高效液相色谱仪常用检测器的种类及分析
通则0512高效液相色谱法
高效液相色谱法：系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。
超高液相色谱仪：是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
（1）色谱柱反相色谱柱：以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径和长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。
（2）检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
不同液相检测器的区别
不同液相检测器的区别公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]高效液相色谱仪的常用检测器有哪几种，有什么区别高效液相色谱仪常用检测器种类及分析检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet_visibledetector,UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm-800nm)。
它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。
当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
液相色谱检测器原理及应用
Science &Technology Vision科技视界1高效液相色谱仪的结构和原理高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术上,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9′107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测。
高效液相色谱仪主要由色谱泵及控制器、进样器、色谱柱、检测器和数据处理及控制五大部分组成,分离原理是一个物理过程,流动相携带着待分析化合物和其他一些共存物质流过色谱柱,利用不同物质在固定相上的保留时间不同,从而出峰时间不同而达到分离,利用保留时间定性,峰高或者峰面积定量,在将分离后的各个成分依次通过一紫外检测器时就可检测出各化合物的浓度来。
2衡量检测器的指标检测器作为高效液相色谱仪的重要组成部分,直接决定分析的准确度和灵敏度,所以对检测器要有一个充分的认识,这样才能更好的使用仪器,提高工作效率,并且平常需要做相关的维护和保养。
衡量检测器的指标有:灵敏度S =R /Q,R 是检测器响应值的增量,Q 是样品量的增量;噪音,即没有样品时检测器的最大输出信号;漂移,即检测器在一段时间内响应值的变化;线性动态范围,即最大线性相应与最小检出限之比;最小检测限,即样品产生两或三倍于噪音信号时的浓度;信噪比,即S/N。
注意最小检测限不是一个单纯的检测器指标它实际上是评价整个色谱系统的指标,包括了色谱系统在内的综合性指标,信噪比亦如此。
3检测器的分类一般常用的有固定波长紫外检测器、可调波长紫外/可见检测器、可编程紫外/可见检测器、光电二极管矩阵检测器、示差折光检测器、荧光检测器、电化学检测器、电导检测器,其他的还有放射性检测器、质谱检测器、热能检测器、LALLS 检测器、蒸发质量检测器、粘度检测器等。
3.1紫外/可见检测器紫外-可见光检测器是应用最广泛的检测器,遵循的原理是Beer’s Law -BEER 定律,即光能量P0=透过溶剂的光能量,P =透过样品的光能量,光通量(透过率%)T=P/P0,吸光度A =-log(T)=log (P0/P),吸光度=单位吸光度,即A =abc,也就是说样品池(S)中的样品对光产生吸收有信号差,如是可变波长检测器还有分光系统(光栅)同紫外检测器灵敏度有关的因素有信号强度(S)和噪音(N)。
液相检测器
液相检测器1. 简介液相检测器是一种常见的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
该设备利用液态样品与检测剂发生反应或产生物理变化，通过测量参数的变化来确定样品中特定物质的含量或属性。
液相检测器包括多种类型，如色谱检测器、荧光检测器、紫外可见光检测器等，根据需求选择适当的检测器可以提高分析的准确性和敏感性。
2. 色谱检测器色谱检测器是液相检测器中最常用的一种类型，在分离和定量分析中起着关键作用。
色谱检测器根据样品分离后产生的物理或化学信号进行检测和分析。
2.1 UV-Vis 检测器紫外可见光检测器（UV-Vis）是色谱检测中最常见的一种类型。
该检测器利用样品在紫外和可见光区域的吸收特性进行分析。
UV-Vis检测器具有灵敏度高、广泛线性范围和简单操作的优点，适用于大多数溶液样品的分析。
2.2 荧光检测器荧光检测器利用样品在特定波长下吸收光能并发生荧光发射的特性进行分析。
该检测器在灵敏度、选择性和检测限方面具有优势，常用于分析含有荧光标记的样品，如药物、生物分子等。
2.3 电导检测器电导检测器测量样品的电导率来确定溶液的浓度。
该检测器适用于电解质溶液的定量分析，具有高敏感性和稳定性，常用于离子分析、环境监测等领域。
3. 液相检测器的工作原理液相检测器的工作原理根据不同的检测器类型而有所不同。
下面以UV-Vis检测器为例介绍其工作原理：UV-Vis检测器中，光源产生一束连续的紫外或可见光，并通过一组光学透镜和滤光片选择特定波长的光。
这束光通过样品流过的流动池，样品溶液中的化合物吸收部分光能。
检测器中的光电二极管（PDA）或光电倍增管（PMT）接收吸收光并产生电流。
产生的电流与吸收光的强度成正比。
通过测量电流的变化，可以确定样品中特定组分的浓度。
4. 液相检测器的优缺点4.1 优点•高灵敏度：液相检测器可以检测很低浓度的物质，提供准确度和精确度较高的分析结果。
