核酸扩增检测实验室设计及工作流程
标准的PCR实验室建设方案
标准的PCR实验室建立方案一、主体构造主体为彩钢板、铝合金型材。
室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。
构造结实，线条简明，美观大方，密封性好。
二、标准的三区分隔和气压调节将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区。
整个区域有一个整体缓冲走廊。
每个独立实验区设置有缓冲区，同时各区通过气压调节，使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可翻开缓冲区Ⅰ，缓冲区Ⅱ和 PCR 扩增区的排风扇往外排气，在实验区的外墙上和各扇门上都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。
三、消毒在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区还设置挪动紫外线灯，对实验桌进展部分消毒。
四、机械连锁不锈钢传递窗试剂和标本通过机械连锁不锈钢〔不建议使用电子连锁方式〕传递窗传递，保证试剂和标本在传递过程中不受污染〔人物分流〕。
五、地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面，整体性好。
便于进展清扫，耐腐蚀。
没有条件的也可采用水磨石地面，或大块的瓷砖〔至少800mm×800mm〕接缝需要小于2mm。
六、照明灯具要选用净化灯具，能到达便于清洗、不积尘的特点。
在建立的过程中应注意：〔1〕标准的安装流程和全面的效劳流程。
〔2〕严格按照标准科学设计的安装流程。
〔3〕安装前需要确定以下安装条件，如：电电压，电进线位置，网络线进线位置，进水水压，最小安装空间，地面平整度，通风孔、进水管和下水管的位置等，理想状态的空间尺寸和通风口尺寸。
简介：介绍了什么叫做基因扩增实验室以及基因扩增实验室是如何保证实验结果的平安性和可靠性的。
并从平面布置、通风空调系统设计、污染的预防与控制几个方面讨论了基因扩增实验室设计的主要特点和应注意的问题。
关键字：基因扩增基因扩增实验室相关站中站：干净实验室/生物实验室1 概述临床基因扩增实验又称PCR实验，是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。
临床基因扩增检验实验室提交资料注意事项及备案流程
临床基因扩增检验实验室提交资料注意事项及备案流
程
一、实验室所在区域总平图应包括周边环境、大通道。
，图纸应按比例缩放。
二、流程布局
1.明确设备类型。
2.实验室内的分区、通道。
3.各功能间尺寸、面积。
三、空气流向。
四、污水、污物、废弃处置。
五、职业防护。
六、撰写卫生专篇，对项目进行描述。
七、新改扩建应符合《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院令第424号）、《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医政发〔2010〕194号）《新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）》（国卫办科教函〔2020〕70号）等要求。
八、临床基因扩增审核申请备案程序:申请临床基因扩增（新冠核酸检测）审核申请备案的实验室必须是已经备案的二级及以上的生物实验室，由实验室所在县（区）卫生健康行政部门组织相关部门进行初审，初审合格后报市卫生健康委备案。
核酸实验室操作步骤流程
核酸实验室操作步骤流程
核酸实验室是进行核酸提取、扩增和检测的重要场所，其操作
步骤流程严谨而复杂。
下面将详细介绍核酸实验室的操作步骤流程。
首先，进行核酸提取。
提取核酸是核酸实验室的第一步，通常
使用化学方法或者机械方法进行。
在进行核酸提取时，需要注意保
持实验室的清洁和无菌环境，避免外源DNA的污染。
提取核酸的样
本可以是血液、组织、唾液等。
接着，进行核酸扩增。
核酸扩增是为了增加核酸的数量，以便
进行后续的检测和分析。
常用的核酸扩增方法有PCR、RT-PCR等。
在进行核酸扩增时，需要准备好扩增试剂盒、引物、模板DNA等材料，并按照扩增方案进行操作。
然后，进行核酸检测。
核酸检测是为了确定核酸的序列和浓度，通常使用凝胶电泳、实时荧光PCR等方法进行。
在进行核酸检测时，需要注意实验条件的控制和结果的准确性，避免假阳性或假阴性结
果的出现。
最后，进行数据分析和结果解读。
在核酸实验室中，数据分析
和结果解读是至关重要的环节，需要对实验结果进行统计分析和生
物信息学分析，以确定实验的可靠性和结果的可信度。
同时，还需
要根据实验结果进行结果解读，判断实验是否成功并得出相应的结
论。
总的来说，核酸实验室的操作步骤流程包括核酸提取、核酸扩增、核酸检测、数据分析和结果解读等环节，每个环节都需要严格按照操作规程进行操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。
核酸实验室的操作步骤流程复杂而繁琐，需要实验人员具备扎实的实验技能和严谨的实验态度，以保证实验的成功进行和结果的可靠性。
PCR实验检测标准操作规范
PCR检测实验室操作规范一、PCR 实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染,保证检测结果的可靠性。
