抗荧光淬灭封片剂
DAPI-抗荧光淬灭封片剂
DAPI-抗荧光淬灭封片剂
产品编号：F-0045 规格：10ml
产品简介
DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，它能与DNA结合，在紫外光下可观察到蓝色荧光，最大吸收波长为358nm，最大发射波长为461nm。
使用范围
本产品为即用型工作液，无须稀释，直接用于FISH、IF、TUNEL等细胞核的荧光染色。
储存条件
-20℃，避光
本产品需要严格避光，可放于铝饭盒中或用锡纸包裹。
本产品为淡黄色粘稠液体，由于其中的抗荧光淬灭成分会吸收光，使用时间长后，液体会慢慢变深，最终为变为深褐色时，请勿使用。
使用方法
FISH
杂交结束，标本经过洗液洗涤、再经梯度酒精脱水、干燥，直接在标本上滴加10～20μl DAPI，加上盖玻片，室温下，大约20分钟后可观察荧光。
IF
孵育二抗结束，PBS洗涤后，直接在标本上滴加10～20μl DAPI，加上盖玻片，避光，室温下，大约20分钟后可观察荧光。
注意：
本产品含有甘油、抗荧光淬灭剂，也具备封片作用，在细胞核染色后，无须清洗，可减缓荧光淬灭，在严格避光情况下，4℃保存一周，荧光仍不会淬灭。
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广州市外显子生物技术有限公司
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抗荧光淬灭剂的原理
抗荧光淬灭剂的原理抗荧光淬灭剂，这可是个挺有趣的东西呢！咱先得知道啥是荧光淬灭。
就好比一个小彩灯，本来亮堂堂的，突然被什么东西给捣乱了，一下子就暗下去了，这就是荧光淬灭啦。
那为啥会这样呢？有好多原因呢。
有时候是周围的环境里有一些调皮捣蛋的分子，它们像小坏蛋一样，把荧光分子的能量给抢走了，荧光分子没能量了，就不发光或者发光变弱了。
这时候抗荧光淬灭剂就闪亮登场啦。
它就像是荧光分子的小保镖一样。
这个小保镖很聪明哦，它会在荧光分子周围形成一种保护圈。
那些想捣蛋的分子靠近的时候，小保镖就会把它们拦住，不让它们去抢荧光分子的能量。
比如说，有些抗荧光淬灭剂就像一个个小盾牌，把荧光分子遮得严严实实的，那些坏分子就没办法下手啦。
还有些抗荧光淬灭剂呢，它们会和荧光分子手拉手，就像好朋友一样。
当有危险靠近的时候，它们就一起抵抗。
这种拉手可不是简单的拉手哦，它们在能量的传递上也有一套。
会让荧光分子的能量稳定住，不会轻易被抢走。
再说说这些抗荧光淬灭剂的神奇之处吧。
你想啊，在科学研究里，要是荧光分子老是淬灭，科学家们就没法好好观察那些微观的东西啦。
比如说在观察细胞里面的一些小结构的时候，就靠荧光分子来标记呢。
如果荧光淬灭了，就像在黑夜里突然没了手电筒一样，啥都看不到了。
而抗荧光淬灭剂就保证了这个手电筒一直亮着，让科学家们能顺利地进行研究。
在一些检测实验里也是一样的。
比如说检测一些疾病的标志物，如果荧光老是淬灭，那检测结果可能就不准啦。
抗荧光淬灭剂就像是一个稳定结果的小能手，让检测能够准确地进行。
其实抗荧光淬灭剂就像一个默默奉献的小英雄呢。
它没有那些特别耀眼的光环，但是它在幕后做的事情可重要啦。
它让那些荧光分子能够稳定地发光，为我们的科研、检测等好多方面都提供了大大的帮助。
如果没有它，很多关于荧光的应用可能都会变得一团糟呢。
所以呀，可别小看了这个抗荧光淬灭剂哦。
细胞免疫荧光(immunofluorescence)操作步骤
细胞免疫荧光（immunofluorescence）操作步骤
1.细胞爬片；
2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)；
3.PBS漂洗5min；
4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)；
5.PBS漂洗2次，每次5min；
6.1%BSA封闭30min；
7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h；
8.PBS漂洗2次，每次5min；
9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h；
10.PBS漂洗2次，每次5min；
11.5ug/ml DAPI染色2min；
12.抗淬灭封片剂封片。
抗淬灭封片剂:
2.5% DABCO (w/v)
50mM Tris(pH8.0)
90%甘油
【注意事项】
大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：
1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
3.第三种就是忌用，就是说明药物在此类人群中有明确的不良反应，应该是由医生根据病情给出用药建议。
如果一定需要这种药物，就可以联合其他的能减轻不良反应的药物一起服用。
大家以后在服用药物的时候，多留意说明书，留意注意事项，避免不良反应的发生。
本文到此结束，谢谢大家!。
免疫组化,免疫检测
免疫组化,免疫检测北京华越洋生物-----------------------------------------------DMDC玻片硅化剂(2%) 100ml 免疫组化40% 室温,6个月玻片的硅化,包括盖玻片和载玻片主要由二甲二氯硅烷(DMDC)组成。
玻片硅化试剂盒(APES法) 3×100ml 免疫组化40% 4℃,6个月玻片的硅化,包括盖玻片和载玻片主要由APES、洗涤液、DEPC水组成。
玻片硅化试剂盒(APES法) 3×500ml 免疫组化40% 4℃,6个月玻片的硅化,包括盖玻片和载玻片主要由APES、洗涤液、DEPC水组成。
