转基因方法
转基因动物方法简介
转基因动物方法简介动物转基因办法简介转基因动物就是基因组中含有外源基因的动物。
它是根据预先的设计，通过细胞融合、细胞重组、遗传物质转移、染色体工程和基因工程技术将外源基因导入精子、卵细胞或受精卵，再以生殖工程技术，有可能育成转基因动物。
原核显微注射法（原核期细胞：受精卵的两个核未融合时期的细胞）目前最常用的转基因动物生产办法，又称DNA显微注射法，即通过显微操作仪将外源基因直接用注射器注入受精卵，利用外源基因整合到DNA中，发育成转基因动物。
其创始人是Jaenisch和Mintz 等。
Gordon等和Palmiter等先后通过此办法获得转基因动物。
此办法目前应用较普遍，现在的转基因动物讨论大都是在Palmiter等办法的基础上有所改进而举行的。
王敏华(1996)报道用显微注射法转移抗瘟病毒核酸酶基因，获得了转基因兔。
KrimPenfort运用体外培养胚胎再施用显微注射法获得了转基因牛这种办法的特点是外源基因的导入整合效率较高，不需要载体，直接转移目的基因。
它可以直接获得纯系（应当也不一定，如上述鱼的状况），所以试验周期短。
但需要贵重精密仪器，技术操作较难，并且外源基因的整合位点和整合的拷贝数都无法控制，易造成宿主动物基因组的插入突变，引起相应的性状转变，重则致死外源基因整合到受体基因组的时机，将打算转基因动物是否发育成嵌合体，如整合发生在第一次卵裂前，即发生在DNA合成的S期，外源基因将随染色体的分别匀称的分布到每一个细胞，得到的转基因动物是纯合体，反之，得到的将是嵌合体。
显微注射转基因的实践证实，受精卵DNA合成的S期是显微注射的相宜时机。
但因为整合需要一段时光，等目的基因整合至染色体后，受精卵早已分裂多次，故很难得到纯合体。
如鱼类在原肠胚早期才开头整合，而此时细胞已多值几千，此时转植基因在每个细胞内的整合状况不行能全都，所以第一代转基因鱼总是嵌合体。
哺乳动物受精卵的单细胞期阶段较长，还有可能得到纯合体的转基因动物。
基因编辑获得转基因植物的方法
基因编辑获得转基因植物的方法基因编辑是一种新兴的生物技术，可用于改变生物体的遗传信息以实现特定目标。
转基因植物则是在自然环境中不存在的，通过基因编辑技术将外源基因导入植物，从而赋予其新的性状或改善现有性状。
下面将介绍几种常用的基因编辑方法来获得转基因植物。
1. CRISPR/Cas9系统CRISPR/Cas9系统是一种经济高效的基因编辑技术，被广泛应用于植物基因编辑。
该系统的核心是CRISPR序列和Cas9蛋白。
CRISPR序列相当于一个导航系统，能够引导Cas9蛋白精确切割目标基因，在切割过程中可以插入或删除基因序列。
通过这种方式，可以改变植物的基因组结构，实现转基因植物的获得。
2. TALENTALEN（转录激活样效应核酸酶）是另一种常用的基因编辑技术。
TALEN是由一串DNA结合结构域（TALE）和核酸酶结构域组成的。
TALEN可以与目标基因的特定DNA序列结合，激活核酸酶结构域切割目标基因，并导致基因序列损伤。
细胞修复受损的基因序列时，通常会引入缺失、插入或替换的变异，从而引发转基因植物的出现。
3. ZFNZFN（锌指核酸酶）是一种基因编辑技术，通过改变特定蛋白质结构域的DNA结合能力来实现基因组的编辑。
ZFN是由与DNA特定序列结合的锌指蛋白和核酸酶结构域组合而成的。
类似于TALEN，ZFN也可以在目标基因上进行切割和修饰，从而促使植物的遗传学转变。
4. RNA干扰技术RNA干扰技术是一种通过转录特定RNA序列来沉默或抑制某个基因的表达的方法。
在转基因植物的制备中，可以利用RNA干扰技术来选择性地靶向抑制特定基因的表达。
通过将目标基因的RNA序列反向转录成干扰RNA，这些干扰RNA 会与目标基因的mRNA结合并导致降解，最终抑制目标基因的功能。
尽管这些基因编辑技术在转基因植物的制备中被广泛应用，但值得注意的是，未经充分探索的基因编辑技术也存在一些风险。
例如，基因编辑可能导致不可预测的副作用，或者不经意间干扰其他有益基因的功能。
转基因方法
转基因方法转基因方法是一种在生物体基因组中引入外源DNA，从而改变生物体性状的技术。
它使科学家可以从一种生物体中取出一段DNA，将其移植到另一种生物体中，从而改变原来生物体的特征。
这项技术实现了能够从一种生物体中转移基因到另一种生物体中，以改变特定基因的属性，或者产生因果关系的基因工程。
