葡萄糖(GLU) 葡萄糖氧化酶终点法
葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法是一种检测血糖的重要方法，被广泛用于从心血管疾病到糖尿病检测等多种临床诊断和研究领域。
它可以帮助医生们诊断病人的血糖水平，以便确定合适的治疗方案，或者针对糖尿病患者的进一步管理。
在过去的十年里，葡萄糖氧化酶法不断改进，以提高检测灵敏度和准确度，提供更加可靠的诊断结果。
葡萄糖氧化酶法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖发生反应的原理，葡萄糖氧化酶是一种酶，具有将不可溶性的葡萄糖氧化到果糖的能力，葡萄糖含量越高，葡萄糖被氧化的速度就越快，反应的活性也就越强。
葡萄糖氧化酶法是利用这种反应特性，将样本中的葡萄糖氧化到果糖，并采用光学测定的方法检测果糖的浓度，从而实现血糖检测。
葡萄糖氧化酶法的检测过程通常包括样品前处理，反应检测和数据分析三个步骤。
样品前处理主要是用来处理样品，去除干扰物质，使其在实验室中稳定存放，以便进一步测定。
反应检测需要将样品、葡萄糖氧化酶溶液和可变因子（温度、pH值等）混合在一起，在一定条件下，葡萄糖会被氧化到果糖，而检测其反应活性，即可获得血糖浓度值。
最后，通过数据分析把检测结果转换成血糖浓度值，完成整个检测过程。
葡萄糖氧化酶法有着众多优点，其中最主要的一点是准确率高。
因葡萄糖氧化酶具有较强的反应活性，而且反应过程也是快速的，所以其准确率较高，可以更准确的测定血糖的含量。
此外，葡萄糖氧化酶法的另一个优点是样本量少，它可以用非常少的血液样本来测定血糖的含量，相比于其他检测方法，它可以减少患者的抽血量，减轻患者的负担。
虽然葡萄糖氧化酶法有着许多优点，但也存在一定的缺点。
首先，葡萄糖氧化酶法必须在一定温度和PH值范围内才能得到准确的结果，所以检测过程受异物的干扰较大，特别是有较多异物存在的样品，检测准确性会受到一定影响。
另外，它需要借助复杂的仪器设备和先进的技术，只有在实验室条件下才能进行测定，不利于家庭自测。
总的来说，葡萄糖氧化酶法是一种重要的血糖检测方法，它具有准确性高，样本量少，但由于它受到温度和异物的影响较大，以及测定需要专业仪器设备，因此也不利于家庭自测。
葡萄糖测定方法操作规程
葡萄糖（GLu）测定方法操作规程【产品名称】通用名称：葡萄糖（GLu）测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）使用说明书【摘要】糖是人体的主要供能物质，也是组织细胞的主要成分。
血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的相对平衡时，则出现高血糖或低血糖症状。
1.病理性高血糖：（1）原发性糖尿病（2）内分泌疾病：嗜铬细胞瘤、甲状腺毒瘤、肢端肥大症、巨人症、Cushing综合征、高血糖素细胞瘤；（3）胰腺疾病：急性或慢性胰腺炎、流行性腮腺炎引起的胰腺炎、胰腺囊性纤维化、血色病（血红蛋白沉着症）等；（4）抗胰岛素受体抗体与有关疾病：棘皮症、Wernicke’s脑病。
2.病理性低血糖：（1）胰岛细胞瘤、高血糖素缺乏；（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长激素、肾上腺皮质激素和甲状腺素分泌减少；（3）严重肝病患者，肝细胞糖原储存不足及糖原异生功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
【预期用途】该试剂盒采用葡萄糖氧化酶法，用于体外定量测定人血清或血浆中葡糖糖的含量。
【检验原理】葡糖糖被葡萄糖氧化酶氧化后生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下，与4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠缩合，生成醌系色素，通过测定此反应的吸光度可求得葡糖糖的含量。
D-2葡萄糖氧化酶D-葡萄糖醛酮+H2O22 H2O2 + 4-APP ++ H3O+POD醌系色素+ 5H2O【主要组成成份】试剂1（R1）：磷酸盐缓冲液100 mmol/L抗环血酸氧化酶4700 U/L葡糖糖氧化酶4000 U/L试剂2（R2）：磷酸盐缓冲液100 mmol/L过氧化物酶6700U/L4-氨基安替比林0.7 mmol/L对羟基苯甲酸钠 1.3 mmol/L校准品：葡萄糖溶液。
*不同批号试剂盒各组分请勿混用。
【试剂准备】R1：即用液体试剂R2：即用液体试剂【储存条件与有效期】未开启的试剂盒避光保存于无腐蚀性气味和通风良好的室内，在2℃~8℃有效期为一年。
葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖反应终点观察
葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖反应终点观察
王彦明
【期刊名称】《实用医技杂志》
【年(卷),期】2008(015)014
【摘要】目的:探讨葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖反应达到终点的时间.方法:先反应15min测定血清葡萄糖的浓度,再延长不同的时间测定血清葡萄糖的浓度直到浓度稳定.结果:葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖的反应25min以后才能达到终点.结论:葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖的反应15min达不到反应终点,应延长到25min.
