酒中甲醇等测定.
自酿葡萄酒甲醇测定
自酿葡萄酒中甲醇含量测定一、实验目的(一)依据食品检验工国家职业标准（中.高级）要求，针对甲醇的测定，通过测定葡萄酒中甲醇含量，学习和领会品红-亚硫酸比色法测定甲醇的操作要点及操作条件的选择。
(二)以甲醇测定学习为主，延伸至学习苯丙锕呵黄曲霉素的测定。
二、实验原理甲醇系无色透明。
具有高度挥发性的液体，略有酒精味，易于水，醚及大多数有机溶剂混融。
其来源为原料和辅料果胶质内甲基酚分解而成。
甲醇进入人体后分解缓慢，有蓄积作用，少量甲醇也容易中毒，一般饮用后数小时即引起昏晕、沉睡、全身无力、头痛、视觉模糊、恶心呕吐、腹痛、呼吸困难，随即譚忘和知觉丧失，数小时至数日后失明。
（GB2757-2012）规定以粮谷类为原料的酒，甲醇不得超过0.6g/L，其他配制酒类不得超过2.0g/L。
三、实验仪器：紫外可见分光光度计四、实验试剂：(1)高锰酸钾一磷酸溶液：称取39高锰酸钾，加入15rnl磷酸(85％)与70ml水的混合液中，溶解后加水至lOOml，贮与棕色瓶内，防止氧化力下降，保存时间不宜过长。
(2)草酸一硫酸溶液：称取59无水草酸(H2C204)或79含2分子结晶水的草酸(H2C204·2H20)，溶与硫酸(1+1)中至lOOml。
(3)品红一亚硫酸溶液：称取0．19碱性品红研细后，分次加入60rnl80℃的水，边加入水边研磨使其溶解，用滴管吸取上层溶液滤于lOOml容量瓶中冷却后加10“亚硫酸钠溶液(100几)，lml盐酸，再加水至刻度，充分混匀，放置过夜，如溶液有颜色，可加少量活性炭搅拌后过滤，贮于棕色瓶中，置暗处保存，溶液显红色时应弃去重新配制。
(4)甲醇标准溶液：称取1．0009甲醇，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10．0mg甲醇，置低温保存。
(5)甲醇标准使用液：吸取10．0“甲醇标准溶液置于lOOml容量瓶中，加水稀释至刻度，再取25．Oral稀释液置于50ml容量瓶中，加水至刻度，该溶液每毫升相当于0．50mg甲醇。
酒精中甲醇含量的测定
《生物产品的分析与检验技术》酒精中甲醇含量的测定酒精中甲醇含量的测定工业酒精主要来源为化工产品。
二是产品标准不同。
在主要危害指标方面，食用酒精的甲醇含量要求小于或等于2-150mg/L、工业酒精要求小于或等于800-8000mg/L。
甲醇在体内有积蓄作用，不易排出体外，发生急性中毒时可使人出现头痛、恶心、胃部疼痛、视力模糊等中毒症状，继续发展可出现呼吸困难、昏迷甚至死亡。
酒精中甲醇含量的测定（一）气相色谱法测甲醇含量1.原理根据甲醇等被测定组分在气液两相中具有不同的分配系数于毛细管色谱柱中经气液两相作用先后从色谱柱中流出在氢火焰中电离检测内标法定量。
（一）气相色谱法测甲醇含量2.试剂与仪器1.试剂甲醇（色谱纯）、基准乙醇、正丁醇（色谱纯）2.仪器气相色谱仪：采用氢火焰离子化检测器，配有毛细管色谱柱连续装置。
10μL微量进样器，100ml容量瓶，0.0001 g电子天平。
（一）气相色谱法测甲醇含量3.操作步骤（1）色谱柱的选择色谱柱的选择：PEG－20M固定液为聚乙二醇20M系列的交联石英毛细管色谱柱，用前应在200℃下充分老化。
内径0.25 mm，膜厚0.25μm，柱长25~30m。
色谱条件：载气（高纯度氮纯度应优于99.9995%），流速为为0.5~1.0mL/min.分流比为:20﹕1～100﹕1，尾吹气约为30 mL/min。
柱温：初始柱温为70℃，保持3 min，然后以5℃/min的速度程序升温至100℃，以使用甲醇及内标峰与食用酒精中其他组分的拖尾峰（tailing peak）获得完全分离为准。