它也使得科学家可以重组DNA，从而改变生物表型。
通过精细控制动物的基因组，可以随时调节和改变任何生物体的表型，从而让其产生新的特性和行为。
20世纪80年代在美国，波士顿儿童医院的Michael Santa已经发现了一种将基因移植到其它有机体中的方法转基因方法。
他将生物体的一段某种特定基因提取出来，并将它植入另一种物种中，观察它们交叉后的表型，这样就得到了转基因技术将一种物种的基因移植到另一种物种中，从而改变受移植物种的性状的技术。
转基因技术的主要应用有两个方面：一是农业，可以改良农作物，提高农作物的抗逆性和产量；二是医学，可以用于基因治疗，通过更改病原体的基因组，使其不会引起疾病。
转基因方法的好处也很多。
首先，它可以使农作物抗逆性强且产量高；其次，它可以改善人类健康水平，减少患病的几率；第三，它可以用于动物育种，获得更优良的品种；最后，它可以促进微生物的研究，以获得更有效的产品。
当然，转基因技术也存在一些弊端，最常见的问题是安全问题。
转基因技术对于环境的影响尚不清楚，而且，转基因作物也可能引起人体的抗体反应，甚至会对人类健康造成危害。
因此，针对转基因作物的研究工作仍然应该以严格检查、安全测试和仔细研究为前提，以确保其产品的安全性。
迄今为止，转基因技术已经取得了许多重大进展，在农业、医学、环境保护和健康等方面都发挥了重要作用。
然而，为了避免可能会带来的不良影响，在进行基因改造实验时，应该保证整个过程安全可控，并在此基础上做出任何决定。
只有这样，我们才能真正发挥转基因技术的优势，给人类带来更多有益的成果。
转基因技术——动植物转基因方法ppt(共22张PPT)
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•优点:不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，
不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握
。
转基因
技术
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动物转基因方法
原核显微注射法 胚胎干细胞介导法
逆转录病毒载体法 精子介导的基因转移
核移植转基因法
体细胞核移植法
线粒体介导法
转基因
技术
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动物转基因方法
原核显微注射法（最常用）
【启动子】是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因
转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 【终止子】也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
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转基因技术的步骤
STEP3：将目的基因导入受体细胞
（1）导入植物细胞一般用农杆菌转化法，也可 用基因枪法或花粉管通道法。 （2）导入动物细胞一般用显微注射法。 （3）导入微生物细胞一般用感受态细胞吸收DNA 分子的方法。
转基因
技术
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转基因技术的步骤
STEP4：目的基因的检测和表达
1.检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因
。
方法：采用DNA分子杂交技术。 2.检测目的基因是否转录出了mRNA。
方法：采用用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。 3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质。
方法：从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行 抗原－抗体杂交。 4. 进行个体生物学水平的鉴定。
