巴曲亭及其有效成分对出血性疾病患者凝血功能的影响_王瑞娟
巴曲亭在膝关节置换围手术期应用对出血量与凝血功能的影响

巴曲亭在膝关节置换围手术期应用对出血量与凝血功能的影响摘要:目的探究在膝关节置换围手术期中应用巴曲亭对患者出血量、凝血功能的影响。
方法选择2013年1月至2014年11月于我院行膝关节置换术的60例患者,按照随机数字表法分为观察组与对照组,每组各有30例,观察组术前给予巴曲亭,对照组术前给予等渗盐水,对两组患者术中、术后24h出血量及手术治疗前、术后1d、术后5d的凝血功能指标等进行比较。
结果观察组术中及术后24h出血量均显著少于对照组患者,差异均有统计学意义(均P<0.05);观察组患者的手术治疗前、术后1d、术后5d的血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆纤维蛋白原(FIB)、血浆D-二聚体(D-D)等凝血功能指标水平与对照组患者相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。
结论在膝关节置换围手术期中应用巴曲亭,可有效减少术中、术后出血量,且不影响患者的凝血功能,具有临床推广价值。
关键词:巴曲亭;膝关节置换术;凝血功能;出血量;影响Effects on the bleeding and clotting function of baqutting in perioperative periodof total knee arthroplastyAbstract:Objective To explore the effects on the bleeding and clotting function of baqutting in perioperative period of total knee arthroplasty. Methods Between January 2013 to November 2014 in our hospital 60 cases of patients scheduled for TKA were randomly assigned to the control group and observation group according to the random number table method, and 30 cases in each group. All patients in observation group received preoperative use of baqutting, while the patients in control group received preoperative use of isotonic physiological saline. The intraoperative, postoperative blood loss and intraoperative and postoperative blood coagulation function index level in two groups were compared. Results The intraoperative and 24 h after operation of the bleeding of observation group were significantly less than those of the control group patients, the differences were statistically significant (all P<0.05). Before surgical treatment and 1d, 5d after operation,the blood coagulation function index level included prothrombin time, thrombin time, activated partial thromboplastin time, fibrinogen, D-dimer of observation group, there were no statistically significant difference(all P > 0.05),compared with the control group patients. Conclusion In perioperative period of total knee arthroplasty, baqutting can effectively reduce the intraoperative and postoperative blood loss,and it does not affect the patient's blood coagulationfunction, it has clinical value.Key words:baqutting; total knee arthroplasty; coagulation function; cadaverine quantity of bleeding;impact膝关节置换手术最常见的并发症是出血,虽然在手术前预防性地使用低分子肝素,可以降低深静脉血栓的形成,但仍存在术中、术后出血量较多的问题[1-2],影响了手术质量。
巴曲亭—蛇毒血凝酶在普通外科手术后腹腔渗血中的应用研究

巴曲亭—蛇毒血凝酶在普通外科手术后腹腔渗血中的应用研
究
焦伟;李明明
【期刊名称】《中国中医药咨讯》
【年(卷),期】2011(003)021
【摘要】目的:研究巴曲亭—注射用血凝酶在普通外科手术后腹腔渗血应用中的有效性安全性.方法:选取本科行腹部手术治疗后术后腹腔内出血的住院病人10例,随机分为两组,于分别应用巴曲亭(实验组)及冰肾盐水(对照组),观察两组病人用后渗血情况.结果:实验组病人用后渗血量较对照组少,术后引流血量也较少,止血效果好,使用次数少,止血时间快.实验组病人未出现用药相关并发症.结论:巴曲亭—注射用血凝酶局部应用能有效治疗普通外科手术术后腹腔内渗血,疗效确切,未发现并发症,临床应用安全.
