烟草植物组织培养实验报告2223
烟草植物组织培养
烟草植物组织培养实验实验目的一学习和掌握植物组织培养技术，理解植物细胞的全能性。
实验原理二年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地世纪30植物组织培养是从20少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物、萘乙4-D4-二氯苯氧乙酸2，，质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2）细胞分裂素IBA、吲哚丙酸IPA和吲哚丁酸NAA酸、萘乙酰胺NAD和吲哚乙酸IAA））等。
分裂期是，KT-30CPPU糠氨基嘌呤（KT）氯吡苯脲（6-（苄氨基嘌呤6-BA、6-指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。
处于分裂期的愈伤组织的特点是：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明。
外植体的脱分化因植物种类、器官来源及其生理状况的不同而有很大差别。
例如，烟草、胡萝卜等植物的脱分化比较容易，禾本科植物的脱分化比较难；花的脱分化比较容易，茎、叶的脱分化比较难；幼嫩组织的脱分化比较容易，成熟的老组织脱分化比较难。
烟草植物组织培养
烟草植物组织培养实验一实验目的学习和掌握植物组织培养技术，理解植物细胞的全能性。
二实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
①起动期是指细胞准备进行分裂的时期。
用于接种的外植体的细胞，通常都是成熟细胞，处在静止状态。
起动期是通过一些刺激因素（如机械损伤、改变光照强度、增加氧等）和激素的诱导作用，使外植体细胞的合成代谢活动加强，迅速进行蛋白质和核酸的合成。
机械损伤能诱导植物体细胞开始分裂，如伤口上会出现愈伤组织。
在植物组织培养中沿用了愈伤组织这一名词，但是植物组织培养中诱导外植体细胞分裂形成的愈伤组织，大都不是损伤的结果。
外源的生长素类物质对诱导细胞开始分裂效果很好，因此生长素类物质在植物组织培养中得到广泛应用，常用的有生长素（2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D、萘乙酸NAA、萘乙酰胺NA D和吲哚乙酸IAA、吲哚丙酸IP A和吲哚丁酸IBA）细胞分裂素（6-苄氨基嘌呤6-BA、6-糠氨基嘌呤（K T）氯吡苯脲（KT-30，CPPU））等。
分裂期是指外植体细胞经过诱导以后脱分化，不断分裂、增生子细胞的过程。
植 物 组 培实验报告
实验报告实验名称：烟草植物组织培养班级：姓名：学号：烟草植物组织培养一、实验目的1、学习植物组织培养技术的基本原理；2、掌握培养基配制方法、步骤及培养环节中，外植体灭菌、接种、培养观察等技术环节；3、了解外植体脱分化及再生过程。
二、实验原理1、植物细胞全能性（totipotency）指植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的遗传能力。
在适宜条件下，任何一个细胞都可以发育成一个新个体。
植物细胞全能性是植物组织培养的理论基础。
2、植物细胞表现出全能性的条件（1）离体状态；（2）有一定的营养物质，激素和其他外界条件（如无菌、温度、pH ）；（3）选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型；3、组织培养组织培养(Tissue culture)是指在无菌条件下，分离并在培养基中培养离体植物组织(器官或细胞)的技术。
广义的组织培养：包括器官培养，组织培养，胚胎培养，细胞培养，原生质培养，花药培养等；狭义的组织培养是指植物离体快繁技术卸微型繁殖(Mieropropagation)或试管繁殖技术。
4、常用的培养基植物组织培养常用培养基为MS基本培养基。
凝固剂常用琼脂粉，它最主要的作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的碳水化合物，从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝固为固体状凝胶。
琼脂的用量一般在4—10克／升之间。
琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐渐失去凝固能力。
5、植物激素（1）培养基中添加的激素是植物激素，是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠等许许多多的生理生化活动。
普生实验报告烟草幼苗培养
普生实验报告
实验名称烟草幼苗的组织培养
实验目的：
1.掌握植物组织培养中无菌操作技术。
2.学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法。
记录一：周次：14
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
