四种提取方法对沙棘总黄酮提取的影响
沙棘叶总黄酮的提取纯化方法概况
沙棘叶总黄酮的提取纯化方法概况曾圣雅;周吉银【摘要】查阅国内外有关文献探讨从沙棘叶中提取纯化总黄酮的方法，指出提取方法有回流提取法、微波萃取法、普通超声提取法、循环超声提取法、微波超声双辅助提取法，其中回流提取率较高，微波法次之，但超声法和超声循环提取法可节约时间和能耗，效率也较高；纯化萃取方法有酸提碱沉法、膜过滤法、大孔吸附树脂法、聚酰胺洗脱法，其中优选膜过滤法和大孔树脂吸附法纯化后总黄酮含量较高且方法简便可行，成本较低。
虽然对沙棘总黄酮的提取纯化方法的研究取得了一定进展，但还需摸索更有效的方法，并且需进一步提高提取率和萃取后总黄酮的含量。
%The pertinent documents at home and abroad were consulted to survey the extracting and purifying methods for total flavonoids from seabuckthorn leaves. The main extraction methods concluded were refluxing method, conventional ultrasonic method, circulating ultrasonic method, microwave method as well as microwave and ultrasonic auxiliary method, among which the refluxing method was with better extracting rate and the next was microwave method, but the ultrasonic method and circulating ultrasonic method can reduce time and energy with good efficacy. The methods for the purification included alkali extraction and acid precipitation method, membrane filtration method, macroporous resin adsorption method and polyamide elution method. Among them, the filtration method with preferred adsorption membrane and macroporous resin method are simple and feasible with lower cost to purify the total flavonoids. Although the extraction and purification methods had beenimproved in a certain de-gree, the more effective ways need to be developed to further enhance the extracting effect and increase the contents of total flavonoids after purification.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P136-139)【关键词】沙棘叶;总黄酮;提取纯化【作者】曾圣雅;周吉银【作者单位】第三军医大学第二附属医院国家药物临床试验机构，重庆 400037;第三军医大学第二附属医院国家药物临床试验机构，重庆 400037【正文语种】中文【中图分类】R284.2沙棘(Hippophae rhamnoides L.)又名醋柳、酸刺，为胡颓子科植物沙棘属的一种野生浆果植物。
沙棘黄酮提取进展_彭游
天然产物研究与开发Nat Prod Res Dev 2012，24:562-567，468文章编号:1001-6880(2012)04-0562-07收稿日期:2010-07-01接受日期:2010-09-06基金项目:国家自然科学基金(81160412);江西省自然科学基金(2010GZN0106);江西省教育厅科技项目(GJJ11626)*通讯作者E-mail :trihydracid@126．com沙棘黄酮提取进展彭游1，2*，汤明1，胡小铭1，邓泽元21九江学院应用化学研究所，九江332005;2南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，南昌330047摘要:沙棘黄酮是食药两用植物沙棘主要的保健与药用成分，具有重要的生理活性，能够清除体内的自由基，防治心血管疾病和抗衰老的作用。