（一）气相色谱法测甲醇含量（2）样品准备：基准乙醇：经毛细管气相色谱测定，其中甲醇、杂醇油、醛等组分含量低于1mg/L的高纯乙醇为基准乙醇。
甲醇标准溶液1g/L：作标样用。
准确称取0.100 g甲醇（色谱醇）试剂，将其定量移入100 mL容量瓶中，用基准乙醇稀释至刻度混匀。
正丁醇溶液1g/L：作内标用。
酒中甲醇的测定方法
酒中甲醇的测定方法
酒中甲醇的测定主要有以下几种方法：
1. 气相色谱法：将酒经过蒸馏提取甲醇，然后使用气相色谱仪进行分析测定，准确性高。
2. 液相色谱法：使用高效液相色谱仪进行测定，通过甲醇在固定相上的保留时间和峰面积进行定量分析。
3. 醇脱氢酶法：使用醇脱氢酶将酒中的甲醇氧化为甲醛，然后使用比色法或高效液相色谱法进行分析。
这种方法操作简单，灵敏度高。
4. 检测试纸法：使用特定的试纸或试剂，在酒中加入后，如果出现颜色变化，则说明含有甲醇。
需要注意的是，以上方法仅是对酒中甲醇进行定性和定量分析的常用方法，具体选择哪种方法还需根据实际情况和检测要求进行选择。
同时，在进行甲醇测定时，需要注意使用适当的防护措施，确保个人安全。
白酒中甲醇的测定
2.2主要试剂 磷酸、碱性品红、甲醇，高锰酸钾、硫酸、草酸、酒精 2.3实验方法 品红亚硫酸法。
2.4原理 氧化 除去有色物质 与品红-亚硫酸作用
3.1
最佳吸收波长的选择
图1 最大吸收峰
3.2改进前后的标准曲线
表1甲醇含量与吸光度的关系 表2甲醇含量与吸光度的关系
图2 改进前标准曲线
图3改进后的标准曲线
结
本实验主要研究了国家标准方法--亚硫酸品红法测定 白酒中甲醇的含量，但总体来说结果不够准确（线形较 差），说明这个方法测定影响因素较多，有待改进。经过 不断的摸索，知道草酸-硫酸的用量会对曲线有较大的影 响，由此，我们就改变草酸-硫酸用量，找出其最佳用量， 确定了最佳实验条件，做出了线性比改进前好的标准曲线， 测定结果可靠。 经过对品红亚硫酸法的改进，使得标准曲线线性关系 良好，精密度和灵敏度都大为提高，对样品测定结果较为 准确。
白酒中甲醇的测定
1 本课题研究的意义 通过实验严格控制白酒中甲醇的含量, 保护人民群众的生命安全是一项十分重要 的工作. 如何对白酒中微量的甲醇进行测 定与检定,是分析工作者既紧迫又艰难的任 务，因为食品质量的控制与保障人民的健 康与我们有着密切的关系。
2.1主要仪器 岛津UV-2401PC紫外分光光度计（日本岛津公司）
谢 谢！
3.4
样品的测定
表3 五种白酒中甲醇含量的测定 (mg/3mL)
酒样 北京二锅 头 九江双蒸 两情烧酒 湘泉 茅台 1次 0.1950 0.1061 0.3762 0.8649 0.1667 2次 0.1957 0.1061 0.3763 0.8651 0.1666 3次 0.1952 0.1062 0.3766 0.8655 0.1674 4次 0.1960 0.1063 0.3770 0.8651 0.1671 平均值 0.1954 0.1061 0.3765 0.8639 0.1669 标准偏差 4.55×10-4 1.29×10-4 3.19×10-4 1.47×10-4 3.74×10-4 变异系数% 0.23 0.12 0.08 0.17 0.22
酒中甲醇含量的测定方法[权威资料]
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酒中甲醇含量的测定方法摘要白酒中甲醇含量的测定方法包括比色法（分光光度法）、填充柱GC法、毛细管柱GC法和高效液相色谱法。
关键词乙醇甲醇鉴定O657. 3 A白酒是中国特有的一种蒸馏酒。
由淀粉或糖质原料制成酒醅或发酵醪经蒸馏而得。
在我国需求量大，是常见的饮品，因此区分真假酒对于我们来说有重要意义。
