肿瘤化疗药敏试验研究进展

甲月赞（ｆｏ姗ａ砌），而死细胞或红细胞则无此能力，甲月赞的形成
量与细胞活力成正比。因此，可通过酶标仪测定其在波长 ５７０Ｉｌｍ的吸光度（Ａ）判断甲膪的多少，利用比色法来计算细
作者单位：０５００１１石家庄，河北医科大学第四医院肿瘤内科（王 玉栋、刘巍）；天津医科大学附属肿瘤医院乳腺病理研究室（付丽）
通讯作者：刘巍，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｗｅｉｈｅｂｅｉ＠ｙａｌｌ００．ｃｏｍ．ｃｎ
１．２区别染色细胞毒检测法
１９８３年，ｗｅｉｓｅｎｔｌｌａｌ建立的区别染色细胞毒检测法（ｄ扛 ｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｃｙｔｏｔ尉ｃ畸嬲ｓａｙ，ＤＩＳｃ）基于以整体细胞群杀 灭概念为基础，同时检测分裂细胞和非分裂细胞，从而维持肿 瘤细胞群体的异质性。该法利用快绿使短期培养（４ ｄ）的死细 胞着色，同时加入鸭红细胞作为内计数标准，以药物处理组与 对照组残存肿瘤细胞的比值作为评价药物敏感性的指标，以残 存肿瘤细胞＜５０％作为体外敏感的界限。该方法不需要单细胞 悬液，不依赖细胞的分裂。Ｇ犯ｄａｒ等嘲和ｗｄｂｕｒ等咚拄行了该方 面的研究，结果显示该技术评价成功率为３３％～７８％，但疗效 结果的差异较大。该方法需人工计数细胞，要具有丰富的细胞 学经验，易受人为因素影响，目前还缺乏随机对照研究的评价。
作者简介：解长佶，男，硕士研究生在读。 （收稿日期：２００６＿ｌＯ一２５；修回日期：２００６一１２—２６）
（本文编辑：白润萍校对：李旭清）
肿瘤化疗药敏试验研究进展
王玉栋刘巍综述付丽审校
【摘要】 肿瘤化疗药敏试验对指导肿瘤患者个体化治疗具有潜在的重要价值，且随着肿瘤化疗和 化疗药敏试验的发展不断地朝着简单、快速、敏感的筛选方向迈进。对ｌＩ缶床意义较大的肿瘤化疗药敏试验 体内和体外方法的研究现状和进展进行了阐述。
三维立体组织培养法（ｈｉｓｔｏｃｕｌｔｕｒｅ ｄｍｇ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｓｓａｙ，
ＨＤＲＡ）由Ｈ盛ｎａｎ建立于２０世纪９０年代初，因此也称为
ｈｏ任ｈｌａｎ培养。其基本原理是将肿瘤组织以组织块形式在体外 培养，然后加入化疗药物，观察组织块对不同化疗药物的敏感 性。此方法的建立基于以下观点：单层的平面生长不利于细胞 形态的展现，影响了细胞结构的完整性；结构完整性的丧失，又 影响了瘤细胞的一些特异性表达；体外药敏试验缺乏体内的代 谢环境；缺乏体内瘤细胞之间的相互联系。因此，将单层细胞培 养改为组织块或多细胞球体培养，模拟体内实体瘤内细胞的环 境会更加接近体内组织情况，与临床实际情况更为接近【１８】。梁 永钜等【１９，捌报道，用此方法检测６０例卵巢恶性肿瘤组织，与临
聃ｓｏｃｉ８ｔｅｄ ｗｉＩｈ ｍｄｕｃｅｄ ｅｘｐ托ｓｓｉｏｎ《ＩＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ０３，１０（４）：５７９—５９０．
【２２】 ｓｏｕｇａｋｏ行Ｗ，Ｒ幽ｇＩｌｅ Ｃ，Ｔｒｕ肪ｔ—Ｐｅｍｏｔ ｃ，ｅｔ ａ１．Ｕｓｅ ｏｆ ａ ｈｉｇｈ—
ｄｅｎＢｉｔｙ ＤＮＡ ｐｍｂｅ ａｍｙ ｆｂｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎ譬舢ｔａｔｉｏｎｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｒｉ—
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１．３端粒酶活性测定法 端粒酶活性是近几年国内外研究热点，端粒酶活性测定应
