不同器官细胞因子在多细菌感染性炎症时的基因表达和临床意义
IL22炎症性疾病关键因子
IL22炎症性疾病关键因子1. 本文概述本文旨在深入探讨白细胞介素22（IL22）这一关键细胞因子在炎症性疾病中的作用及其机制。
IL22作为一种重要的炎症介质，已被证实在多种炎症性疾病的发病机制中扮演关键角色。
本文首先将回顾IL22的结构、来源及其信号传导途径，为理解其在炎症性疾病中的作用提供基础。
随后，本文将重点分析IL22在不同炎症性疾病，如自身免疫性疾病、炎症性肠病和呼吸道炎症等中的作用机制。
本文还将探讨IL22作为治疗靶点的潜力，包括目前针对IL22信号通路的治疗策略以及未来可能的发展方向。
通过这些讨论，本文旨在为IL22在炎症性疾病中的作用提供全面而深入的见解，为相关疾病的治疗策略提供新的思路和理论基础。
2. 22的生物学特性IL22是一种属于IL10细胞因子家族的蛋白质，主要由活化的T 细胞和自然杀伤细胞分泌。
它具有独特的结构，包括四个螺旋束和两个反向平行的折叠，形成一个典型的桶状结构。
IL22的分子量为1822 kDa，其氨基酸序列在不同物种间具有较高的保守性。
IL22通过与细胞表面的IL22R1和IL10R2异二聚体结合来发挥作用。
这种结合激活了细胞内的JAKSTAT信号传导途径，特别是激活STAT1和STAT3，导致目标基因的转录。
IL22还可以激活其他信号途径，如MAPK和PI3KAkt途径，影响细胞的生长、分化和存活。
IL22在多种生理和病理过程中发挥重要作用。
它在调节免疫应答、维持肠道屏障功能、促进组织修复和再生等方面具有关键作用。
IL22还参与炎症性疾病的发生和发展，如炎症性肠病、银屑病和自身免疫性疾病。
在炎症性疾病中，IL22的表达通常上调。
它通过促进炎症细胞的浸润和组织重塑，加剧疾病症状。
同时，IL22还可以诱导抗炎细胞因子的产生，参与疾病的调节和恢复过程。
鉴于IL22在炎症性疾病中的关键作用，针对IL22及其信号传导途径的药物开发成为研究热点。
目前，已有针对IL22抗体和IL22R 拮抗剂的研究，旨在通过调节IL22信号传导来治疗相关疾病。
细胞因子的临床意义
细胞因子的临床意义关键词：细胞因子一、细胞因子与疾病正常情况下，细胞因子表达和分泌受机体严格的调控，在病理状态下、细胞因子会出现异常性表达，表现为细胞因子及其受体的缺陷，细胞因子表达过高，以及可溶性细胞因受体的水平增加等。
（一）细胞因子及其受体的缺陷包括先天性缺陷和继发性缺陷两种病理情况，例如先天性的性联重症联合免疫缺陷病人（XSCID），表现为体液免疫和细胞免疫的双重缺陷，出生后必须在无菌罩中生活，往往在幼儿期因感染而夭折。
现已发现这种患者的IL-2受体γ链缺陷，由此导致IL-2、IL-4和IL-7的功能障碍，使免疫功能严重受损。
细胞因子的继发性缺陷往往发生在感染、肿瘤等疾病以后，如人类免疫缺陷病毒（HIV）感染并破坏TH后，可导致TH细胞产生的各种细胞因子缺陷，免疫功能全面下降，从而表现出获得性免疫缺陷综合征（AIDS）的一系列症状。
（二）细胞因子表达过高在炎症、自身免疫病、变态反应、休克等疾病时，某些细胞因子的表达量可成百上千倍地增加，例如为风湿关节炎的滑膜液中可发现IL-1、IL-6、IL-8水平明显高于正常人，而这些细胞因子均可促进炎症过程，使病情加重。
应用细胞因子的抑制剂有可能治疗这为类症性细胞因子水平升高的疾病。
（三）可溶性细胞因子受体水平升高细胞膜表面的细胞因子受体可脱落下来，成为可溶性细胞因子受体，存在于体液和血清中，在某些疾病条件下，可出现可溶性细胞因子受体的水平升高。
这类分子可能结合细胞因子，使其不再与膜表面的细胞因子受体结合，因而封闭了细胞因子的功能。
二、细胞因子与治疗目前，利用基因工程技术生产的重组细胞因子做为生物应答调节剂（BRM）治疗肿瘤、造血障碍、感染等已收到良好的疗效，成为新一代的药物。
重组细胞因子做为药物具有很多优越之处。