•根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有 一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入 到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目 的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因 向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转 基因植株。 •近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中得到了广 泛应用。
叶绿体转基因方法
叶绿体转基因方法在当今的生物技术领域，转基因技术无疑是一项具有重要意义和广泛应用前景的研究方向。
其中，叶绿体转基因作为一种相对新兴的技术手段，正逐渐引起科学界的关注。
叶绿体是植物细胞中进行光合作用的重要细胞器，其独特的遗传特性为转基因操作提供了一些独特的优势。
首先，叶绿体基因组的拷贝数相对较多，这意味着一旦成功导入外源基因，其表达量往往较高。
其次，叶绿体基因大多是母系遗传，这在一定程度上降低了转基因通过花粉传播带来的潜在环境风险。
那么，叶绿体转基因是如何实现的呢？常见的方法主要包括基因枪法、农杆菌介导法和花粉管通道法等。
基因枪法，又被称为微弹轰击法，是将包裹有外源 DNA 的微小金粒或钨粒，借助高压气体的加速，像子弹一样射入细胞或组织中。
这种方法的优点在于其适用范围较广，不受植物材料的限制。
然而，其缺点也比较明显，操作相对复杂，成本较高，且容易造成多拷贝的随机插入，可能影响转基因的稳定性和表达效率。
农杆菌介导法是在植物转基因中应用较为广泛的一种方法。
农杆菌是一种天然的植物病原菌，它能够将自身携带的一段 DNA（称为TDNA）转移并整合到植物细胞的基因组中。
在叶绿体转基因中，需要对农杆菌进行改造，使其携带的 TDNA 能够靶向叶绿体基因组。
但这种方法在应用于叶绿体转基因时，成功率相对较低，而且对于一些植物物种可能效果不佳。
花粉管通道法是一种相对简便的方法。
在植物授粉后，将含有外源基因的溶液注入花粉管通道，使得外源基因能够随着花粉管的生长进入胚囊，进而整合到叶绿体基因组中。
该方法操作简单，但转基因的效率和准确性较难控制。
在进行叶绿体转基因操作之前，首先需要构建合适的载体。
载体通常包含启动子、目的基因、终止子等元件。
启动子的选择对于基因的表达起着关键作用，需要根据具体的实验目的和植物物种来确定。
目的基因则是我们希望导入叶绿体中并表达的特定基因，例如具有抗虫、抗除草剂或者提高光合作用效率等功能的基因。
终止子用于确保基因转录的正确终止。
转基因检测的主要技术方法及基本流程
转基因检测的主要技术方法及基本流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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常用转基因方法
目前转基因研究中应用较为广泛的一种方法。
3．花粉管通道法
在授粉后向子房注射含目的基因的 D NA溶液，利用植物在开花、 受精过程中形成的花粉管通道，将外源 D NA导入受精卵细胞， 并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而 成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由我国学者周光宇 提出，我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道 法培育出来的。该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株， 技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。
2．在细胞水平，克隆实质由一个单一的共同祖先细胞分裂所形成的 一个细胞群体。其中每个细胞的基因都相同。比如，使一个细胞 在体外的培养液中分裂若干代所形成的一个遗传背景完全相同的 细胞集体即为一个细胞克隆。
3．在个体水平，克隆是指基因型完全相同的两个或更多的个体组成 的一个群体。比如，两个同卵双胞胎即为一个克隆！因为他（她） 们来自同一个卵细胞，所以遗传背景完全一样。
