温度对酶活性影响

课题2 温度对酶活性的影响

课题概述：

生物体内的各项代谢，只有在酶的参与下才能迅速进行。酶的本质是蛋白质，其催化作用受温度等条件的影响。不同类酶均有其作用的最适温度，高于或低于该温度，酶的活性就会下降，直至完全遭到破坏。

双氧水对大多数生物体有害，而许多生物体内都有过氧化氢酶等来分解它。

过氧化氢酶

H2O2—————→ H2O+ O2

本实验将以酵母菌为过氧化氢酶来源，利用氧气浓度传感器来测定不同温度下该反应的速度，从而确定过氧化氢酶发挥作用的最适温度。

氧气浓度传感器可测定气体中0-27%范围的氧气的浓度。其核心装置是一原电池，氧气分子进入其中被还原而引起电流变化，即氧气浓度决定了电流变化的大小，进而改变输出电压的大小。因此通过对输出电压的测定即可确定气体中氧气的浓度。

目的：

1．学会氧气浓度传感器的使用方法。

2．学会测定不同温度下酶促反应的速率，并对各速率进行比较。

器材：

实验材料：市售干酵母。

实验仪器及用品：TI—83 Plus图形计算器及CBL系统、氧气浓度传感器(附配套塑料瓶)、玻璃棒、温度计、100mL小烧杯、50mL量筒、小试管、刻度移液管、胶头滴管、保温杯、蒸馏水洗瓶、冰、冷水、热水、吸水纸。

实验试剂：3% H2O2溶液、2%葡萄糖。

步骤：

一．实验准备

1．水浴准备：保温杯(或两个烧杯间填充泡沫塑料代替之)中盛放一定量冰水或热水，分别调至0—5℃、20—25℃、30—35℃、35—40℃。实验期间温度计始终要悬在水中，监测温度。如有变化，及时调整。

2．称取0.5g 干酵母溶解在25mL2%葡萄糖溶液中，搅拌均匀。取4支小试管，各加入1mL 上述悬浊液，分别置于各温度水浴中5—10分钟。

二．设置传感器

1．连接TI —83 Plus 图形计算器、CBL 系统。

2．将氧气浓度传感器与CBL 系统CH1通道相连。

3．打开TI —83 Plus 图形计算器、CBL CHEMBIO ”程(见图1、2)

图1 图2 4．在“MAIN MENU ”菜单中选择“1：SET UP PROBES ”；输入传感器数量

“1(见图3) 5．在“SELECT PROBE ”菜单中选择选择“7：MORE PROBES ”，直至出现氧气浓度传感器。

6．在“SELECT PROBE ”菜单中选择“4：OXYGEN SENSOR ”。 (见图4)

图3 图4 7．输入通道序号“1”；在“CALIBRATION ”菜单中选择“1：USE STORE ”。

(见图5、6) 图5 图6

8．在“OXYGEN UNITS ”菜单中选择“1：PERCENT ”。 传感器设置完成后即返回“MAIN MENU ”菜单。(见图7、8)

图7 图8 三．设置采样方式

1．在“MAIN MENU”菜单中选择“2：COLLECT DATA”。(见图9)

2．在“COLLECT DATA”菜单中选择“2：TIME GRAPH”，预热30秒后，按

(见图10)

图9 图10

3．输入采样间隔时间：“30”秒，16”

个，480(见图11、12)

图11 图12 4．在“CONTINUE”菜单中选择“1：USE TIME SETUP”。(见图13)

图13

5．输入Y轴(氧气百分含量)的最小值：“19.0”(%)Y轴的最

大值：“22.0”(%)Y轴坐标点间隔：“0.5

(见图14、15)

图14 图15 四．数据采集

1．用移液管移取3mL3% H2O2溶液于氧气浓度传感器附带之塑料瓶中，再加入

3mL蒸馏水后，放入35-40℃水浴中温育5分钟左右。

2．用滴管滴加4滴35-40℃温度的干酵母葡萄糖溶液，略微震荡摇匀后塞上氧气

3．当CBL显示“DONE”时，采样全部完成(见图16)

4．在“REPEAT”菜单中选择“1：NO”。(见图17)

图16 图17 5．在“MAIN MENU”菜单中选择“7：QUIT”。

6．取出传感器，洗净塑料瓶，吸干水分。用风扇或纸扇对传感器扇风一分钟左右以换气。

五．数据存储

1，在“NAMES”菜单中选择“1：L1”；按

，L1数组中的数据存储到A数组中。(见图18、19)

图18 图19

2，在“NAMES”菜单中选择“2：L2”；按

，L2数组中的数据存储到B数组中。(见图20、21)

图20 图21 六．继续数据采集。

1CHEMBIO

2．重复三、四、五的操作步骤，可以依次测定30-35℃、20-25℃、0-5℃下过氧化氢酶催化反应的速率。

实验结果及数据处理：

1MAIN MENU”菜单中选择“7：QUIT”。

2，在“NAMES”菜单中选择“A

，在“NAMES”菜单中选择“1：L1”，A数组中的数据复制到L1数组中。(见图22)

3，在“NAMES”菜单中选择“B

，在“NAMES”菜单中选择“2：L2”，B数组中的数据存储到L2数组中。(见图23)

图22 图23

4，在“OPS”菜单中选择“8：SELECT(”；按，在

“NAMES”菜单中选择“1：L1，在“NAMES”菜单中选

择“2：L2按L1、L2数组中截取出一段。(见图24、25)

图24 图25

5

。(例：见图26、27、28)

举例如下(起点：X =90，Y =19.283；终点：X =390，Y =21.079)

图26 图27

图28

6EDIT”菜单中选择“1：EDIT”，可以看到截取的数据自动替

换了原L1、L2中的数据。按退出。(例：见图29、30)

图29 图30

7CACL”菜单中选择“4：LinReg(ax + b)”；，

在“NAMES”菜单中选择“1：L1，在“NAMES”菜单中选择“2：L2”。此操作将对L1、L2数组中数据进行线性回归。得到线性回归的方程为y = 0.00603x + 18.739，线性回归的相关系数r = 0.999。(例见图31、32、33)