2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等.3．负责人：4．细则:4．1流感实验室为急传所的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等. 4．2 本实验室采用实时荧光定量（定性）PCR 技术作为病毒基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区)、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识.标本的接收则在检验科标本接收处进行.4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用. 4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP 文件。
4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。
4．6 非本实验室工作人员,未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
二、PCR 实验室工作制度1．目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。
2．适用范围：所有本实验室人员。
3．负责人:4．细则：4．1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作。
4．2 各区的用品不得混用。
4．3 在各区的实验操作过程中,操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程.4．4 试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP 文件)。
4．5 标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA 时cDNA 的合成（见相关SOP 文件）。
PCR实验室
建立PCR实验室的基本条件临床基因扩增实验室采用PCR技术用于临床基因诊断，由于PCR技术对所检测的核酸模板进行大量扩增，容易出现实验室污染导致临床检测标本假阳性结果；另外由于PCR技术要求高、影响因素多（特别是RNA标本），实验过程处理不当易导致核酸模板无扩增现象，导致临床标本假阴性结果。
因此临床基因扩增检验实验室技术验收和规范化管理是PCR 技术本身需要，也是在临床上顺利应用该技术前提。
二、PCR实验室验收准备工作（一）硬件准备——实验室基本建设1.根据文件要求，临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区；标本制备区；扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区，如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。
2.各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。
3.进入各工作区域必须严格按照单一流向进行，即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
4.不同的工作区域使用不同的工作服（不同的颜色）。
工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。
5.工作区域仪器设备配置标准⏹试剂贮存和准备区2～8℃和-15℃冰箱：混匀器；微量加样器（覆盖1～1000μl）；移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。
⏹标本制备区2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器（覆盖1～1000μl）；可移动紫外灯（近工作台面）；超净工作台，消耗品；一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。
⏹扩增反应混合物配制和扩增区核酸扩增仪；微量加样器（覆盖1～1000μl）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。
医院PCR实验室设计规划方案
随着人类基因组计划的实施及今后基因技术的不断发展，医学及医学生物学将迎来新的一轮革命。
未来医学的发展将更多的倾向份子生物学。
PCR 实验又叫基因扩增实验，这是一种份子生物学技术，用于放大特定的DNA 片段，可看做生物体外的特殊 DNA 复制的专业实验；通过 DNA 基因追踪系统，能迅速掌握患者体内的病毒含量，其精确度高达纳米级别。
PCR 实验是目前国际国内上专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等众多病毒感染性疾病的一种先进可靠的份子生物学检测手段；它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，检测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。