【总页数】2页(P1822-1823)
【作者】王彦明
【作者单位】朝阳市中心医院,辽宁,朝阳,122000
【正文语种】中文
【中图分类】R587.1
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葡萄糖氧化酶双试剂终点法测量模式的系统分析
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葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
实验名称：葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖【实验原理】葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。
醌的产量与葡萄糖量成正比。
醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。
【实验准备】一、材料（1）血清（2）血浆：以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆二、试剂（1）试剂R1：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，苯酚10mmol/L。
（2）试剂R2：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，葡萄糖氧化酶16 000U/L，过氧化物酶1 000U/L，4-氨基安替比林2.0mmol/L。
（3）葡萄糖校准液：5.550mmol/L（1mg/ml）（4）生理盐水。
（5）工作试剂（酶酚混合液）：取R1试剂4.5ml与R2试剂0.5ml混合在10ml试管中。
三、器材（1）试管和试管架（2）移液枪（3）722型分光光度计（4）酶标仪（5）恒温水浴箱（6）酶标板（7）板条（8）生化培养箱【实验步骤】（1）取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按【实验结果】葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值）×5.55参考值：3.89~6.11mmol/L测得数据为A2 A3 A4 A50.085 0.05 0.03 0.037(0.037+0.030)/2——×5.55 ﹦2.75mmol/L（0.085+0.050/2【实验讨论】①移液枪操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习②测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。
③由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。
④本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引起误差。
实验血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法）
【目的】
体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。
【临床意义】
葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的 起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高 见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少 见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。
此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。
【参考文献】
1.全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997,P616.
2.Trinder P. Ann Clin Biochem，1969, 6: 24-27.
血糖测定实验所需器材：
1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm），
2.恒温水浴箱（能调温度的，37C）,
工作液
1.50 ml
1.50 ml
1.50 ml
蒸馏水
0.01 ml
校准液
0.01 ml
样品
0.01 ml
分别混合均匀，37C水浴10〜15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。
【计算】
葡萄糖
葡萄桃
【参考值】
血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L（70—110mg/dl）。
>13000U/L
过氧化物酶（POD
>l/L
酚
11mmol/L
4-氨基安替吡啉
0.77mmol/L
葡萄糖测定葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。
5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。
2h 以后方可使用。
7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
葡萄糖检测标准操作规程SOP
葡萄糖1.目的规范葡萄糖测定的操作程序，确保葡萄糖测定结果准确。
2.检验方法氧化酶法（两点终点法） 3.检验原理 葡萄糖+O 2+H 2O 葡萄糖酸+H 2O 2H 2O 2+4-AAP+苯酚红色醌亚胺+4H 2O在波长505nm 处比色，计算出GLU 浓度。
4.临床意义临床检测GLU 浓度主要用于糖尿病诊断、昏迷鉴别诊断及糖代谢研究。
血糖增高主要见于：①生理性高血糖：可见于饭后1-2小时或情绪紧张肾上腺分泌增加时;②病理性高血糖：可见于内分泌功能障碍引起的糖尿病、颅外伤、颅内出血、脑膜炎引起的颅内高压、脱水引起的高血糖、急慢性胰腺炎、肝功能障碍等。
血糖降低主要见于：①生理性低血糖：常见于饥饿和剧烈运动后。
②病理性低血糖：可见于高胰岛素血症、非胰性肿瘤、糖原累积症、自身免疫性疾病、半乳糖血症和肾脏疾病等。
5.标本采集及干扰因素 5.1标本要求空腹不抗凝静脉血2~3ml 。
5.2标本保存室温保存，及时送检。
血清ALT 在20-25℃可稳定24小时，在2-8℃储存可稳定7d ，-20℃冰冻保存可稳定30d 。