本文概述了国内外对沙棘资源的开发利用研究状况，综述了沙棘黄酮类化合物提取方法的最新研究进展，为充分利用沙棘资源和开发沙棘黄酮提供科学研究基础。
关键词:沙棘;黄酮类化合物;提取中图分类号:Q946．91;R284．2文献标识码:AAdvances in Extraction of Flavonoids in SeabuckthornPENG You 1，2*，TANG Ming 1，HU Xiao-ming 1，DENG Ze-yuan 21Institute of Applied Chemistry ，Jiujiang University ，JiuJiang 332005，China ;2Key Laboratory of Food Science of Ministry of Education ，Nanchang University ，Nanchang 330047Abstract :Seabuckthorn flavonoids are a major healthcare and pharmaceutical ingredients of seabuckthorn．They have im-portant physiological activities that can remove free radicals ，treat cardiovascular disease ，and be anti-aging．To provide scientific basis for utilizing of sea-buckthorn resources and exploration of seabuckthorn flavonoids ，an overview of sea buckthorn flavonoids extraction of the latest research advances was completed in this paper．Key words :seabuckthorn ;ketone category compound ;extraction沙棘(Hippophae rhamnoides Linn )是胡颓子科(Elaeagnaceae )多年生落叶乔木或灌木，能防风固沙、保持水分和改良土壤，具有优良的生态效益。
不同提取方法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较
不同提取方法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较目的考察不同提取方法对生、制骨碎补中总黄酮提取效果的影响。
方法分别采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法对骨碎补生品和砂烫品进行提取，通过紫外-可见分光光度（UV-Vis）法检测总黄酮的含量。
结果回流提取法测得的总黄酮含量最高。
结论骨碎补中总黄酮的提取方法以回流提取法为佳。
标签：骨碎补；总黄酮；提取方法骨碎补是较常用中药，具有补肾强骨、养伤止痛之功效，用于肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨伤折等症[1]。
其活性成分是以柚皮苷为主的二氢黄酮类化合物[2]。
笔者采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法3种方法提取生、制骨碎补中总黄酮的含量，以比较不同提取方法对总黄酮提出量的影响。
1实验材料1.1仪器752紫外分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。
1.2药品骨碎补药材（购于亳州市药材总公司第二中药批发部）；骨碎补生品和砂烫品均按《中国药典》一部方法制备[1]。
柚皮苷（批号110722-201312，购于中国药品生物制品检定所）；甲醇为AR级。
2方法与结果2.1样品提取方法2.1.1超声提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL，超声提取1 h。
提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至100 mL。
2.1.2索氏提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，置于索氏提取器中，加80 mL甲醇，抽提1 h，将提取液转移至100 mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度。
2.1.3回流提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL水浴回流提取1 h，提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。
