hplc_opa柱后衍生离子交换法对乳粉中掺水解动物蛋白检测方法的研究
柱后衍生_高效液相色谱法测定水中呋喃丹和甲萘威_刘健明
Abstract: H PL C was applied to the deter minatio n of the insect icides car bo furan and carbary l in w ater with
刘健明等: 柱后衍生-高效液相色谱法测定水中呋喃丹和甲萘威
杀虫剂。对人、畜低毒, 对鸟类、鱼类安全, 可广泛用 于防治粮、棉、果、菜、林、牧及卫生 等方面的害虫。 GB 3838- 20025地表水环境质量标准6规定, 甲萘 威在地表水中质量浓度不得超过 0. 05 m g # L- 1 。
目前, 测定水中呋喃丹和甲萘威含量的方法有 高效液相色谱紫外法[ 2-4] 、气相色谱- 质谱法[ 5] 和柱 后衍生- 高效液相色谱法等[ 2] 。一般高效液相 色谱 紫外法需通过液- 液萃取或固相萃取等操作对样品 进行浓缩富集处理, 以提高检出限, 需消耗大量的溶 剂, 且在萃取过程中易引入干扰物质, 影响回收率和 稳定性; 气相 色谱- 质谱法 设备价 格昂贵。柱后 衍 生- 高效液相色谱法具有快速、灵敏、回收率高、重现 性好等特点。本工作采用柱后衍生- 高效液相 色谱 法测定水中呋喃丹和甲萘威, 只需酸化过滤即可直 接进样测定, 方法操作简单易行。
Keywords: H P LC; Car bo fur an; Carbary l; Po st- co lumn derivatizatio n; Water
呋喃丹又名克百威, 属氨基甲酸酯类的内吸杀 虫剂。呋喃丹属高毒农药, 随环境 生物毒性很强,
收稿日期: 2010-04-12 作者简介: 刘健明( 1982- ) , 男, 广东东莞人, 助理工 程师, 主要 从事水质检测工作。
离子色谱法测定婴幼儿配方乳粉中的糖类
乳业科学与技术
※分析检测
离子色谱法测定婴幼儿配方乳粉中的糖类
李 莉1，曹文军2，薛伟锋3,*，刘 明2
（1.大连市检验检测认证技术服务中心，辽宁 大连 116600；2.中检（大连）测试技术有限公司，辽宁 大连 3.大连海关技术中心，辽宁 大连 116600）
116600；
摘 要：为建立操作简便、快速有效、同时分析婴幼儿配方乳粉中多种糖类的离子色谱分析方法，采用高效阴离 子交换柱分离-脉冲安培检测法建立婴幼儿配方乳粉中葡萄糖、蔗糖、乳糖、低聚半乳糖三糖、蔗果三糖、低聚 半乳糖五糖、蔗果四糖和蔗果五糖的分析方法。考察色谱柱、柱温、检测波形和淋洗液（NaOH、NaAc）浓度及 流速对8 种糖分离效果的影响。结果表明：选用CarboPac PA20阴离子交换柱，包括分析柱（3 mm×150 mm）和 保护柱（3 mm×30 mm），流速0.30 mL/min，柱温30 ℃，在选定的流动相梯度洗脱程序条件下实现高效分离； 本方法对葡萄糖、蔗糖、乳糖、低聚半乳糖三糖、蔗果三糖、低聚半乳糖五糖、蔗果四糖和蔗果五糖的检出限为 3.0～12.0 μg/L，精密度实验相对标准偏差小于3%，豆浆样品中8 种糖类的加标回收率为78.0%～96.8%，表明该方 法可行。 关键词：离子色谱；脉冲安培检测；梯度洗脱；婴幼儿配方乳粉；多种糖类
Dairy Science and Technology, 2020, 43(1): 9-14. DOI:10.15922/ki.jdst.2020.01.003.