【总页数】1页(P37)
【作者】焦伟;李明明
【作者单位】枣庄矿业集团中心医院,山东枣庄,277100;枣庄矿业集团中心医院,山东枣庄,277100
【正文语种】中文
【相关文献】
1.巴曲亭-蛇毒血凝酶在普通外科手术中的应用研究 [J], 卢海武;林少芒;邵子力;彭和平;梁建中;温子龙
2.蛇毒血凝酶(巴曲亭)在骨科手术中的止血作用 [J], 李平;孙雪峰;郝建华;张英民
3.巴曲亭与白眉蛇毒血凝酶在妇科手术止血作用的对比观察 [J], 焦向阳;毛学文;牛力春;黄海燕;王战胜;贺显建
4.蛇毒类血凝酶制剂速乐涓与巴曲亭对外科手术患者凝血功能的影响 [J], 袁子学
5.巴曲亭在神经外科手术中止血作用的临床研究 [J], 甘国胜;王庆利;吴明春;季蒙;陈利民
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巴曲亭对颅脑手术患者63例止血效果观察论文

巴曲亭对颅脑手术患者63例止血效果观察【摘要】目的:观察和探讨巴曲亭(国产蛇毒血凝酶)在颅脑手术中的对患者的止血效果,并对其有效性和安全性进行评价。
方法:对于我院神经外科近期收治的颅脑手术患者126例,随机分为两组,实验组(63例)采用巴曲亭进行止血,对照组(63例)使用止血敏,对两组的止血效果进行观察,比较两组患者的术中出血量、输血量以及术后24h引流量。
结果:巴曲亭的止血效果明显,实验组患者的术中出血量、输血量以及术后24h引流量均明显低于对照组,两组存在显著性差异。
结论:巴曲亭对于颅脑手术患者是一种安全有效的止血方法,且在使用过程中患者无不良反应,因此值得临床广泛推广使用。
【关键词】巴曲亭;颅脑手术;止血【中图分类号】r563 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484(2012)13-0343-01巴曲亭即国产注射用蛇毒血凝酶,是一种从巴西矛头蝮蛇蛇毒血凝酶中提取的酶性止血剂。
主要活性成分有两种:巴西矛头蝮蛇的巴曲酶以及磷脂依赖性凝血因子x激活物( fax)。
巴曲亭可以网罗血浆血细胞使之覆盖在血小板止血栓及其附近,从而加固血小板血栓,达到止血的目的。
其中矛头蝮蛇巴曲酶作用于纤维蛋白原后,使之释放出纤维蛋白肽a,继而生成可溶性的纤维蛋白i单体。
血管破损口处聚集的可溶性纤维蛋白i单体在聚合成纤维蛋白i多聚体后促进血管破损处的血小板聚集,从而加速血小板止血栓形成,在血管破损处产生初期止血效应。
而fax可与血管破损处暴露血小板磷脂反应表面结合,作用于激活凝血酶原,间接促进凝血酶在血管破损处的形成,产生止血的效果。
因为蛇毒血凝酶在正常血管内不会产生血小板集聚作用,不能激活凝血酶原转变为凝血酶,因此,蛇毒血凝酶在正常血管内不产生凝血作用。
正因为具有这一特点,巴曲亭临床上被广泛用于治疗出血性疾病或缓解因手术引起的出血状态,可有效缩短手术患者的出血时间,减少出血量。
经过颅脑手术的患者,由于各种原因常在创伤部位出现出血或渗血的情况。
巴曲亭

裂解为降解产物(FDP),从而预防血管内凝血。
►血凝酶的凝血作用只有在生成的FIm与Fg的比例大于1:5时才会出现。在血管损伤处由于血小 板聚集而使血流减弱,Fg数量因此减少,而矛头蝮蛇巴曲酶能使Fg裂解出FIm又进一步使其减少, 在它的持续作用下,Fg不断减少,FIm不断增加并最终使FIm与Fg的比例大于1:5而产生血凝块。
纤维蛋白生成阶段
凝血酶
Ca2+
巴曲亭作用机理
局部血管破损,血管内皮 下基底膜、胶原暴露 释放凝血因子Ⅲ 血小板粘附、聚集 血小板血栓 形成
加固止血栓 形成
FXA X
Xa
凝血酶原
小覆 板盖 血在 PF3 Va Ca2+ 栓血 纤维蛋白原 小 板 脱A肽 矛头蝮蛇巴曲酶 血 纤维蛋白Ⅰ多聚体 栓 及 纤维蛋白Ⅰ单体 其 附 脱B肽 近 凝血酶 巩 纤维蛋白Ⅱ单体 固 血
