马铃薯茎线虫的培养_徐进军
马铃薯腐烂茎线虫在甘薯上的形态鉴定
马铃薯腐烂茎线虫在甘薯上的形态鉴定马铃薯腐烂茎线虫（Ditylenchus destructor）是一种全世界分布广泛的植物寄生性动物，广泛存在于农作物种植区域，主要危害马铃薯等根茎作物，可导致茎瓤叶变黑枯死，经济损失极大。
甘薯也是马铃薯腐烂茎线虫的宿主之一，但往往出现子母不对应，鉴定和认定被感染者时，要视具体情况进行实地鉴定。
马铃薯腐烂茎线虫可以使甘薯叶片与叶脉变黑、潮烂，也可以出现蔫萎、绿叶变白、表皮粗糙等症状。
也可能出现灰白色的病斑，病斑处经过按压或抠取时会检查到狭长的成虫或褐色的卵。
此外，甘薯根中的马铃薯腐烂茎线虫也可能长期潜伏，成熟者不能很容易被发现，因而检疫要特别当心，及早发现和防治。
为了准确鉴定马铃薯腐烂茎线虫存在情况和治疗情况，需先进行常规检查和实验室检测，同时进行模拟试验，全面分析对马铃薯腐烂茎线虫影响因素所造成的蔓延状况，根据检查结果及时采取合理的防控措施。
我们可以利用细胞凝聚和入侵的实验，进行靶物的分离、检测，采用荧光显微镜观察叶片上卵和幼虫的形态特征，及时确认病原及其传播蔓延情况，并采取科学的防控措施，尽早控制病害的发展和经济损失，确保农作物的平安产量。
鉴定马铃薯腐烂茎线虫在甘薯上的形态首先应到种植或病害发生原位查看，关注甘薯叶片是否出现植物萎蔫发黄、叶肉变黑等症状，出现有病斑的话，应将病斑取出及时浸泡，以提高动物的表观密度。
同时，应采用洗涤的方法将病斑表面的植物残渣洗净，然后仔细观察叶片表面，可以发现褐色粒状的卵、灰白色的成虫，以及褐色小虫、灰褐色小虫等，经过确认就可确定马铃薯腐烂茎线虫感染情况。
另外，还可以进行发芽实验，将病害发生区甘薯叶片在75℃水里浸泡，共浸泡2小时，再将其浸出，移植到湿土中，用文房四宝在植物叶片下编号，每天清洗观察包含的褐色卵和灰白色的成虫是否孵化，若有，则说明病情严重平时动物积累已达到有感染的程度。
综上所述，用于鉴定马铃薯腐烂茎线虫在甘薯上的形态，需要对植物叶片、叶肉、病斑进行一一分析查看，结合发芽实验和显微镜查看，观察褐色的卵和灰白的成虫，并采取有效的防控措施，及时鉴定并处理马铃薯腐烂茎线虫在甘薯上的形态。
马铃薯腐烂茎线虫侵入甘薯部位以及在植株内的种群动态
１８ ２６头 ／ 土 时 ， 的 秧 苗 发 病 率 已 达 １０ ， 病 指 数 为 ２ ，６ｄ后 其 病 指 高 达 １０ ２ ５ 克 ４ ２ ｄ后 ０％ 发 ０９ ０ 。线 虫 在 甘 薯 内 的数 量
随 接 种 时 间 的 延 长 呈 指 数 增 长 趋 势 。 在 低 剂 量 接 种处 理 ， 克 土 壤 含 １ 每 —２头 线 虫 时 ， 虫 在 移 栽 ６ 线 ０ｄ以标 识 码 ： Ａ 文章 编号 ： ０ ７９ （０８ 增 刊 一 ２４— ４ １ ０— ０ １２０ ） ０ ０ ３ ０
Ｔｈｅ Ｉ ｆ ｃ ｉ ｎ ａ ｄ Ｄｙ ａ ｃ ｆ Ｄｉ ｌｎ ｈ ｓ ｄ ｓｒ ｃ ｏ ｎ Ｓｗｅ ｔＰｏ ａ ｏ ｎ ｅ ｔｏ ｎ ｎ ｍｉ ｓ ｏ ｔ ｅ ｃ ｕ ｅ ｔｕ ｔ ｒ ｉ ｙ ｅ ｔ ｔ
线 虫数 量 较 少 ， 茎 数 量 在 ４ ５ 之 间 ， 单 ９ ６头 而此 时 高 剂 量 接 种 处 理 线 虫 数 量 已 达 ２０头 以上 。 在植 株 生 长 后 期 ， 茎 ０ 其
内 的 线 虫 数 量 又 出现 下 降 趋 势 。
关键词 ： 马铃 薯 腐 烂茎 线 虫 ； 染 部 位 ； 体 动 态 侵 群
下 茎 下 部 ３ｃ 部分 危 害 ； 栽 后 ８ ， 虫 扩 展 到 地 下茎 接 近 地 面 部 位 ； 栽 后 １ ｍ 移 周 线 移 ０周 ， 虫 扩 展 到 地 上 茎 部 分 ； 栽 线 移 后１ ２周 ， 虫 已 转 移 到 新 结 甘 薯 块 根 上 危 害 ； 未发 现 线 虫 侵 入 甘 薯 须 根 。 在装 有 ５０ｇ 壤 土 的塑 料 管 中移 栽 甘 薯 线 但 ０ 沙 秧 苗 ， 接 种 量 为 每 克 土 壤 含 １～２头 线 虫 时 ，４ ｄ后 秧 苗 的 发 病 率 为 ４ ％ ， 病 指 数 低 于 １ ，０ｄ后 发 病 率 达 到 在 ２ ０ 发 ０ ６