假酒中含有最主要的有害物质是甲醇。
甲醇对人体有强烈毒性，因为甲醇在人体新陈代谢中会氧化成比甲醇毒性更强的甲醛和甲酸（蚁酸），因此饮用含有甲醇的酒可引致失明、肝病、甚至死亡。
误饮4毫升以上就会出现中毒症状，超过10毫升即可因对视神经的永久破坏而导致失明，30毫升已能导致死亡。
下面介绍几种测定甲醇含量的方法。
1比色法（分光光度法）比色法（colorimetry）是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。
比色法测定甲醇含量的原理是甲醇经氧化成甲醛后，与品红亚硫酸作用生成蓝紫色化合物，与标准系列比较定量。
操作过程：取适当样品置于25 ml具塞比色管中。
吸取0.00，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml，甲醇标准使用液（相当于0.0，0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg甲醇），分别置于25 ml具塞比色管中，各加0.5ml无甲醇乙醇（体积分60%）。
于试样管中及标准管中各加入水至5 ml，再依次各加2 ml高锰酸钾―磷酸溶液，混匀，放置10min，各加2 ml草酸―硫酸溶液，混匀使之褪色，再各加5ml亚硫酸品红溶液，混匀，于20～25℃静置30min，用2cm比色杯，于波长59处测吸光度，绘制标准曲线比较。
2填充柱GC法该法即目前我国采用的GB/T5009.48―2003 《蒸馏酒和配制酒卫生标准分析方法》它利用甲醇在氢火焰中的化学电离进行检测。
根据峰高与标准比较测量。
操作过程：甲醇标准溶液：吸取2ml色谱纯甲醇试剂于100ml容量瓶中，用电子天平准确称量，用60%vol四无酒精定容，并计算其质量浓度，单位为mg/L。
气相色谱法测定白酒中的甲醇
气相色谱法测定白酒中的甲醇主讲教师：徐世娟地点：理学院C213实验名称：气相色谱法测定白酒中的甲醇实验目的：1.了解并初步掌握气相色谱仪的基本原理与构造；2.了解气相色谱仪常用的氢火焰检测器工作原理和使用范围；3.掌握工作曲线的配制方法；4.学习气相色谱法分离化合物和检测化合物的含量的方法；5.通过测定对样品的定性、定量测定，初步掌握获得气相色谱谱图和数据的一般操作程序与技术；6.学习外标定量方法。
实验试剂：甲醇（色谱纯）、无水乙醇（分析纯，500mL）、无水硫酸钠（分析纯，500mL），白酒样品（学生可以自己准备、教师准备工业酒精和某一品牌白酒）实验仪器：移液枪（5mL、1 mL）或者移液管（不同体积）、容量瓶（10mL 6个，50mL、100mL个两个），进样瓶20个，GC9790Ⅱ气相色谱仪。
仪器条件：参考教材，预做实验相结合实验要求：1、进入实验室需穿白大褂；2、不准穿拖鞋；3、进入实验前预习，写预习报告；4、进入实验室不能大声喧哗，遵守指导老师安排。
实验步骤：气相色谱法是英国生物化学家Martin等人于1952年创立的一种极为有效的分离方法，可以分离、分析复杂的多组分混合物。
由于高效能的色谱柱、高灵敏的检测器以及计算机处理技术的使用，，使其在石油化工、食品工业、生物技术、医药卫生、农副产品、环境保护等领域得到了广泛的应用。
1、气相色谱原理、结构和操作规程（包括注意事项）①气相色谱原理：待测物样品被蒸发为气体并注入到色谱分离柱柱顶，以惰性气体（指不与待测物反应的气体，只起运载蒸汽样品的作用，也称载气）将待测物样品蒸汽带入色谱柱后，由于吸附剂对每个组分的吸附能力不同，经过一定时间后，各组分在色谱柱中的运行速度也就不同。
吸附力弱的组分容易被解析下来，最先离开色谱柱进入检测器，而吸附力最强的组分最不容易被解吸下来，因此最后离开色谱柱。