用于肿瘤诊断、端粒酶抑制剂应用于肿瘤治疗均被认为具有较 大的发展潜力。端粒酶活性测定法（ｔｅｌｏｍｅｒｉｃ ｒｅｐｅａｔ ａｍｐｌｉｆｉｃａ— ｔｉｏｎ ｐｍｔｏｃｏｌ，ＴＲＡＰ）出现于２０世纪９０年代，用于判断化疗药 物对肿瘤的效果，没有明确应用于肿瘤药敏预测，文献报告较 少ｆｊｏｊ。其基本原理为：端粒酶是目前已知最为广谱的恶性肿瘤 分子标志物，几乎在各种人类恶性肿瘤中均有不同程度的表 达，而正常体细胞大多无端粒酶活性，仅在某些有分化能力的 组织，如胚胎细胞、男性生殖细胞、造血干细胞、活化的淋巴细 胞有表达…≈。目前的研究表明，恶性肿瘤组织中的端粒酶检出 率达８４％一９５％，而良性肿瘤和正常组织中端粒酶的检出率 仅为４％左右。而且在一定范围内肿瘤细胞数与端粒酶活性成 线性关系，利用ＰｃＲ—ＴＲＡＰ—ＥＬＩｓＡ可以定量检测端粒酶活性， 进而测定肿瘤细胞数∞】。其优点是可以区分正常组织细胞和恶 性肿瘤细胞；灵敏度极高，可以检测出１—１０个肿瘤细胞；可以 应用于穿刺、活检标本，适应临床需要。缺点是成本较高、操作 较复杂，而且利用扩增容易出现假阳性。目前报道较少，缺乏大 量临床验证。 １．４ ＡＴＰ生物荧光法
ｈ鹪ｂｅｃ砌ｅ ｍｏｒｅ ｓｉｍｐｌｅ，ｑＩｌｉｃｋ蛐ｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ．．１１ｌｅ ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ ｄｅＶｅｌｏｐｍｅｎｔ锄ｄ ｃｕＨ＿ｅｎｔ ｓｉｔｔｌ撕ｏｎ ｏｆ ｉｎ Ｖｉｔｒ０蛐ｄ
【ｓｕｂｊｅｃｔ呲】 ｉｎ、ｒｉｖｏ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｅｓｔ ｉｓ ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｉｎ ｔＩＩｉｓ叭ｉｃｌｅ． Ｎｅ叩ｌａｓｍｓ ｔｕｍｏｒ； Ｄｍｇ ｓｅｒｅｅｎｉｎ岛锄ｔｉｔｕｍ明
Ｃ２４】
ｃｈｉｎ Ｋ ｖ’Ａｊａｂａｌｌｚａ Ｌ，Ｆｕｊｉｉ Ｋ，ｅｔ ａＩ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｅ—
ｔｒｅ咖ｅｎｔ ｎｏＩｌｌｉｃｓ ｆ撕ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ
ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｃ锄ｃｅｒ【Ｊ】．Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａ—
ｃａｄ ｓｅｉ，２００５，１０５８：１８６—１９５．
胞的存活与增生程度，以此来研究抗肿瘤药物对肿瘤细胞的杀
伤程度网。ｘｕ等叨ｆ究，结果显示该方法评价成功率为８８％，药
敏指导化疗方案的临床有效率为７７％。其优点是操作简单，成 本低。缺点是检测到的是活细胞，不能区分正常细胞和肿瘤细 胞，因此当应用于高度不均一的临床肿瘤组织时，难以准确反 映药敏结果；且ＭｒＩ’Ｉ’法所需细胞数较多，所测数据变异较大 （抑制率分析变异系数在２３％一３０％），结果不稳定。经过长 期应用，普遍认为”ｒｒ法临床符合度较差，目前不少学者在探 讨对此技术的改良。
床疗效符合率为８４．６％，对临床治疗有较大帮助。其优点是操 作简便、成本低，并可以模拟体内实体瘤环境，非常适用于临床 应用。缺点是不同肿瘤细胞的选择性培养有困难，而且实验结 果的重复性和稳定性还需要进一步探讨。
１．６胶原凝胶包埋培养药物敏感实验
２０世纪８０年代起有学者应用胶原凝胶进行细胞培养，２０ 世纪９０年代起日本学者应用于肿瘤药物敏感性试验并发展完 善。该方法克服了以往其他方法存在的不足，是目前最为看好 的化疗药物敏感性检测方法。其检测结果与临床治疗效果符合 率达９５％以上，肿瘤组织可在这种胶原凝胶体内培养并得到 重建。胶原凝胶包埋培养药物敏感性实验（ｃｏｌｌａｇｅｎ ｇｅｌ ｄｍｐｌｅｔ ｅｍｂｅｄｄｅｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｄｍｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖ畸ｔｅｓｔ，ＣＤ—ＤＳＴ）的基本原理是胶 原凝胶滴包埋培养实质上为单细胞的立体培养，因此具有部分 集落形成的特点。