PBS-Triton去污剂100ml 免疫组化40% 室温,12个月去污主要由PBS、Triton-100组成。
Sorensen磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)500ml 免疫组化40% 4℃,6个月组织化学常用缓冲液主要由磷酸二氢盐(钠/钾)和磷酸氢二盐(钠/钾)溶液组成,按不同比例混合后获得对用PH值。
pH值可选5.3，5.6，5.91，6.24，6.47，6.64，6.81，6.98，7.17，7.73，8.04。
Sorensen磷酸缓冲液(1×,pH6.2) 500ml 免疫组化40% 4℃,6个月少量细胞趋化实验主要由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化镁、氯化钙组成,终浓度17mM。
Sorensen磷酸缓冲液(10×,pH6.2) 500ml 免疫组化40% 4℃,6个月少量细胞趋化实验主要由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化镁、氯化钙组成,终浓度170mM。
TBS缓冲液(0.02mol/L,pH8.2) 500ml 免疫组化40% 室温,6个月免疫金银染色缓冲液主要由Tris、氯化钠组成。
TBS缓冲液(0.05mol/L,pH7.4) 500ml 免疫组化40% 室温,6个月免疫金银染色缓冲液主要由Tris、氯化钠、叠氮钠、BSA组成。
抗荧光淬灭封片液成分
抗荧光淬灭封片液成分
嘿，朋友们！今天咱来聊聊抗荧光淬灭封片液的成分。
你可别小看了这玩意儿，它就像是给我们的样本穿上了一层保护衣呢！
这抗荧光淬灭封片液里啊，通常有一些特别的成分。
就好像是一个团队里的各个成员，都有着自己独特的作用。
比如说，有一种成分就像是一个忠诚的卫士，努力维持着样本的稳定，让荧光信号能乖乖地待在那里，不轻易消失。
还有的成分呢，就如同一个神奇的魔法师，能够增强荧光的亮度和持久性，让我们能更清楚地看到那些细微之处。
你想想看，要是没有这些成分的精心呵护，我们观察的那些漂亮的荧光图像岂不是很快就会变得暗淡无光啦？那可就太可惜了呀！就好比你精心画了一幅美丽的画，结果没一会儿颜色就掉光了，那多让人沮丧啊！
而且啊，这些成分还得相互配合得恰到好处才行。
这就跟踢足球一样，每个球员都要在自己的位置上发挥好作用，同时和队友紧密配合，才能赢得比赛。
如果某个成分“掉链子”了，那整个封片液的效果可就大打折扣啦。
再打个比方，这抗荧光淬灭封片液的成分就像是一道美味菜肴里的各种调料。
盐不能太多，不然太咸；糖不能太少，不然没味道。
只有各种调料搭配得宜，才能做出让人赞不绝口的美食。
咱在使用抗荧光淬灭封片液的时候，可一定要选对产品，就像挑水果一样，得挑新鲜又甜美的。
不同的样本可能需要不同的封片液呢，这可得仔细着点儿。
要是选错了，那不就相当于给千里马套上了小毛驴的缰绳，能发挥好才怪呢！
总之，抗荧光淬灭封片液的成分可真是太重要啦！它们默默地守护着我们的样本，让我们能更好地探索微观世界的奥秘。
可别小瞧了它们哟！你说是不是呀？。
Hoechst 染色
本人收集的激光共聚焦常见荧光染料染色方法zuohy(2008-09-19 17:33:43)一、Hoechst 33258染色1、试剂盒组成固定液 50 mlHoechst 33258染色液 50 ml抗荧光淬灭封片液 5 ml说明书 1 份保存条件：4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。
本试剂盒自订购之日起六个月内有效。
2、注意事项：需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
需PBS或0.9%NaCl溶液。
需盖玻片与载玻片。
荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
3、使用说明：1）贴壁细胞A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。
将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
C. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。
使细胞接触封片液，切勿弄反。
G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
激发波长在350nm左右，发射波长在460nm左右，详细图谱请参考下图。
2）悬浮细胞A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
B. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
洗涤期间手动晃动。
C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
细胞技术课堂小知识——荧光免疫实验步骤
细胞技术课堂小知识——荧光免疫实验步骤贴壁细胞免疫荧光法(1）在培养板中接种的带染色的细胞爬片用PBS泡洗3次×3min。
(2） 4%多聚甲醛固定细胞爬片15min。
(3） 1XPBS洗涤3 次，每次5min。
(4） 0.5%Triton X-100 (PBS 配制）室温通透10min。
(5) 1×PBS 洗涤3 次，每次5min。
(6） 1%BSA室温封闭30min。
(7）弃掉封闭液，细胞爬片滴加适量稀释至适当比例的一抗，4℃孵育过夜。
(8) 1 ×PBS 洗涤3 次，每次5min。
(9）细胞爬片滴加稀释至适当比例的荧光二抗。