甘肃定西马铃薯腐烂茎线虫的发生、病原学研究及品种抗性评价
甘肃定西马铃薯腐烂茎线虫的发生、病原学研究及品种抗性评价甘肃定西马铃薯腐烂茎线虫的发生、病原学研究及品种抗性评价引言：甘肃定西地区是中国马铃薯的主要种植区之一，然而，近年来马铃薯腐烂茎线虫病却严重威胁着该地区的马铃薯产量和质量。
该病害在甘肃定西地区广泛分布，严重影响了当地的马铃薯产业发展。
因此，对该病害的发生机制、病原学特性以及马铃薯品种的抗性进行研究具有重要意义。
一、马铃薯腐烂茎线虫的发生机制1.1 天气因素对病原菌的影响研究发现，温暖湿润的气候条件是马铃薯腐烂茎线虫大量繁殖的适宜环境。
高湿度和高温度会促进线虫发育并加速病害的传播速度。
1.2 马铃薯种薯处理与传播马铃薯种薯是马铃薯腐烂茎线虫传播的重要途径。
研究发现，使用受感染的种薯种植会导致腐烂茎线虫病的迅速蔓延，因此，使用健康的种薯是控制病害的关键。
二、马铃薯腐烂茎线虫的病原学特性2.1 病原菌的形态特征马铃薯腐烂茎线虫根据形态特征可分为雌、雄两性。
雌虫头部小，体长约0.2mm，背部有13纵行状毛带。
雄虫体型较小，约0.15mm，呈弯曲状，体后部有尾刺。
2.2 病害症状表现受感染的马铃薯植株表现为根部呈黑褐色腐烂，根系受损，影响植株正常摄取水分和养分，导致植株整体生长衰弱，最终导致减产甚至死亡。
三、马铃薯品种的抗性评价3.1 选择抗性较强的品种通过测试不同品种的抗性，可以根据植株的生长状况、根系的腐烂情况等指标评价其抗病性能。
选择抗性较强的品种进行大面积种植，可以有效防止病害蔓延。
3.2 强化病害管理措施除选择抗性较强的品种外，还应采取科学的病害管理措施，如地块轮作、适时排水排涝、合理用药等，以进一步加强对马铃薯腐烂茎线虫的防治。
结论：甘肃定西地区马铃薯腐烂茎线虫的发生与气候因素、种薯处理等因素密切相关，病原菌形态特征和病害症状表现已被初步研究明确。
通过对品种的抗性评价，可以选择适应该地区气候特点且抗性较强的品种进行种植，结合科学的管理措施，有望有效控制该病害的发生和传播，保障马铃薯产业的健康发展综上所述，马铃薯腐烂茎线虫的形态特征包括雌虫头部小、体长约0.2mm，背部有13纵行状毛带，雄虫体型较小约0.15mm，呈弯曲状，体后部有尾刺。
马铃薯块茎腐烂线虫发生与防治
马铃薯块茎腐烂线虫发生与防治承德市北部的丰宁、围场两县年种植马铃薯4万余公顷，年产种薯、商品薯8亿余千克，冬季储薯1.2亿千克左右，是全国四大马铃薯生产墓地之一。
近年来，由于马铃薯块茎腐烂线虫的危害造成很大储薯损失，1994年造成储薯损失5%～7%，为害严重的薯窖造成损失高达20%～30%。
根据目前所检索到的资料来看，此种线虫广泛分布于亚洲、欧洲、美洲及非洲马铃薯种植区，寄主范围广泛，对马铃薯储藏都构成不同程度的危胁，经过两年来的工作，摸索出发生规律与防治措施如下。
1.病原物及为害症状1.1病原物经显微镜鉴别确认为马铃薯块茎腐烂线虫。
1.2症状此种线虫在马铃薯生长期间只侵染其块茎，地上部无特殊症状，最初的直观症状是在薯块上出现淡白色的小斑点。
薯块的严重发病出现在储藏期，被侵染的薯块组织干枯，呈颗粒状，当整个薯块全部被侵染后，块茎表皮变得象纸一样薄，并裂开，薯块变干，重量损失80%以上。
且受线虫侵染的组织易被真菌造成二次浸染。
2.侵染循环2.1越冬越冬主要有三个途径：①广泛存活于土壤中，在马铃薯收获后营腐生生活。
②可在杂草及多种作物上寄生；③随种薯入窖越冬，并在来年随薯块入田里。
2.2侵染在马铃薯定植后，线虫自皮孔及芽眼附近的表皮进入幼小的马铃薯块里。
在马铃薯生育前期，只有少量线虫侵入薯块的皮下组织里，在块茎膨大及成熟期，在薯块上形成很小的白色斑点，大量线虫存在于病健交界处，病斑下面的组织软化并呈颗粒状，当薯块收获后，线虫随薯块入窖，一旦入窖较早或储藏量过大，大量产生呼吸热而导致温度升高时.线虫便严重发生，更多的块茎组织受到危害，并导致青霉、曲霉等病菌对薯块造成的二次感染。