2.2总黄酮含量测定2.2.1供试品溶液的制备精密吸取上述三种提取方法提取液各1 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作为供试品溶液。
沙棘汁总黄酮测定方法的对比分析
沙棘汁总黄酮测定方法的对比分析SUN Xue-jiao;SHI Lin;ZHANG Xuan;MENG Xian-jun;YAN Ting-cai【摘要】为确立适合沙棘汁总黄酮测定的方法,更好地开发沙棘汁的营养功效,以沙棘汁为试验材料,研究沙棘汁总黄酮NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法、AlCl3-CH4O显色法以及紫外分光光度法3种检测方法的准确度与加标回收率,并采用高效液相法对检测结果进行验证,找出最佳方法.结果表明:NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色法、AlCl3-CH4O显色法以及紫外分光光度法检测波长分别为510,420和350nm.芦丁可作为3种检测方法的标准品.在浓度范围内,每个方法的标准曲线线性关系良好,相关系数高;测出的沙棘汁总黄酮含量分别为1.19,0.42和2.47mg·mL-1,RSD值分别为7％,25％和7％,加标回收率平均值分别为97％,147％和99.6％.本试验确立的高效液相色谱条件,可以较好地分离芦丁、槲皮素、异鼠李素3种对照品;沙棘汁中分离出多个黄酮组分,黄酮苷元在沙棘中相对含量较少,大部分以黄酮糖苷形式存在.芦丁可作为高效液相法的标准品,标准曲线的相关系数R2为0.9999,浓度在0～160μg·mL-1时存在良好的线性关系,测定沙棘汁中总黄酮含量为2.49mg·mL-1.可见,NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法、AlCl3-CH4O显色法测定沙棘汁总黄酮的结果准确度较低,与高效液相验证结果比较偏差较大,都在50％以上,且需要额外添加化学试剂;紫外分光光度法结果准确度高,偏差只有1％,该方法无需额外添加化学试剂,对环境污染少,操作简便,是测定沙棘汁总黄酮含量的理想方法,该方法为沙棘总黄酮测定与功能性食品开发提供一定参考.【期刊名称】《沈阳农业大学学报》【年(卷),期】2019(050)001【总页数】8页(P120-127)【关键词】沙棘汁;总黄酮;检测方法;显色法;紫外法【作者】SUN Xue-jiao;SHI Lin;ZHANG Xuan;MENG Xian-jun;YAN Ting-cai 【作者单位】;;;;【正文语种】中文【中图分类】S793.678沙棘（Hippophae rhamnoides L.）是胡颓子科（Elaeagnaceae）酸刺属灌木[1]。
不同提取方法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较
样 品（ 批号 ： １ ４ ０ ３ １ １ ） 研细， 取约 １ ． ０ ｇ ， 精密称定 ， 精 密加入 阿 魏酸对 照品适量 ， 制成 各 自的供试 品溶液 ， 依法测 定 ， 计算加 样 回收率 。结果见表 １ 。
表１ 加 样 回 收 率试 验 结 果
曾考察 了乙酸乙酯萃 取 １ 次， 萃取 ２次 ， 萃取 ３次 ， 萃取 ４次 ， 萃取 ５次 ， 结果表明 ， 萃取 ４次 ， 与乙酸乙酯萃取 ５次 ， 效 果相 当， 为 了节省资源 ， 简单方便 ， 选择乙酸 乙酯萃 取 ４次 ， 同时对
乙酸乙酯 每 次 萃 取 用 量 做 了 比较 ， 分别每次 １ ０ ｍ Ｌ ， 每 次 １ ５ ｍ Ｌ， 每次 ２ ０ ｍＬ ， 每次 ２ ５ ｍＬ ， 结果表明 ， 每次 １ ５ ｍ Ｌ， 后含量 不再增加 ， 故选择乙酸乙酯萃取 ， 每次 １ ５ ｍ Ｌ 。 参 考文献 ：
２ ０ １ ６ 年第 ３ ７ 卷第１ １ 期
云 南 中 医 中 药 杂 志
７ ５
不 同提 取 方 法对 骨碎 补 中 总黄 酮 含 量 的 影 响 比较
张 琳 ，周 润天 ，李 兴华 （ １ ．中 国药科 大 学 中药学院 ，江 苏 南京 ２ １ １ １ ９ ８ ；２ ．南京 第 １ ３中学 ，江 苏 南京 ２ １ ０ ０ ０ ８ ）
０ １ ４， １ １： ６ ７ ．
［ ４ ］ 宋兴发 ， 刘俊超 ． Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 法测定复方调经糖浆中阿魏酸 的含量 ［ Ｊ ］ ．
沙棘不同部位总黄酮含量的比较研究
沙棘不同部位总黄酮含量的比较研究
邢金香
【期刊名称】《山西林业科技》
【年(卷),期】2018(047)003