例如细胞因子为人体自身成分，可调节机体的生理过程和提高免疫功能，很低剂量即可发挥作用，因而疗效显著，副作用小，是一种全新的生物制剂，已成为某些疑难病症不可缺少的治疗手段。
细胞因子与炎症[优质文档]
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细胞因子与炎症邢杰1,王淑芬2综述,翁福海3审校(1.黑龙江省鸡西煤炭高等医学专科学校病原室,158100;2.天津市干部疗养院医疗中心内科,3.天津医科大学药理教研室)[中图分类号]R363[文献标识码]A[文章编号]1006-8147(2001)01-0146-03[关键词]细胞因子;内毒素;炎症;[Ca2+]红肿热痛以及脓毒血症是感染性炎症病理过程反映的症状,它是由大量炎性细胞产生的介质参与的复杂现象,其中值得注意的是细胞因子的作用。
细胞因子是一组调节细胞反应的蛋白质,由体内多种细胞产生分泌,它既是机体应激反应的需要,又是应激组织损伤发生和发展的病理基础。
由单核细胞或巨噬细胞分泌的细胞因子又称淋巴因子,包括肿瘤坏死因子(TN F )、白细胞介素(IL s )、干扰素(IFN )、粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM -CSF )等。
生长因子如内皮生长因子(E GF )、血小板衍生的生长因子(PD GF )以及转化生长因子(T GF )也可称为细胞因子。
细胞因子共同特点是:1.低分子量(<80KD )糖基化蛋白。
2.在炎症及免疫反应过程调节反应的幅度及持续时间。
31不同于内分泌激素,它产生作用为局部性及短暂性。
4.作用强,在10-1mol 时即显示生物学效应。
5.与细胞表面特殊受体结合具有高度亲和力,多个细胞相互作用于受体形成细胞因子网络(C y tokines network )。
目前已知有5种细胞因子受体如白介素-2(IL -2)、IL -1α,IL -1β,IL -6,γ-干扰素(γ-IFN )及M -CSF 。
各种类细胞间有多种重叠的细胞调节作用。
6.多种细胞有刺激生长及增强机体功能上调节作用(u p re g ulation )而导致免疫及炎症反应增强,而IFN -γ及TN F -β产生低调节作用(downre g ulation )。
7.有种属差别。
如人IL -5对嗜酸性细胞敏感,对小鼠不敏感。
细胞因子6项临床意义
6 项细胞因子检测试剂盒检测靶标促炎因子： IL-6、IL-17、IFN-γ、TNF-α、抑炎因子：IL-4、IL-10、本项目涵盖由Th1、TH2、Th17、单核/巨噬细胞、树突细胞等多种细胞分泌的细胞因子，可更全面的反映疾病状态下机体免疫系统的改变。
重症疾病细胞因子水平是早期预警全身炎症反应综合证（SIRS）的灵敏指标，SIRS 发生时IL-6、IFN-γ、IL-10、TNF-α等细胞因子大幅升高，是反映SIRS 的关键细胞因子。
对于临床重症患者，如脓毒症、不明原因发热、急性胰腺炎、重症肺炎、围手术期等患者，若发生SIRS 不能及时治疗，则易引发ARDS 和MODS，死亡率高达40-60%，因此，越完善的因子种类更有利于反映患者的细胞因子风暴，进而警醒临床医生及时干预。
IL-4 是机体Th2 细胞特异性分泌的细胞因子，IFN-γ是机体Th1 细胞特异性分泌的细胞因子，临床中多用IFN-γ/IL-4 来反映机体Th1/Th2 漂移水平，Th1/Th2 漂移是评估肿瘤疾病病情的重要指标；自身免疫性疾病IL-17 几乎参与所有自身免疫疾病的炎症反应，是自身免疫性疾病炎症损伤评估的主要指标感染/炎症相关疾病IL-6、IFN-γ、TNF-α是感染患者主要升高的促炎因子，IL-4、IL-10 是机体最主要的抗炎因子，检测促炎/抗炎因子变化情况可评估感染病情进展及预后疗效。