所以，各组分得以在色谱柱中彼此分离，顺序进入检测器中被检测、记录下来。
气相色谱测定白酒中的甲醇
白酒中甲醇的测定一、目的要求了解气相色谱仪（火焰离子化检测器FID）的使用方法，掌握外标定量的原理，了解气相色谱法在产品质量控制中的应用。
二、基本原理在酿造白酒的过程中，不可避免地有甲醇产生。
根据国家标准（GB10343-89），食用酒精中甲醇含量应低于0.1g/L（优级）或0.6 g/L （普通级）。
利用气相色谱分析可分离、检测白酒中的甲醇含量。
利用甲醇在氢火焰中的化学电离进行检测，根据保留时间可确定试样中是否含有甲醇，有甲醇峰峰高的标准曲线，可确定试样中甲醇的含量。
三、仪器与试剂仪器气相色谱仪（带FID检测器），HP-INNOWAX （30m*0.25mm*0.25um）色谱柱，微量注射器5.0uL 试剂甲醇（色谱纯）；无水乙醇（优级纯）；无水硫酸钠甲醇标准溶液的配制精密称取色谱纯甲醇适量,用60%乙醇溶解并配制成浓度为 4 g / 100 mL的溶液。
甲醇标准使用液吸取甲醇标准溶液用 60%乙醇配成0.02、0.04、0.08、0.16 g/ 100 mL 甲醇标准溶液使用液。
无甲醇乙醇取0.30 mL 无水乙醇置于 25 mL 具塞比色管中加水至5 mL，再加2 mL高锰酸钾－磷酸溶液，混匀，放置10 min，加2 mL 草酸－硫酸溶液，混匀使之褪色，加 5 mL品红－硫酸溶液，混匀，静置0.5 h，不应显色若显色则需作以下处理，取300 mL 无水乙醇，加少许高锰酸钾蒸馏，收集馏出液，馏出液中加入硝酸银溶液( 取1g硝酸银溶于水中) 和氢氧化钠溶液( 取1.5 g 氢氧化钠溶于少量水中) 摇匀，取上清液蒸馏，弃去初馏液50 mL，收集中间馏出液约 200 mL，用酒精计测其乙醇浓度，然后加水配制成60%无甲醇乙醇溶液，取1uL进样无杂峰出现即可。
四、样品预处理方法一：将酒样取2 mL 移致离心管中加少许无水硫酸钠，充分搅拌后再重新转到另一个新的离心管中。
在3000r p m的速度离心5～10m i n左右即可达到脱水目的，要是样品量较多可以重复几次此步骤。
甲醇检测方法汇总
甲醇检测方法方法一、酒醇仪测定法适用范围：适用于蒸馏酒（又称白酒或烧酒）中甲醇急性中毒剂量的现场快速测定a既适用于80度以下蒸馏酒中甲醇含量超过1%(O%～60%范围内)或2%（60%～80%范围内）时的快速测定。
方法原理：在20℃时，不同浓度的乙醇具有固有的折光率，当甲醇存在时，折光率会随着甲醇浓度的增加而降低，下降值与甲醇的含量成正比。
按照这一现象而设计制造的酒醇含量速测仪，可快速显示出样品中酒醇的含量。
当这一含量与玻璃浮计（酒精度计）测定出的酒醇含量出现差异时，其差值即为甲醇的含量。
在20℃时，可直接定量；在非20℃时，采用与样品相当浓度的乙醇对照液进行对比定量。
检测试材：酒醇速测仪。
玻璃浮计。
乙醇对照液。
在环境温度20℃时的操作方法：用玻璃浮计测定样品的酒精度数后，再用酒醇仪测定样品的酒精度，二者的差值即为甲醇浓度。
在环境温度非2⑩℃时操作方法：1．首先用玻璃浮计测试样品的酒精度数后，可以根据换算表找到一个在20℃时配制成的与其相等的乙醇对照液，用玻璃浮计测试这一对照液是否与样品酒精度数相等或相近在±1度以内，如果超出±1度，改用临近度数的对照液再测，直至找到一个与样品酒精度数相等或相近在±1度以内的乙醇对照溶液。
2．用酒醇仪分别测试样品和选中的对照液的醇含量，如果样品读数低于对照液读数，其差值即为甲醇的百分含量。
方法二、速测盒测定法适用范围：本方法适用于蒸馏酒中微量即0. 02%以上甲醇含量的现场快速测定。