胶原 异物 K
内源 性 PK
Ⅻa
正常血液凝固过程(瀑布学说)
外源 性 凝 血 酶 原 复 合 物 生 成 阶 段
Ⅻ
HK
Ⅺ Ⅸ
Ⅺa
Ⅲ
Ⅶ
组织损伤
Ⅸa
Ⅷa Ca 2+
a
Ca2+
PL
Ⅹa Ⅴa Ca2+ PL
PL
Ⅹ Ⅹ
凝血酶原
凝血酶
凝血酶生成阶段
纤维蛋白原 ⅩⅢ
在血管破损处形成红色血栓达到止血
可溶性纤维蛋白 ⅩⅢa 难溶性纤维蛋白
4
主要成分:巴西矛头蝮蛇巴曲酶 磷脂依赖性凝血因子X激活(FXA)。
采用特异性亲和层析 技术纯化提取而来。
巴西矛头蝮蛇
(Bothrops atrox)
巴西矛头蝮蛇,这类毒蛇分为五个亚种,分别为:
经气管注入巴曲亭治疗气管切开术后出血的临床观察

经气管注入巴曲亭治疗气管切开术后出血的临床观察陈欣【摘要】目的观察气管内注入巴曲亭治疗气管切开术后的出血. 方法 36例 ICU 病房气管切开术后气道内出血患者随机分为3组:经气管内注入巴曲亭治疗组、静脉注射巴曲亭治疗组及经气管内注入去甲肾上腺素治疗组.观察其对患者的止血效果及治疗前后的血小板计数及凝血功能的变化. 结果 3组患者治疗前后血小板计数及凝血功能差异无统计学意义,经气管注入巴曲亭组的止血效果明显好于气管内注入去甲肾上腺素组和静脉注射巴曲亭组. 结论气管内注入巴曲亭对治疗气管切开后气管内出血有明显的抑制作用,且给药方便,疗效迅速直接.【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2010(015)010【总页数】2页(P1384-1385)【关键词】巴曲亭;气管切开;出血【作者】陈欣【作者单位】421001,湖南,衡阳,衡阳市第三人民医院呼吸科【正文语种】中文气管切开术作为急危重病人通畅气道、改善气体交换、减少呼吸道死腔、机械通气治疗、有效清理呼吸道分泌物的重要抢救措施之一,但有可能发生严重的并发症,如气胸、皮下气肿、气管狭窄等,气管切开后气道内出血是较严重的并发症,若发生迅猛,出血量大常致病人死亡。
巴曲亭(注射用蛇毒血凝酶)是从巴西矛头蝮蛇蛇毒中提取的酶性止血剂。
大量临床资料显示,巴曲亭在预防和治疗出血性疾病及出血状态上疗效显著,同时安全性突出,在正常血管内无血栓形成的危险[2]。
巴曲亭在围术期应用较多,且使用途径多为静脉注射或肌内注射[2]。
临床上有将巴曲亭局部应用于消化道治疗消化道出血的报道,而未见将其局部应用于气道的报道。
本研究分别经气管内局部注入巴曲亭、静脉注射巴曲亭或气管内注入去甲肾上腺素行止血治疗,比较它们之间止血效果及其对凝血功能的影响。
资料与方法一、我院 2005年 6月至 2008年 10月有 36例患者气管切开术后气道内出血,患者均系根据病情需要作气管切开病例,其中男 22例,女 14例;年龄 36~74岁,平均年龄 55岁;体重45~75 kg。
巴曲亭与白眉蛇毒血凝酶在肝脏切除手术止血作用的对比观察

1.3用药方法于手术前3O分钟治疗组静脉注射巴曲亭2ku(蓬莱诺康药业有限公司产品),并于术后静脉注射巴曲亭1ku;对照组用白眉蛇毒血凝酶替代注射。
1.4观察指标所有病例记录切口的止血时间、切口出血量,手术出血量,术后三天血浆管引流量。术前及术后抽取静脉血,检测凝血酶原时间(PT)、部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原定量(FIB)。术中常规监测BP、ECG、SPO2等各项指标。
1资料与方法
1.1一般资料本组病例共100例,随机分为巴曲亭组(治疗组)50例和白眉蛇毒血凝酶组(对照组)50例。年龄21-72岁,平均40.5士8.5岁,其中:肝血管瘤58例(择期手术),肝细胞性肝癌35例(限期手术),胆管细胞性肝癌7例(限期手术),所有占位病变均位于右肝。两组患者在年龄,术前凝血功能测定等方面差异无统计学意义(P>0.05)。