【摘要】为了研究沙棘不同部位总黄酮含量的差异,以山西省右玉县沙棘为原料,采用乙醇回流法制备黄酮提取液,采用分光光度法测定沙棘不同部位总黄酮含量.试验结果表明,沙棘叶中总黄酮含量最高,沙棘叶、果肉、全果渣、果皮、籽中的总黄酮含量分别为2.24％,0.95％,0.89％,0.51％,0.31％;叶中总黄酮含量分别是果肉、全果渣、果皮、籽的2.36倍、2.52倍、4.39倍、7.23倍.因此,从沙棘叶中提取黄酮,黄酮含量高、成本低,不与其它加工争原料,可为沙棘全株加工利用提供广阔的前景.【总页数】2页(P4-5)
【作者】邢金香
【作者单位】山西省林业科学研究院,山西太原 030012;国家林业局沙棘工程技术研究中心,山西太原 030012
【正文语种】中文
【中图分类】S793.6
【相关文献】
1.青海沙棘不同部位总黄酮含量比较研究 [J], 谢久祥;林恭华;都玉蓉;巨海兰;索有瑞;张同作;
2.吴起野生沙棘不同部位总黄酮含量测定 [J], 赵文娟;马齐;陈卫锋;徐升运
3.吴起野生沙棘不同部位总黄酮含量测定 [J], 赵文娟;马齐;陈卫锋;徐升运
4.中国沙棘不同部位总黄酮含量测定初报 [J], 王军宪;常永红
5.沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较 [J], 李春英;王微;赵春建;刘晓娜;王延兵;赵博;祖元刚
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超声波提取沙棘果中的总黄酮
第三阶段：增进扩散、置换阶 段
当溶剂在细胞中溶解了大量的可溶性物质后，细 胞内溶液浓度显著提高使细胞内外出现一定的浓 度差和渗透压差，产生扩散作用，使被提取的高 浓度物质向低浓度的溶剂中扩散，
超声波会增进细胞内浓度差的扩散与溶剂流动， 提供传质的推动力，因细胞破裂，加速溶剂流动
使溶剂在药材内完全地将细胞中物质置换出来， 以提高化学成分的提取率
第二阶段：促使解吸、溶解阶段
• 溶剂进入细胞后，先必须克服细胞中各成分间的 吸附作用，以使各种成分分离开固体相溶剂中转 移，即解吸作用。超声波空化作用引起空化点周 围溶剂形成超临界状态使溶质在其中的溶解度大 大增高，由于大体积溶剂和小颗粒溶质界面之间 压力差，也增加了溶质在溶剂中的溶解度，以加 速细胞中所含成分的解吸和向溶剂中溶解过程， 促进今年初叶重所含成分浓度逐渐提高，而达到 溶解平衡，创造向外扩散的条件，强化传质速率。
相关文献
（3）超声波的振动匀化
超声波的振动匀化（Sonication）使样 品介质内各点受到的作用一致，使整个样品 萃取更均匀。
实验室用超 声波提取仪
超声波法提取中药成分中的应用
从植物药中提取其中化学成分的提取过程，就是 提取细胞内物质，所以细胞壁是影响提取速度的 壁垒之一。必须通过溶剂和植物密切接触，将溶 剂送入植物的细胞壁内促使原生质中的各种化学 成分溶解到溶剂中，以扩散出细胞外，这是一个 细胞被破碎，成分溶解的过程 利用超声波加速溶剂流动、渗透、溶解、扩散等 传质的整个过程来提高效率
（2）空化作用
超声波在液体介质中传播产生特殊的“空化效 应”，“空化效应”不断产生无数内部压力达到 上千个大气压的微气穴并不断“爆破”产生微观 上的强大冲击波作用在中药材上，使其中药材成 分物质被“轰击”逸出，并使得药材基体被不断 剥蚀，其中不属于植物结构的药效成分不断被分 离出来。加速植物有效成份的浸出提取 。
总黄酮的提取方法
总黄酮的提取方法-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异，使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1]。
这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单3、超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。
原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热，同时有利于保护热不稳定成分，省时，节能，提取率高的优点。
4、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力，从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多，一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。
目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用，因此，在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性[15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16]。