常用的植物转基因方法
按其是否需要通过组织培养、再生植株可分成 两大类，第一类需要通过组织培养再生植株，
常用的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法；
另一类方法不需要通过组织培养，目前比较成
熟的主要有花粉管通道法。
常用的动物转基因技术
1．显微注射DNA的方法 在显微镜下，用一根极细的玻璃 针（直径1－2微米）直接将DNA注射到胚胎的细胞核内， 再把注射过DNA的胚胎移植到动物体内，使之发育成正常的 幼仔。用这种方法生产的动物约有十分之一是整合外源基因 的转基因动物。
2．体细胞核移植方法 先在体外培养的体细胞中进行基因 导入，筛选获得带转基因的细胞。然后，将带转基因体细胞 移植到去掉细胞核的卵细胞中，生产重构胚胎。重构胚胎经 移植到母体中，产生的仔畜Байду номын сангаас分之百是转基因动物。
转基因技术操作方法
转基因技术操作方法
转基因技术是一种将外源基因引入生物体中的方法，下面是一般的转基因技术操作方法：
1. 基因选择：选择要转入生物体的外源基因，这可以是来自同一物种中的其他个体，也可以是来自不同物种的基因。
2. 基因克隆：将所选择的外源基因通过PCR扩增、酶切、连接等操作克隆到载体DNA上。
常用的载体包括质粒、逆转录病毒或人工染色体等。
3. 载体构建：将克隆好的载体DNA转入宿主细胞中。
常用的方法有热冲击转化、电穿孔等。
4. 选择和筛选：将转化了外源基因的宿主细胞进行选择和筛选，常用的方法有抗生素筛选、荧光筛选等。
通过筛选，可以得到携带外源基因的转基因宿主细胞。
5. 基因表达与分析：将转基因宿主细胞培养扩增，通过转基因表达，使外源基因在宿主细胞中产生相应的蛋白质或RNA。
然后通过PCR、RT-PCR、Western blot等技术对外源基因的表达进行验证和分析。
6. 生物体转化：将外源基因导入到整个生物体中。
这可以通过基因枪、细胞电穿孔、细菌介导转化等方法来实现。
7. 生成转基因生物体：通过培养、育种等方法，将成功转化并表达外源基因的细胞或组织繁殖和培育成为转基因生物体。
需要注意的是，转基因技术的操作方法可能因具体的实验目的和生物体而有所不同，上述方法是一般性的操作流程。
在进行转基因技术操作时，需要遵守相关的实验规范和法律法规，确保实验的安全性和合法性。
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转基因方法一、基因枪法：1、综述：基因枪法又称为高速微弹法、微粒抢法、微粒轰击法，是由康奈尔大学的Sanford等于1987年首次研制出的火药引爆基因枪，并与该校工程技术专家Wolf及Kallen合作研究出的一种基因转移的新方法。
1990年美国杜邦公司推出商品基因枪PDS-1000系统。
在此期间，高压放电、压缩气体驱动等各种基因枪相继出现，并都在重复的实践中得到改进和发展。
其改进的核心是粒子加速系统，以提高射弹的可控度，即粒子速度和射入的浓度等。
2、基本原理：其基本原理是将外源DNA包被在微小的金粒或钨粒表面，然后在高压的作用下微粒被高速射入受体细胞或组织。
微粒上的外源DNA进入细胞后，整合到植物染色体上，得到表达，从而实现基因的转化。
根据基因枪的动力系统，可将它们分为三种类型：一类是以火药爆炸力为加速动力，其显著特征是塑料子弹和阻挡板。
塑料子弹前端载放已沉淀有DNA的钨金粉。
当火药爆炸时，塑料子弹带着钨金粉向下高速运动，至阻挡板时，塑料子弹被阻遏，而其前端的钨金粉粒子继续以高速向下运动，击中样品室的靶细胞。
其粒子的速度主要是通过火药的数量及速度调节器控制，不能做到无级调整，可控度较低。
第二类是以高压气体作为动力，如以氦气、氢气、氮气等。
其工作原理是把载有DNA 的钨金粉喷洒在一张微粒载片上，电极间悬滴众着微水滴。
在压缩空气的冲击下，微水滴雾状喷射，驱动载片。
当载片受阻于金属筛网时，载有DNA的钨金粒继续向下冲击射入细胞。
第三类是以高压放电为驱动力。
其最大优点是可以无级调速，通过变化工作电压，粒子速度及射入浓度可准确控制，使载有DNA的钨金粉粒子能到达具有再生能力的细胞层。
3、步骤：（1）微粒体的洗涤。
取60-100mg钨或金粉，溶于1ml无水乙醇中，用超声波振荡洗涤。