•宽线性范围：液相检测器可以线性响应广泛的浓度范围，使其适用于定量分析。
中药制剂高效液相常见的色谱柱类型及其检测器类型
中药制剂高效液相常见的色谱柱类型及其检测器类型中药制剂高效液相常见的色谱柱类型包括C18、C8、Phenyl、CN、NH2等。
其中C18属于常规的反相色谱柱，适用于大多数化合物的分离；C8柱的分离效果较C18柱略差，但可以用于分离易失活的化合物；Phenyl柱可以增加由于芳香环与反相胶体间的作用而引起的选择性；CN柱比C18柱对亲水性化合物更为灵敏，适合分离极性化合物；NH2柱与CN柱相似，适于极性化合物的分离。
常见的检测器类型包括UV检测器、荧光检测器、电化学检测器和质谱检测器。
UV检测器是常见的检测器类型，根据样品吸收UV光谱特征进行定量或者鉴定；荧光检测器则根据荧光光谱特征进行检测，其对于化合物的灵敏度一般高于UV 检测器；电化学检测器包括阳极和阴极两种类型，可用于检测电化学反应产生的电信号，最常用的电化学检测器是电化学荧光检测器；质谱检测器则可以对化合物的结构进行进一步的确认和鉴定，其灵敏度和选择性都比较高。
仪器分析 高效液相色谱法
第17章HPLC法17.1 内容提要17.1.1 基本概念高效液相色谱法──在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱(GC)的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，使之发展成为高分离速率、高分离效率、高检测灵敏度的高效液相色谱法，易称为现代液相色谱法。
高效液相色谱仪──采用了高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置的液相色谱仪称为高效液相色谱仪。
梯度洗脱──用两种(或多种)不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续的改变流动相的浓度、配比和极性，使样品中各组分能在最佳的分配比下出峰的操作技术。
也称为梯度淋洗。
低压梯度──又称外梯度，特点是先混合后加压。
它是采用在常压下预先按一定的程序将溶剂混合后再用泵输入色谱柱系统，易称为泵前混合。
高压梯度──又称内梯度，特点是先加压后混合。
它有两台高压输液泵、梯度程序器(或计算机及接口板控制)、混合器等部件组成。
两台泵分别将两种极性不同的溶剂输入混合器，经充分混合后进入色谱柱系统，是一种泵后高压混合形式。
柱外效应──由色谱柱以外的因素引起的色谱峰形扩展的效应。
柱外因素常指从进样口到检测器之间，除色谱柱以外的所有死时间，如进样器、连接管、检测器等的死体积，都会导致色谱峰形加宽、柱效下降。
液固吸附色谱法──以固体吸附剂为固定相，吸附剂表面的活性中心具有吸附能力，样品分子被流动相带入柱内，它将与流动相溶剂分子在吸附剂表面发生竞争吸附性。
K值大的强极性组分易被吸附，K值小的弱极性组分难被吸附，样品组分因此被分离。
液液分配色谱法──根据物质在两种互不相溶(或部分互溶)的液体中溶解度的不同，有不同的分配，从而实现分离的方法。
分配系数较大的组分保留值也较大。
正相分配色谱法──流动相极性低而固定相极性高的称为正相分配色谱法。
反相分配色谱法──流动相极性高而固定相极性低的称为反相分配色谱法。
化学键合相──利用化学反应将有机分子键合到载体表面上，形成均一、牢固的单分子薄层而形成的各种性能的固定相。
高效液相色谱仪紫外检测器原理
高效液相色谱仪紫外检测器原理
高效液相色谱仪紫外检测器是一种常用的色谱检测器。
它基于紫外光的吸收特性，对样品进行定量分析。
其原理是：样品在流动相中随着溶液流动进入检测器中，通过紫外灯激发发生吸收，从而测量出样品的吸光度值。
在检测过程中，紫外灯照射流动相，使样品中的化合物吸收紫外光能量，形成一个吸收峰。
然后，检测器通过光电二极管将吸收峰转换成电信号，并经过放大和滤波后，通过计算机处理和分析，得到样品中化合物的浓度。
高效液相色谱仪紫外检测器的检测范围为200-600nm，其中
254nm和280nm是常用的波长。
不同的化合物在不同波长下的吸收峰也不同，因此可以通过选择合适的波长，来检测不同种类的化合物。
另外，紫外检测器的检测灵敏度和线性范围也是影响检测效果的关键因素，通常采用不同波长下的标准溶液，来确定灵敏度和线性范围。
总之，高效液相色谱仪紫外检测器是一种可靠、灵敏、准确的色谱检测器，可以用于快速、准确地检测各种化合物的浓度。
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仪器分析技术w6202-2高效液相谱仪常用检测器的分类及工作原理和应用
高效液相色谱仪常见检测器分类及工作原理和应用
主讲教师：长春职业技术学院 王磊
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检测器的分类 常用检测器的工作原理及应用
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检测器的分类
高效液相色谱仪常用检测器分类及工作原理和应用
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高效液相色谱仪常用的检测器
主要特点
池体积可制作的很小，检测后不破坏杨品， 可用于制备
灵敏度比紫外检测器高，噪音低，线性范围 宽，适用梯度洗脱及制备色谱；紫外吸收大 的溶剂不能做流动相
易受背景荧光、pH和溶剂的影响，适用于痕 量分析
可检测所有物质，不适合微量分析
蒸发光散射检测器 ELSD 纳克级激光计数检测器NQAQ
任何挥发型低于流动想的样品均能 被检测
高效液相色谱仪常见检测器分类及工作原理和应用
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常见检测器的工作原理及应用
荧光检测器的应用
环境中的污染物
– 多环芳烃(PAH)，多酚， 氨基甲酸酯等
食品、饮料 – 食品中的毒素；例如：黄 曲霉毒素
– 染料 – 维生素及衍生氨基酸 生物技术及制药