但它所需要的设备规模较大，技术要求高，投资大，安全操作要求高，难以用于较大规模的生产。
沙棘黄酮类物质提取纯化及功能活性
王萌，王子纯，黄京美，等. 沙棘黄酮类物质提取纯化及功能活性研究进展[J]. 食品工业科技，2023，44（2）：487−496. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022040134WANG Meng, WANG Zichun, HUANG Jingmei, et al. Research Progress on Extraction, Purification and Functional Activity of Seabuckthorn Flavonoids[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(2): 487−496. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022040134· 专题综述 ·沙棘黄酮类物质提取纯化及功能活性研究进展王 萌1,2，王子纯3，黄京美3，张 璐1,2，高 铭1,2，丁方莉1,2，王 晴1,2，苑 鹏1,2，段盛林1,2，姜 慧4，王永霞5，谭志超6，柳 嘉1,2,*（1.中国食品发酵工业研究院有限公司，北京 100015；2.功能主食创制与慢病营养干预北京市重点实验室，北京 100015；3.北京林业大学生物科学与技术学院，北京 100083；4.北京联合大学旅游学院，北京 100101；5.河北工程大学生命科学与食品工程学院，河北邯郸 056038；6.张北宝得康食品有限公司，河北张家口 076450）摘 要：沙棘作为药食同源的植物，其主要的功能性成分为黄酮类物质，是优质的黄酮来源。
本文归纳整理了已发表的相关文献资料，对沙棘黄酮类物质提取纯化方法的原理及特点、结构及检测方法进行了对比分析，介绍了沙棘黄酮类物质的代谢特征，并从调节肠道微生态的角度阐述了沙棘黄酮抗病毒、抗炎、保护肝脏、改善肥胖和降血糖等多种生理功能的作用机制。
【doc】沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较
沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较第25卷第4期)I_25No.4植物研究BULLETINOFBOTANICALRESEARCH2005年10月Oct.,2005沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较李春英王微赵春建刘晓娜王延兵赵博祖元刚(东北林,大学森林植物生态学教育部再点实验室,哈尔滨150040)摘要考察了引种于俄罗斯的大果沙棘不同部位总黄酮含量的差异.用超声提取作为沙棘总黄酮的制备方法;以芦丁为对照品,采用分光光度法作为沙棘总黄酮的测定方法.实验结果表明,沙棘叶,果肉和果皮中总黄酮含量分别为1.71%,0,76%和0.55%,叶中总黄酮含量分别是果肉和果皮的2.3倍和3.1倍,因此引种于俄罗斯的大果沙棘叶具有较大的开发价值和应用前景.关键词沙棘;总黄酮;超声提取;分光光度法Comparisonanddeterminationoftotalflavonoidsindifferentpartsof HippophaerhamnoidesLIChun--YingW ANGWeiZHAOChun--JianLIUXiao??NaW ANGY an??BingZHA0BoZUYuan—Gang(KeyLaborato~ofForestry.PlantEcolo~,MinistryofEducation,NortheastForestryUniver sity,Harbin150040) AbstractThecontentdistributionoftotalflavonoidsindifferentpartsofHippophaerhamnoid esL.fromRussiawasinvestigated.Thesamplepretreatmentprocessinvolvedultrasonicextraction.Th etotalfla—vonoidsweredeterminedbyspectrophotometry,rutinascontrolsample.Theexperimentres ultsshowedthatthecontentsoftotalflavonoidsinleaf.pulpandpericarpwererespectively1.71%.0.76%a nd0.55%,thatthemeanscontentoftotalflavonoidsinleafis2.3and3.1timeshigherthanthatinpu lpandpericarp.TherebytheleafofHippophaerhamnoidesL.fromRussiahasvaluetobedevelo pedandused.KeywordsHippophaerhamnoMesL.;totalflavonoids;ultrasonicextraction;speetrophoto metry沙棘(HippophaerhamnoidesI.)