果蝇唾腺染色体的制片与观察
果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告
果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告果蝇唾腺染色体标本的制备与观察实验报告一、实验原理双翅目昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体。
这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约400um，相当于普通染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色体。
唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。
并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体。
多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。
各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心；横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列。
唾腺染色体广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。
二、实验材料果蝇的三龄幼虫三、实验器材双目解剖镜，生物显微镜，解剖针，载玻片，盖玻片，滤纸条，废物缸，托盘等。
四、实验试剂生理盐水，盐酸，蒸馏水，改良苯酚品红染色液等。
五、实验步骤1.剥离唾腺：在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。
每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。
由于果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。
剔除脂肪体并弃除无关物质。
2.解离：加一滴45%乙酸溶液于腺体上，作用5-7s。
用滤纸吸干溶液。
在唾腺组织上滴一滴1mol/lLHCl，解离30-40s，以松软组织，利于染色体的分散。
3.吸去 HCl，用水冲洗2-3次.4.染色：滴加改良苯酚品红染液染色30min,染色时间不可过长，否则背景也着色。
果蝇唾腺染色体的制备与观察
实验方法
把载玻片置于解剖镜下。载玻片上滴水一滴， 取三龄幼虫放在其中，操作者两手各握一枚解 剖针，左手的解剖针压住幼虫后端１/３处， 固定幼虫。右手解剖针按住幼虫头部，用力向 右拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出，唾 腺是一对透明的棒状腺体
在载玻片上除去幼虫其他组织部分，还要把 唾腺周围的白色脂肪剥离干净，再滴上改良 苯酚品红染色。
4.横纹结构：每条染色体的染色线在不同的 区段螺旋化程度不一，出现一系列宽窄不 同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。
5.Puff结构：幼虫 的不同发育期，浓 缩的染色质纤维会 成群解旋、松开， 形成泡状松散结构， 这种泡状结构称 Puff结构，亦称染 色体的疏松。
三、实验用品
实验材料 果蝇的三龄幼虫 用品 解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、 盖玻片、吸水纸等
������
普通果蝇（2n=8）唾腺染色体的形态：各染色体 着丝点附近异染色质区相互结合形成染色很深的 染色中心，第Ⅱ、Ⅲ对染色体呈Ｖ形（中着丝 粒），各有两臂，Ｘ染色体呈棒状，第Ⅳ对染色 体呈粒状，观察时可见五条臂由染色中心向外蜿 蜒伸展。
果蝇唾腺染色体的特点：
1.巨大染色体：这种染色体比普通染色体大 得多，宽约5μm，长约400μm，相当于普通 染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色 体。
果蝇唾腺染色体的制 备与观察
一、实验目的
练习取出果蝇幼虫唾腺的技术和制作唾腺 染色体标本的方法；������
了解体细胞染色体联会现象，观察果蝇唾 腺染色体的形态特征，并根据唾腺染色体 上横纹的形态和排列，识别不同的染色体 识别染色体结构变异的细胞学表现。 练习绘制多线染色体图Βιβλιοθήκη 二、实验原理
果蝇唾液腺染色体的制片与观察
果蝇唾液腺染⾊体的制⽚与观察果蝇唾液腺染⾊体的制⽚与观察121140083 朱琪璋⼀实验⽬的1观察果蝇的唾腺染⾊体，练习果蝇幼⾍唾腺分离技术及唾腺染⾊体的制⽚⽅法2观察了解果蝇唾液腺染⾊体的形态特征3了解果蝇唾腺染⾊体在遗传学研究中的意义⼆实验原理（预备知识）1果蝇唾液染⾊体的介绍果蝇、摇蚊幼⾍唾液腺细胞中的巨⼤染⾊体。
双翅⽬昆⾍的唾液腺细胞发育到⼀定阶段之后就不再进⾏有丝分裂，⽽永久停留在分裂间期。
