骨髓细胞化学染色
骨髓细胞内外铁染色
骨髓细胞内外铁染色
骨髓细胞内外铁染色是一项重要的实验技术，被广泛应用于医学研究和临床诊断中。
通过对骨髓细胞进行铁染色，可以了解细胞内外铁的分布情况，从而判断细胞的功能状态和疾病进程。
铁是人体内必需的微量元素，它在体内参与氧气输送、免疫反应和能量代谢等多种生理过程。
在正常情况下，骨髓细胞内的铁主要储存于铁粒蛋白中，以便在需要时释放出来。
而在某些疾病状态下，如缺铁性贫血、血色病等，细胞内的铁可能会异常积聚或过度释放，导致细胞功能紊乱。
骨髓细胞内外铁染色的原理是利用特定染液与铁元素的化学反应，产生可见的颜色反应。
一般常用的铁染色方法有Perl's染色法、Prussian blue染色法等。
这些染色方法可以清晰地显示细胞内外铁的分布情况，根据颜色的深浅可以初步判断细胞内外铁的含量。
在实验操作中，首先需要准备好骨髓细胞标本，并进行细胞固定和染色处理。
然后，将标本放入显微镜下观察，通过调节镜头和光源，可以清晰地观察到细胞内外铁的染色情况。
通常情况下，细胞内的铁呈现出蓝色或绿色，而细胞外的铁呈现出红色或棕色。
通过骨髓细胞内外铁染色，可以对疾病的诊断和治疗提供重要的参考依据。
例如，在缺铁性贫血的诊断中，可以观察到细胞内铁的减少或消失，从而确定疾病的类型和严重程度。
此外，铁染色还可以
用于研究细胞内铁的代谢途径和调控机制，为疾病的发生机制提供线索。
骨髓细胞内外铁染色是一项重要的实验技术，对于疾病的诊断和研究具有重要意义。
通过观察细胞内外铁的染色情况，可以了解细胞的功能状态和疾病进程，为临床医学和基础科学研究提供有力支持。
细胞化学染色
细胞化学染色检验前言细胞化学是细胞和化学相结合的一门科学。
细胞化学染色是根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。
在病理情况下，血细胞的化学成分可发生改变。
因此，细胞化学染色不仅对研究血细胞的代谢活动、生理功能，而且对生理和病理情况下血细胞的化学成分的变化、各种类型血细胞的鉴别、某些血液病的鉴别诊断、疾病的疗效观察以及发病机制的探讨均有重要意义。
研究血细胞的化学物质较多，如各种酶类、脂类、糖元、铁等。
下面主要介绍血液学中常用的一些细胞化学染色方法。
瑞氏染色法：瑞氏染色液的配制：瑞氏染料（粉）1g纯甲醇60ml将染料放在乳钵内加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解得倒入洁净的玻璃瓶内，剩下未溶解的再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直到全部染料溶解及用完甲醇为止。
制配好的染液保存于温室中一周便可应用。
新鲜配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性，染液储存愈久染色愈好。
缓冲液的配制及其作用:1% KH2PO4 (即1g KH2PO4+100ml蒸馏水) 30ml1% Na2HPO420ml加蒸馏水至1000mlPH 6.4~6.8过氧化物酶染色一、原理：细胞中的过氧化物酶（POX）分解底物过氧化氢（H2O2）产生新生态氧，后者使联苯胺氧化为联苯胺蓝沉淀而定位于POX活性部位。
二、过氧化物酶染色法染液的配制：（1）联苯胺（Benzidine）0.3g95%乙醇（Ethye alcohol）99ml36%亚硝基铁氰化钠（Sodium Nitroprusside）1ml (0.36g+1ml蒸馏水，置于37℃水浴箱中促溶。
)（2）30%mlml过氧化氢溶液：30%双氧水，吸取一滴约0.05ml放入50ml蒸馏水内，每次用时必须新鲜配制。
三、结果判断：细胞质中有蓝色颗粒的为阳性细胞。
四、临床意义：粒细胞中除早期原粒细胞呈阴性反应外，晚期原粒细胞及以后各阶段粒细胞均呈阳性反应，细胞越成熟反应越强。