此次观察结果向我们显示,巴曲亭止血作用无论在切口的止血时间、切口出血量;手术中出血量、术后24h引流量及输血量都明显优于白眉蛇毒血凝酶,在围手术期应用巴曲亭能减少创面渗血,保证术野清晰,提高手术效率。术前使用巴曲亭能有效地预防术后出血及其它并发症,降低手术治疗费用[10]。并且能够加快病人的康复,缩短引流管放置时间,减少感染发生率,是外科手术中一种安全、有效的止血剂。疗效确切,可靠,安全,值得临床推广使用。
3讨论
减少术中出血及输血是目前重要的医学问题之一,其目的主要是避免输异体血引起的各类传染病,及人体免疫系统的损害及缓解血源紧张等。现在主要的缓解血源紧张的方法有:采用术中控制性降压,术中自体输血,术前、术中或术后使用止血药物[3-4]。确切有效的减少术中或术后出血的药物不多,抗纤溶类药物有选择性的止血作用,但仅用于纤溶酶亢进的手术。
巴曲亭一蛇毒血凝酶在普通外科手术后腹腔渗血中的应用研究

巴曲亭一蛇毒血凝酶在普通外科手术后腹腔渗血中的应用研究【摘要】目的:研究巴曲亭—注射用血凝酶在普通外科手术后腹腔渗血应用中的有效性安全性。
方法:选取本科行腹部手术治疗后术后腹腔内出血的住院病人10例,随机分为两组,于分别应用巴曲亭(实验组)及冰肾盐水(对照组),观察两组病人用后渗血情况。
结果:实验组病人用后渗血量较对照组少,术后引流血量也较少,止血效果好,使用次数少,止血时间快。
实验组病人未出现用药相关并发症。
结论:巴曲亭—注射用血凝酶局部应用能有效治疗普通外科手术术后腹腔内渗血,疗效确切,未发现并发症,临床应用安全。
【关键词】血凝酶;手术后;局部应用巴曲亭—注射用血凝酶系从巴西矛头蝮蛇蛇毒中提取和精制而成的酶性止血剂,可用于各种出血病症,能缩短病人出血时间,减少出血量。
本科于2010年7月至2011年6月1年间对该药在普通外科术后创面渗血止血中的临床作用进行观察分析,现将结果报道如下。
1 临床材料1.1 一般资料病人平均年龄49岁〔37 ~ 78岁),男6例,女4例。
所有病例术前检查肝、肾功能及凝血功能基本正常,无严重心、肺及脑合并症。
1.2 手术类型肝胆手术(肝癌切除术、胆囊切除术、胆道探査术等)4例,胃肠手术(胃癌根治切除术、大肠癌根治切除术等)4例,阑尾切除术2例,将以上患者均分为2组。
1.3 上述患者术后发现引流管引出血性液较多,说明出现术后创面出血(渗血)。
用药方法实验组于手术后发现渗血后自引流管内注入注射用巴曲亭2 单位+生理盐水20ml。
对照组经引流管注入冰肾盐水。
1.4 观察方法:对止血效果、使用次数、止血时间、用后渗血量的比较;手术前后血生化、血尿常规及生命体征的观察比较;手术后并发症和不良反应的观察。
2 方法2.1 以上患者术后24小时内发现引流管内引出液为血性且每小时量均为50ML左右,持续3小时,此过程中患者生命体征平稳,同时以上患者术前术后静脉用止血药物相同。
两组病人按病种平均分组。
巴曲亭

观察结果 3组患者术中止血效果对比(均值±标准差 )
组别 例数
止血时间 (s) 118.9±40.8 125.6±46.9 159.2±39.2**
切口出血量 (g) 10.0±6.0 9.6±2.8 12.5±5.4*
切口单位面积 出血(g) 0.2±0.2 0.2±0.1 0.3±0.2**
立止血组 巴曲亭组 甘露醇组
内皮细胞
纤维蛋白溶酶原
巴曲亭
t-PA 纤溶酶
纤维蛋白原
纤维蛋白肽A
纤维蛋白单体I
纤维蛋白I多聚体
纤维蛋白降解片断
被内皮网状系统吞噬
正常血管系统内巴曲亭的作用
释 放
血加 栓速 形血 成小 板
可溶性纤维蛋白Ⅱ多聚体
XⅢ
XⅢa
难溶性的纤维蛋白丝
血管内皮基底膜、胶原
局部血管不破损
血小板粘附、聚集 (白色血栓)
凝血
纤维蛋白原 FXA 释放凝血因子Ⅲ 释放 矛头蝮蛇巴曲酶
纤维蛋白肽A X Xa PF3 Va Ca2+