但随着幼⾍的⽣长，唾液腺染⾊体仍不断地进⾏⾃我复制⽽且不分开，经过许多次的复制形成约 1 000—4 000拷贝的染⾊体丝，合起来直径达5µm，长度达400µm，⽐普通细胞中期染⾊体约⼤100～150倍，所以⼜称为多线染⾊体或巨⼤染⾊体。
唾液腺染⾊体的另⼀特点是体细胞中同源染⾊体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。
在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋⽩纤维丝唾液腺染⾊体是⼀类存在于双翅⽬昆⾍，如果结合在⼀起，紧密盘绕。
所以细胞中染⾊体只呈单倍数。
⿊腹果蝇的染⾊体数⽬2n=8其中第Ⅱ、第Ⅲ染⾊体为中部着丝粒染⾊体，第Ⅳ染⾊体和第IX染⾊体为端着丝粒染⾊体。
唾液腺染⾊体形成时，染⾊体着丝粒和近着丝粒的异染⾊质区聚于⼀起形成⼀个染⾊中⼼，所以在光学显微镜下可见从染⾊中⼼处伸出6条配对的染⾊体臂，其中5条为长臂，l条为紧靠染⾊中⼼的很短的臂。
唾液腺染⾊体经染⾊后，呈现深浅不同，疏密各异的横纹。
这些横纹的数⽬，位置，宽窄及排列顺序都具有物种的特异性。
研究认为这些横纹与染⾊体的基因是有⼀定关系的。
通过⼀定的实验⽅法使果蝇唾液腺染⾊体各臂分散开，并且使带纹、膨突等特征不受杂质影响清晰地显⽰出来，是进⾏果蝇遗传学研究的很重要的⼀个环节．果蝇唾液腺染⾊体在不同种间的共同点是染⾊体的着丝点位于⼀个染⾊区域，但不同的种类往往其染⾊体臂数⽬不同．每条染⾊体臂上分布着染⾊深浅不同、粗细各异的磺纹，这些横纹的宽窄疏密程度以及排列顺序和数⽬⼜都有种的特异性和种内的差异．由此，果蝇唾液腺染⾊体近⼏⼗年来，已⼴泛⽤于种内系统发⽣和种间亲缘关系的研究中，因为种间及种内不同品系和近缘种中的遗传差异经常反映在唾液腺染⾊体的不联会、形成泡、缢虞和间带区的伸缩性以及顶体的形态等多⽅⾯的差异，⽽特别重要的是研究它的基因序列的差异(观察是否产⽣了例位以及染⾊体的断裂、融合和重排)。
果蝇唾腺染色体的制片与观察
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第1页
一、试验目标
1.了解唾腺CS特点 2. 学习分离唾腺技术 3. 掌握唾腺CS制片方法
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第2页
二、试验原理
• 永久间期CS • 复制而不分开 与观察
第3页
果蝇唾腺染色体特点：
• 剥离唾腺置载片中央,加一滴HCl,解离23
• 吸去HCl,冲洗23次,吸干;加1d染液,染色5
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第18页
4. 压片及观察
• 载片置平整处,加盖 片,轻敲;压片
• 低倍至高倍镜检
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第19页
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第20页
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第21页
五、注意事项
1. 水不可太多,不然幼虫会漂浮而且活跃 2. 一定加生理盐水,不然唾腺易干 3. 将脂肪组织去除洁净 4. 吸水时勿将唾腺一起吸走 5. 染色时间不可过长,不然背景也着色 6. 压片时要揉,用力要均匀
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第22页
六、作业
1. 制效果很好唾腺CS暂时片1-2张 2. 真实绘制观察到唾腺CS绘图 3. 思索题P66 1-2
4.Puff结构：幼虫不一样发育期，浓缩染色质纤维会成群解 旋、松开，形成泡状涣散结构，使对应基因得以表示，这 种泡状结构称Puff结构，亦称染色体疏松。
果蝇唾腺染色体的制片与观察
第7页
三、试验材料、器具、药品试剂
• 大果蝇(D. virilis)活体三龄幼虫 • 解剖镜,显微镜,培养箱;培养瓶,
1.巨大染色体：这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um， 长约400um，相当于普通染色体100—150倍，因而又称为巨 大染色体。
果蝇唾腺染色体标本的制备和观察
果蝇唾腺染色体标本的制备和观察摘要本实验通过用黑腹果蝇的三龄幼虫的唾腺，来观察果蝇的唾腺染色体。
目的在于学会辨认果蝇的唾腺的特征和识别各条不同的染色体以及掌握其基本的特征。
了解唾腺染色体的作用和意义。
１．引言果绳唾睬染色休为多线染色休,形成原因是由于染色休不断复制,但细胞不分裂从而形成了多线染色休,其上每一横纹相当于一个顺反子,横纹的形态特征有着种的特异性和稳定性。
因此果蝇唾睬染色休成为了研究染色休结构、基因定位、基因功能的重要实验材料。
1881年Ba}biani首次在摇蚊幼虫的唾腺细胞中发现多线染色体.20世纪30年代Painter首先用果蝇唾腺体作为遗传学数据在细胞学上的验证材料,他研究了多线染色体上的横纹跟基因的关联性以及染色体的物种特异性。