2.3适宜温湿度①温度。
此线虫在5～34℃的范围内均可发育，在大田情况下，在-28℃的低温下仍可存活。
②湿度。
适宜相对湿度为90%～100%，在相对湿度低于40%时，对此线虫基本不造成危害。
3.防治措施3.1带药播种使用5%杜耳颗粒剂，按每667平方米4～5千克，采取穴施法，在播薯时同时施入田里。
一种纯化培养腐烂茎线虫的方法
通过简单和易操作的方法获得群体纯度高、生命力 良好的线虫是系统研究该线虫的生物学特性、致病机理、 种群群体及个体的遗传变异等工作的基础和前提。目前 系统进行纯化培养该线虫的方法，一般通过下述几种渠
道获得。如在PDA平板中接入茄腐镰刀菌，灰葡萄孢和 毛壳菌，25℃温箱中暗培养腐烂茎线虫，另外，刘斌等人 报道采用玉米培养基培养的灰葡萄孢对腐烂茎线虫进行 单异活体培养，在室内可以快速大量繁殖腐烂茎线虫，阮 龙等人报道采用甘薯发根单寄主培养体系繁殖腐烂茎线 虫的方法，上述纯化培养方法都是通过接种大量线虫获 得成功，且纯化成功的基础是在大量接种前进行腐生线 虫等其它虫体的去除，因此，建立1种快速、高效培养腐烂 茎线虫的方法是本研究的重点。
Mao Jia1，2 et al. （1Huaiyin Institute of Agricultural Sciences of Xuhuai Region in Jiangsu，Huai′ an 223001；2Huai′ an Agricultural Science and Technology Industry Corporation，Huai′ an 223001，China；3Xuzhou Institute of Agricultural Sciences in Jiangsu Xuhuai Area，Xuzhou 221131，China） Abstract：Ditylenchus destructor is an important plant pathogenic nematode in the world. In this experiment，the ad⁃ vantages and disadvantages of nematode culture were compared by three methods：sweet potato culture dish inocula⁃ tion method，potato centrifugal tube inoculation method and potato slice drilling inoculation method. A culture sys⁃ tem was screened，in which sweet potato slice drilling inoculation method was used to inoculate a single pregnant fe⁃ male. This system provided a new idea for high purity culture and purification of rotten stem nematode，and also pro⁃
腐烂茎线虫对马铃薯块茎危害症状及其线虫分布研究
腐烂茎线虫对马铃薯块茎危害症状及其线虫分布研究王宏宝;刘伟中;郭小山;李茹;熊战之;赵桂东【摘要】为了解马铃薯（Solanum tuberosum）块茎上腐烂茎线虫危害症状及线虫的侵染分布情况，通过室内在马铃薯上接种腐烂茎线虫进行了观察研究。
结果显示：接种腐烂茎线虫至马铃薯薯块上表现的症状除了马铃薯块茎表皮容易剥离外，其他症状表型如部分组织软化、变暗变黑、内陷外等与文献报道的基本一致。
镜检块茎坏死组织可见线虫发生量不大，原因可能与坏死组织营养严重流失、生存环境恶化不利于线虫生存有关；镜检块茎表皮层组织发现有大量成虫，大龄幼虫和卵聚集在表皮层和皮孔下的薄皮细胞及组织中，这对解释腐烂茎线虫对环境的适生性有一定意义；同时，在降低线虫数量方面，马铃薯病残体块茎以及表皮坏死组织应彻底清除，以有效降低线虫发生量。