骨髓细胞化学染色简易操作卡
骨髓细胞化学染色简易操作卡
中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
工作液配制：取B液30μl,C液30μL混匀，静置2分钟，再加蒸馏水1ml，D液30μl,混匀。
染色步骤：1.干燥涂片，滴加A液固定剂（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，甩干；
2.滴加或浸入工作液15分钟，蒸馏水冲洗2-3分钟，甩干
3.E液(使用前务必摇匀！)复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检
酸性α-醋酸萘酚酯酶染色（ANAE）
工作液配制：于试管内加B液50μL，C液50μL混匀，静置1分钟，再加D液1.5ml，E 液50μl,混匀，（分为两份，其中一份作为NaF抑制试验加NaF液1滴）静置2分钟备用。
染色步骤：1.干燥涂片，直接滴加工作液做第二步或滴加A液（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干（涂片不固定直接做ANAE
染色，阳性反应强于固定者）；
2.滴加或浸入工作液布满涂片（37℃）孵育分钟，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干。
3.F液复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检。
糖原染色(PAS)
滴染：1.干燥涂片，滴加A液（用前恢复室温，并充分摇匀），布满涂片固定约30~60秒，蒸馏水冲洗，待干或滤纸吸干。
2.滴加B液布满涂片作用5~10分钟，蒸馏水冲洗5分钟，待干或滤纸吸干。
3.滴加C液布满涂片作用10~15分钟，蒸馏水冲洗5分钟。
4.D液复染2~5分钟，干后镜检。
骨髓片染色方法
骨髓片染色方法一、背景介绍骨髓是人体内产生血液细胞的重要组织，骨髓片染色是一种常用的方法，用于观察和分析骨髓中各种血细胞的形态、数量和分布。
本文将详细介绍常用的骨髓片染色方法及其原理。
二、常用的骨髓片染色方法2.1 Wright-Giemsa染色法Wright-Giemsa染色法是一种常用的骨髓片染色方法，它可以同时染色骨髓中的细胞核和细胞质。
该方法具有简便、快速、可靠的特点，被广泛应用于临床实验室。
2.2 染色原理Wright-Giemsa染色法的染色原理是通过染料与细胞成分之间的化学反应来实现的。
染料将与细胞中的某些结构特异性地结合，从而在显微镜下呈现出不同的颜色。
2.3 染色步骤Wright-Giemsa染色方法的步骤如下： 1. 将待染色的骨髓片固定在玻片上。
2.将固定的骨髓片浸入Wright-Giemsa染料溶液中，染料浓度根据需要进行调整。
3. 在染料中浸泡时间一般为5-10分钟。
4. 取出骨髓片，用水冲洗去掉多余染料。
5. 将骨髓片风干后进行观察。
2.4 显微镜观察完成染色后，将骨髓片放置在显微镜下观察，可以通过调节镜头来观察不同倍数下的细胞形态和细胞质颜色。
不同种类的血细胞在染色后呈现出特定的形态特征和染色性质，通过观察不同细胞的形态和染色特点，可以进行血液病的诊断和分类。
三、骨髓片染色的应用领域3.1 临床诊断骨髓片染色方法在临床诊断中起着重要的作用。
通过观察骨髓中各种血细胞的形态、数量和分布，可以帮助医生判断患者是否有血液病变，并确定病变的类型和程度。
3.2 科学研究除了在临床诊断中的应用，骨髓片染色方法也广泛应用于科学研究。
通过观察和分析骨髓中不同类型血细胞的形态和染色特点，可以深入了解血液系统的发育、功能和病理。
这有助于揭示血液病发生的机制，并为疾病的治疗提供理论依据。
3.3 周期性评估骨髓片染色方法还可以用于周期性评估，跟踪疾病的进展和治疗效果。