Bridges也对果蝇唾腺体进行了广泛详细的研究,制成一系列与已有的基因连锁图相对应的果蝇细胞学图。
２．实验材料和方法２．１实验材料受精的雌果蝇、盖玻片和载玻片、镊子、解剖针解剖镜和显微镜、醋酸地衣红染液、指甲油生理盐水、香柏油、镜头纸。
２．２实验方法２．２．１实验材料的获取和处理（1）三龄幼虫的培养：取20-30只受精的雌果蝇于培养基中，在22摄氏度的恒温冰箱中饲养7天得到肥大的果蝇三龄幼虫。
（2）唾腺的剥取和制片：取果蝇三龄幼虫于一滴加了生理盐水的载玻片上，用两根解剖针，一根扎住口器，一根扎住体前1/3处像两端拉唾腺腺体随之而出。
唾腺是一对透明的茄子状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）在腺体的前端各延伸出一细管汇合在一起与口器相连，相对于其他组织唾腺最为透明因此在黑色背景下其他组织呈白色,而唾腺是半透明的,辨别时应在明亮的光源下进行，果蝇的唾腺细胞很大，在解剖镜下可以看见其轮廓。
幼虫被拉断时唾腺也可能随之被拉出,也可能仍连在口器上,这时可用解剖针轻轻将其挤压出来。
拉出的腺体有可能仍为完整的左右对称的长茄状囊体,也可能分开、断裂。
去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察
果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察一.实验目的通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。
二.实验原理唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。
果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。
由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。
三.实验用品1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI四.实验方法和步骤1. 幼虫的培养为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。
在实验中，人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。
A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。
B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。
果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。
在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。
实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。
2. 剖取唾腺用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。
将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。
首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。
解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。
在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。
果蝇唾液腺染色体制片与观察
同源染色体的两条臂紧密结合，自由伸展。因 此唾液腺细胞染色体数看不出2n的染色体数， 只能观察到从染色中心向空间伸展的染色体臂。 与其它细胞染色体相比的另一个特点是，唾液 腺染色体上有深浅不同、宽窄不一的带纹，这 些带纹的数目和位置是恒定的，代表着种的特 征和一些基因的位置。
由于这些带纹的存在，染色体上发生缺失、重 复、倒位、易位等很容易在唾液腺染色体上识 别出来。
三、实验材料
野生果蝇
四、实验步骤
1、剥离果蝇幼虫的唾液腺
取一洁净的载玻片，滴上1滴0.75%生理盐水。在瓶壁 上挑选肥大的充分发育的三龄幼虫放在的生理盐水中，唾 液腺位于幼虫食道的两侧，长度约占身体总长的1/3—— 1/4左右。
解剖时把载玻片放在解剖镜或放大镜下,一手用解剖针压住头部 (外型似一个黑色小点)，压住的地方越小越好，同时，用镊子夹住幼 虫身体1/2处， 轻轻地将幼虫的头部自身体拉开。唾液腺随同内脏一 起拉出。如果头部拉断,腺体没有拉出,可以用解剖针从镊子附近的腹 部缓缓地向头端挤压,也可压出唾液腺。然后在镜下细心分离，理出双 叉形半透明的囊状腺体即为唾液腺，在生理盐水中无论怎样触动它都 不会发生形状改变。