5.3注意事项推荐选用血清，避免溶血，红细胞中ALT 比血浆高约7倍，溶血时红细胞内ALT 可进入血浆，导致测定结果偏高。
标本应避免溶血、脂血、黄疸。
6.检测仪器日立7180全自动生化分析仪，使用具体要求和校准程序详见《仪器GOPOD操作规程》。
7.试剂 7.1试剂品牌美康生物 7.2包装规格200mL （R1:2×65mL+R2:1×70mL ） 7.3主要组成成分 试剂成分含量（最终反应体系） 试剂1 磷酸盐缓冲液 0.1mol/L 苯酚0.01×10-3mol/L 试剂2葡萄糖氧化酶 16000u/L 过氧化物酶 1000u/L 4-氨基安替比林0.02×10-3mol/L不同批次的试剂不推荐混合使用 7.4储存条件有效期试剂在2-8℃保存可稳定1年，试剂开瓶后于2-8℃可稳定1个月。
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目录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。
过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。
此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。
GOD
β-D-葡萄糖+ H2O + O2 ----------- H2O2 + D-葡萄糖酸
POD
H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚---------- 醌亚胺（红色）+ H2O
2．标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
有些药物长期应用，可使患者糖代谢发生障碍，引起血糖增高，因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖，避免引起高血糖。
常用药物中可致血糖增高的有以下几类。
糖皮质激素：糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等，临床应用广泛。
糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢：（1）增强糖元分解；（2）使糖异生途径活动；（3）减少外周组织对葡萄糖的作用，因而血糖升高。
如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗，应密切监测血糖，根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。
甲状腺制剂：甲状腺激素（甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白），可以促进葡萄糖的吸收，加速糖元分解及糖异生，使血糖增高。
因而应用甲状腺制剂时应严密观察，特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂时应慎重给药。
肾上腺素：肾上腺素可动员肝及肌肉的糖元分解，使血糖升高。
一般来说，肾上腺素及拟肾上腺素制剂很少会长时间就用，所以对血糖的影响不大。
利尿剂：噻唪类利尿剂长时间应用，可使病人的糖耐量降低而升高血糖，可能是抑制胰岛素分泌或使糖元分解的缘故。
噻唪类利尿剂致高血糖大多出现在用药2-3个月后，停药能自行恢复。
避孕药：包括雌激素与黄体酮样衍生物，这些药物均具有降低糖耐量和升高血糖的作用。
因此患有糖尿病的育龄妇女，不能服用这些避孕药。
异烟肼：异烟肼是抗结核病的一线药物，治疗结核病时用药期至少在半年以上。
长期用异烟肼可影响糖代谢，使糖耐量降低，因此在用药期间应定期检查血糖并采取相应措施。
当糖尿病合并肺结核时，异烟肼忌与磺脲类降糖药合用，否则可能产生不可逆糖尿病。
其它：如烟酸及其衍生物、吩噻嗪类药物、生长素、促肾上腺皮质激素、双香豆素、去甲基麻黄碱等药物，均有增高血糖浓度的作用，使用时应注意监测血糖，避免引起高血糖或糖尿。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
血浆使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司GLU试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下：
3.2：校准血清
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。
试剂颜色为无色至浅粉色，当试剂变色或者在546 nm的吸光度高于0.15ABS，按照试剂失效处理。
多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。
参见校准血清说明书。
试剂盒配备的水标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，开瓶后2-8℃储存避免污染，可稳定2个月。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长500nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。
本法为终点法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
A测定
C = ————×C0
A标准
式中：c——测定葡萄糖浓度，g/L；
A测定——标本管吸光度；
A标准——标准管吸光度；
C O——校准血清葡萄糖浓度，g/L；
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV< 0.25%，批间CV< 1.87%。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
葡萄糖浓度为：10mmol/L时，显色吸光度为0.558～0.660。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:100时，测定上限为27.8mmol/L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸80mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
4.16~6.44mmol/L。
临床意义
血糖(英文名称: glucose)测定试剂盒用于定量测定血清中葡萄糖的含量。
葡萄糖是存在于人体血液中最主要的碳水化合物，葡萄糖浓度的测定常用于内分泌功能的检查。
血糖增高常见于甲状腺机能亢进、糖尿病等；血糖降低常见于胰岛素增多症、胰腺癌等。
附录A: 参数。