微粒体处理后可在密闭条件下室温贮存一周。
离心除去乙醇，密闭贮存于室温中，备用，保存时间不要超过一周。
（2）DNA微粒载体的制备。
（3）靶外植体材料准备。
在无菌条件下截取靶外植体，放于样品皿中，外植体大小按基因枪要求选择；在无菌条件下把靶外植体放入基因枪的样品室，并对准子弹发射中心。
（4）DNA微弹轰击，按照不同的基因枪说明书操作。
（5）轰击后外植体的培养。
DNA微弹轰击后立刻转入相应的培养基中培养，以免材料脱水加重细胞受伤害的程度，获得再生植株。
4、影响因素：（1）基因枪轰击参数，如基因枪类型、氦气压力、基因枪真空度、包裹金属粒子类型、金属粒子大小、载体膜位置、靶材料位置轰击次数、微粒加速装置参数等都会影响转化效率的高低。
其中金属粒子以金粒效果最好、94.92kPa左右的氦气真空度为佳。
（2）转化质粒的参数，如转化质粒的纯度要高、且浓度不宜过大。
加入一定量的氯化钙与亚精胺对质粒的包被有促进作用。
（3）转化材料的类型。
对于不同物种，它都有其适应的转化材料，如水稻胚性愈伤组织和配型悬浮系细胞的基因枪转化效率要高于幼胚的转化效率。
（4）启动子、选择培养基类型等，其中启动子是调节外源基因在转化细胞中表达的重要因素，不同启动子调控的基因在受体材料中的表达水平差别很大。
5、优缺点：优点：（1）无宿主限制，对双子叶和单子叶植物以及动物和微生物都同样适用。
（2）靶受体类型广泛。
基因枪技术可以选用易于再生的受体，绕过原生质体再生的困难。
它不仅以原生质体、叶圆片为靶受体，而且悬浮培养细胞，茎或根切段以及种子胚、分生组织、幼穗、愈伤组织、花粉细胞等几乎所有具有潜在分生能力的组织或细胞都可用基因枪进行转化。
（3）可控度高。
近代的高压放电或高压气体可调控微弹的速度和射入的浓度，可以较高的命中率把DNA微粒载体射入特定层次的细胞。
（4）操作十分简便快速。
缺点：（1）转化效率低，多在0.1%-1%之间，这就增加了选择难度；（2）仪器设备昂贵，转化费用高；（3）不易获得再生植株。
6、应用前景：（1）植物基因转化：目前已有十几种植物采用了此技术获得了转基因植株，如小麦、玉米、水稻等，显示了其广阔的前景。
近年来，多基因转化是一个新亮点，由于基因枪法转化容量大，一次能导入12-14个不同质粒，因而被认为是实现多基因转化的较理想的方法。
（2）将外源基因导入植物细胞的细胞器在植物细胞中有三套遗传系统，即在细胞核、线粒体、叶绿体中都有自己的遗传物质。
它们相互调节，共同调控者细胞的生命活动。
细胞器的遗传系统同样具有重要作用，因此通过细胞器的基因转化改造生物同样是一条可行的途径。
现已证明基因枪法可将外源基因导入细胞器，并能得到稳定表达，因此，基因枪为细胞器的基因转化开拓了一片新领域。
（3）植物基因表达调控研究：利用基因枪技术为外源基因导入特定组织提供了可能，因此可以用于研究植物的发育及调控。
如果把外源的特定基因导入不同的细胞或不同发育时期，则可以研究其基因表达的特点。
二、脂质体介导基因转化法：1、综述：脂质体法是用脂类化学物质包裹DNA成球体，通过植物原生质体的吞噬或融合作用把内含物转入受体细胞。
Deshayes等用脂质体包裹带有卡那霉素抗性嵌合基因的大肠杆菌质粒，用PEG诱导脂质体与烟草原生质体融合。
实验成功地从转化原生质体获得再生植株。
这一成功例子，为基因转化建立了新的方法。
2、基本原理：脂质体是根据生物膜的结构功能特性合成人工膜，然后把DNA包裹在人工膜内。
反相蒸发法制备脂质体的原理，是在溶于有机溶剂的磷脂中加入核算水溶液。
磷脂即以其亲水基朝向水相，疏水的尾链伸向有机相而整齐地排列在两相界面上，经超声波处理后，在有机相中形成包有DNA水溶液的囊泡，通过减压蒸馏有机溶剂，并加入水溶液后即可形成包含有DNA的脂质体。
将脂质体与原生质体在适当的培养基中混合，通过原生质体的吞噬或融合可将外源DNA导入受体细胞。
为了避免在包裹DNA时超声波和有机溶剂对DNA的损伤，通常使用去垢剂透析法制备脂质体，也有人使用反相蒸发法。
3、步骤：（1）用反相蒸发法制备脂质体，常用的脂类是牛脑磷脂酰丝氨酸和胆固醇。
（2）RNA和DNA核算制备。
（3）脂质体纯化。
（4）脂质体-原生质体保温培养转化。
（5）转化原生质体选择培养。
4、影响因素：（1）脂质体的制备类型、方法均有明显差异；（2）PEG的浓度、加入时间、pH值及Ca离子浓度均起到重要作用；(3)保温培养及转化时的条件。