Determination of Sugars in Infant Formula by Ion Chromatography
LI Li1, CAO Wenjun2, XUE Weifeng3,*, LIU Ming2
反向高效液相色谱法分离检测乳粉中的酪蛋白
反向高效液相色谱法分离检测乳粉中的酪蛋白刘梦云;申雨珂;靳羽晓;袁海娜;鲍文娜;尤玉如;刘士旺【期刊名称】《中国乳品工业》【年(卷),期】2017(045)003【摘要】以C8色谱柱为分离柱,利用反相高效液相色谱法,在流速1.0 mL/min,检测波长220 nm,柱温25℃,0.1％TFA水溶液为A流动相;100％乙腈溶液为B流动相的梯度洗脱条件下对乳粉中酪蛋白的4种组分(αs1-酪蛋白、αs2-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白)分离检测.结果表明,该法具有良好的线性关系,重复性好,加标回收率高,对全脂牛乳粉、羊乳粉等乳粉中酪蛋白组分的分离测定有很好的效果.【总页数】4页(P52-54,58)【作者】刘梦云;申雨珂;靳羽晓;袁海娜;鲍文娜;尤玉如;刘士旺【作者单位】浙江科技学院生化学院/轻工学院,杭州310023;浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室,杭州310023;浙江省农业生物资源生化制造协同创新中心,杭州310023;浙江科技学院生化学院/轻工学院,杭州310023;浙江科技学院生化学院/轻工学院,杭州310023;浙江科技学院生化学院/轻工学院,杭州310023;浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室,杭州310023;浙江科技学院生化学院/轻工学院,杭州310023;浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室,杭州310023;浙江科技学院生化学院/轻工学院,杭州310023;浙江科技学院生化学院/轻工学院,杭州310023;浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室,杭州310023;浙江省农业生物资源生化制造协同创新中心,杭州310023【正文语种】中文【中图分类】TS252.7【相关文献】1.高效液相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中酪蛋白磷酸肽的含量 [J], 刘玉娟2.高效液相色谱法检测乳粉中活性β-内酰胺酶含量 [J], 李雪芳;冯卫强;戴绚丽3.正相高效液相色谱法检测婴幼儿乳粉中的α-生育酚、α-生育酚醋酸酯 [J], 张晓雷;任国谱;颜景超;刘奕博4.超高效液相色谱法快速检测乳粉中维生素A方法的研究 [J], 其布勒哈斯;徐向峰;扎木则仁;常建军;宋晓东5.高效液相色谱法检测婴幼儿配方乳粉中酪蛋白磷酸肽 [J], 魏敏;李兴佳;柴艳兵;李飞;刘丽;张耀广因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱_柱后衍生法检测水中呋喃丹残留量的方法研究_施俭
引起对地下水的污染， 为此美国对呋喃丹使用作了 一些地区性限制,我国在 2007 年 7 月 1 日正式实施 的新版 《生活饮用水卫生标准 》(GB 5749—2006)中 也列入呋喃丹作为检测指标。
图 1 呋喃丹结构式 Fig.1 The structural formula of carbofuran
邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法检测珍珠粉中的氨基酸含量
邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法检测珍珠粉中的氨基酸含量【摘要】目的测定珍珠粉中的氨基酸含量。
方法邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生反相高效液相色谱法，采用荧光检测，梯度洗脱。
结果该法在28 min之内分离出15种氨基酸。
结论该法样品用量少、灵敏度高、线性范围宽、重现性好，适于分离大量样品。
【关键词】高效液相色谱；柱前衍生法；氨基酸；珍珠粉Determination of the Contents of Amino Acids in Pearl Powder by RP-HPLC after Pre��column Derivation with O��Phthaldialdehyde (OPA)Abstract：ObjectiveIn this paper， we determined amino acids in pearl powder. Methods A manual pre-column derivation procedure has been developed by reversed-phase HPLC with