细胞因子谱鉴别脓毒症和噬血细胞综合征（HLH）脓毒症：IL-6 显著升高，IL-10 升高较明显噬血细胞综合征：IFN-γ和 IL-10 显著升高革兰氏阴阳性菌细胞因子谱G-BIRCP：我们将 IL-6、 IL-10 同时高度增高＞10 倍（ X＋S），定义为革兰氏阴性菌感染相关细胞因子谱（ G-BIRCP）G+BIRCP：将 IL-6 为轻度增高＞2 倍甚至>10 倍（ X＋S），但 IL-10 正常或增高值＜10 倍（ X+S）者，定义为革兰氏阳性菌感染相关细胞因子谱（ G＋BIRCP）噬血细胞综合征（HLH）细胞因子谱IFN-γ＞100pg/mL, ，IL-10＞60pg/mL ,且 IFN-γ水平高于 IL-10 水平。
细胞因子的生物学特性及其临床应用
细胞因子的生物学特性及其临床应用细胞因子是一类具有特殊生物学特性的蛋白质物质，它们在机体内起调控生理活动的作用。
细胞因子分布于机体的各个组织和细胞间质中。
在人体的免疫系统中，诸如细胞因子的免疫分子能够调节我国自身免疫反应。
当机体受到外界威胁时，如微生物感染或者肿瘤生长等，细胞因子会被免疫系统释放出来，从而协助机体完成相应的免疫反应。
细胞因子在免疫分子中起着重要作用。
从细胞因子的生物学特性入手，我们能够全面了解它们在机体内的功能，并探讨其在临床上的应用。
一、细胞因子的类型及作用细胞因子是免疫系统中不可或缺的调节蛋白。
它们根据其在机体内的生物学特性和结构组成可分为不同类别。
例如，细胞因子可以分为染色体Y的因子和细胞增殖因子等。
1.染色体Y的因子 (Interleukin)染色体Y的因子 ( Interleukin, IL) 隶属于31种细胞因子之一。
它们是一类具有多功能性的免疫介导分子。
IL的主要功能是调节机体免疫反应的效率和方向。
在免疫系统中，IL可刺激T和B淋巴细胞的分化与生长，从而达到免疫反应的目的。
2.细胞增殖因子 (Cytokine)细胞增殖因子 (Cytokine) 是类似于激素的分子。
它们能够促进细胞分裂，增殖和分化。
由于它们能够刺激免疫反应，因此细胞增殖因子在肿瘤治疗中应用非常广泛。
此外，细胞增殖因子还能够增加机体免疫系统中细胞数量和功力，提高机体免疫反应的效率。
二、细胞因子在临床治疗中的应用1.免疫治疗细胞因子在肿瘤治疗中发挥很大的作用。
细胞增殖因子可以促进机体免疫系统中免疫细胞数量的增多，从而增强机体对癌细胞的反应。
同时，免疫治疗还可以提高机体免疫反应的效率，从而减少化疗药物的使用。
此外，在自身免疫疾病中，人体免疫系统出现异常，导致机体免疫反应过度。
其中，细胞因子的不当分泌和调节是导致自身免疫疾病发生的一个原因。
因此，免疫治疗也可用于自身免疫疾病的治疗。
2.抗炎治疗炎症是机体对各种刺激作出的一种免疫反应。
细胞因子检测与临床意义
细胞因子检测与临床意义细胞因子种类包括：白细胞介素、干扰素、趋化因子、肿瘤坏死因子、转化生长因子β 家族、集落刺激因子或生长因子。
细胞因子检测临床应用：1.脓毒症目的：评估全身炎症反应综合征的状态检测因子：TNF-a、IIL-1、IL-6、IL-12、IL-8、MIF、sCD74、HMGB1等IL-6临界值为52.6 pg/mL时可诊断败血症，当其超过348.92 pg/mL时可诊断败血症休克，且28天病死率明显增高。
TNF-α随着脓毒症疾病进展而升高，TNF-α的高表达提示患者预后不良。
IL-8是强烈的中性粒细胞趋化因子，在早期预测脓毒症有重要价值，其诊断敏感度和阴性预测值均比PCT高。
IL-8还可以预示脓毒症患者存在多器官功能障碍可能，可作为脓毒症患者的死亡风险指标。
IL-10是机体关键的抗炎性细胞因子，IL-10升高与脓毒症不良预后相关，持续高表达的IL-10反映脓毒症处于免疫抑制状态。
HMGB1可促进促炎性细胞因子的释放，诱导中性粒细胞、DC等细胞活化。
HMGB1水平与脓毒症休克患者预后密切相关，HMGB1水平越高，患者的预后越差，HMGB1可作为脓毒症病情变化的重要监测指标。
巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是一种具有多效炎症介质功能的细胞因子，包括抑制巨噬细胞迁移、化学趋化作用及促进白细胞在炎症部位募集。
脓毒症及脓毒症休克患者血清中MIF浓度显著升高，并与疾病严重程度相关。
2.感染炎症因子IL-6、TNF-α和抗炎因子IL-10等可用于急性感染的早期诊断、评价病情严重程度及判断预后。
IL-6的升高早于CRP和PCT，其持续时间长，2h达到高峰。
IL-6＞1000ug/L，提示预后不良。
IFN-γ：病毒感染患者主要升高的细胞因子，IFN-γ显著升高、伴随IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10和TNF-α等因子升高，多提示为病毒感染。
IL-6和IL-10＞正常值的10倍以上，考虑革兰阴性菌感染。
细胞因子的临床意义
细胞因子的临床意义【摘要】细胞因子在临床中起着至关重要的作用。
在免疫调节中，细胞因子可以调节和增强免疫功能，帮助身体抵抗病原体侵袭；在炎症反应中，细胞因子能够调控炎症过程，加速愈合。
在癌症治疗中，细胞因子的应用也显示出潜在的疗效。
在自身免疫性疾病和感染性疾病中，细胞因子可能会导致病理性炎症的产生。
细胞因子的研究和应用不仅可以帮助我们更好地理解疾病发生的机制，还有助于开发新的治疗手段和药物。
细胞因子作为重要的信息传递分子，在临床中具有重要意义，对其深入研究将为医学领域带来更多的突破和进展。
【关键词】细胞因子、免疫调节、炎症反应、癌症治疗、自身免疫性疾病、感染性疾病、信息传递分子、新治疗手段、药物发展1. 引言1.1 细胞因子的临床意义细胞因子是一类在机体内起着重要调节作用的蛋白质分子，它们能够在细胞间传递信息，调控免疫反应、炎症过程、细胞增殖等生理活动。
在临床上，细胞因子的作用十分广泛，对于多种疾病的治疗和诊断起着关键作用。
细胞因子在免疫调节中的作用是其最为广泛的功能之一，它们可以调节免疫细胞的生理活动，维持免疫平衡，对抗外来病原体。
在炎症反应中，细胞因子能够促进炎症介质的释放，调节炎症过程的发生和发展。
在癌症治疗中，某些细胞因子被用于促进免疫细胞对肿瘤的识别和消灭。
细胞因子在自身免疫性疾病和感染性疾病中也发挥着重要作用，影响疾病的发展和预后。
细胞因子作为重要的信息传递分子在临床中具有重要意义，研究对其在疾病发生发展中的作用有助于发展新的治疗手段和药物，为临床治疗提供更为有效的策略和方法。
深入研究细胞因子的生物学功能和临床应用具有重要的意义，可以为人类健康提供更好的保障。
2. 正文2.1 细胞因子在免疫调节中的作用细胞因子可以促进免疫细胞的增殖和分化，增强机体的免疫应答能力。
促炎细胞因子如白细胞介素-1、白细胞介素-6等可以激活巨噬细胞和T细胞，增加它们对病原微生物的识别和清除能力。
而抗炎细胞因子如白细胞介素-10则有助于抑制炎症反应，维持免疫系统内部的平衡。
细胞因子及其临床应用
细胞因⼦及其临床应⽤细胞因⼦概述细胞因⼦(Cytokine,CK)，是由活化的免疫细胞（单核、巨噬、T、B）或⾮免疫细胞（⾎管内⽪细胞，表⽪细胞，成纤维细胞、某些肿瘤细胞）合成分泌的可溶性⽣物活性分⼦，通过与靶细胞上的受体结合发挥免疫应答、免疫调节、介导炎症反应等作⽤。
受到刺激后产⽣迅速且半衰期短。
Th1/Th2/Th17细胞亚群辅助性T细胞（Th细胞）是产⽣细胞因⼦最多的免疫细胞，是免疫系统的指战员。
Th1-Th2⽐例平衡共同维持机体稳态，⼀旦其⽐例失衡，将导致多种疾病的发⽣和发展。
通常认为Th1及其分泌的细胞因⼦具有促炎功能；Th2及其分泌的细胞因⼦具有抑炎功能。
细胞因⼦的临床应⽤⼀临床应⽤—感染性疾病2017年4⽉的《感染相关⽣物标志物临床意义解读专家共识》明确指出，细胞因⼦可⽤于急性感染的早期诊断、评价病情严重程度及判断预后。
IL-6的升⾼早于CRP和PCT，其持续时间长，2h达到⾼峰。
IL-6＞1000ug/L，提⽰预后不良。