由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，因此被临床医生广为认可，已广泛应用于医院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。
随着 PCR 技术迅猛发展,强大的实用性,我们可以预见不久的将来,PCR 技术将有更高的突破,PCR 实验室在医疗临床诊断和禽疫病诊断中将发挥更大的作用。
1.2.1 PCR 实验室可开展检测项目众多，有巨大市场经济效益；➢可开展的项目有 HBV、HCV、HAV、HDV、HEV、目前新冠核酸检测、 TB 荧光定量 PCR 检测项目，可应用于检测是否感染和指导临床用药； UU、沙眼衣原体、淋球菌、 HPV16/18 亚型、 HPV6/11 亚型荧光定量 PCR 检测，可检测是否感染； HBV YMDD 荧光定量 PCR 检测可应用于检测HBV 病毒突变情况和指导临床用药； HBV P 区耐药基因测序也可应用于指导临床用药等医疗临床诊断；➢焦磷酸测序可开展项目有 HBV 分型， HBV 变异及耐药性检测，可应用于微生物(细菌、病毒、真菌、酵母菌及霉菌)鉴定，分型，耐药性评估；同时还可开展分支杆菌鉴定及结核病用药指导基因检测、微生物耐药基因测定、家族型乳腺癌基因突变测定、多发性内分泌腺瘤RET 基因突变检测及地中海贫血基因突变检测项目，可应用于基因突变及禽疫病诊断。
3 医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法 及医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法发布部门：卫生部发布文号：卫办医政发[2010］194号第一章总则第一条为规范医疗机构临床基因扩增检验实验室管理，保障临床基因扩增检验质量和实验室生物安全，保证临床诊断和治疗科学性、合理性,根据《医疗机构管理条例》、《医疗机构临床实验室管理办法》和《医疗技术临床应用管理办法》，制定本办法.第二条临床基因扩增检验实验室是指通过扩增检测特定的dna或rna，进行疾病诊断、治疗监测和预后判定等的实验室，医疗机构应当集中设置，统一管理.第三条本办法适用于开展临床基因扩增检验技术的医疗机构。
第四条卫生部负责全国医疗机构临床基因扩增检验实验室的监督管理工作。
各省级卫生行政部门负责所辖行政区域内医疗机构临床基因扩增检验实验室的监督管理工作.第五条以科研为目的的基因扩增检验项目不得向临床出具检验报告，不得向患者收取任何费用。
第二章实验室审核和设置第六条医疗机构向省级卫生行政部门提出临床基因扩增检验实验室设置申请，并提交以下材料：《责验收行政部门执业许可证》（一）《医疗机构执业许可证》复印件;（二）医疗机构基本情况，拟设置的临床基因扩增检验实验室平面图以及拟开展的检验项目、实验设备、设施条件和有关技术人员资料;（三）对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增检验实验室运行的预测分析.第七条省级临床检验中心或省级卫生行政部门指定的其他机构（以下简称省级卫生行政部门指定机构）负责组织医疗机构临床基因扩增检验实验室的技术审核工作。
第八条省级临床检验中心或省级卫生行政部门指定机构应当制订医疗机构临床基因扩增检验实验室技术审核办法，组建各相关专业专家库，按照《医疗机构临床基因扩增检验工作导则》对医疗机构进行技术审核。
技术审核办法报请省级卫生行政部门同意后实施。
第九条医疗机构通过省级临床检验中心或省级卫生行政部门指定机构组织的技术审核的，凭技术审核报告至省级卫生行政部门进行相应诊疗科目项下的检验项目登记备案。
核酸扩增检测实验室设计及工作流程
核酸扩增检测实验室设计及工作流程一、核酸扩增检测实验室设计1. 实验室空间布局设计核酸扩增检测实验室空间布局应根据实验室操作流程设计，尽量使实验室布局合理、流畅。
一般实验室需要分为准备区、处理区、分析区和储存区四个区域。
（1）准备区：放置进出实验室所需的物品、试剂、耗材等。
（2）处理区：扩增、提取、检测等样品处理操作区域。
该区域需配置相应的消毒设备和抽风设备，并考虑操作人员的人流量，确保操作空间充足。
（3）分析区：PCR扩增、电泳分析等实验操作区域。
该区域需要保持相对干净和静电消除，重要仪器和设备应单独放置。
（4）储存区：将操作过的样品、耗材和试剂分类存放，且应配置低温、恒温、干燥等设备，以确保长期保存。
2. 实验室环境要求核酸扩增检测实验室的环境应符合以下要求：（1）室内温度：18~28℃。
（2）相对湿度：40%~60%。
（3）装修材料：实验室室内装修材料应为易清洁、防腐蚀材料。
（4）光照：实验室应配备恒光可调光源；（5）洁净度：除配置洁净工作台外，实验室墙、地面和物品表面均需定期消毒。
3. 实验室设备及器具要求（1）洁净工作台：核酸扩增实验涉及到高度灵敏的样品处理和PCR扩增，容易引入异物和污染物，必须配置洁净工作台。
（2）PCR仪：PCR仪是核酸扩增检测的核心仪器，具有高温度精度和均匀性，能精确控制温度变化，使PCR反应体系在恒定的温度下进行扩增。
（3）显微镜：核酸扩增检测的结果常常需要用到显微镜，观察PCR扩增产物的大小、形态、颜色等。
（4）离心机：用于离心样品沉淀，制备溶液和样品混合等。
（5）电泳仪：电泳仪用于检测PCR扩增产物，并可用于结合染色方法，对扩增产物进行定性、定量和分析。
二、核酸扩增检测实验室工作流程1. 样品获取和处理根据样品种类，样品获取后需进行不同处理。