O-phthalaldehyde and fluorescence detector. Results More than 15 amino acids were separated within 28 min. Conclusion The method is sensitive， precise and shows good repeatability.Key words：High��performance liquid chromatography；Pre��column derivation； Amino acids； Pearl powder随着生命科学和生物工程的发展，氨基酸作为组成生物大分子的基本单元，其分析方法受到重视。
20世纪70年代以后，反相高效液相色谱技术在氨基酸分析中得到广泛应用，使分离时间缩短。
柱前在线衍生-HPLC内标法快速测定脑蛋白水解物注射液中的氨基酸
柱前在线衍生-HPLC内标法快速测定脑蛋白水解物注射液中的氨基酸冯辉;董祥君;吴焱;孙海侠【摘要】A HPLC for rapid determination of amino acids in cerebroprotein hydrolysate injection was developed. Norvaline was added to samples before preparation as internal standard. Then online derivatization with o-phthaldialdehyde(OPA) and 9-fluore-nylmethyl chloroformate( FMOC - Cl) was performed automatically by the autosampler, and analyzed on a C18 short column using gradient elution with diode array detector(for Iysine) and fluorescence detector(for other amino acids except lysine) combined detection. The analytical time was 14 min. The peak area of amino acids versus their concentration had a good linearity (correlation coefficients were 0.9987 -0.9999) in the range of 4.5 -900 μmol/L. Limits of detectio n (LOD) were in the range of0.032 -0.578 mg/L, limits of quantification (LOQ) were in the range of 0. 105 - 1.929 mg/L. The recoveries of standard spiking of 16 amino acids were in the range of 95.39% - 105.33%. The relative standard deviations(n =7) of intraday and interday were in the range of 1.95% -4.81% and 3. 14% -6.70% , respectively.%建立了利用高效液相色谱仪快速测定脑蛋白水解物注射液中氨基酸含量的方法.样品处理采用先提取后水解转化的方法,色谱分离使用反相C18分析柱二元高压梯度洗脱;使用二极管阵列检测器检测,波长为260 nm;分析时间为14 min.各氨基酸在4.5-900μmol/L范围内线性关系良好,相关系数为0.998 7-0.9999;检出限为0.032 -0.578 mg/L,定量限为0.105 -1.929 mg/L;16种氨基酸回收率为95.39% -105.33%,日内和日间分析的相对标准偏差(n=7)分别为1.95% -4.81%和3.14%-6.70%.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】5页(P29-33)【关键词】柱前在线衍生;高效液相色谱法;脑蛋白水解物注射液;氨基酸【作者】冯辉;董祥君;吴焱;孙海侠【作者单位】长春市产品质量监督检验院,长春,130012;山东科兴生物制品有限公司,济南,250200;长春市产品质量监督检验院,长春,130012;长春市产品质量监督检验院,长春,130012【正文语种】中文脑蛋白水解物注射液(cerebroprotein hydrolysate injection)是以健康猪脑(或牛脑)经酶水解制成的无菌制剂，主要成分是游离氨基酸和小分子多肽[1]。
婴配乳粉中2′-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-新四糖含量离子色谱法检测
