，并记录 结果。
【实验思考】 1．记录血型鉴定试验、乳胶妊娠诊断 试验的材料、方法及结果判定（可用图示 或表格方式表示）。 2．直接凝集试验与间接凝集试验有何 不同？ 3．在各凝集试验中都设有相应对照， 有何意义？若对照出现异常如何分析及解 决？
吞噬细胞的吞噬作用（示教）
间接血球凝集试验：血清类风湿因子测定
【实验原理】 以红细胞为载体，将人丙种球蛋白吸附在 载体上而成为致敏红细胞，然后用此致敏红细 胞检测类风湿性关节炎后者血清种的类风湿因 子，当患者血清中含有类风湿因子时红细胞发 生凝集。此方法常用于检测血清中的抗体，辅 助诊断疾病。
【实验材料】 1．致敏红细胞悬液 2．1：10待检血清、阳性对照血 清、稀释液。 3．V型微量反应板、微量移液器、 37度恒温箱、吸头。
一、直接凝集反应 细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与 下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集 反应 。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。 玻片凝集试验——ABO血型鉴定 玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作 为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗 原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼 观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便， 快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断 或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。
【实验原理】 人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根 据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分 为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测 红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞 表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集， 据其凝集情况便可判定出受试者的血型。
ABO血型的划分
红细胞表面Ag A型 B型 AB型 O型 A B A、B —、— 血清中Ab 抗B 抗A —、— 抗A、抗B
【实验材料】 1．抗A群脑膜炎球菌抗体致敏的金 黄色葡萄球菌液、未致敏的金黄色葡萄 球菌液、生理盐水。 2. 毛细吸管、有格玻片。
【实验方法】 1．在玻片的第1、2格分别加入1滴金 黄色葡萄球菌液、生理盐水。 2. 在第1、3格各加1滴病人脑脊液， 第2格加1滴生理盐水，将玻片轻轻摇动3－ 5分钟，观察结果。