免疫学实验凝集反应
胶乳凝集试验
胶乳凝集试验胶乳凝集试验是一种常见的免疫学实验方法，用于检测抗原与抗体之间的反应。
该试验广泛应用于临床诊断、药物研发、生物学研究等领域，具有简单、快速、灵敏、特异性高等特点。
本文将从胶乳凝集试验的原理、方法、应用以及优缺点等方面进行详细介绍。
一、胶乳凝集试验的原理胶乳凝集试验是一种免疫学实验方法，其原理基于抗原与抗体之间的特异性反应。
在试验中，将含有特定抗原的胶乳颗粒加入到含有特定抗体的试剂中，当抗原与抗体结合时，胶乳颗粒会凝集形成可见的凝集物。
凝集的程度与抗原与抗体的浓度、结合力、亲和力等因素有关。
通过观察凝集程度可以判断样本中是否存在特定的抗原或抗体。
二、胶乳凝集试验的方法1、试剂准备将含有特定抗体的试剂配制好，并将其与含有特定抗原的胶乳颗粒混合均匀，形成胶乳凝集试剂。
2、样本处理将待测样本与胶乳凝集试剂混合均匀，使抗原或抗体与试剂中的相应抗体或抗原结合。
3、观察凝集反应将混合好的样本与试剂放置一段时间后，观察凝集反应的程度，根据凝集程度判断样本中是否存在特定的抗原或抗体。
三、胶乳凝集试验的应用1、临床诊断胶乳凝集试验在临床诊断中应用广泛，常用于检测病原体抗原或抗体，如流感病毒、结核杆菌、肝炎病毒、艾滋病病毒等。
同时，该试验还可用于检测自身免疫性疾病、过敏反应等。
2、药物研发胶乳凝集试验在药物研发中也具有重要的应用价值，可用于筛选药物的抗原抗体反应性，评估药物的免疫原性、毒性等。
3、生物学研究胶乳凝集试验还可用于生物学研究中，如检测细胞表面分子、蛋白质、糖类等的抗原性、抗体反应性等。
四、胶乳凝集试验的优缺点1、优点胶乳凝集试验具有操作简单、快速、灵敏、特异性高等优点，可用于大规模样本的检测。
2、缺点胶乳凝集试验的缺点在于其灵敏度低于一些其他免疫学方法，且结果受温度、离心等因素的影响较大。
五、结论胶乳凝集试验作为一种常见的免疫学方法，在临床诊断、药物研发、生物学研究等领域具有重要的应用价值。
同时，我们也应该认识到该试验的局限性，合理选择试验方法，提高诊断准确性。
免疫学实验教案
实验一凝集反应一、目的要求学习和掌握用试管凝集反应测定抗血清效价的方法。
二、实验说明细菌、螺旋体、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在有适量电解质存在的情况下，抗原颗粒相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
参加反应的抗原称凝集原，抗体称凝集素。
三、实验材料1．试剂抗原、石炭酸生理盐水、阳性血清、被检血清、阴性血清。
2．器材及其他载玻片、小试管（1 cm×6.5 cm）、试管架、移液管、吸管、水浴锅。
四、方法步骤1．玻片凝集实验（1）在载玻片两端各滴一滴大肠杆菌菌悬液。
（2）在一端的菌悬液中加入一滴1:10稀释的大肠杆菌抗血清，另一端悬液加入一滴生理盐水。
（3）将载玻片小心地振动使混合液混匀后静置于室温，数分钟后便可观察到加抗血清的一端产生凝集块，而另一端生理盐水对照没有凝集块产生。
若反应不明显，可放入培养皿中（皿内放入湿滤纸，以保持一定湿度），37℃保温30 min后观察结果。
亦可将载玻片放置显微镜下，凝集块明显可见。
2．试管凝集试验（1）抗血清的稀释抗血清稀释采取倍比稀释法。
取干净小试管7支，排列在试管架上，依次注明号码，每支试管用移液管加入0.5 ml生理盐水。
（2）按下表操作用0.5%石炭酸生理盐水，将待检血清稀释成4个稀释度，5、6、7管分别设为抗原对照、阳性对照和阴性对照。
（3）加入抗原各管中加入抗原0.5ml，充分混匀。
（4）抗原抗体反应把各管混合液振摇混匀，置37℃水浴箱中水浴4 h或在室温中过夜，观察结果。
（5）结果观察与效价判断①生理盐水对照管中的抗原（细菌）应分散，无凝集块沉淀而呈混浊菌悬液。
②实验管如有凝集，管底可见到凝集块，液体上部澄清、半澄清或混浊度降低，管底凝集块轻摇即浮起，呈片块状。
③凝集强弱的判断（以“+”表示）“-”：细菌不被凝集，液体混浊、无透明度，管底无伞状沉淀，但由于菌体自然下沉，管底中央出现圆点状沉淀，振荡时复呈均匀混浊状态。
“+”：液体透明度不明显（25%清亮），25%菌体凝集，管底有少许不明显的伞状沉淀。
实验一 凝集反应
1.间接凝集抑制试验
2.抗“O”试验