第41卷2024 年 3 月应用化学CHINESE JOURNAL OF APPLIED CHEMISTRY第3期405⁃414婴配乳粉中2′-岩藻糖基乳糖和乳糖-N -新四糖含量离子色谱法检测詹胜群 葛城* 周荣杰 周钧（澳优乳业（中国）有限公司， 长沙 410200）摘要 研究了离子色谱法同时测定婴配乳粉中2′-岩藻糖基乳糖和乳糖-N -新四糖的含量及影响因素。
采用离子色谱柱分离，脉冲安培检测器检测和外标法定量分析等方法。
通过对不同净化方式、酶解处理和洗脱条件等过程进行考察和优化，比较确定色谱条件和前处理条件对分离的影响，并就线性范围进行探讨。
结果表明，优化后的方法线性关系良好， R 2＞0.999； 方法精密度好， 相对标准偏差（n =7）＜2.7%； 方法准确度好，2′-岩藻糖基乳糖回收率为95.97%~103.38%，乳糖-N -新四糖回收率为100.09%~104.01%。
该方法能对婴配乳粉中的2′-岩藻糖基乳糖和乳糖-N -新四糖同时测定， 操作简单， 具有良好的准确度和精密度， 可为婴配乳粉质量监控方法提供参考。
关键词 母乳低聚糖；离子色谱；2′-岩藻糖基乳糖；乳糖-N -新四糖；婴配乳粉中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1000-0518（2024）03-0405-10母乳低聚糖（HMOs ）是一种多功能聚糖，是人乳中的第三大成分［1］，其结构主要由5种基本单糖组成： 葡萄糖（Glucose ， Glc ）、半乳糖（Galactose ， Gal ）、N -乙酰葡糖氨（Nacetylglucosamine ， GlcNAc ）、岩藻糖（Fucose ， Fuc ）和N -乙酰神经氨酸（N -Acetylneuraminic acid ， NeuAc ），通常由半乳糖和葡萄糖与其它一种或多种单糖聚合形成多种结构［2］。
HMOs 对于婴幼儿的生长健康有着重要的意义，除了可预防感染、过敏以外，还能促进肠胃发育、增强自身免疫、预防糖尿病和心血管疾病［3-5］等。
离子交换高效液相色谱法测定婴幼儿奶粉中的核苷酸
离子交换高效液相色谱法测定婴幼儿奶粉中的核苷酸离子交换高效液相色谱法（Ion-exchange high performance liquid chromatography，IE-HPLC）是一种常用于分离和测定化合物的方法。
核苷酸是婴幼儿奶粉中的重要营养成分之一，对婴幼儿的生长发育起着重要作用。
测定婴幼儿奶粉中的核苷酸含量对于保证婴幼儿的营养摄入是非常重要的。
IE-HPLC法测定婴幼儿奶粉中的核苷酸的主要步骤如下：（一）样品预处理1. 取适量婴幼儿奶粉样品，称重记录样品的质量。
2. 将样品加入适量的纯水中，搅拌均匀，使其溶解。
3. 用污染滤纸过滤样品溶液，将滤液收集。
4. 取适量滤液，用实验室离心机离心5分钟，去除悬浮物。
5. 取上清液，转移到离心管中备用。
（二）色谱条件设置1. 使用离子交换高效液相色谱仪，选择适量的离子交换柱。
2. 设置流动相，一般采用含有缓冲剂的盐溶液，pH值在3.8-4.2之间。
3. 设置流速，通常为1.0 mL/min。
4. 设置检测波长，核苷酸的最大吸收波长一般为260 nm。
根据不同的核苷酸类型，可能需要调整波长。
（三）标准曲线绘制1. 取不同浓度的核苷酸标准品，称重配制不同浓度的核苷酸溶液。
2. 用色谱仪分析不同浓度的核苷酸标准溶液，记录吸光度值。
3. 将吸光度值作为纵轴，核苷酸浓度作为横轴，绘制标准曲线。
4. 根据标准曲线计算未知样品中核苷酸的浓度。
（四）样品分析1. 取适量以上清液，转移到注射器中。
2. 用注射器将样品注入离子交换柱中，进行检测。
3. 根据标准曲线计算样品中核苷酸的浓度。
（五）结果计算和分析1. 将样品中核苷酸的浓度换算成每100克样品的含量，用于评价婴幼儿奶粉的营养成分。
2. 比较不同样品之间核苷酸含量的差异，评估婴幼儿奶粉的质量。
离子交换高效液相色谱法是一种准确、灵敏且高效的方法，可用于测定婴幼儿奶粉中的核苷酸含量。
通过该方法的应用，可以及时评估婴幼儿奶粉的营养成分，并确保婴幼儿的营养摄入符合标准。
柱后衍生法在食品标准中的应用
柱后衍生法在食品标准中的应用在HPLC分析中，最常用的检测器为UV/VIS或荧光检测器，但是很多物质因不具有发色基团或不能产生荧光，或者很难与背景区分以致不能被检测。
天津兰博独家代理的美国兰博柱后衍生装置，完美地解决了这一问题。
它能够将一些因上述原因不能被分析的样品通过化学反应，转化为带有发色基团或能够产生荧光的可分析化合物，在某些情况下可以使检测灵敏度提高几个数量级，这使得HPLC应用得以被广泛地延伸。
衍生化技术分为柱前衍生和柱后衍生两类。
而柱后衍生化技术是常用的一种在线处理技术。
该技术为介质中痕量药物的分析和弱紫外吸收物质的分析开辟了广阔的应用前景，在食品中残留农药检测、氨基酸分析、无机离子分析、生物毒素检测、兽药分析及体内药物分析等领域有着广泛的应用。