【期刊名称】《长江大学学报（自科版）农学卷》【年(卷),期】2013(000)012【总页数】3页(P1-3)【关键词】腐烂茎线虫;马铃薯 (Solanum tuberosum);皮孔【作者】王宏宝;刘伟中;郭小山;李茹;熊战之;赵桂东【作者单位】江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安 223001; 南京农业大学植保学院，江苏南京210095;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001;江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所，江苏淮安223001【正文语种】中文【中图分类】S435.313+4;S435.32马铃薯腐烂茎线虫（Ditylenchus destuctor）是国际公认的检疫性线虫，也是严重危害马铃薯的重要病原之一［1］。
Kuhn首次观察并描述此线虫危害马铃薯块茎，引起马铃薯干腐病。
马铃薯腐烂茎线虫病是植物侵染性病害，被我国列入植物线虫检疫对象名录。
马铃薯金线虫病
马铃薯金线虫病马铃薯金线虫病，又称马铃薯胞囊线虫病、马铃薯根线虫病。
〔病原学名〕HeteroderarostochinesisWollen.〔寄主作物〕马铃薯、番茄、茄子等。
〔病害诊断〕线虫主要在地下根部为害，一般地上部分症状并非特色明显可鉴。
常形成嫩叶苍白色、像缺肥或缺水的衰弱状，干旱条件下会产生萎蔫。
严重病株会造成矮化、早衰。
受害根部经常出现侧根增生，开花期症状尤其明显，根部表皮上叮着很多乳白或乳黄色的、略显半透明的小球形的雌虫虫体。
被害根部表皮常出现龟裂，易于受到其他腐生真菌或细菌的侵染而加剧枯亡。
致病线虫为马铃薯金黄线虫。
线虫雌雄异形。
雄虫体为线形，雌虫成虫近球形或洋梨形。
虫体分卵、幼虫、成虫三个历期。
幼虫具5个龄期。
雄雌虫体在成虫期才有形体上明显区别。
〔发病规律〕胞囊线虫以胞囊在土壤里越冬。
春天，胞囊内的卵在适宜条件下开始孵化，一龄幼虫在卵壳内生活，至二龄期幼虫破卵而出，作为侵染期幼虫，侵入植株根部，取食发育，而后连续3次蜕皮，发育为成虫。
雌成虫膨大，突破组织外露，仅头颈部可附于根部。
雄成虫离开根并与雌虫交配。
雌成虫受精后体积增大呈近球形，颜色变深，体壁变厚，内中充满虫卵（约500粒）。
马铃薯收获后，胞囊保留在土壤里越冬。
线虫喜于较低的土壤温度、通气良好的土质以及相对潮湿的条件。
幼虫在10℃时开始活动，16℃时根部受侵染严重，26℃时线虫发展受到抑制，故冷凉地区病害严重。
土质上中等黏土、排水良好和通气的砂壤土、含水50%～70%的泥炭土等适合线虫活动。
胞囊内的卵抗干燥，可存活20年之久，病土、附带有胞囊的种薯、器具，均可远距离传播线虫。
品种间抗性有差异。
〔防治措施〕（1）严格检疫措施。
此病为检疫性病害，应严加限制从疫区调运带虫种薯。
（2）合理进行轮作。
重病地区和非寄主作物实行5年以上的轮作，水旱轮作效果更优。
（3）选种抗病品种。
对压低病情有一定效果。
（4）进行土壤消毒。
播种时每667平方米用3%克线磷5千克拌土后穴施，效果明显。
甘肃定西马铃薯腐烂茎线虫的发生、病原学研究及品种抗性评价
甘肃定西马铃薯腐烂茎线虫的发生、病原学研究及品种抗性评价马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor)是马铃薯贮藏期的一种重要病害,也是一种重要的全球检疫性有害生物,严重威胁马铃薯的生产。
本研究对甘肃省定西地区马铃薯腐烂茎线虫(D.destructor)的发生危害、种类鉴定、培养条件、侵染规律和抗性评价等方面进行了研究,主要研究结果如下:1.2014年12月和2015年3月,采集甘肃省定西地区马铃薯腐烂茎线虫病样,对马铃薯腐烂茎线虫为害马铃薯的症状进行观察和描述,并采用随机抽样的方法对该病在甘肃省定西地区的发生情况进行调查。