【原理】在受检血清标本中，加入溶血素“O”致敏的 胶乳试剂反应，如标本中含有高单位抗体，可出现清晰 而均匀的凝集颗粒。
试剂：ASO胶乳试剂、待检血清、双凹玻片、滴管、 生理盐水。
2.抗“O”试验
方法： （1）在右侧中加生理盐水1滴,在玻片左侧内加待检血清 1滴， （2）加溶血素“O”致敏胶乳1滴，混匀，再连续缓慢摇 动3min。观察结果。 结果：
实验室规则
一、爱护公物，节约使用实验材料。 二、进入实验室必须穿实验服，必要的文具应玻片等器材，应放在指定的地方。 四、实验完毕，应清理桌面，把用过的物品放回原处。 五、值日生负责整理清洁实验室，关好水、电、门、窗。 六、未经许可，不得将实验室内任何物品带出室外。
玻片、接种环、酒精灯。
NS+伤寒杆菌
诊断血清+伤寒杆菌
轻摇玻片1-2分钟，观察结果。
结果：对照侧——均匀混浊状；
试验侧——乳白色凝集块（阳性）； ——均匀混浊，不出现凝集（阴性）；
对照侧、试验侧均出现凝集，为自凝。
2.试管法凝集试验
【原理】用定量抗原悬液与一系列的待检血清混合，静 置后，根据每管内颗粒抗原凝集的程度，以判断待检血清 中有无相应抗体及其效价。
特异、敏感、快速、简便
抗原抗体反应的基本检测方法
根据抗原物的性质、出现结果的现象、参 加反应的成分不同，可将抗原抗体反应分为:
•凝集反应 •沉淀反应 •补体参与的反应 •免疫标记技术
实验一 凝集反应
（agglutination reaction)
颗粒性抗原(红细胞、细菌等)与相应抗体特 异结合后，在一定条件下出现肉眼可见的凝集物。
的结构互补性。
凝集反应实验原理和方法(直接凝集反应和间接凝集反应)(1)
凝集反应实验原理和方法（直接凝集反应和间接凝集反应）(1)凝集反应是指细菌、红细胞等颗粒性抗原或表面覆盖抗原的颗粒状物质与相应抗体特异结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见的凝集现象。
一、直接凝集反应颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）直接与相应特异性抗体结合，在适量电解质存在条件下，出现肉眼可见的凝集现象，称直接凝集反应。
参加凝集反应的抗原称为凝集原，而抗体则称为凝集素。
直接凝集反应有玻片法和试管法两类。
（一）玻片凝集反应在玻片上进行的直接凝集反应,主要用于抗原的定性分析,数分钟之内便可观察结果,快速、简便。
常用于细菌的分型鉴定,也用于ABO血型的测定。
【实验材料】（ 1）抗原：受检菌液或受检者的血细胞盐水悬液。
（ 2）抗体：用于细菌鉴定的1：20稀释诊断血清。
血型检测的A及B诊断血清。
（ 3）生理盐水、玻片、吸管、接种环。
【实验方法】（ 1）于洁净玻片的一端加诊断血清1滴，另一端加生理盐水1滴作阴性对照。
（ 2）用接种环取待检菌液或血细胞悬液分别涂于诊断血清和生理盐水，混匀。
（ 3）轻摇玻片，静置数分钟，观察结果。
【结果分析】玻片上抗原凝集成肉眼可见的小团块状或絮状凝集物，其周围液体澄清，为阳性反应。
阴性反应和生理盐水对照均不发生凝集，为均匀混浊的乳状液。
【注意事项】细菌鉴定时，特别是肠道菌种的沙门菌属或志贺菌属，原则上先用多价诊断血清检测，如为阳性，再用单价诊断血清进行分群或定型。
血型测定时，室温需保持在 20oC左右，若低于10oC，易出现冷凝集现象而造成假阳性的错误诊断。
（二）试管凝集反应是用定量的颗粒性抗原悬液与一系列倍比稀释的待检血清在试管中进行的凝集反应，根据试验结果判定待检血清中有无相应抗体及其效价，对血清中抗体进行半定量分析。
此法目前仍常用于某些病原微生物感染的免疫学诊断，例如，诊断伤寒和副伤寒的肥达氏（ Widal test）反应，诊断斑疹伤寒的外—裴氏反应（weil-felix test）。
实验一抗原抗体反应凝集反应
将待测抗原或抗体与相应的抗体或抗原结合，再与载体颗粒结合， 形成可见的凝集块。
间接凝集抑制反应
在间接凝集反应的基础上，加入特异性抗体或抗原，抑制了抗原抗 体结合，从而抑制了凝集现象。
凝集反应的原理
抗原抗体结合
温度和pH值影响
抗原和抗体具有特异性结合的特性， 当抗原和抗体结合后，会形成较大的 复合物，导致颗粒性改变。
03
凝集反应
凝集反应的定义
01
凝集反应是指颗粒性抗原与相应 抗体结合后，在一定条件下，出 现可见的凝集现象。
02
凝集反应是一种免疫学检测方法 ，常用于检测抗原或抗体的存在 ，以及进行抗原抗体的定性或定 量分析。