与柱后衍生相比，柱前衍生因存在反应时间长、操作步骤烦琐、重现性差、分析测定不易连续化和自动化等不足而逐渐被柱后衍生所取代。
在近年来颁布的食品标准中，柱后衍生的应用也呈现逐年递增的趋势。
柱后衍生系统是将HPLC的洗脱液与衍生试剂混合，混合溶液在一定的时间内通过反应器完成反应。
如果反应速度慢，可通过反应器加热加快速度。
有些反应则需要加入两种溶剂。
最后混合液进入检测器使衍生反应生成物被检测。
一个完善的柱后衍生系统由计量泵、脉冲阻尼器、加热线圈、安全装置等部分组成，以确保提供安全、可靠的数据。
下面列举了若干柱后衍生法在食品标准当中的应用：出口面制品中溴酸盐氢碘酸80 柱后衍生离子色谱法紫外0.1 mg/kg进出口肉及肉制品中甲萘威水解：NaOH溶液衍生：OPA溶液水解：100衍生：室温柱后衍生反相色谱法(C18)荧光0.005 mg/kg婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定OPA溶液室温柱后衍生钠离子色谱法荧光0.5 mg/100g牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2 过溴化溴化吡啶35 柱后衍生反相色谱法(C18)荧光0.001~0.05μg/kg1025牛奶中氨基苷类多残留OPA2-巯基乙醇45 柱后衍生阳离子交换色谱法荧光10~25 μg/L蔬菜和水果中氨基甲酸酯类农药多残留水解：NaOH溶液衍生：OPA溶液水解：100衍生：室温柱后衍生反相色谱法(C18)荧光0.008~0.02mg/kg蜂王浆中链霉素、双氢链霉素残留衍生剂1：1,2-萘醌-4-磺酸钠衍生剂2：NaOH50 柱后衍生反相色谱法(C8)荧光0.02、0.08mg/kg进出口蜂蜜中黄曲霉毒素碘70 柱后衍生反相色谱法(C18)荧光0.5 μg/kg进出口蜂王浆及蜂王浆冻干粉中链霉素残留量衍生剂1：1,2-萘醌-4-磺酸钠衍生剂2：NaOH室温柱后衍生反相色谱法(C18)荧光0.01、0.02mg/kg1柱后衍生除应用在以上在食品标准当中外，还在其它多种食品中的氨基酸，黄酮类，萜类，氨基糖苷类、磺胺类、四环素类、聚醚类等抗生素，氨基甲酸酯、除草剂等农药残留，以及黄曲霉毒素、河豚毒素、生物性贝类毒素等生物毒素等食品分析中有着广泛应用。
高效液相色谱法测定奶粉中羟脯氨酸含量
高效液相色谱法测定奶粉中羟脯氨酸含量于淑新;赵连海;王丰琳;孙元社;唐涛;李彤【摘要】In this paper, a method for measurement of hydroxyproline in milk powder by high perform ance liquid chromatography(HPLC)with pre-column derivation was established. 2, 4-dinitrofluorobenzene (DNFB) was used as derivative reagent, and the separation was performed on Elite AAK C18 column (250 mm×4. 6 mm I. D. , 5 μm) with gradient elution of 0.05mol/L sodium acetate and acetonitrile/water (50: 50, V:V) at 27 ℃. The flow rate was 1. 2 mL/min and the detection wavelength was 360 nm. Method val idation was performed. The results showed that the linear range was from 0. 04 to 10 mg/L with a linear correlation coefficient of 0. 9999. The limit of quantification was 30 mg/kg in milk powder sample (S/N = 10). The relative standard deviations of parallel determination (n=5) were 9. 64% and 0. 36% with spiked of 0. 05 mg/L and 8. 0 mg/L respectively. The recoveries were from 95. 94% to 114. 87% in the spiked range of 0. 05~8. 0 mg/L in milk powder. It was indicated that the method was accurate and repeatable for the determination of hydroxyproline in milk powder.%建立了柱前衍生化高效液相色谱法(HPLC)测定奶粉中羟脯氨酸含量的方法.