为胡颓子科(Elaeagnaceae)植物,落叶灌木,产于欧亚两洲.沙棘不仅是我国西部生态治理的优选植物,而且具有很高的食用价值.随着人们认识到沙棘的神奇疗效,以及它"绿色",天然的属性,开发沙棘资源成为世界关注的研究课题,国内外对沙棘属植物中富含的多种生物活性物质作了大量的研究,以沙棘为主要原料研制的产品有:沙棘饮料,沙棘油,沙棘酒,沙棘食品等.黄酮类化合物是沙棘中非常晕要的生物活性成分,它对于沙棘的质量控制有重要的意义.沙棘整株的各部位都含有黄酮类化合物,但各部位总黄酮含量均存在较大的差异.所以,测定沙棘不同部位的总黄酮显得尤为重要.目前,国内研究较多的是中国沙棘,对从国外引进的沙棘品种研究的较少.近年来,超声技术在植物有效成分提取方面已显示出巨大的优势.本研究以引种于俄罗斯的大果沙棘为原料,超声提取样品中的沙棘总黄酮,分光光度法对沙棘不同部位(叶,果肉和果皮)中的总黄酮含量进行了比较分析,旨在为沙棘资源琏金项I』:科技科研条仆丌绒改造』!j!Ii(J(一2004-09):新世纪优秀人才支持计划项}I(NCET-04-0316)筇一作符新介:李存炎(1976一),女,博{研究,从事天然产物研究工作通汛f1者Authorfor(.OlTesponden(?eE-mail:*************.en收稿¨期:2005—01—17454植物研究25卷的综合利用和国内引种俄罗斯大果沙棘提供科学依据..1实验部分1.1仪器,试剂及原料UV一4060紫外一可见分光光度计(AmershamPharmaciaBiotech,瑞典)BS2lOS电子天平(德国Sa~orius公司);KQ一250DB型超声波清洗仪(昆山市超声波仪器有限责任公司).95%乙醇(分析纯);三氯化铝(分析纯);芦丁对照品(98%,购于中囝药品牛物制品检定所).引种于俄罗斯的大果沙棘2004年8月中旬采自黑龙江省孙吴县大河厂I林场1.2实验方法1.2.1样品溶液制备沙棘叶,果肉和果皮60℃烘干,粉碎,过60目筛.精确称取沙棘叶,果肉和果皮粉2.0g,加30mL85%乙醇静止浸泡2hJS-,按下面的超声方法提取:超声时间25min;超声温度45℃;超声频率40KHz.提取液过滤,定容,待测.1.2.2对照品溶液及试剂的配制芦丁对照品储备液配制:精密称取105℃真空干燥至恒重的芦丁对照品0.0025g,加无水乙醇溶解后定容至5mL容量瓶.三氯化铝储备液配制:精密称取三氯化铝5.0000g,加无水乙醇溶解后定容至lO0mL容量瓶.1.2.3标准工作曲线的建立吸取芦丁对照品储备液lO0,200,300,400,8昌七星尝A200.00300.O0400.O0500.O06OO.O0波长^/nm500,600I,分别置于10mL容量瓶中,向各容量瓶中分别加三氯化铝储备液lmL,用无水乙醇定容至刻度,摇匀,静置8min,以相应浓度的未加三氯化铝储备液的芦丁对照品溶液为空白,于430nm处测定吸光度.以芦丁浓度为横坐标,吸光度为纵坐标进行拟合,得回归方程为:Y:39.566x一0.0162芦丁浓度在0.05～0.30mg?mL范围内符合朗伯一比尔定律,相关系数r=0.9976.2结果与讨论2.1分析方法的选择2.1.1测定波长的选择精确称取芦丁对照品适量,用无水乙醇溶液制成0.5mg?mL..的溶液.另精确称取沙棘叶总黄酮样品适量,同法制成乙醇溶液.取上述2种溶液,按1.2.3项下的方法,分别在200～600nm波长范围进行吸收光谱扫描.光谱图表明,对照品溶液及样品溶液与三氯化铝一乙醇溶液反应生成的螯合物在277nm和430nm处均有吸收峰.在277nm测定时,反应液吸光度测定值不稳定,因而选择430nm波长为沙棘叶总黄酮的测定波长.对照品及样品的紫外一可见光谱扫描见图l.2.1.2三氯化铝用量的选择吸取芦丁对照品溶液2.0mL,分别加入0.40,0.60,0.80,1.00,1.20,1.40,1.60mL三氯化铝储备液,8rain后按1.2.3项下的方法分别测定其吸光度(A)值.