纤维蛋白Ⅰ多聚体 纤维蛋白肽B 凝血酶原 凝血酶 纤维蛋白单体Ⅰ 纤维蛋白Ⅱ单体 可溶性纤维蛋白Ⅱ多聚体 XⅢ (纤维蛋白稳定因子) XⅢa 难溶性的纤维蛋白丝
纤维蛋白生成阶段
凝血酶
Ca2+
巴曲亭作用机理
局部血管破损,血管内皮 下基底膜、胶原暴露 释放凝血因子Ⅲ 血小板粘附、聚集 血小板血栓 形成
加固止血栓 形成
FXA X
Xa
凝血酶原
小覆 板盖 血在 PF3 Va Ca2+ 栓血 纤维蛋白原 小 板 脱A肽 矛头蝮蛇巴曲酶 血 纤维蛋白Ⅰ多聚体 栓 及 纤维蛋白Ⅰ单体 其 附 脱B肽 近 凝血酶 巩 纤维蛋白Ⅱ单体 固 血
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文章编号(Article ID):1009-2137(2012)02-0376-05·论著·巴曲亭及其有效成分对出血性疾病患者凝血功能的影响王瑞娟,王兆钺*,江明华,张威,曹丽娟,孙雄华,张剑,白霞,阮长耿苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室,江苏苏州215006摘要本研究旨在观察巴曲亭及其有效成分的止血机理及对出血性疾病凝血功能的影响。
采用全自动血凝仪检测巴曲亭及其有效成分巴曲酶与凝血因子Ⅹ激活物(FⅩA)对正常人及出血性疾病患者血浆的活化部分凝血活酶时间(APTT)与凝血酶原时间(PT)的影响,用发色底物法检测FⅩA、巴曲酶及巴曲亭对凝血因子Ⅹ(FⅩ)活化及凝血酶生成的影响。
结果表明:巴曲亭及其有效成分可以缩短正常人血浆的APTT,其中FⅩA缩短APTT的作用在一定浓度范围内存在量效关系(r=0.889,P<0.05)。
FⅩA、巴曲酶及巴曲亭可纠正出血性疾病患者APTT 的延长,三者对PT无明显影响。
FⅩA能促进FⅩ的活化及凝血酶的生成,巴曲酶及巴曲亭对二者无明显作用。
结论:巴曲亭有明显的促进凝血效果,并可纠正出血性疾病的止血异常,其有效成分巴曲酶直接作用于纤维蛋白原,而FⅩA通过活化FⅩ促使凝血酶的生成。
关键词巴曲亭;凝血作用;出血性疾病中图分类号R554文献标识码Ain vitro Effects of Hemocoagulase Atrix and Its Effective Components on Blood Coagulation of Patients with Bleeding DisordersWANG Rui-Juan,WANG Zhao-Yue*,JIANG Ming-Hua,ZHANG Wei,CAO Li-Juan,SUN Xiong-Hua,ZHANG Jian,BAI Xia,RUAN Chang-GengKey Laboratory of Thrombosis and Hemostasis Subordinated to Ministry of Health,Jiangsu Institute of Hematology,The First Affiliated Hospital of Soochow University,Suzhou215006,Jiangsu Province,China*Corresponding Author:WANG Zhao-Yue,Professor.Tel:(0512)67780872.E-mail:zwang11@sina.comAbstract This study was aimed to investigate the procoagulation effects of hemocoagulase atrix and its effective components(batroxobin and factorⅩactivator)on plasma of normal subjects and patients