(10) 1×PBS 洗涤3 次，每次5min。
(11）DAPI染细胞核，浓度和时间根据试剂说明书使用。
(12）1×PBS洗涤3 次，每次5min。
(13）用抗荧光淬灭剂封片。
(14）荧光显微镜下观察采集图像。
悬浮细胞免疫荧光法（一)(1）收集悬浮细胞，细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机于4℃以800 g 离心5 min，吸去培养液并以4℃ 1×PBS重悬细胞。
(2）离心吸去 PBS，4%多聚甲醛固定液，重悬细胞，置冰上固定30 min。
(3）离心、吸去固定液，用4℃ 1×PBS重悬细胞，离心800 g 离心5 min，去PBS，留细胞沉淀。
(4） 0.5%Triton X-100 (PBS 配制）室温通透10min。
(5）离心800 g离心5 min，去通透液，留细胞沉淀。
▲注意:步骤（4）和(5）用于检测细胞核抗原，细胞膜抗原直接跳过此步骤(6）使用1% BSA进行室温封闭30min，用于封闭非特异性抗原表位。
(7）离心800 g离心5 min，去封闭液，留细胞沉淀。
(8) 孵育一抗,浓度根据抗体说明书操作,4℃摇床孵育过夜(一般孵育15-16h)。
(9）用4℃ 1×PBS稀释细胞和抗体，离心，吸去PBS，以4℃ 1×PBS重悬细胞，重复1次。
免疫荧光步骤
免疫荧光步骤
1.脱蜡和水化
脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60℃恒温箱中烘烤20min。
1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min； 2）无水乙醇中浸泡5min； 3）95%乙醇中浸泡5min； 4）70%乙醇中浸泡5min；（动作要快，减少暴露在空气中中的时间）
2.PBS洗两次各5min。
（整个过程中注意切片不能干）
3.抗原修复，用于多聚甲醛固定的石蜡包埋组织芯片。
煮沸热修复电炉或者水浴锅加热 0.01M柠檬酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10min，必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。
4.PBS洗3次每次5min。
5.滴加5%正常山羊血清，室温封闭30min，甩去多余液体。
6.滴加一抗（根据说明书的比例稀释，一般为1:100），室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45min）。
7.PBS洗3次每次5min。
8.滴加荧光标记的二抗，室温避光孵育1h。
（注意抗体针对的种属，使用浓度，用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光。
）
9.PBS洗3次每次5min。
10. DAPI染色：把DAPI滴在片上，将切片覆盖，50ul/片，染色10min。
11. PBS洗3次每次2 min。
12.封片：抗荧光淬灭封片剂封片，再拍照。
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抗荧光淬灭封片剂
简介：
抗荧光淬灭封片剂(Antifade Mounting Medium)又称抗荧光衰减封片剂(Fluorescence decay resistant Medium)，是一种用于减缓荧光淬灭的封固剂。
可以用于减缓各种常见荧光染料的荧光淬灭。
按每个样本需要封片剂计算，可以用于样本的封片。
组成：
自备材料：
1、 载玻片
2、 盖玻片
3、 荧光显微镜
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞样本
①染色完成后，吸去染色液。
②滴一滴Antifade Mounting Medium 于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。
③在荧光显微镜下观察。
2、组织切片
①染色完成后，吸去染色液。
②滴一滴Antifade Mounting Medium 于组织切片上，盖上盖玻片，让切片接触封片液，尽量避免气泡。
③在荧光显微镜下观察组织切片。
3、其它样品
其它样品参考细胞样品或组织切片进行操作。
注意事项：
1、 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
2、 在使用Antifade Mounting Medium 的情况下，虽然可减缓淬灭，仍需尽量避光。
编号 名称 IH0252 IH0252 Storage Antifade Mounting Medium 5ml 10ml 4℃ 避光 使用说明书 1份
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
亦可短期内室温存储。
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编号名称
DH0005Mayer苏木素染色液
IH0091多聚赖氨酸溶液(10×PLL,1mg/ml)
IH0142PBS磷酸盐缓冲液(0.01mol/L,pH7.2-7.4)
IH0270甘油明胶封固液
IH0305柠檬酸钠抗原修复液(50×)
PW0053Western抗体洗脱液(碱性)
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
TC1213 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)。