从A值分析,三氯化铝溶液的用量在lmL以上时,其值达到稳定,相对误差为0.9%.8量尝—B200.O0300.O0400.O0500.O06OO.00波长^/nm1对照品(A)和样品(B)的紫外一可见吸收光谱Fig.1uV—Visibleabsorbspectrumofcontrolsample(A)andsample(B)4期,英等:沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较4550.6oo0.580董0.5600.5400.520反应时问reactiontime(min)2反』时时吸光度的影响Fig.2Effectofrea('liontimeona1)SOl'bency所以选择二氯化铝溶液的最佳用量为1mL.2.1.3色稳定时问的选择为了考察沙棘11黄酮与j|氯化铝形成有色螯合物反应完全,达到稳定时所需的时间,在14rain内,每问隔2nlin埘芦丁对照r门1H及样品的吸光度值进行测定,结果见图2.从图2可以看出,在反应8rain后,芦丁和沙棘叶总黄酮与铝盐生成的螯合物的吸光度趋于稳定,完全可以用作定量分析,所以选择8rain为显色稳定时间.2.2回收率和精密度试验精密称取已测含量的沙棘叶,果肉和果皮的提取液若干份,每份IO0mL,加人一定量芦丁对照品,混匀后,分光光度法测定含量,计算回收率,结果表明,叶,果肉和果皮提取液样品中黄酮的平均回收率分别为98.17%,99.83%和100.28%,相对标准偏差分别为1.08,1.27和2.85%.本方法所测沙棘不同部位总黄酮的含量,相对标准偏差较小,结果准确度高.2.3提取方法对沙棘总黄酮提取率的影响以叶为原料,应用不同提取方法对沙棘叶总黄酮进行了提取,根据回归方程计算出总黄酮的提取率,结果见表1.表1不同样品制备方法对沙棘叶总黄酮提取率的影响(n=3)Table1EffectofdifM'enlsampleplepm'atlonmethodsonyieldoftotalflavonoidsintheH.rha mnoidesleaves(n=3)表2沙棘不同部位总黄酮含量的测定结果(n=3)Table21)eterminati()noftotalflavonoidsindifferentpansofHrhamnoideI..(n=3)均含;Cont~ntf%1卡u对标准偏差RSDf%)Iar果肉Pulp果戍Pericarp1.721.7l1.7l1.690.760.75().760.780.58O.56().560.55从表1可以看出,应用回流提取法对沙棘叶总黄酮的提取率明显偏低,超声提取法与索氏提取法对沙棘叶总黄酮的提取率均较高,考虑到超声提取所用时间短,溶剂用量少,操作步骤简单,故选择超声法作为样品溶液的制备方法.2.4样品的测定取沙棘叶,果肉和果皮若干份,按1.2.I项下的方法提取总黄酮,按1.2.3项下的方法测定提取液的吸光度,根据回归方程计算出总黄酮的含量,每个样品重复3次测定,结果见表2.从表2的结果可以看出,叶中总黄酮含量最高,分别是果肉,果皮的2.3倍和3.I倍,沙棘叶,果肉和果皮中总黄酮的相对标准偏差均较小,测定结果可靠3结论目前我国对沙棘的研究主要集中在对果的开456植物研究25卷发和利用,而对叶的利用率很低,本文通过对引种于俄罗斯的大果沙棘不同部位总黄酮含量的检测,结果表明,引种于俄罗斯的大果沙棘叶中总黄酮含量较高,如果能利用叶作为原料,进行化工及保健品的开发,沙棘的应用前景将更加广泛.本研究的结果不但为俄罗斯大果沙棘叶的综合利用开创了新思路而且为我国引种俄罗斯大果沙棘提供了科学依据.致谢实验中使用的沙棘原料由黑龙江省孙吴县林业局提供,本实验室聂绍荃教授在定方而给予了帮助,在此深表谢意!参考文献1.RousiA.ThegenusHippophae1.Ataxonomicstudy.Annals BotanyFennici,1971,8:177～2272.SGeetha,MSaiRam,VSingh,eta1.Anti—oxidantandim—munomodulatorypropertiesofseabuckthorn(Hippophaerh—amnoides)anin—vitrostudy.JournalofEthnopharmacology, 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四种提取方法对沙棘总黄酮提取的影响
作者：田永刚张沙莎
来源：《科学与财富》2016年第20期
摘要：目的比较超声波、闪式、微波和回流四种提取法对沙棘总黄酮提取的影响。
方法采用超声波、闪式、微波和回流四种提取法对沙棘籽中黄酮进行提取；采用紫外分光光度法，检测波长为510nm，测定沙棘籽各提取液中的OD值，计算黄酮含量并进行比较。
结果超声波、闪式、微波和回流提取液中的总黄酮含量分别是9.8，14.16，8.8，10.39mg/g。
结论实验结果表明，闪式提取法对沙棘总黄酮的提取率最高，略优于回流提取法，超声提取法次之，微波提取法最低。
关键词：沙棘籽；黄酮；提取法；比较
沙棘总黄酮对心脏功能、呼吸系统疾病、消化系统疾病、烧伤、烫伤和癌症等均有较好作用。