凝集反应的类型
直接凝集反应
将待测抗原或抗体直接与相应抗体或抗原结合，形成可见的凝集 块。
抗原抗体反应的特点
高度特异性
抗原和抗体的结合具有高度的特 异性，这种特异性是由免疫原和
抗体的分子结构所决定的。
可逆性
抗原和抗体的结合是可逆的，当环 境发生变化时，如温度、pH值、 离子浓度等，抗原和抗体可以解离。
动力学特征
抗原和抗体的结合符合动力学特征， 包括速率常数、平衡常数等参数。 这些参数可以用于描述抗原和抗体 的相互作用。
抗原抗体反应的特性
抗原抗体反应具有高度的特异性，能专一地与相应抗原结合 ，因此可用于各种抗原的定性或定量检测、抗体的筛选和鉴 定，细胞表面标志的分析，肿瘤的诊断、鉴别和预后判断等 。
抗原抗体反应的类型
沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体结合后，在一定条件下出现沉淀现象。沉淀反应可根据是否需要通 电等物理手段来加速其进程，分为单向沉淀和双向沉淀。
对照组
抗原抗体反应凝集反应后，试管 中未出现凝集颗粒，液体呈透明 状。
医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)
实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪Βιβλιοθήκη 样+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
颜色改变 = 待测标本中存在抗体
实验结果
呈红色片状凝集颗粒为阳性 实验结束后，洗涤试管；
10简述凝集反应的原理及凝集反应的类型
凝集反应是一种免疫学实验技术，广泛应用于临床诊断和研究领域。
它是通过抗原与抗体的特异结合来发生凝聚现象，从而实现对特定抗原的检测和定量。
凝集反应的原理是基于抗原与抗体相互结合后形成免疫复合物，使得溶液中的物质发生可见的沉淀或凝聚现象。
这种凝聚现象可以通过肉眼观察或者光学仪器来进行定性或定量分析。
凝集反应主要包括直接凝集反应、间接凝集反应和双重凝集反应等类型：1. 直接凝集反应直接凝集反应是指抗原与抗体直接结合形成凝集物质的反应。
在这种反应中，抗原与抗体的结合是直接发生的，不需要其他介质的参与。
该反应通常用于检测红细胞凝集抗体、细菌抗原等。
2. 间接凝集反应间接凝集反应是指抗原与抗体先间接结合，再与介体结合形成凝集物质的反应。
在这种反应中，介体起到传递抗原-抗体复合物的作用，使得凝集反应能够进行下去。
间接凝集反应通常用于检测病毒抗体、梅毒螺旋体抗体等。
3. 双重凝集反应双重凝集反应是指两种抗体与抗原之间分别发生凝集反应，最后抗原-抗体复合物之间再发生凝集现象的反应。
这种反应在研究免疫球蛋白结构和功能、检测致病微生物等方面具有重要意义。
凝集反应的类型多种多样，各自在临床诊断和免疫学研究中发挥着重要作用。
通过对不同类型凝集反应的原理和特点的深入研究，可以更好地理解免疫学的基本原理，提高临床诊断的准确性和敏感性。
凝集反应也为药物研发和免疫治疗提供了重要依据和支持。
希望未来能有更多的科研人员投入到凝集反应领域的研究中，推动该领域的发展，为人类健康做出更大的贡献。
凝集反应是一种免疫学实验技术，广泛应用于临床诊断和研究领域。
它是通过抗原与抗体的特异结合来发生凝聚现象，从而实现对特定抗原的检测和定量。
凝集反应的原理是基于抗原与抗体相互结合后形成免疫复合物，使得溶液中的物质发生可见的沉淀或凝聚现象。
这种凝聚现象可以通过肉眼观察或者光学仪器来进行定性或定量分析。
凝集反应主要包括直接凝集反应、间接凝集反应和双重凝集反应等类型。
血液凝集实验报告
血液凝集实验报告篇一：直接凝集反应实验报告免疫学·直接凝集反应实验报告实验一：玻片凝集实验1.实验原理：颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应的抗体结合，在适量电解质（通常是0.85%nacl）存在的条件下出现凝集现象，称为凝集反应。
凝集反应的方法有两种：①直接法；②间接法。
颗粒性抗原（如完整的细菌或细胞）与相应抗体在体外直接结合而出现的凝集反应，称为直接凝集反应。
如玻片凝集反应和试管凝集反应。
将可溶性抗原预先吸附于一种与免疫无关的颗粒性载体表面，然后与相应的抗体结合，出现凝集现象，称为间接凝集反应。