with bleeding disorders and their mechanisms.Activated partial thromboplastin time(APTT)and prothrombin time(PT)were measured.The factor(F)Ⅹactivation and thrombin generation were analyzed by using chromogenic substrate method.The results showed that the plasma APTT of normal subjects was shortened by hemocoagulase atrix,batroxobin and FⅩactivator,and the effect of FⅩactivator was found to be concentration-dependent(r=0.889,P<0.05).The prolonged APTT of plasma from patients with bleeding disorders could be corrected by hemocoagulase atrix,batroxobin and FⅩactivator,but PT showed no great changes resulted from the treatments.FⅩactivator could promote FⅩactivation and thrombin generation,while neither hemocoagulase atrix nor batroxobin showed such abilities.It is concluded that hemocoagulase atrix promotes coagulation process,and corrects coagulation abnormalities in patients with bleeding disorders,its main component batroxobin directly acts on fibrinogen,and FⅩactivator promotes thrombin generation through activating FⅩ.Key words hemocoagulase atrix;coagulation;bleeding disorderJ Exp Hematol2012;20(2):376-380凝血过程是由一系列的丝氨酸蛋白酶及其辅因子参与的网络酶促放大反应。
组织因子(tissue factor,TF)表达于受损伤或受刺激的细胞(内皮细胞或单核细胞),与循环中的凝血因子Ⅶ(coagulation factorⅦ,FⅦ)结合形成FⅦ-TF复合物,激活FⅨ与FⅩ,使凝血酶原变为凝血酶,后者通过内源性凝血途径的正反馈作用,将纤维蛋白原转变为纤维蛋白。
出血是一种常见的临床表现,外伤、手术及一些出血性疾病常常引起大量出血,甚至威胁到患者的生命。
蛇毒中含有许多不同生物活性的酶类,有些酶类作用于血液凝固酶促级联反应过基金项目:国家自然科学基金资助项目(编号81070395);江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)*通讯作者:王兆钺,教授,博士生导师.电话:(0512)67780872.E-mail:zwang11@sina.com2011-10-25收稿;2011-11-04接受·673·中国实验血液学杂志Journal of Experimental Hematology2012;20(2):376-380程中的一个或多个环节,可激活FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅨ、FⅩ或直接使纤维蛋白原凝集[1-8]。