ＣＤ—ＤｓＴ法先通过酶消化获得单细胞成分， 再将细胞成分包埋于人工细胞外基质Ｉ一型胶原凝胶中，构成 与体内相似的微环境，进行三维立体培养，之后加入化疗药物 共同培养，利用图像分析，计算出肿瘤细胞克隆的体积值，对药 物的敏感性进行对比【３】。其优点是：（１）可检测的药物种类多： 包括５一氟尿嘧啶、吡柔比星、顺铂、丝裂霉素、长春酰胺、依托 泊苷、紫杉醇、依立替康、吉西他滨、表柔比星、多柔比星、吉非 替尼等。（２）可检测的肿瘤种类多：包括胃癌、大肠癌、乳腺癌、 肺癌、卵巢癌、子宫颈癌、胰腺癌等。（３）ｃＤ—ＤｓＴ相当于人体 内环境三维立体培养的优点，将体内、外实验二者有机地结合 起来，能更加准确地预测针对某个体的敏感药物。（４）微量材 料：即仅需少量组织细胞（３×１０，／３０仙１）即可实施试验。 （５）通过引入图像分析装置可以除去混入的成纤维细胞的影 响，可以评价药物仅对肿瘤细胞的抗肿瘤效果等，临床效果预 测性高。（６）ｃＤ—ＤｓＴ可以按临床等值剂量概念设定药物的接 触条件。并可显示患者预后，用于指导实体瘤的化疗口·制。但该 法价格较贵，一般需要１０～１４ ｄ，目前仅在日本广泛应用，欧美 也有少数报道。国内仅天津医科大学附属肿瘤医院乳腺病理研 究室开展了这项检测项目。
ｃｏ肿ｓｐｏ蒯，ｌｇ纰舶开ＵＵ耽‘Ｅ，删如Ｚｉ删ｅ池６ｅｉ＠灿ｏ．ｃｏ阮ｃｎ
【Ａｂｓ妇哺ｃｔ】 ｎｅ他ｉｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔ舳ｔ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｅ伍ｃａｃｙ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｉｚｅｄ ｃｈｅｍｏｔｌｌｅｍｐｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ
ｗｉｔｌｌ ｃ蚰ｃｅｒ ｂｙ ｄｍｇ∞ｎｓｉｔｉｖ畸ｔｅｓｔ． Ｗｉｄｌ ｔｌｌｅ ｄｅｖｅｌ叩ｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｅｍｏ出ｅｍｐｙ ａＩｌｄ ｎｅｗ ｄｍｇ ｓｅｎｓｉｔｉＶ时ｔｅｓｔ， ｉｔ
ＡＴＰ生物荧光法 （ＡＴＰ—ｔｕＩｎｏｒ ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｓｓａｖ， ＡＴＰ—ＴｃＡ）建立于２０世纪８０年代末，根据现应用状况，该方 法与临床符合率相对较高ｉ１４］。其基本原理：ＡＴＰ是一切细胞代 谢的能量来源，当细胞死亡时ＡＴＰ在酶的作用下迅速水解，可 以认为只有活细胞中含有ＡＴＰ，所以通过检测细胞中Ａ仰含 量可以准确地反映活细胞的数量。为了检测ＡＴＰ，加入荧光色 素一荧光色素酶复合物，在ＡＴＰ参与下发生化学反应而产生 荧光。通过检测发出的荧光强度来反映ＡＴＰ含量，进而反映 活细胞的数量【１５·…。其优点是敏感性高，可测出５０个细胞发 光强度的改变；干扰因素少，结果稳定，抑制率分析变异系数 小（１０％一１５％），重复性较强；在较大范围内（含量为１０。～ １０。２ ｍ０１．Ｌ。１·ｈ＿１），活细胞的对数值与发光值的对数值之间线 性关系良好，因此可以精确定量。在卵巢癌和乳腺癌药敏实验 研究中发现，预测精确率＞９０％，阳性预测值８５％。９０％，阴 性预测值接近１００％【１７】。缺点是只能检测活细胞，不能区分正常 细胞和肿瘤细胞；且要采用荧光检测方法，仪器要求高，成本相 对较高。目前大规模临床应用存在一定难度。 １．５三维立体组织培养法
Ｄ抛ｇ ｔｌｌｅｒａｐｙ
目前，化疗作为恶性肿瘤的重要治疗手段，仍无法保证肿 瘤患者个体治疗的有效性。人们对能否依据肿瘤药敏试验来指 导抗癌药物的选择，实现肿瘤个体化化疗进行了广泛地研究和 探讨，至今已有体内、体外等２０多种方法㈣。尽管还存在与临 床疗效符合率低等缺点，仍未在临床广泛应用，但考虑到其潜 在的重要临床价值，因此鼓励进行新的肿瘤药敏技术创新闻。 现将就该领域的研究现状和发展趋势进行综述。