通过定期观察和统计骨髓中各种血细胞的数量和形态变化，可以帮助医生及时判断治疗效果，并进行调整。
白血病骨髓细胞学诊断标准
白血病骨髓细胞学诊断标准
根据骨髓象的分类和特点，白血病的骨髓细胞学诊断可分为以下几种类型：
1.急性淋巴细胞白血病：
（1）骨髓增生明显活跃或极度活跃，以原始淋巴细胞为主；
（2）幼稚淋巴细胞增多，占骨髓细胞总数的20%以上；
（3）淋巴细胞体积增大，形态不规则，核染色质粗糙，核仁明显；
（4）血小板和红细胞减少；
（5）骨髓细胞化学染色：过氧化物酶（POX）染色阴性，糖原（PAS）染色阳性。
2.急性髓系白血病：
（1）骨髓增生明显活跃或极度活跃，以原始髓系细胞为主；
（2）幼稚髓系细胞增多，占骨髓细胞总数的20%以上；
（3）髓系细胞体积增大，形态不规则，核染色质粗糙，核仁明显；
（4）血小板和红细胞减少；
（5）骨髓细胞化学染色：过氧化物酶（POX）染色阳性，糖原（PAS）染色阴性或弱阳性。
3.慢性淋巴细胞白血病：
（1）骨髓增生活跃，以成熟淋巴细胞为主；
（2）淋巴细胞体积正常或略大，形态规整，核染色质细腻，核仁不明显；
（3）血小板和红细胞减少；
（4）骨髓细胞化学染色：过氧化物酶（POX）染色阴性，糖原（PAS）染色阳性。
4.慢性髓系白血病：
（1）骨髓增生活跃，以成熟髓系细胞为主；
（2）髓系细胞体积正常或略大，形态规整，核染色质细腻，核仁不明显；
（3）血小板和红细胞减少；
（4）骨髓细胞化学染色：过氧化物酶（POX）染色阳性，糖原（PAS）染色阴性或弱阳性。
诊断白血病时，需结合患者的临床表现、骨髓象特点、骨髓细胞化学染色结果等综合判断。
在确诊后，还需进行进一步的分型，以指导治疗方案的制定。
不同类型的白血病，治疗方法及预后差异较大，因此，精确的诊断和分型至关重要。
临床医学检验技术模拟练习题(含参考答案)
临床医学检验技术模拟练习题（含参考答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、除了胰腺炎外，最易引起血AMY升高等疾病还有（）。
A、肾炎B、心肌炎C、腮腺炎D、胆石症E、急性肝炎正确答案：C答案解析：慢性胰腺炎、流行性腮腺炎、唾液腺化脓等，均可引起淀粉酶（AMY）轻度升高。
2、骨髓细胞化学染色：PAS染色（＋）量弥散分布红色细颗粒状，POX 染色（＋），NAP积分减低，AS-DCE（－），α-NAE（＋）并被氧化钠抑制。
最可能的诊断是（）。
A、慢性淋巴细胞白血病B、急性单核细胞白血病C、急性粒细胞白血病D、再生障碍性贫血E、巨幼细胞性贫血正确答案：B答案解析：急性单核细胞白血病原、幼单核细胞PAS染色阳性反应呈弥漫分布的红色细颗粒；POX染色原、幼单核细胞多呈细小颗粒弱阳性反应；NAS-DAE染色原、幼单核细胞多呈阳性或强阳性反应，但能被氟化钠抑制；急性粒-单核细胞白血病的阳性反应的单核细胞系白血病细胞能被氟化钠抑制。
3、某患者进行血液分析结果为：血红蛋白72g/L，红细胞3.85×1012/L，红细胞比积0.245，可初步判断此患者为（）。
A、正常细胞性贫血B、单纯小细胞性贫血C、小细胞低色素性贫血D、大细胞性贫血E、红细胞增多症正确答案：C答案解析：红细胞参数计算公式：MCV＝HCT/RBC＝0.245/（3.85×1012/1015）＝63fL；MCH＝HGB/RBC＝（72/3.85×1012）×1012＝18pg；MCHC＝HGB/HCT＝72/0.245＝293 g/L。
可计算出该患者MCV、MCH、MCHC均低于正常，故为小细胞低色素性贫血。
4、血清学检测结果提示病毒复制能力最强的是（）。