操作方法：用滴管取酒样6滴于离心管中，加入5滴A试剂氧化剂，放置5min，加入4滴B试剂还原剂，盖盖后上下振摇20次以上使溶液充分混匀，打开盖子，等溶液完全退色，加入2滴C试剂显色剂后，再加入15滴D试剂，观察管内颜色变化，3min后与对照图谱对比判断酒样中甲醇含量。
方法三：气相色谱测定甲醇含量【实验目的】学习色谱法的分离原理并熟悉色谱仪器的操作掌握色谱法保留时间定性和内标法定量的基本原理和方法了解氢火焰检测器的基本原理【实验原理】是利用试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。
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•
Hale Waihona Puke 气相色谱仪分析基本流程：样品由载气吹动 ——> 样 品经色谱柱分离——> 打印分析结果 检测器检测成分——>工作站
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测定 分别吸取标准液和样品注入色谱仪，色谱图分 析，定性和定量（以各组分色谱峰的保留时间定性、 峰高或峰面积定量）。
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三、气相色谱法测定酒中的甲醇
计算：
酒中甲醇的测定
学习重点
• 蒸馏酒和发酵酒的卫生问题 • 酒中甲醇的检验方法
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酒：含酒精饮料
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酒的分类
• 蒸馏酒：指以粮食、薯类和糖蜜为主要原料， 在固态或液态下经糊化、糖化、发酵、和蒸馏 而成的酒，通称为白酒。 • 发酵酒：指以含糖和淀粉的原料，经糖化和发 酵，但不需蒸馏而成的酒，包括啤酒、黄酒和 果酒等。 • 配制酒：指以发酵酒和蒸馏酒为酒基，经添加 可食用的辅料配制而成（也称露酒）。
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酒类的卫生要求
在酒类生产过程中，从原料选择到加工工艺 等诸环节都应达到卫生要求。
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酒的主要卫生问题
• (1) 乙醇:酒的主要成分，除了可提供热能外无其他营养 价值。乙醇主要在肝脏代谢，在其氧化过程中可抑制正 常物质的代谢。因此，经常过量饮酒的人，肝脏功能很 容易受到损害。 乙醇对人体健康的影响是多方面的，常见的是急性酒精 中毒。中毒症状与血中乙醇浓度有关。
• （5）有害金属：铅和锰
在制酒和贮存中，如蒸馏器和贮酒容 器采用不纯锡制品，酒中铅的含量可以 增高，有的酒中含铅量能达到使人中毒 的程度。我国卫生标准规定铅含量不超 过1毫克／升。
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（6）其它有害物质 • 氰化物：氢氰酸
• 霉菌毒素：黄曲霉毒素B1
• 微生物污染 • N-二甲基亚硝胺
• 轻度 肌肉运动不协调及感觉功能受损，情绪、人格与行为改变等 中度 出现恶心、呕吐、复视、供给失调等 重度 发音困难、昏迷、呼吸衰竭甚至死亡
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（2）甲醇：酒中甲醇来自原粮中的果胶，果胶主 要存在于植物的果皮、种皮、块茎等细胞间质， 它在果胶酶或酸、碱的作用下，分解为果胶酸和 甲醇。 别名木醇或木酒精，为无色透明、高度挥发， 易燃液体，主要经过呼吸道和胃肠吸收，皮肤也 可部分吸收。体内甲醇分解缓慢，有蓄积作用。