如环境样品需要加入缓冲液，以及粉尘、沙尘、胶片、坦克等样品需要分解。
2. DNA/RNA提取将样品经过离心后，取沉淀样品，加入DNA/RNA提取试剂，进行蛋白酶处理和洗脱DNA/RNA等处理步骤，以提取出样本中的DNA/RNA。
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理想的核酸扩增实验室设计A
产物分析区
扩增区
标本制备区 试剂准备区
空气流向
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
专用走廊
工作流向
理想的核酸扩增实验室设计B
产物分析区
扩增区
空气流向
空气流向 缓冲间
专用走廊
标本制备区
试剂准备区
空气流向 缓冲间
空气流向 缓冲间
工作流向
核酸扩增检测实验室设计的一般原则
如果在标本接收区分离血清（浆）标本，有1 台分离血清（浆）用离心机、1台生物安全柜、 1台冰箱、加样器及相应一次性经高压处理的 消耗品如带滤芯吸头、标本接收编号记录本以 及记号笔等即可。
如果不在标本接收区分离血清（浆）标本，只 是简单的接收，则就不需要分离血清（浆）用 离心机、生物安全柜、加样器及其消耗品。
（3）应在标本制备区、扩增及产物分析区等相对有可能 出现“污染物”的区域安装排风扇或其它排风和有效的装置， 以使空气按试剂准备区标本制备区扩增（及产物分析） 区方向流动。
核酸扩增实验室的工作流程
试剂准备区 标本制备区 扩增区及扩增产物分析区
试剂准备区
核酸扩增实验室中最为“洁净”的区域，不应有任何核酸 的存在，包括试剂中所带的标准品和阳性对照。
核酸扩增检测实验室的设计
依据：卫生部颁发的《临床基因扩 增检验实验室管理暂行办法》（卫 医发[2002]10号）
血液标本的应在四个测定区域之外的地方或区域内接 收
接收的标本应收集在原始容器中 在核酸提取时带入至标本制备区
标本的接收区的仪器设备要求
扩增及产物分析区
热循环仪的电源应专用，并配备一个 不间断电源（UPS）或稳压电源。
每次扩增后，可使用可移动紫外灯对 扩增热循环仪进行照射。
扩增仪应定期进行校准。
核酸扩增实验室最有效的防“污染”措施
实验室的“通风” 次氯酸钠溶液的使用 1mol/L HCl溶液的使用 紫外照射 无水乙醇溶液？
无“基因”或“核酸”概念的重要性
符合基本要求的核酸扩增检测实验室的条件
（1）试剂准备区、标本制备区和扩增及产物分析区等三 个或四个区域在物理空间上，必须是完全相互独立的，各 区域无论是在空间还是在使用中，应始终处于完全的分隔 状态，不能有空气的直接相通。
（2）各区的可移动的仪器设备及各种物品包括实验记录 本、记号笔、试管架及清洁用具等必须专用。
扩增及产物分析区
扩增反应体系的配制和提取核酸的加入，可在标本制备区 也可在本区内进行，关键是要防止产物的污染。如果空间 允许的话，也可在一个独立的区域内进行。
加样时，先加提取的核酸模板样本，每加完一个即盖好盖 子，然后加阳性质控核酸模板，再就是标本制备阴性质控 和仅含按样本一样稀释的主反应混合液的扩增阴性质控， 这样做的目的是，最大可能地测出以前扩增产物的交叉污 染。
其他实验室
其他实验室
走廊
走廊
其他实验室
空气流向
标本制备区
其他实验室
其他实验室
其他实验室
标本制备区
空气流向+
空气流向
试剂准备区
门
门
扩增及产
物分析区
空气流向++
门
门
扩增和产 物分析区 空气流向++
其他实验室
试剂准备 区
空气流向
其他实验室
其他实验室
空气流向
走廊
走廊
其他实验室
空气流向+
其他实验室
标本制备 区
各区独立
注意风向 因地制宜
“十六字口诀”
方便工作
A
扩增区
门 产物分析区
标本制备区 门
门 试剂准备区
门
外走廊
门
B
扩增及产物 分析区
标本制备区 门
试剂准备区 门
门
外走廊
门
标本制备区
空气流向
空气流向
试剂准备区
门
门
扩增及产
物分析区
空气流向
门
门
扩增和产 物分析区
空气流向
其他实验室
试剂准备区
空气流向
其他实验室
其他实验室
产物分析区
扩增区
标本制备区
试剂准备区
传递窗
空气流向
传递窗
空气流向
传递窗
空气流向
空气流向
缓冲间
缓冲间
缓冲间
专用走廊
工作流向
关于“区域”合并
如使用扩增和产物分析同时完成的实时荧光 PCR仪进行核酸扩增检测，扩增区和产物分析 区可以合并。
如使用核酸提取、扩增及产物分析等均在一台 仪器上完成的全自动核酸检测分析仪，标本制 备区、扩增区和产物分析区可合并。
所有实验用洁净物品如离心管、吸头等的存放和准备处。 商品试剂盒： 75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）处理水、
有机溶剂等可能需要自配 自制试剂：一次较大量配制，然后分装成小瓶保存，每次
检测时，取出一小瓶使用，未用完的即弃掉，不再使用。 仪器设备主要有加样器、天平、离心机和冰箱等，最好配
备超净工作台。
谢谢！
标本制备区
仪器设备主要有混样设备、核酸提取仪、生物安 全柜、加样器、高速台式（冷冻）离心机、加热 模块或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不应放在实 验室门口等易受人员走动影响的地方，也不应直 对分体式空调。
主要是用于血液样本的混样、核酸样本的提取。
加样器吸头必须带滤芯。
使用加热模块时，如在模块孔中填入二氧化硅细 砂，然后将标本管置于细砂中温育，可得到较为 一致的温育温度。