多环芳烃（PAH）
H3C CH3
CH3
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常见检测器的工作原理及应用
荧光检测原理
原理：发荧光的化合物吸收光使其分子达 到激发态，当其返回到基态时发射光的现象即 荧光。
检测过程：由光源发出的光，经激发光单 色器后，得到所需波长的激发光。经过样品池 被样品吸收，并使其被激发后发射出荧光。再 经选择发射波长的单色器分光后，单一波长的 发射光波被送至检测器进行检测，吸光强度与 激发光强度成正比。
紫外可见吸收检测器
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高效液相色谱仪常用检测器的种类及分析
检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet－visibledetector，UVD)
紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。
其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。
紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。
(1)紫外吸收检测器
紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm～800nm)。
它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。
当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。
局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。
(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)
也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。
它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。
由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据，从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长。
单光束二极管阵列检测器，光源发出的光先通过检测池，透射光由全息光栅色散成多色光，射到阵列元件上，使所有波长的光在接收器上同时被检测。
阵列式接收器上的光信号学的方法快速扫描提取出来，每幅图象仅需要10ms，远远超过色谱流出峰的速度，因此可随峰扫描。
2．荧光检测器(fluorescencedetector，FD) 荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生荧光的化合物。
某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物，再进行荧光检测。
其最小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量分析；一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级，但其线性范围不如紫外检测器宽。
近年来，采用激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比，因而具有很高的灵敏度，在痕量和超痕量分析中得到广泛应用。
3.示差折光检测器(differentialrefractiveIndexdetector，RID)
示差折光检测器是一种浓度型通用检测器，对所有溶质都有响应，某些不能用选择性检测器检测的组分，如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等，可用示差检测器检测。
示差检测器是基于连续测定样品流路和参比流路之间折射率的变化来测定样品含量的。
光从一种介质进入另一种介质时，由于两种物质的折射率不同就会产生折射。
只要样品组分与流动相的折光指数不同，就可被检测，二者相差愈大，灵敏度愈高，在一定浓度范围内检测器的输出与溶质浓度成正比。
4.电化学检测器(elec)chemicaldetector，ED)
电化学检测器主要有安培、极谱、库仑、电位、电导等检测器，属选择性检测器，可检测具有电活性的化合物。
目前它已在各种无机和有机阴阳离子、生物组织和体液的代谢物、食品添加剂、环境污染物、生化制品、农药及医药等的测定中获得了广泛的应用。
其中，电导检测器在离子色谱中应用最多。
电化学检测器的优点是：
①灵敏度高，最小检测量～般为ng级，有目可达pg级；
②选择性好，可测定大量非电活性物质中极痕量的电活性物质；
③线性范围宽，一般为4～5个数量级；
④设备简单，成本较低；
⑤易于自动操作。
5.化学发光检测器(c。
iluminescencedetector，CD) 化学发光检测器是近年来发展起来的一种快速、灵敏的新型检测器，因其设备简单、价廉、线性范围宽等优点。
其原理是基于某些物质在常温下进行化学反应，生成处于激发态势反应中间体或反应产物，当它们从激发态返回基态时，就发射出光子。
由于物质激发态的能量是来自化学反应，故叫作化学发光。
当分离组分从色谱柱中洗脱出来后，立即与适当的化学发光试剂混合，引起化学反应，导致发光物质产生辐射，其光强度与该物质的浓度成正比。
这种检测器不需要光源，也不需要复杂的光学系统，只要有恒流泵，将化学发光试剂以一定的流速泵入混合器中，使之与柱流出物迅
速而又均匀地混合产生化学发光，通过光电倍增管将光信号变成电信号，就可进行检测。
这种检测器的最小检出量可达10-12g。
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