调查结果表明,甘肃定西地区马铃薯腐烂茎线虫病的发病率为2-11%,病情指数为0.72-5.33;品种间的发病程度差异较大,其中青薯9号和荷兰15号的发病程度显著高于其它品种。
2.采用形态学结合分子生物学的方法对甘肃定西马铃薯上的4个线虫群体进行了鉴定,利用UPGMA法构建线虫群体ITS序列的系统发育树,并按照柯赫氏法则进行了致病性测定。
结果表明,4个线虫群体在形态学上与马铃薯腐烂茎线虫一致,但群体DX27与群体DX11、DX16、DX19存在差异。
利用通用引物TW81/AB28扩增rDNA-ITS 序列获得了长度均为915 bp的片段;序列比对分析表明,群体DX27与其它3个群体相比,在ITS1区的96-255 bp片段内有25个位点的差异;系统发育树显示,群体DX27与马铃薯腐烂茎线虫C型群体聚为1支,群体DX11、DX16、DX19与马铃薯腐烂茎线虫B型群体聚为1支。
根据形态学特征及rDNA-ITS序列分析结果,将该病原线虫确定为马铃薯腐烂茎线虫,其中群体DX27属于C型,群体DX11、DX16、DX19属于B型。
3.选用茄镰刀菌(Fusarium solani)、轮枝镰刀菌(F.verticillioides)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、半裸镰刀菌(F.semitectum)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、交链孢(Alternaria alternate)和茄链格孢(A.solani)等8个真菌菌株,在15℃、20℃、25℃和30℃4个温度梯度下对马铃薯腐烂茎线虫的最佳室内培养条件进行筛选。
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A. B在 20×倍 视野下培养皿 盖上的马铃薯茎 线虫聚集成团情 况 B. 培养 43天后聚集到皿 盖上的马 铃薯茎线 虫 ( 1× ) C. B在 40 ×倍视野下的情况 A. Cul tu red Dit ylenchus dest ructor on cov er of pet ri dish ( B× 20) ; B. Cul tu red Di tylenchus dest ructor on cov er of pet ri dish f or 43 d ( 1 × ) ; C. Cul tu red Dit ylenchus dest ructor on cov er of pet ri di sh ( B× 40)
沉 降或用 离心机使 线虫快 速沉淀 ( 6000 /rpm, 3 6个重复中培养量最大的为 28, 000条 /皿 , 最小
mi n )。 加入各约 500 mg /kg 的青霉素和氯霉素 , 为 18, 000条 /皿 ,平 均为 23, 777条 /皿 ; 25℃黑
保持 5 mi n,离心后吸出消毒液。 再用无菌水冲洗 暗条件下培养 43d后 ,培养量最小为 46, 000条 /
Culture of Potato Rot Nemotode
X U Jin-jun1, 2 , L I Shi-dong1 and Y AN G Zhi-w ei2
( 1. Th e Chinese Academy of Agricult ural Sci ences, Bei ji ng 100081, China; 2. N o rthw est Sci-Tech U niversi ty of Agricult ure and Forest ry, Y angli ng Shaanxi 712100, China)