如RF因子检测玻片凝集试验是使用已知抗体与未知颗粒性抗原在玻片上直接结合而出现的凝集反应。
此类反应较简单迅速，常用于抗原或抗体的定性检测。
本次实验使用玻片凝集试验的原理进行人类aBo血型的鉴定。
aBo血型系统是按照血液中红细胞表面的抗原分子来命名的。
人类aBo血型抗原有两种：a抗原和B抗原。
a型血红细胞表面具有a型抗原，血液中具有抗B抗体；B型血红细胞表面具有B型抗原，血液中具有抗a抗体；aB型血红细胞表面具有a抗原和B抗原，血液中不具有抗a、B抗体；o型血红细胞表面不具有a、B抗体，但血液中含有抗a、B抗体。
若用已知的抗a血清和抗B血清与受试者红细胞上的相应抗原结合，即可引起红细胞凝集，根据凝集反应结果便可判断出受试者的血型。
2.实验方法：（1）取洁净载玻片一张，用马克笔分为两格并注明a、B分区。
（2）倒置标准抗血清试剂瓶，悬空轻挤出抗a血清一滴，滴在a区内；同法在B区内滴加抗B血清一滴。
（3）使用消毒液对左手无名指进行消毒，待消毒液自然干燥后，使用无菌三棱采血针快速刺破手指。
（4）用木棒的两端取血，分别在抗a血清和抗B血清中搅拌均匀。
（5）用无菌棉棒压迫手指止血。
（6）静置玻片数分钟后，观察红细胞凝集反应结果。
3.实验结果：4.结果分析：实验二：试管凝集实验1.实验原理：试管凝集反应是在试管内将待检血清对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检血清混合，然后观察试管内有无凝集快出现。
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液 面，沿孔壁吹出。动作要连续轻巧，切勿出错
试管凝集试验操作与稀释图示 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
孔号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
小心加样！ 取U型微量反应板（做好个人或小组标记）
• 于两横排1～10孔中各加入生理盐水 每孔50μl。
• 分别在两横排的第1孔内加入1:20伤寒免疫血清 50μl， 每排各从第1孔开始作对倍稀释至第9孔， 从第9孔混匀后弃去50μl。
• 第一横排从第10孔至第1孔各加入伤寒沙门菌菌液50μl/孔 第二横排同法各加入甲型副伤寒沙门菌菌液50μl/孔。
1
2
取清洁玻片两张，用记号笔，玻璃蜡笔作出标记和画好 分区，按实验指导要求加样操作。
【方法】
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1. 取洁净玻片2张，各用记号笔划分三等份。 2. 在玻片的左上角分别标记1和2。 3. 按下列要求依次加入反应物。各种加量均为20微升 4. 转动玻片，充分混匀1-2min后观察反应结果并作出解释。
例如 孕妇血清中免疫性IgG检测，用于新生儿溶血病的诊断、
病毒感染后，患者抗病毒抗体产生情况的观察
【材料】
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1．1:20伤寒免疫血清。
2．伤寒沙门菌菌液，甲型副伤寒沙门菌菌液。
3．生理盐水，TIP头，微量移液器，
4. U型微量反应板。见下图
5．恒温培养箱等。
方法: 取U型微量反应板，做好标记，加样 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
解释说明出现凝集和不出现凝集的依据。
1●
●
2●
●
生理 盐水
+ 伤寒沙
门菌
1：20伤 血清
+ 伤寒沙
门菌
1：20痢 血清
+ 伤寒沙 门菌
生理 盐水
+ 痢疾志
贺菌
1：20伤 血清
+ 痢疾志 贺菌
1：20痢 血清
+ 痢疾志 贺菌
二、试管凝集反应 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
【实验原理】
将待检血清作对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检 血清混合，抗原与不同稀释度的抗体在试管内直接结合而出现 的凝集现象称为试管凝集反应。此法是一种半定量法。 常用已知抗原(如细菌悬液，RBC悬液)来测定被检血清中 相应抗体的水平(效价或滴度)。 用于检测被检血清中是否存在和已知抗原相应的抗体 及抗体的效价：如；患者血清中免疫性抗体检测。