以2,4-二硝基氟苯为衍生试剂,采用Elite AAK C18色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.,5μm)；0.05 mol/L乙酸钠,乙腈/水(50∶50,V∶V)为流动相梯度洗脱；流速1.2 mL/min;检测波长360 nm；柱温27℃.结果表明:羟脯氨酸标准品在0.04～10.00mg/L范围内线性相关系数为0.9999;方法检出限为30 mg/kg(S/N=10)；加标浓度为0.05,8.0 mg/L的平行5次测试结果相对标准偏差分别为9.64％和0.36％；0.05,0.1,0.25,0.5,1.0,2.0,8.0 mg/L7个加标水平测试,加标回收率在95.94％～114.87％之间,加标线性曲线的线性相关系数为0.9998.该方法定量结果准确,满足奶粉中羟脯氨酸含量测定的要求,可以作为判断奶粉中是否违禁添加皮革水解蛋白的依据.【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2012(000)002【总页数】4页(P26-29)【关键词】羟脯氨酸;皮革水解蛋白;柱前衍生;高效液相色谱【作者】于淑新;赵连海;王丰琳;孙元社;唐涛;李彤【作者单位】大连依利特分析仪器有限公司,大连116023;大连依利特分析仪器有限公司,大连116023;大连依利特分析仪器有限公司,大连116023;大连依利特分析仪器有限公司,大连116023;大连依利特分析仪器有限公司,大连116023;辽宁大连依利特分析仪器工程技术研究中心,大连116023;大连依利特分析仪器有限公司,大连116023;辽宁大连依利特分析仪器工程技术研究中心,大连116023【正文语种】中文近几年，国内有些乳制品生产企业违禁向乳及乳制品中添加皮革水解蛋白，以提高蛋白质含量，引起社会的广泛关注。
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Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．０７，２００７刘婷１，姜金斗２，刘宁１，＊（１．东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨１５００３０；２．国家乳制品质量监督检验中心，黑龙江哈尔滨１５００８６）摘要：利用高效液相离子交换色谱法寻找乳粉中掺水解动物蛋白的特征氨基酸，对乳粉和水解动物蛋白中的１７种氨基酸进行了分离测定，氨基酸浓度在５０～１０００μｍｏｌ／Ｌ时，其峰面积和氨基酸浓度的线性相关系数均大于０．９８９６，且乳粉和水解动物蛋白样品的重现性较好，加标回收率分别为９５．７％～１０４．０％、９５．３％～１０４．３％。
通过对比水解动物蛋白与乳粉的氨基酸指纹图谱，找到了甘氨酸、丙氨酸等差异显著的６种特征氨基酸用于定性鉴定，并根据模拟掺假实验，建立了乳粉中掺假水解动物蛋白的半定量检测方法。
关键词：高效液相色谱法，氨基酸，乳蛋白，水解动物蛋白Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｓｔｕｄｉｅｄｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆ１７ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒａｎｄｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄａｎｉｍａｌｐｒｏｔｅｉｎｂｙｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅＨＰＬＣ．Ｗｈｅｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｗｅｒｅ５０～１０００μｍｏｌ／Ｌ，ｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐｅａｋａｒｅａｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｗｅｒｅａｂｏｖｅ０．９８９６．Ｔｈｅｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙｏｆｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒａｎｄｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄａｎｉｍａｌｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｇｏｏｄ，ｔｈｅｒａｎｇｅｓｏｆｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｗｅｒｅ９５．７％～１０４．０％ａｎｄ９５．３％～１０４．３％．