N otes: Th e res pective resul t i s nematod e s um of per cover of petri di sh. Direct cult ure by pieces of s weet po tat o. N emat odes on each
f ungi colony no more th an 10 000 p er Pet ri di sh. - : f ew , + + : man y, + + + : pl en tif ul.
cover and co ng regat ed tog ether there. Key words: Ditylenchus destructor; Fusarium solani; Culture
马 铃 薯 茎 线 虫 ( Ditylenchus destructor T horne, 1945)是一类比较重要的植物病原线虫 , 主要发生在温带地区 ,中国、美国、加拿大、秘鲁、 日本、新西兰、南非、等国家和地区分布比较广泛 , 危害严重。 它的寄主有马铃薯、花生、胡萝卜、甘 薯、大豆、烟草、番茄、大麦等约 90～ 120多 种植 物 [2, 3 ]。 在国外主要危害马铃薯和花生 ,在国内主 要危害甘薯 ,是我国甘薯上比较重要的一类病害。 而 获得 大 量 的、 具有 良 好 生 命力 的 线 虫群 体 是 研 究这种线虫的生理生化特性、致病机理、遗传特点 以及控制技术的最基本的前提。 韩国 Young 和 Seung 曾在 1995年进行了马铃薯茎线虫的离体
培养温度 /℃ Cul tu ral
t emperatu res
20
F. solani
B . cinerea
Chaetomi um sp .
重复 Ck总数 平均数
总数
平均数
总数
平均数
Sum. / Average / Sum. / Av erage / Su m. / Averag e/
(条· 皿 - 1) (条· 皿 - 1) (条· 皿 - 1 ) (条· 皿 - 1 ) (条· 皿 - 1 ) (条· 皿 - 1)
集发 病的 土 壤及 病薯。 茄腐 镰刀 菌 ( Fusarium solani )由中国农业大学植病生防室提供 ,灰葡萄 孢 ( Bot rytis cinerea Pers)由中 国农业大学提供 ,
收稿日期: 2004-06-10 修回日期: 2004-08-15 基金项目: 国家 863计划 ( 2001 A A246010) 作者简介: 徐进军 ( 1977- ) ,男 , 硕士研究生。
接 入 茄腐 镰 刀 菌 ( Fusarium solani )、灰 葡 萄 孢 上 ,基本没有爬到盖子上的情况。
( Botry tis cinerea Pers ) 和 毛 壳 菌 ( Chaetomium
利用甘薯薯块繁殖马铃薯茎线虫 ,也可得到
sp. ) , 25℃温箱中暗培养。待菌丝长满整个培养皿 大量马铃薯茎线虫 ,但要取得线虫 ,需要要用贝曼
摘 要 : 采用茄腐 镰刀菌 ( Fusarium solani)培养马铃薯 茎线虫 ,在 20℃黑暗条件下培养 43d,直径 9 cm的培 养皿每 皿活线虫 总数平均 为 23, 777条 /皿 ;在 25℃黑暗条 件下培养 周期 43d,每皿 一次可培 养出 46, 000至 72, 000条线虫 ,平均 60, 777条。 与 Yo ung 和 Seung 的培养结 果 ( 10, 000条 /皿 ) [1 ]相比 每皿多 50, 000条左 右 ,而且培养的线虫聚集在培养皿盖上 ,方法简单 ,培养量大 ,含 杂质少。 关键词: 马铃薯茎线虫 ;茄腐镰刀菌 ;培养 中图分类号: S432. 4+ 5 文献标识码: A 文章编号: 1004-1389( 2004) 04-0077-04
好的病薯小块放入漏斗中加入无菌水 ,下面用带 个温度作 6个重复。 培养 35～ 40 d后 ,用贝曼漏
橡胶管的指型管相连 , 24 h后取下指型管 , 吸去 斗漏斗法进行线虫分离 ,在倒置显微镜下观察计
表层水 ,将线虫置于 35% 的蔗糖溶液中离心 , 去 数。