A、HBsAg（－）、抗HBs（＋）、HBeAg（－）、抗HBe（－）、抗HBc（＋）B、HBsAg（＋）、抗HBs（＋）、HBeAg（－）、抗HBe（－）、抗HBC（＋）C、HBsAg（＋）、抗HBs（－）、HBeAg（＋）、抗HBe（－）、抗HBc（＋）D、HBsAg（＋）、抗HBs（－）、HBeAg（－）、抗HBe（＋）、抗HBc（＋）E、HBsAg（＋）、抗HBs（＋）、HBehg（－）、抗HBe（＋）、抗HBc（＋）正确答案：C答案解析：①HBsAg为乙型肝炎患者血清中首先出现的病毒标志物，可作为乙型肝炎的早期诊断和普查，在急性肝炎潜伏期即可出现阳性；②抗-HBs为保护抗体，阳性提示急性感染后的康复；③HBeAg阳性是乙型肝炎传染性的标志；④抗-HBe多出现于急性肝炎恢复期的患者中，一般表示HBV复制减少和传染性减低；⑤抗-HBc，可持续多年，是HBV既往感染的标志，可作为急性病毒复制和机体免疫应答的标志。
骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查
骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种用于诊断血液疾病的特殊检查方法。
该检查可以通过染色技术直接观察血液细胞中特定的染色体、酶或其他化学物质，进而判断疾病的类型和程度。
下面我们将从步骤、原理及应用等多个方面进行细致的阐述。
一、步骤1.取样骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查需要从患者的骨髓中取得样本。
通常采用穿刺取骨髓的方法，使用空心针将骨髓组织抽取出来。
2.制片将采集到的骨髓组织用特定的方法制成薄片，然后将制片玻片放入预处理液中，去除组织中的脂肪和血液。
3.固定用甲醛等化学物质将薄片固定在制片玻片上，以免组织失去结构。
4.染色根据不同的需求，使用不同的染色方法染色。
常用的染色方法有Gear （G）染色、Wright（W）染色、Giemsa（G）染色、PAS染色、酶组织化学染色等。
5.观察染色完成后，使用显微镜观察染色后的组织和细胞，看到目标物质的颜色或形态变化，从而判断患者的疾病类型及程度。
二、原理骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查的原理是通过染色技术观察不同的物质反应，从而帮助医生确定患者的诊断。
例如，由于白血病细胞存在着特殊的染色体核型，因此通过染色技术可以直接观察到这些染色体。
又如，用PAS染色技术可以看到细胞中的糖原，发现是否存在糖尿病等疾病。
这些染色方法可以同时应用于细胞形态与细胞化学特性的研究。
三、应用骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查广泛用于对各种血液疾病的诊断，特别是在白血病、贫血、血小板疾病、骨髓增生异常综合症等疾病的确诊和辅助诊断中得到了广泛应用。
通过该检查方法的组织学检查，可以检查人体中蛋白质、酶液、糖原、脂肪等物质，并进一步辅助疾病的诊断和治疗。
而且，该检查方法具有操作简便、灵敏度高、结果准确等优势，可以为医生提供诊断血液疾病的重要实验依据，为患者提供更好的诊治服务。
总之，骨髓特殊染色及酶组织化学染色检查是一种具有较高研究价值和应用前景的检查方法。
骨髓细胞学检查一
碱性磷酸酶染色（NAP）
1. 目的： 掌握卡氏偶氮偶联法测定中性粒细胞碱性磷酸酶染色的 原理、方法、注意事项和临床意义。 2. 原理： 中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在pH9.6的碱性条件下能 水解磷酸萘酚，生成萘酚，后者与重氮盐偶联形成不溶性的 有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。重氮盐有多种，常用的 有坚牢蓝RR、坚牢蓝BB、坚牢紫酱等。
（一）固定
固定有物理法与化学法，
前者为干燥和火焰固定， 后者最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。