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｉｎｇｅｒａｔｌａｓｏｆｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ｗｅｃａｎｆｉｎｄｓｉｘｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ｓｕｃｈａｓｇｌｙｃｉｎｅ，ａｌａｎｉｎｅ．Ａｎｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｉｍｉｔａｔｅｄａｄｕｌｔｅｒａｔｅｄｔｅｓｔ，ｗｅｃｏｕｌｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅｓｅｍｉｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆａｄｕｌｔｅｒａｔｅｄｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄａｎｉｍａｌｐｒｏｔｅｉｎｉｎｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ；ｌａｃｔｏｐｒｏｔｅｉｎ；ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄａｎｉｍａｌｐｒｏｔｅｉｎ中图分类号：ＴＳ２０７．３文献标识码：Ａ文章编号：１００２－０３０６（２００７）０７－０２０７－０４收稿日期：２００６－１０－３０＊通讯联系人作者简介：刘婷（１９８１－），女，硕士研究生，研究方向：食品分析检测。
蛋白质在乳中含量为３．０％～３．５％，是乳的主要成分，对乳品的理化特性和营养价值有重要的影响。
某些非法厂家在乳粉，尤其是在婴幼儿配方乳粉中掺入廉价的水解动物蛋白来冒充或替代乳蛋白质。
水解动物蛋白是将牛皮下脚料等有害成分粗加工后制成的水解蛋白质，因其氨基酸的组成不合理，且不易消化，所以营养价值低下，导致人体吸收利用率降低，严重地影响到婴幼儿的生长发育和智力水平。
在一般情况下，质检单位在市场上抽到产品进行检验所得的数据中，蛋白质含量实际上是乳蛋白与水解动物蛋白之和，所以在加工企业常规检验时水解动物蛋白成分是测不出来的，因此需要建立快速测定乳制品中水解动物蛋白的检测方法，保障乳制品的质量与安全。
本文利用邻苯二甲醛（ＯＰＡ）柱后衍生、离子交换高效液相色谱法对乳蛋白和水解动物蛋白水解后的氨基酸进行了分离和定性、半定量分析，从而确立了可行的有效检测水解动物蛋白的方法。
１材料与方法１．１材料与设备乳粉进口脱脂乳粉（龙丹提供）、完达山全脂、脱脂奶粉、伊利全脂甜鲜奶粉、蒙牛全脂甜奶粉、美赞臣安儿宝１段、３段幼儿配方乳粉、多美滋多领加、多学１加婴幼儿配方乳粉；水解动物蛋白（四种）自某企业采集。
Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪１５２５泵，７１７自动进样器、２４７５荧光检测器、Ｅｍｐｏｗｅｒ系统操作软件；Ｗａｔｅｒｓ氨基酸分析专用柱４．６×２５０ｍｍ；ＤＫ－９８－１型电热恒温水浴锅、ＤＨＧ－９２４５Ａ鼓风干燥箱上海一恒科技有限公司；ＥＬＧＡ超纯水仪等。
１．２主要试剂配制１．２．１缓冲液Ａ二水合柠檬酸三钠１９．６０ｇ，苯酚１．０ｇ，加超纯水８００ｍＬ溶解，用硝酸调ｐＨ至３．１０，再用水定容至１０００ｍＬ，用０．４５!ｍ滤膜过滤备用。
１．２．２缓冲液Ｂ硼酸１．５０ｇ，硝酸钠２１．００ｇ，加超纯水８００ｍＬ溶解，用６ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠调ｐＨ至９．６０，再用水定容至１０００ｍＬ，用０．４５!ｍ滤膜过滤备用。
１．２．３氨基酸标样（Ｓｉｇｍａ公司）配制１７种氨基酸标样和混合氨基酸标准液，浓度均为５００!ｍｏｌ／Ｌ。
１．３样品处理取含蛋白２０ｍｇ的各种样品于水解管中，加１０ｍＬ的浓盐酸，滴入几滴苯酚，充氮后封管，置于ＨＰＬＣ－ＯＰＡ柱后衍生离子交换法对乳粉中掺水解动物蛋白检测方法的研究分析检测ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＦｏｏｄＩｎｄｕｓｔｒｙ１１０℃烘箱中保持２４ｈ，冷却后经滤纸过滤到５０ｍＬ容量瓶中，用超纯水反复冲洗水解管及滤纸，最后定容。
取１０ｍＬ的样液于蒸发皿中在蒸气浴上蒸干，加超纯水重复三次，残渣用１０ｍＬ缓冲液Ａ定容，０．４５!ｍ滤膜过滤，备用上机。
１．４色谱条件荧光检测波长：激发波长：３３８ｎｍ；发射波长：４２５ｎｍ；柱温：６２℃，反应器：３５℃；进样量：１０!Ｌ；流速：０．４ｍＬ／ｍｉｎ，柱后泵：０．４ｍＬ／ｍｉｎ；梯度洗脱程序，如表１。
１．５样品氨基酸的测定１．５．１氨基酸工作曲线制作将氨基酸混合标准液配制成浓度分别为５０、１００、２００、３００、５００、６００、８００、１０００μｍｏｌ／Ｌ的溶液，每一种标准液都按１．４的色谱条件进行上机测定。
１．５．２乳粉的氨基酸测定样品处理方法同１．３所述，并进行重现性及回收率实验。