实 验 要 求 与 实 验 室 规 则 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
实验课要求：
1. 课前预习，明确目的，了解实验内容与方法。阅读实验指导 2. 实验过程严肃认真，按实验规程操作，要有严格的科学态度 3. 仔细观察如实记录实验现象与结果，按时独立完成实验报告
实验室规则：
1. 进入实验室必须穿整洁的隔离衣，严禁在实验室内高声喧哗 2. 禁止在实验室内饮食，吸烟和做与实验无关的其他事情 3. 节约实验用品，爱护仪器设备，如有损坏及时报告老师 4. 强化安全意识，注意水电安全。值日小组认真整理卫生，
一、玻片凝集反应（定义）
当颗粒性抗原与相应的抗体发生特异性结合时，两者 比例适宜，在电解质溶液中呈现肉眼可见的颗粒状 凝集，此现象称凝集反应。
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一、玻片凝集反应
【实验材料】
1. 1:20痢疾免疫血清，1:20伤寒免疫血清。 2. 伤寒沙门菌菌液，痢疾志贺菌菌液。 3. 生理盐水，玻片，微量移液器，消毒缸等。
表面,再与相应抗体结合发生凝集反应。
具体实验内容与方法：
◆ 玻片凝集试验：伤寒沙门氏菌与痢疾志贺式菌的检测，用已知抗血清 检测患者体内未知抗原。 操作见实验指导
◆ 试管凝集试验（微量反应板法）：用已知颗粒性抗原与被检血清混合， 然后观察试管内有无凝集，并观察血清凝集效价，判断抗体浓度。
◆ 间接凝集试验（类风湿因子检测 RF）：属自身免疫性疾病 受外界刺激，机体IgG变性，产生抗原性（RF），刺激自身产生抗变性 IgG抗体，此抗体与RF因子结合形成免疫复合物沉积于病变部位。
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抗原抗体反应示意图
NaCl
直接凝集反应
可见反应
实验一 凝集反应 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
定义： 凝集反应指细菌、红细胞等颗粒性抗原或
表面覆盖抗原的颗粒状物质(如红细胞、聚苯乙 烯胶乳等)，与相应抗体结合，在一定条件下， 形成肉眼可见的凝集团块现象。
保持实验台面清洁整齐，实验废物放入指定的垃圾桶内。
临床免疫学实验指导 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
第一部分 抗原抗体反应
（Antigen-Antibody Reaction） 抗原抗体反应概念： 是指相应的抗原-抗体在体内或体外发生的特异性结
合反应。 主要应用： 1.用已知抗原检测未知抗体，抗体效价 2.用已知抗体检测未知抗原，明确病原生物 抗原-抗体结合反应常用实验方法：
实验目的：
掌握抗原抗体结合反应的原理，方法及其应用
属免疫学最简,不当之处，请联系改正。
用已知的抗血清检测被检样品中有无相对应的抗原
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【实验内容】
玻片凝集： 常用已知抗血清检测未知抗原，定性 试管凝集：可检测未知的抗原或抗体并能报告凝集效价
• 充分混匀后，置45℃恒温箱孵育1h后取出。 室温静置15min，最好在黑色背景下，观察并报告结果。
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血清对倍稀释方法：
• 用微量移液器将第1孔的溶液连续吸吹三次，使
其充分混匀。吸出50μl移入第2孔 。同法吸吹三次 使充分混匀后再吸出50μl移入第3孔，如此作对倍稀 释至第9孔，吸吹混匀后吸出50μl弃去。此时第1～ 9孔的血清稀释度依次增加一倍，即血清对倍稀释法 或倍比稀释法。
◆ 凝集反应 ◆ 沉淀反应 ◆ 补体结合实验 ◆ 免疫标记实验技术
实验目的：掌握抗原抗体结合反应的原理，方法及其应用
第一节 凝集反应（Agglutination） 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
反应原理：
颗粒型抗原与相应抗体在电解质溶液中出现凝集的想象 凝集反应方法： 直接凝集：颗粒性抗原和相应抗体直接出现凝集反应 间接凝集：先将可溶性抗原吸附于大分子颗粒载体