COVID-19与细胞因⼦风暴2020年1⽉25⽇，国际顶尖医学期刊《柳叶⼑》（Lancet）在线发表有关新型冠状病毒的研究论⽂，⽂章从流⾏病学、临床表现、实验室检查、影像学特征、治疗和患者预后分析了⾸批确诊的41例新冠病毒感染者。
结果发现，已经被2019-nCoV病毒感染的危重患者中，免疫系统均出现致命的“细胞因⼦风暴“现象。
患者体内⼀系列细胞因⼦升⾼，ICU患者的IL-2，IL-6，IL-10和TNF-α的⾎浆浓度⾼于⾮ICU患者，这表明细胞因⼦风暴与疾病严重程度有关。
2020年2⽉19⽇，国家卫⽣健康委员会⼜发布了《新型冠状病毒肺炎诊疗⽅案（第六版）》，其中关于重症、危重症患者诊疗的临床预警指标中提到：“重型、危重型患者常有炎症因⼦升⾼。
建议有条件的进⾏细胞因⼦的检测。
”HBV⼄肝肝炎研究显⽰，Th1/Th2细胞功能失衡可能会使HBV感染转为慢性化。
正常状态下机体内Th1/Th2维持在平衡状态，当机体发⽣HBV慢性感染时，Th1/Th2平衡状态发⽣“漂移”，表现为Th1型免疫低下⽽Th2型免疫亢进。
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此， 多细菌感染性炎症时， 循环血液中的细胞因子含 量能否代表器官中细胞因子的基因表达有待研究。
＊ 本课题为北京市自然科学基金资助项目（ 编号： ７９９２０１７） １． 北京大学人民医院检验科（ 邮编 １０００４４） ２． 首都医科大学附属北京友谊医院检验科 ３． ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｘａｓ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ， ＴＸ７８２２９－ ３９００， ＵＳＡ △ 作者现在北京友谊医院 △△ 本 文 通 讯 作 者
北京医学 ２００５ 年第 ２７ 卷第 １０ 期
· ５７７ ·
· 论著 ·
不同器官细胞因子在多细菌感染性炎症时的
基因表达和临床意义 ＊
苏建荣 １△ 张 正 １△△ 孙东旭 ２ Ａｐａｒｎａ Ｋｒｉｓｈａｎ３ Ｇａｂｒｉｅｌ Ｆｅｒｎａｎｄａｓ３
【摘要】 目的 探讨肝、肺细胞因子基因表达与腹腔吞噬细胞上清液、循环血中细胞因子含量的关系 ， 为临床诊 治多细菌感染引发的炎症提供实验依据。 方法 将 ３０ 只小鼠分为假手术对照组（ ｓｈａｍ 组） 和盲肠结扎组（ ＣＬＰ 组） 。 采用 ＲＴ!ＰＣＲ 法检测肝脏和肺脏肿瘤坏死因子 α（ ＴＮＦ!α） 和白细胞介素 １０（ ＩＬ!１０） 的基因表达情况， 采用 ＥＬＩＳＡ 法检 测腹腔巨噬细胞上清液和循环血液中相应细胞因子含量。 结果 ＣＬＰ 组的 ＴＮＦ"α、ＩＬ!１０ 基因表 达 和 腹 腔 巨 噬 细 胞 上清液、循环血液中的相应细胞因子含量均高于 ｓｈａｍ 组。ＣＬＰ 后 １８ｈ 组与 ４ｈ 组比较， ＴＮＦ"α在腹腔巨噬细胞上清 液、循环血液中的活性均有显著性差异（ Ｐ＜０．０５） ，在肝、肺中基因表达有非常显著性差异（ Ｐ＜０．０１） ； ＩＬ!１０ 在腹 腔 巨 噬 细胞上清液和循环血液中的含量无显著性差异，而在肝、肺中基因表达有显著性差异。 结 论 发 生 多 细 菌 感 染 性 炎 症时， 肝、肺参与细胞因子的表达； 血液中细胞因子含量不能完全代表组织器官内 的 基 因 表 达 情 况 ； 多 细 菌 感 染 性 炎 症治疗应考虑靶器官细胞因子的表达状态。
【关键词】 多细菌感染 细胞因子 基因表达
Ｃｈａｎｇｅｓ ａｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒ ｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒ ｅｎｔ ｏｒ ｇａｎｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｉｃｒ ｏｂａｃｔｅｒ ｉａｌ ｐｅｒ ｉｔｏｎｉｔｉｓ