除杂物及淀粉粒 ,然后 ,吸出 400至 500条线虫 , 在显微镜下去除腐生线虫。
Abstract: Thi s paper repo rt ed an im prov ed m ethod t o ha rv est a larg e num ber of Dit ylenchus desturctor, pat hogen of sw eet po ta to rot disease, i n labo rato ry conditi on. The nemato de w as cult ured f o r 43d o n colo ny of Fusarium solani at 20℃ under darkness, leadi ng to 23, 777 nema todes reproduced per cov er of Pet ri dish ( dia. 9cm ) , at 25℃ leading to 46, 000-72, 000 reproduced. Com paring w it h Yo ung Ho Ki m& Seung Hw an Ohh 's metho d, thi s method i s no t o nly mo re ef fici ent but also mo re si mple, and the nemato des gained is more clean because they m ov ed i nt o t he i nside o f the Pet ri dishes
1. 2. 1 线虫分离 将采集到的病薯用自来水冲
同时将 500条消毒后的甘薯茎线虫接种于约
洗干净 ,剖开病薯 ,用刀切成薄片 ,然后用镊子将 200 g 表面消毒后的甘薯块茎中 ,将接 种口用原
病薯撕成小块 ,在漏斗底部铺上两层餐巾纸 ,将切 薯块封好 [4] , 分别在 20℃和 25℃下黑暗培养 ,每
3遍 , 定容到一定体积 (可 在 4℃冰箱中保存 ) 备 皿 ,培养量最大为 72, 000条 /皿 ,平均 为 60, 777
用。
条 /皿。在毛壳菌和灰葡萄孢上培养 43 d后 ,线虫
1. 2. 3 线虫的培养 在 PDA(约 20 m L )平板中 量很小 ( < 10, 000条 /皿 ) ,而且大部分 在培养基
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西 北 农 业 学 报
1 3卷
毛壳菌 ( Chaetom ium sp. )为中国农科院生物防治 养皿盖上的线虫用无菌水 冲洗到灭菌的 50 m L
研究所缪作清先生提供。
离心管中 ,然后将线虫液定容到 20 m L,用振荡器
1. 2 方 法
震荡均匀吸取 10个 10μL在倒置显微镜下计数。
西北农业学报 2004, 13( 4): 77～ 80 Acta Agricultur ae Bo r ea li-occidentalis Sinica
马铃薯茎线虫的培养
徐进军 1, 2 ,李世东 1 ,杨之为 2
( 1. 中国农业科学院生物防治研究所 ,北京 100081; 2. 西北农林科技大学植物保护学院 ,陕西杨凌 712100)
培养 ,每个温度作 6个重复。 接种培养 2～ 3 d后 地域的限制。
将培养皿盖朝下放置 ,培养 35～ 40 d左右 ,将培
表 1 不同温度下马铃薯茎线虫 (Ditylenchus destructor )的培养
Table 1 Cultural result of potato rot nematode in diff erent temperatures
2 结果与分析
1. 2. 2 线虫的消毒 将分离到的线虫用无菌水
不同培养材料在不同温度条件培养马铃薯茎
洗出 ,冲入无菌的指型管中 ,用 0. 5% 的次氯酸钠 线虫 ( D. dest ructo r)的试验结果 (表 1)表明: 在