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甲醇对机体组织细胞有直接毒害作用，眼睛视 神经对其毒性尤为敏感，7～8毫升可此起失明，30～ 1 000毫升可能使人致死。急性中毒的临床表现为头 痛、恶心呕吐、胃痛和视力模糊，严重者可出现呼吸 困难、低钾血症、昏迷，甚至死亡。
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• （3）杂醇油：杂醇油是比乙醇碳链长的多种高级醇 的统称，包括正丙醇、异丁醇、异戊醇等，它们是 原料中蛋白质和糖类分解的产物。杂醇油在体内氧 化分解缓慢。 杂醇油含量多少及各种醇间的比例对白酒风味很 重要。但其毒性比乙醇大，杂醇油能抑制神经中枢， 可使神经系统充血，饮后有头痛、头晕症状，含量 高的酒常造成饮用者头痛和大醉。
Ｘ＝ hx×Ｖs ×Ｃs ×100
hs×Ｖx×1000
X:样品中甲醇含量； hx：样品中甲醇的峰高；hs：标准中甲醇的峰高；
Ｖx：样品溶液进样体积；Ｖs：标准溶液进样体积；
Ｃs：标准溶液浓度
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三、气相色谱法测定酒中的甲醇
注意事项
1. 本法最低检出限甲醇为0.008g/100ml、异丁醇 0.01g/100ml。 2. 气相色谱法的精密度优于分光光度法，分光光 度法所测定的结果为甲醇和甲醛含量之和。
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酒中甲醇、杂醇油的测定法
• 比色法用分光光度计 • 气相色谱法（GC） ：定性和定量
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三、气相色谱法测定酒中的甲醇
气相色谱法是我国测定酒中甲醇的国标第一法。 实验目的：掌握气相色谱法测定酒中甲醇的实验原理；熟 悉气相色谱仪的正确操作方法；了解气相色谱法的数据结 果分析。 实验原理：酒中的甲醇和高级醇类经色谱柱分离后，进入 火焰离子化监测器，利用醇类在火焰中的化学电离进行检 测，与标准比较，根据色谱峰的保留时间定性，峰高或峰 面积定量。
3. 严格遵守气相色谱仪的规范操作。
4.加样注入色谱仪速度要快
5.因为是以氢气为燃气，操作间不能有明火。
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讨论
1.
2.
检出结果的分析
酒中有毒有害物质主要有哪些？其主要 危害是什么？怎样才能更好地减少这些 有害物质？
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• （4）醛类：毒性比相应的醇要高，其中毒性 较大的是甲醛，甲醛毒性比甲醇高30倍，甲 醛为甲醇氧化后产物可使蛋白质变性和酶失 活。浓度在30mg/100ml时即可产生黏膜刺激 症状，出现烧灼感和呕吐等严重中毒可出现 而快呼吸，二氧化碳结合力常在30%以下， 10克可致死 。
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三、气相色谱法测定酒中的甲醇
试剂：样品：白酒；标准溶液。
仪器：气相色谱仪；微量进样器
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• 色谱条件：
色谱柱：2m×4mm，玻璃柱或不锈钢；固定相： GDX-102（60-80目）； 温度：汽化室、检测器190℃，柱温170℃；
气流速度：氢气、氮气40ml/min，空气450ml/min