在显微镜下观察，由单层细胞构成，细胞形状不规则，细胞轮廓 清晰，细胞大，细胞核也大，甚至可以看清细胞核是由染色体卷缩在 一起形成的。唾液腺拉出后，剔除腺体周围乳白色的脂肪组织和身体 的残留部分，只留唾液腺在载玻片上。
2、解离 用滤纸条吸净唾液腺周围的其它物质，然后将唾 液腺放入1N HCl，解离2—3分钟，以松软组织利于 细胞破裂，使染色体散开。 3、水洗 解离后的唾液腺用蒸馏水洗3—4次（或0.4%的 生理盐水），水洗时要注意不要把唾液腺弄丢，水洗 要彻底，目的是洗去盐酸，以免影响染色效果。另外 水洗过程也是细胞低渗过程，使唾液腺细胞膨胀。
果蝇唾腺染色体标本的制备与观察
果蝇唾腺染色体标本的制备与观察摘要本次实验以果蝇三龄幼虫唾腺为实验材料，为掌握果蝇三龄幼虫唾腺的剖离技术、掌握唾腺染色体标本的制备方法，并且为对唾腺染色体的形态结构特征进行了观察研究。
实验过程中取果蝇三龄幼虫唾腺进行装片制作，并且于显微镜下观察。
由于在幼虫消化道或消化腺中存在大体积的多线染色体，并且腺体易剥离，故为实验材料。
理想状况下应为唾腺染色体从染色体中心向四周放射状地伸出5长1短的6条臂，但是在实际操作中很难实现分散均匀。
所以实验最终得到的染色体多为臂与臂相互纠缠重叠或未伸展完全，除染色中心，可较容易观察到横纹结构。
1.引言染色体（Chromosome）由脱氧核糖核酸、蛋白质和少量核糖核酸组成的线状或棒状物，是生物主要遗传物质的载体。
因是细胞中可被碱性染料着色的物质，故名。
其形态和数目具有种系的特性，在细胞间期核中，以染色质丝形式存在，在细胞分裂时，染色质丝经过螺旋化、折叠、包装成为染色体，为显微镜下可见的具有不同形状的小体。
染色体的发现历程：早在1883年，鲁克斯（W·Roux）就观察到细胞核内能被染色的丝状体。
1888年，德国人沃尔德耶（W·Waldeyer）称这种丝状体为“染色体”（英语：chromosome；希腊语：chroma=颜色，soma=体），意即可染色的小体，并猜测染色体与遗传有关。
1902年，博韦里（T·Boveri）和萨顿（W·S·Sutton）指出，染色体在细胞分裂中的行为与孟德尔的遗传因子平行：两者在体细胞中都成对存在，而在生殖细胞中则是成单的；成对的染色体或遗传因子在细胞减数分裂时彼此分离，进入不同的子细胞中，不同对的染色体或遗传因子可以自由组合。
因而，博韦里和萨顿认为，染色体很可能是遗传因子的载体。
染色体研究通常面临两个困难：一是染色体很小，二是除极少数动植物，如玉米粗线期的染色体上具有染色粒这样的结构可以作为识别或定位的标志外，大多数生物的染色体都没有标志，由此提出了多线染色体的概念。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
果蝇唾腺染色体的制片与观察
一、实验目的
1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法；
2、观察果蝇的唾腺染色体。
二、实验原理
1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨型
染色体。
唾腺染色体的显著特征是：
（1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍；
（2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体；
（3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。
唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。
横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。
横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记；
（4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。
唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani环。
一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。
许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。
果蝇唾液腺：
2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，构
成一个永久间期系统。
唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染色
体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，多则可达2的10次方至15次方次复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧地排列形成一大束宽而长的带状物，称为多线染色体。