为了充分提取和利用沙棘黄酮，本文以沙棘为研究对象，分别采用超声波、闪式、微波和回流提取法提取沙棘籽中的黄酮，并将四种方法对黄酮的提取率作一比较，筛选出最好的提取方法，为沙棘黄酮的合理利用奠定良好理论基础。
1 仪器、材料和试剂
JHBE-50S闪式提取控制器（北京金鼎科技发展有限公司）；UV757CRT紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；FA2004电子分析天平（上海恒平科学仪器有限公司；超声波清洗器（昆明超声仪有限公司）。
芦丁对照品（中国药品生物制品鉴定所，纯度大于98%）；沙棘购买于佳木斯市宝泰医药公司，经佳木斯大学药学院宗希明教授鉴定为沙棘；所用试剂为分析纯。
2 方法
2.1 黄酮的含量测定
2.1.1 对照品溶液的配制。
精确称取芦丁标准品19.98mg，加入30mL乙醇使其溶解，冷却后定容至100mL，摇匀，即得0.1998mg/mL的芦丁标准溶液。
2.1.2 供试品溶液的配制。
精确称量沙棘干燥药材10.00g，按不同方法提取后得提取液，加入适量乙醇溶解并定容至500mL，摇匀，即得。
2.1.3 紫外显色方法。
取待测溶液于25mL的容量瓶中，加入10%的NaNO2溶液1.0mL，摇匀，室温放置6min；加入10%的Al（NO3）3溶液1.0mL，摇匀，室温放置6min；再加入5%的NaOH溶液10.0mL，摇匀，室温放置15min；加入乙醇定容至25mL容量瓶中，摇匀即可。
2.1.4 最大吸收波长的确定。
精密移取
3.0mL芦丁标准溶液于25mL的容量瓶中，按2.1.3项下方法显色，利用紫外可见分光光度计，在波长为450-600nm区间扫描，确定最大吸收波长为510nm。
2.1.5标准曲线的绘制。
精密移取标准溶液0mL、1.0mL、2.0mL、
3.0mL、
4.0mL、
5.0mL 分别置于25mL容量瓶中，加入乙醇12.0mL，11.0mL，10.0mL，9.0mL，8.0mL，7.0mL后，按2.1.3项下方法显色，用紫外可见分光光度计在510nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线，通过计算得到回归方程。
2.2 沙棘籽中黄酮的提取
2.2.1 超声波提取法。
精密称取10.02g沙棘籽粉末于锥形瓶中，加入60%乙醇，料液比1：15（g：mL），超声提取时间30min，提取温度70℃-80℃，超声功率600W，提取2次，合并滤液，定容于500mL容量瓶中，备用。
2.2.2 闪式提取法。
精密称取10.11g沙棘籽粉末置于闪式提取器，加入80%乙醇，料液比1：40（g：mL），闪式提取40s，2次，将提取液定容于500mL容量瓶中，备用。
2.2.3 微波提取法。
精密称取10.07g沙棘籽粉末置于微波炉专用杯中，加入75%乙醇浸泡10min，料液比为1：25（g：mL），微波功率为400W，提取10min，将提取液定容于500mL 容量瓶中，备用。
2.2.4 回流提取法。
精密称取10.20g沙棘籽，置于圆底烧瓶中，加入70%乙醇，料液比为1：40（g：mL），提取温度为90℃，提取时间为100min，提取2次，合并二次提取液后，定容于500mL容量瓶中，备用。
3 结果
3.1 标准曲线及回归方程
按照2.1.5项下方法绘制标准曲线图1，通过计算得到回归方程y=0.5271x-0.0125，相关系数R2=0.9913。
参照该曲线计算供试液中黄酮的含量。
3.2 各提取液中黄酮含量比较
采用4种不同方法对沙棘总黄酮进行提取，所得提取液经过紫外分光光度法检测并依据回归方程计算得到各提取液总黄酮含量。
测定结果见表1。
四种提取方法闪式提取法提取率最高，其次是回流提取法，再次为超声提取，最次为微博提取法。
4 讨论
本实验分别考察了超声、闪式、微波和回流提取法对沙棘总黄酮的提取影响，总黄酮含量分别是9.8mg/g，14.16mg/g，8.8mg/g和10.39mg/g。
实验结果表明，闪式提取法略优于回流提取法，超声提取法次之，微波提取法最低。
闪式提取法为黄酮的提取提供了一种高效、简便易操作的新方法，吸收了传统的粉碎、搅拌、振动、浸渍、萃取等技术的优点，大大缩短了提取时间，同时最大程度避免了对有效成分的破坏，是一种对有效成分快速、强化提取的方法，具有提取效率高、提取溶剂用量少、常温操作及环保等优点；回流法提取黄酮操作复杂、耗时多，但是适合大量提取；微波和超声提取技术，因其自身的优点越来越受到重视。
综上所述，提取率并不能作为鉴定最佳提取方法的唯一标准，若需要在实验室进行快速、高效的提取，可以选用闪式提取法，但是其很难满足工业生产需求，可以考虑选用回流提取法。
参考文献
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