很多蛇毒成分已用于出血或血栓性疾病的诊断和治疗[9,10]。
蛇毒类凝血酶(thrombin-like enzyme,TLE)为丝氨酸蛋白酶,是蝮亚科蛇毒中一个具有促凝血活性的组成成分,能直接作用于纤维蛋白原,促进血液凝固[8]。
不同来源的蛇毒类凝血酶对血浆纤维蛋白原的作用方式不同。
根据类凝血酶作用于纤维蛋白原所得产物不同将其分为3类:①只释放纤维蛋白肽A,即SVTLE-A,如巴曲酶(bathroxobin);②只释放纤维蛋白肽B,即SVTLE-B,如铜头蝮蛇毒类凝血酶(trimeresu-rus okinavensis);③既释放纤维蛋白肽A又释放纤维蛋白肽B,即SVTLE-AB,如巴西窝面蝰蛇毒(B.jararacussu venom)[11]。
巴曲亭(hemo-coagulase atrix,注射用蛇毒血凝酶)为巴西矛头蝮蛇(Bothrops atrox)毒液中分离出来的止血成分,包括2种有效成分:巴曲酶和少量FⅩ激活物(FⅩactivator,FⅩA)。
巴曲酶直接作用于纤维蛋白原Aα链Arg16-Gly17处,释放纤维蛋白肽A后形成纤维蛋白单体Ⅰ,但不降解纤维蛋白B肽,亦不直接激活FⅩⅢ,因此不能形成稳定的纤维蛋白。
FⅩA可以直接激活FⅩ,从而激活凝血酶原,使纤维蛋白原降解成纤维蛋白,并激活FⅩⅢ,形成稳定的纤维蛋白。
巴曲亭已广泛用于神经外科、妇科与骨科手术,以及消化道与呼吸道出血,临床上有较满意的止血效果[12-15],但有关实验研究资料较少,至今尚无对出血性疾病的治疗方面的实验研究。
材料和方法实验对象根据知情同意原则,留取20名健康志愿者(年龄20-45岁,男女各半)的3.8%柠檬酸钠抗凝血浆。
血友病A患者25例,维生素K依赖性凝血因子缺乏症患者7例,血管性血友病(von Willebrand disease,vWD)患者3例,FⅩ缺乏症患者3例,血友病B、FⅤ缺乏症、FⅦ缺乏症与纤维蛋白原缺乏症患者各1例。
血浆分装后在-20ħ条件下保存备用。
主要试剂及仪器巴曲亭(产品批号1003172)、巴曲酶与FⅩA由蓬莱诺康药业有限公司提供;人血浆FⅩ为Calbiochem公司产品;发色底物S-2337、S-2222为美国Sigma公司产品;活化FⅩ(FⅩa)标准品及人凝血酶标准品为Hyphen BioMed公司产品。
STAGO COMPACT全自动血凝仪为法国Stago公司产品,全波长多功能酶标仪为赛墨飞世尔科技实验室产品,KDC-40低速离心机为北京东南仪诚实验室设备有限公司产品。
活化部分凝血活酶时间(APTT)与凝血酶原时间(PT)检测在正常人血浆及出血性疾病患者血浆中分别加入一定浓度的FⅩA、巴曲酶或巴曲亭,37ħ温育3min 后在全自动血凝仪上检测APTT和PT,并与空白对照组(加入等量生理盐水)比较(APTT参考值范围为28-40s,PT参考值范围为11-14.5s。
)血浆FⅩ活化及凝血酶生成的发色底物法检测S-2337和S-2238分别为FⅩa及凝血酶特异性发色底物,被水解后释放出生色基团对硝基苯胺,后者的释放量与FⅩa及凝血酶的活力成正比,在405nm 波长处检测吸收峰。
取血浆或FⅩ(8μg/ml)100μl,加入100μl FⅩA溶液〔FⅩA0.002U/ml,Tris-HCl100mmol/L (pH7.5),CaCl26mmol/L,盐酸苯甲醚2mmol/L〕,37ħ温育5min,吸取100μl加入96孔酶标板中,再加入100μl发色底物缓冲液〔S-23370.625mg/ ml,Tris-HCl0.5mmol/L(pH8.3),EDTA25 mmol/L,NaCl375mmol/L〕,在405nm波长处检测其吸光度值30min[16]。