由于细胞分裂停止在间期，核物质螺旋化程度低而充分伸展，这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约2000um，是其体细胞中期染色体长度的100—200倍。
伸展形式的DNA长度约为40000um，只需简单的染色和压片，就可以很容易地在光学显微镜下观察到。
唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。
并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。
在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的界旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼环，其富含转录出来的RNA ，因此不着色，是基因活动的区域。
在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼环在染色体上出现的部位不同，因此可以研究基因的表达，开展各种染色体变异的研究等等。
果蝇共有4对染色体。
其中一对为性染色体（XY或XX），XX染色体为顶端着丝粒染色体，呈杆状，Y染色体为“J”形；第二对、第三对染色体均为中央着丝粒染色体，呈“V”形；第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色体，呈点状，附在染色盘边缘。
由于唾腺染色体的假联会，X染色体的一端在异染中心上，另一端游离；而第二对、第三对染色体着丝粒在中央，可以从异染中心呈“V”字形向外伸展出四条臂（2L、2R、3L、3R），Y染色体着丝粒附近的异染色质参与了染色中心的形成，所以理想的片子，不管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂（X、2L、2R、3L、3R)和一条短臂（第四条染色体臂不易观察）。
雄果蝇唾腺细胞中的X染色体臂比雌果蝇的稍细。
在染色体臂上可观察到许多明暗相间的带。
三、材料与器材
实验仪器：解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸等实验材料：果蝇三龄幼虫、醋酸洋红、生理盐水、1M盐酸等
四、方法与步骤
1、幼虫培养：置于16-18℃下饲养，当幼虫爬上瓶壁准备化蛹前，即为三龄幼
虫，此时虫体肥大，便于解剖，是制备唾腺染色体的最理想时期；
2、幼虫解剖：将载玻片置于解剖镜下，滴一滴生理盐水。
将幼虫置于生理盐水
内，一手持解剖针按住幼虫前端的1/3处，固定幼虫。
另一手持针揿住幼虫头部正中，用力向前拉，把头部从身体拉开，腺体即随之而出：
唾腺为半透明小囊状，其上附有脂肪带，食道两侧各一个。
找到唾腺后尽可能把腺体上的脂肪剔除；
3、染色前处理：清除脂肪体等残体，使载片上只留下唾腺；
4、酸解：把腺体放入1N HCl中浸泡2-3分钟，水洗3次；
5、染色：滴上几滴醋酸洋红于唾腺上，染色30分钟；
6、压片：在载片上加盖玻片，盖片上覆盖一吸水纸，然后以拇指适当用力压片，
要求将唾腺细胞核压破，染色体伸展开来而不破碎为好；
7、显微镜观察：压好的玻片标本，用显微镜观察四对染色体。
五、实验结果
染色中心
染色中心
可观察到5条长臂（压片时局部用力过大导致臂部分断裂）：染色体十分巨大，每条臂的横纹有深浅、数目、疏密的不同，各个染色体中异染色质多的着丝粒部分相互靠拢形成颜色较深的染色中心。
六、实验讨论
制片时操作要点：
1、本次制片一份染色较浅，但尚可观察到横纹，臂伸展开但由于局部用力过
大导致臂部分断裂，而另一份伸展不够，所以，好的装片染色适中，压片时用力均匀适中，使五条臂充分展开而不断裂；
2、一定要加生理盐水，否则唾液腺容易干，影响其正常形态，进而影响观察。
但生理盐水不可加太多，否则幼虫会漂浮而且活跃。
如水多了，小心吸水，在剥离唾腺前吸走些，唾腺剥离后勿吸水，以防将唾腺一起吸走。
；
3、避免将幼虫肠道扯出，否则不易找到唾液腺；
4、将脂肪组织清除干净，若脂肪真的很难去除，则可用解剖针截取一部分没
有脂肪的唾液腺细胞，不必一定要完整的唾液腺；
5、水洗盐酸时，要洗净，否则不易染色；
6、染色液勿过多，否则压片时唾腺易随染色液漂走。
如染色时间到后，染色
液已干，应再少加些染色液，再盖上盖波片，避免气泡产生；
7、染色时间不要太长，否则背景会着色，影响观察效果；
8、用吸水纸吸取液体时，注意不要将唾液腺吸到吸水纸上。
实验中，可倾斜
载玻片，让载玻片上的液体慢慢流下，而唾液腺粘在载玻片上游，用吸水纸在下游轻轻吸取溶液。
向唾液腺组织滴加染液或蒸馏水时，若滴管口距离载玻片太近，滴下液体时，由于水的表面张力作用，唾液腺会被水带到滴管口上，可将滴管口离载玻片稍远一些，不至于将唾液腺吸走，也不至于液滴滴下时将唾液腺溅走；
9、压片时轻敲，使染色体分散，垂直用力，并用力均匀，不可使盖玻片滑动，
否则易破坏细胞及细胞核结构；
10、本次实验有一定难度，但是孰能生巧；操作多次之后比较熟练，掌握制
片的技巧，获得较为理想的标本。