（二）显示
偶氮偶联法：这类方法多利用人工合成的酶底物，在
酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮 偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存
在。
联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于 过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色 沉淀。
Hale Waihona Puke （三）细胞化学定量
粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别为阴 性和各种程度的阳性。
百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱。 积分法，是常用的半定量法，将前述的等级估量与百分率相结 合（计算方法见碱性磷酸酶染色），它既反映了细胞阳性率的 高低，又反映了细胞受色的强弱。
第三节 骨髓细胞学检查 一、常用血细胞化学染色
昆明医科大学第二附属医院 徐益恒
血细胞化学染色
是以细胞形态学为基础， 运用生物化学或化学技术 对血细胞内化学成分、代谢产物等进行定性/定位 /半定量检查的方法 用于某些血液的诊断、疗效观察及预后判断。
本节课主要任务
机体铁储备状况：骨髓铁染色
感染性及白血病鉴别诊断：中性粒细胞碱性
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尼曼（-）
细菌↑病毒↓
慢粒↓类白↑
急淋（-）
红血，红白血（+）
B（-）
组织（+）
多毛（+）
耐酒石酸
白系：急粒、单、淋（+）
急粒↓急淋↑
AA↑阵发睡↓
巨幼贫（+）
特异性高
单核
T（+）
B（-）
不典型巨核（+）RS（-）
真红↑MDS↓
红↑红白↓
淋巴肉瘤
慢淋（+）
戈谢（+）尼曼（-）腺癌（+）
慢淋↑骨纤↑
Zzp制作
（+）
（+）
淋巴（±）
巨核PLT（+）
（+）
（+）
巨核、幼红、浆（-）或±
早红（+）成熟减低
吞噬（+）
巨噬（+）
（+）
（+）
急粒（+）
红系：红血病、红白（+）
IDA、珠生成、MDS(+)
巨贫、溶贫、AA（-）
油镜100，积分7-51
急粒(+)
急单（-）
T急淋（+）
急粒（+）
急单（+）
T，非T非B（+）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
POX
过碘酸萘酚
а-醋酸萘酚酯酶
醋酸AS-D萘酚酯酶
碱性а-丁酸萘酚
ACP
铁染色
棕黑色
紫红色
灰黑色
红色
棕黑色
棕黑色
蓝色
红色
蓝色
-无颗粒
-无色
- 0分
-无色
- 0分
-无色
±细小，弥散
±少量稀疏0.5分
+较粗局灶
+淡红色<10个
+灰褐色
1分
+淡红色
+ 1/2 1分
+淡红色
2+粗大1/2-2/3
2+红色>10个
2+深褐色
2分
2+鲜红色
2+ 3/4
2分
2+鲜红色
3+粗大，布满胞质
3+暗红色块状
3+棕黑色
3分
3+深红色
3+布满
3分
3+深红色
4+团块，覆核
4+紫红色块状
4+深黑色
4分
4+浓密
4分
原粒（-）
（-）
（-）或（+）
（—）
（-）或（+）
（-）
粒（+）
单（+）
淋巴（+）
巨核（+）
PLT（+）
浆（+）
外铁：小粒
+—++
内铁：100中红、晚红
19—44%
6颗，1/2
MDS，>15%
早幼粒（+）随成熟
（+）
随成熟
（+）
不随成熟
（+）
嗜酸（+）
浆(+)
（-）或±
嗜碱（-）
(+)
（+）
原单（-）
(-)
（-）
（-）或±
（-）或（+）
分化好（+）
幼单/单（±）
(+)
（-）