5、优缺点：优点：方法简便、重复性好、对多种类型的细胞有效，而且包装容量大、安全性高。
缺点：有时大部分DNA会被溶酶体降解，所以效率不高。
6、应用前景：近年来，美国BRL公司推出一种新型脂质体即转化脂，只要把转化脂与DNA简单的混合，即可形成转化脂与DNA的复合体，把DNA包裹在脂质体内，并可有效地转化动植物细胞。
此方法不仅可明显提高转化率，而且由于有商品出售，减少耗时，简便快捷，因此，脂质体介导转化原生质体法是值得广泛试用的一种转化方法。
脂质体在介导植物病毒RNA的转化方面应用更多，并取得重要进展。
脂质体在包裹植物病毒裸露的RNA后，与原生质体在特定的融合条件下保温，可获得较高的感染率。
此外，用脂质体转染可以大大降低核算的用量，TMV-RNA的用量可以从50ug降到5ug，使体外转录体的应用变为可能，具有很高的实用价值。
三、电激法介导基因转化：1、综述：电激法是利用高压电脉冲作用在原生质体膜上“点激穿孔”，形成可逆的瞬间通道，从而促进外源DNA的摄取。
此方法在动物细胞中应用较早并取得很好效果，李宝健等于1985年首次将其应用于植物细胞的基因转化。
现在这一方法已被广泛应用于各种单、双子叶植物中，特别是在禾谷类作物中更有发展潜力。
2、基本原理：细胞膜主要由脂类组成，每一个脂质分子有极性的头部和疏水的尾部。
因此细胞膜可视为一个电容，当细胞处于一个外加电场中时，膜电位增高，最高部位与电场作用方向之间的夹角成正比，随着E的不断增加，V也不断升高，于是膜被压缩变薄。
当V升高到一定值时膜被击穿形成微孔，此电压称之为击穿电压。
如果电场强度不再继续增加，膜孔数量少，孔径小，间隔一段时间后即可复原，称之为“可逆击穿”。
相反，如果电场强度继续增加，膜上的穿孔区域增大，数量增多，孔径增大，最后引起“不可逆击穿”。
电激处理时输出脉冲电压波形有两种：一种是指数波，一种是方波。
方波脉冲的电场强度在整个脉冲的持续期内均保持恒定；而指数波脉冲持续期内由于使用电容进行辉光放电，从高于膜击穿电压呈指数下降到低于膜击穿电压，在使用方波时，E和t都能确定，而且由于方波脉冲所使用的E始终高于Ec，故一般采用短期多次处理。
在使用指数波时，E和t则难以确定，而且指数波脉冲的E高于Ec的时间极为短暂，故一般多采用长时间一次性脉冲，随后约有10分钟的收敛阶段。
具体情况需据仪器而定。
3、步骤：（1）分离的原生质体加入电击缓冲液重悬，并离心3分钟去掉上清液，再加入适量的电击缓冲液，计数，调节原生质体密度；（2）加入质粒DNA和样品DNA，混合后分装于电击反应槽内；（3）冰浴5分钟；（4）选择不同参数电击；（5）冰浴10分钟；（6）离心3分钟除去电击缓冲液，用液体培养基洗涤；（7）将原生质体包埋于固体培养基中，28度黑暗条件下选择培养。
4、影响因素：（1）电击的处理方式对转化率起决定作用，一般是用高电压，短时间处理；（2）电击法中使用的电场强度、波形及处理时间对转化率也有重要影响，在一般情况下增加场强，延长脉冲持续时间能提高转化率，但也要考虑原生质体的存活率；（3）PEG存在时对转化率有促进作用；（4）原生质体所处的介质成分同样有重要作用，原生质体应悬浮在便于进行电击的具有特定电阻的盐溶液中，一般采用电击缓冲液；（5）pH值、Ca离子浓度等都对转化率有影响，另外还要注意植物的种类。
5、优缺点：优点：操作简便，DNA转化效率高，特别适于瞬时表达的研究。
缺点：会造成原生质的损伤，使植板率降低，且仪器也较昂贵。
6、应用前景：近年来，人们已可以通过电击法直接在带壁的植物组织和细胞上打孔，然后将外源基因直接导入植物细胞，使用该技术可以不制备原生质体，提高了植物细胞的存活率，而且简便易行，现已在水稻上获得转基因植株。
四、花粉管通道法：1、综述：在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。
该方法于80年代初期由我国学者周光宇提出，我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。
该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握。
2基本原理：花粉管通道法的主要原理是授粉后使外源DNA能沿着花粉管渗入，经过珠心通道进入胚囊，转化尚不具备正常细胞壁的卵、合子或早期胚胎细胞。