Ｓｕ Ｊｉａｎｒｏｎｇ， Ｚｈａｎｇ Ｚｈｅｎｇ， Ｓｕｎ Ｄｏｎｇｘｕ， ｅｔ ａｌ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｎｍｉｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４４）
７． 细胞因子 ｍＲＮＡ 表达分析：使用 ＡｌｐｈａＩｍａｇｅｒ ２０００ 分析系统分别检测内对照 ＧＡＰＤＨ 和细胞因子 ＴＮＦ!α、ＩＬ!１０ 含量， 定量分析ＰＣＲ 产物。
结果
一、腹腔巨噬细胞上清液中 ＴＮＦ!α和 ＩＬ!１０ 含 量变化
ＣＬＰ 后 ４ｈ 和 １８ｈ 组 与 相 应 ｓｈａｍ 组 ＴＮＦ!α和 ＩＬ!１０ 比较， 均有显著性差异， Ｐ＜０．０５； ＣＬＰ 后 ４ｈ 与 １８ｈ 比较， ＴＮＦ!α有显著性差异， Ｐ＜０．０５， 见表 １。
· ５７８ ·
２００３ 年至２００５ 年， 我们采用多细菌感染性小鼠模 型， 对肝、肺细胞因子基因表达与腹腔吞噬细胞上清 液、循环血中细胞因子含量的关系进行探讨， 以求找 出规律， 为临床诊治多细菌感染性炎症提供可靠的 实验依据。
材料与方法
一、材料 ＥＬＩＳＡ 试剂： 荧光标记单克隆抗体 ＴＮＦ!α、ＩＬ－ １０， 生物素标记的辣根过氧化物酶为 Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ 公 司产品。ＲＮＡ 提取试剂为 Ｔｒｉｚｏｌ 试剂， 购自 Ｇｉｂｃｏ 公 司。ＲＴ－ ＰＣＲ 试剂购自 Ｐｒｏｍｅｇａ 公司。ＰＣＲ 引物设计 依 据 ＭＥＤＬＩＮＥ 提 供 的 基 因 序 列 ， ＴＮＦ!α引 物 ： 上 游 ： ５’!ｃｔｇｇｇａｃａｇｔｇａｃｃｔｇｇａｃｔ !３’， 下 游 ： ５’!ｇｃａｃ－ ｃｔｃａｇｇｇａａｇａｇｔｃｔｇ !３’； ＩＬ !１０ 引 物 ： 上 游 ： ５’!ａｔ－ ｇｃａｇｇａｃｔｔｔａａｇｇｃｔｔａｃｔｔｇｇｇｔｔ!３’， 下游： ５’!ａｔｔｔｃｇｇａｃａｇａｇ－ ｇｔａｃａａａｃｇａｇｇｔｔｔ!３’； ＧＡＰＤＨ 引物： 上游： ５’!ａｃｃａｃａｇｔｃ－ ｃａｔｇｃｃａｔｃａｃ!３’， 下游： ５’!ｔｃｃａｃｃａｃｃｃｔｇｔｔｇｃｔｇｔａ!３’。 二、方法 １． 多细菌感染性炎症模型： Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠（ 购于 首都医科大学实验动物中心） ３０ 只， 分为两组， 每组 １５ 只。实验组采用盲肠结扎法（ ＣＬＰ） ［２］。假手术对照 组（ ｓｈａｍ 组） 同时切开腹壁但不结扎和穿孔盲肠。 术后 ４ｈ 和 １８ｈ 分别取小鼠肝脏、肺做细胞因子基因 表达分析， 取血液做细胞因子含量测定。 ２． 腹腔巨噬细胞上清液的采集：分别向 ｓｈａｍ 组 和实验组小鼠腹腔注入 ２ｍｌ ＰＢＳ 溶液， 吸取小鼠腹 腔液， 其中含有巨噬细胞。测定上清液中细胞因子的 含量。 ３． 细胞因子含量免疫分析： 采用 ＥＬＩＳＡ 法测定 细胞因子 ＴＮＦ!α和 ＩＬ!１０ 含量。 ４． 肝脏、肺脏总 ＲＮＡ 的提取： 采用 Ｔｒｉｚｏｌ 法［２］。 ５． ＲＮＡ 完整性的检测： 制备变性胶后， ５０Ｖ 电 泳约 １．５ｈ 后， 将胶块置紫外灯下， 观察 ＲＮＡ 的完整 性， 记录 １８Ｓ、２８Ｓ 条带的位置。 ６． 逆转录反应获得 ｃＤＮＡ、ＰＣＲ 扩增和琼脂糖 凝 胶 电 泳 和 产 物 分 析 ［２］： ① 逆 转 录 反 应 获 取 ｃＤＮＡ 的方法： 取 １μｇ 总 ＲＮＡ 于微量离心管中， 置 ７０℃温 育 ５ｍｉｎ， 离心后冰浴 ５ｍｉｎ。离心管中加入混合液 ［ ＭｇＣｌ２， ２５ｍｍｏｌ／Ｌ； １０×逆 转 录 缓 冲 液 ； ＲＮＡ 酶 抑 制 剂 ； 逆 转 录 酶 ； Ｏｌｉｇｏ（ ｄＴ） １５ Ｐｒｉｍｅｒ； ＤＥＰＣ Ｈ２Ｏ］ ， 终 容 量为 ２０μｌ。置于 ４２℃反应 １５ｍｉｎ， ９５℃加热５ｍｉｎ 后，