１．５．３水解动物蛋白的氨基酸测定样品处理方法同１．３所述，并进行重现性及回收率实验。
１．６模拟掺假实验在乳粉中按不同质量比１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％的量添加水解动物蛋白来制备样品，样品处理方法同１．３所述，按１．４的色谱条件进行上机测定。
２结果与分析２．１样品氨基酸的测定结果乳粉、水解动物蛋白的氨基酸色谱图如图２、图３所示。
２．１．１氨基酸标样的回归方程、相关系数和线性范围１７种氨基酸标准色谱图见图１，以峰面积（Ａ）为纵坐标，各种氨基酸溶液浓度（Ｃ）为横坐标，得到各氨基酸的工作曲线，回归方程、相关系数和线性范围结果表（略）。
从表中数据可以看出，大部分氨基酸的回归方程相关系数均为０．９９以上，仅有Ａｓｐ和Ｓｅｒ的相关系数为０．９８９６和０．９８９８，相关性较好。
２．１．２样品的重现性和回收率实验精密称取适量样品，平行称５份，按１．３的方法处理样品，进行上机分析。
另取不同浓度的氨基酸混合标样分别加入到样品中，进行加标回收率的测定。
平行样间各种氨基酸的相对标准偏差ＲＳＤ和样品加标回收率表略。
结果表明，乳粉氨基酸的ＲＳＤ在０．６５％～４．５１％之间，水解动物蛋白氨基酸的ＲＳＤ在０．３８％～３．９１％之间，重现性较好，样品加标回收率范围分别为９５．７％～１０４．０％、９５．３％～１０４．３％。
２．２乳粉与水解动物蛋白氨基酸指纹图谱的对比分析２．２．１乳粉的氨基酸指纹图谱本实验对比了国内外不同知名品牌的乳粉及婴幼儿配方乳粉的氨基酸指纹图谱，结果表明，各图谱形态均与图２基本一致，只是某几个氨基酸含量比例由于配方调制有略微的差异。
乳蛋白中赖氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸和亮氨酸占总氨基酸的含量比例较高，分别为２３．９０％、１９．６０％、１１．２０％和８．５７％。
２．２．２水解动物蛋白的氨基酸指纹图谱本实验对四种不同原料来源制成的水解动物蛋白进行了氨基酸测定，对比四种水解蛋白氨基酸的指纹图谱，各峰的保留时间、面积均与图３基本一致，说明不同种原料水解而成的水解动物蛋白的各种氨基酸含量组成基本接近。
２．２．３图谱对比分析对比水解动物蛋白与乳粉的氨基酸指纹图谱，见图４，某些氨基酸含量有明显的差别。
水解动物蛋白中的甘氨酸（峰２）含量明显很高，四１天门冬氨酸，２苏氨酸，３丝氨酸，４谷氨酸，５甘氨酸，６丙氨酸，７缬氨酸，８甲硫氨酸，９异亮氨酸，１０亮氨酸，１１酪氨酸，１２苯丙氨酸，１３组氨酸，１４色氨酸，１５赖氨酸，１６氨，１７精氨酸６００．００５００．００４００．００３００．００２００．００１００．０００Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ时间（ｍｉｎ）０１０．００２０．００３０．００４０．００５０．００６０．００７０．００８０．００９０．００１００．００１１０．０图２脱脂乳粉氨基酸色谱图２１３４５６８７９１０１１１２１３１４１５１６１７时间（ｍｉｎ）流速（ｍＬ／ｍｉｎ）Ａ（％）Ｂ（％）０４８７５７６１１５０．４０．４０．４０．４０．４１００００１００１０００１００１００００表１梯度洗脱程序１天门冬氨酸，２苏氨酸，３丝氨酸，４谷氨酸，５甘氨酸，６丙氨酸，７胱氨酸，８缬氨酸，９甲硫氨酸，１０异亮氨酸，１１亮氨酸，１２酪氨酸，１３苯丙氨酸，１４组氨酸，１５色氨酸，１６赖氨酸，１７氨，１８精氨酸９００．００８００．００７００．００６００．００５００．００４００．００３００．００２００．００１００．０００Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ时间（ｍｉｎ）０１０．００２０．００３０．００４０．００５０．００６０．００７０．００８０．００９０．００１００．００１１０．００图１氨基酸混合标准液色谱图２１３４５６８７９１０１１１２１３１４１５１６１７１８分析检测氨基酸名称（代码）六种乳粉氨基酸含量平均值四种水解动物蛋白氨基酸含量平均值天门冬氨酸（Ａｓｐ）１１．２０８．７９苏氨酸（Ｔｈｒ）４．０２１．３４＊甘氨酸（Ｇｌｙ）２．０３３２．５５＊丙氨酸（Ａｌａ）３．０１１３．１７缬氨酸（Ｖａｌ）６．４５２．２５甲硫氨酸（Ｍｅｔ）１．０５０．２４异亮氨酸（Ｉｌｅ）５．０７１．５０＊亮氨酸（Ｌｅｕ）８．３８２．９８酪氨酸（Ｔｙｒ）４．２３０．１６苯丙氨酸（Ｐｈｅ）３．２３１．３６组氨酸（Ｈｉｓ）２．４１２．１９＊未知峰０．９２色氨酸（Ｔｒｐ）２．０６３．８８＊赖氨酸（Ｌｙｓ）２３．９８１３．４７＊精氨酸（Ａｒｇ）０．４１２．４９丝氨酸（Ｓｅｒ）５．９２２．７３＊谷氨酸（Ｇｌｕ）２０．４７１１．８２表２乳粉与水解动物蛋白的各氨基酸占总氨基酸的含量比较（％）（＊为特征氨基酸）种水解动物蛋白中的甘氨酸占总氨基酸含量比例都在３３．０４％～３３．３７％之间，而乳蛋白中的甘氨酸占总氨基酸含量比例只在１．７７％～２．０３％之间，可见水解动物蛋白中的甘氨酸含量要高出乳蛋白的１６倍。