北京医学 ２００５ 年第 ２７ 卷第 １０ 期
冰浴 ５ｍｉｎ， 以 灭 活 逆 转 录 酶 并 防 止 ｃＤＮＡ 相 互 结 合。② ＰＣＲ 扩增和琼脂糖凝胶电泳和产物分析： 用 ＤＥＰＣ Ｈ２Ｏ 稀释 ｃＤＮＡ 至 １００μｌ。在 １００μｌ ＰＣＲ 扩增 管中， 加入 １０μｌ 稀释好的 ｃＤＮＡ， １．８μｌ 的 １０ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ 混 合 液 ， ７．５μｌ 的 ２５ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２， ９．８μｌ 的 １０×逆转录缓冲液， ５０ ｐｍｏｌ 的上游引物， ５０ ｐｍｏｌ 的 下 游 引 物 ， ２．５Ｕ 的 Ｔａｑ ＤＮＡ 聚 合 酶 和 ＤＥＰＣ Ｈ２Ｏ， 终容量为 ５０ μｌ。ＴＮＦ!α和 ＩＬ!１０ 的 ＰＣＲ 反应退火温 度 分 别 为 ５９℃和 ５８℃， ３８ 个 循 环 。 上 载 １０μｌ ＰＣＲ 产物于 １．５％琼脂糖凝胶板上， 电泳。
与 ｓｈａｍ 组比较 ＊Ｐ＜０．０５； 与 ＣＬＰ 后 ４ｈ 比较 ＃Ｐ＜０．０５
二、循环血液中 ＴＮＦ!α和 ＩＬ!１０ 含量变化 在腹腔巨噬细胞上清液和循环血液中， 实验组 ＴＮＦ!α和 ＩＬ!１０ 含量均高于 ｓｈａｍ 组。ＣＬＰ 后 １８ｈ 与 ４ｈ 比较， ＴＮＦ!α变化有显著性差异（ Ｐ＜０．０５） ； 而 ＩＬ! １０ 变化无显著性差异， 见表 ２。
【Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ】 Ｐｏｌｙ"ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
多细菌感染性炎症是临床常见的感染性疾病。 感染后引起机体炎症反应， 释放大量细胞因子。炎症 反应的失调可导致组织细胞损伤， 包括肺、肝、肾在 内 的 多 器 官 功 能 衰 竭 ［ １］ 。 细 胞 因 子 是 联 系 细 胞 间 相 互作用的一种化学物质， 在多细菌感染性炎症的临 床诊治中起重要作用。但由于细胞因子由旁分泌或 自分泌方式释放，在少数细胞范围内发挥作用， 而不 像激素等物质可通过血流迅速到达全身靶器官， 因
表 １ 多细菌感染性炎症腹腔巨噬细胞上清液中细胞因子
的含量（ ｎ＝３０） （ ｘ! ±ｓ， ｐｇ／ｍｌ）
细胞因子
ＣＬＰ后 ４ｈ
ｓｈａｍ组
实验组
ＣＬＰ后 １８ｈ
ｓｈａｍ组
实验组
ＴＮＦ!α ４００±４６
８２０±５８＊
６３５±５５ １２１０±１０６＊＃
ＩＬ!１０
４３５±４２
７±１０２＊
【Ａｂｓｔｒ ａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ， ｌｕｎｇｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｓｅｒａ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｙ ｃｅｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｎｃｔｕｒｅ（ ＣＬＰ） ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ３０ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｓｈａｍ ｇｒｏｕｐ （ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ） ａｎｄ ＣＬＰ ｇｒｏｕｐ． ＲＮＡ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｌｕｎｇｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ"αａｎｄ ＩＬ"１０ ｍＲＮＡ ｂｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐ－ ｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ （ ＲＴ"ＰＣＲ） ． ＥＬＩＳＡ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＴＮＦ"αａｎｄ ＩＬ"１０ ｉｎ ｓｅｒａ ａｎｄ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＴＮＦ"αａｎｄ ＩＬ"１０ ｉｎ ｓｅｒａ ａｎｄ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｆｌｕ－ ｉｄ ｏｆ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｌｕｎｇｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ＣＬＰ ｔｈａｎ ｉｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｓｈａｍ ｃｏｎｔｒｏｌｓ． ＴＮＦ"αｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍｏｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｆｒｏｍ ４ ｈｒｓ ｔｏ １８ ｈｒｓ ｂｏｔｈ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｌｕｎｇｓ （ Ｐ＜０．０１） ｔｈａｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｓｅｒａ ａｎｄ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｆｌｕｉｄ（ Ｐ＜０．０５） ． Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＩＬ"１０ ｉｎ ｓｅｒａ ａｎｄ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｃｈａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ４ ｈｒｓ ｔｏ １８ ｈｒｓ， ｗｈｉｌｅ ｔｇｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｌｕｎｇｓ ｗｅｒｅ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｉｎ １８ ｈｒｓ ｔｈａｎ ｉｎ ４ ｈｒｓ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｌｉｖｅｒ ａｎｄ ｌｕｎｇｓ ａｒｅ ｏｒｇａｎｓ ｔｈａｔ ｐｒｏｄｕｃｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｃａｎｎｏｔ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｔｈａｔ ｉｎ ｏｒｇａｎｓ ｏｆ ｂｏｄｉｅｓ ｓｕｆｆｅｒｅｄ ｆｒｏｍ ｍｕｌｔｉｐｌｅ"ｍｉｃｒｏｂａｒｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．