记录二：周次：15
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
记录三：周次：16
6-BA:NAA=1:5 2-4D
6-BA:NAA=5:1 对照组
作用：6-BA ：促进芽的形成,诱导愈伤组织发生。
NAA ：促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。
差异：培养基中生长素、细胞分裂素浓度不同，可以诱导烟草幼片生根或生芽。
细胞的全能性：植物组织当中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化的细胞发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。
烟草植物组织培养实验报告2223
烟草叶片的组织培养一、实验目的本实验通过配制3种不同的培养基来实现烟草种子苗叶片诱导、分化及植株再生从而深刻理解植物细胞的全能性、学习和掌握植物组织培养技术，二、实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
培养基配方设计是组培法育苗中的关键步骤。
根据理论与实际经验，对不同种类的花卉及不同的取材部位，需设计出相适应的配方，并从中筛选出最佳者。
继代芽增殖培养：很多花卉植物经过2-6 周的培养即可分化出大量的不定芽。
根据情况可以将这些增殖了大量新芽的外植体重新分割进行几代培养，以扩大繁殖规模直至满足繁殖需要为止。
三、实验材料植物材料：烟草植株药品：激素（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、1N NaOH、1N HCl 蒸馏水、 70%酒精、 0.01%升汞仪器：1 玻璃杯、1玻璃棒、1pH试纸(5.5-9.0) 1瓶无菌水、1个无菌烧杯、1包无菌滤纸、 1个无菌白瓷板、培养瓶若干移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子四、实验方法与步骤4.1 MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O 单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
烟草幼苗的组织培养
烟草幼苗的组织培养
一、目的与要求
掌握植物组织培养中无菌操作技术 学习用生长调节剂对植物器官发生的诱导方法
二、 实验原理
植物组织培养 在无菌条件下，将植物体的一部分细胞、组织、器 官切割下来，接种到营养介质上，使其增殖成一群细胞、组织、器官， 甚至完整植物体的实验技术。
植物细胞全能性 植物体的每个活细胞都有相同的遗传组成，在适
当条件下具有繁殖出完整植株的能力。 脱分化 已经分化的细胞，发生生理、生化的改变，退回到胚性 细胞的过程。 再分化 经过退分化的细胞或组织再次获得分化成不同功能的细 胞、组织、器官或完整植物体。 改变生长素NAA和细胞分裂素6-BA浓度比例，可以决定烟草幼苗从 叶片直接分化生成根或芽。 2，4-D能够诱导生成愈伤组织。
1% 1% 1% 3%
3个实验组 5.8 0.8%
Step1: 配大瓶培养基(无激素)
500 ml
Step 2: 分瓶,加激素, 调PH=5.8
125ml
ctrl
NAA:6-BA=1:5
NAA:6-BA=5:1 2,4-D
Step 3:分装,加琼脂
30ml
四、操作步骤
1.灭菌：
(1)器具灭菌： 剪、镊、培养皿，诱导培养基， 120℃，高压灭菌15-20min；
五、无菌操作注意事项
1.
2.
无菌操作时不要讲话，以免污染；
用酒精对双手消毒时，务必待酒精彻底挥发后再靠近酒 精灯火焰，以免火焰伤手。
烟草育种学实习报告（推荐五篇）
烟草育种学实习报告（推荐五篇）第一篇：烟草育种学实习报告烟草育种生产实习报告一、实习目的：通过烟草育种生产实习，进一步了解烟草的生长习性，将理论知识渗透到实践中。
强化理论和实践相结合，提高自身对现代烟草育种的理解和基本技能；提高和培养理论联系实际、独立分析和解决问题的能力，懂得根据市场需求变化来组织管理和经营农业生产。
二、实习时间：2012年3月10日到2012年9月30日三、实习内容：不论是直播还是催芽播种，烟草在播种之前要对种子进行处理。
通过种子处理，清除种子中的夹杂物，淘汰不饱满的种子，对提高种子的发芽势和发芽率有着显著作用。
同时通过药剂处理可以杀灭种皮上附着的病菌和病毒，有效地地减轻苗床期烟草病害的发生。
播前烟草种子处理主要包括以下几方面内容：（1）种子精选：目的是清除种子的夹杂物，淘汰不饱满的种子。
生产上多采用水选法。
将种子倒入盛有清水的小缸或其他器皿内。
烟草种子粒小而轻，比重明显比水小（烟籽比重约为0.9，水比重为1），初放入时种子到多漂浮在水面，应搅拌，使之浸泡均匀。
放置4-6小时后，饱满的种子下沉，不好的种子及夹杂物漂浮在水面，将漂浮物捞出，选留沉下去的种子。
水选后的种子晒干备用或随即消毒催芽。
（2）晒种：水选后的种子含水比较多，第一天要晒干种子表面水分，以手抓能松散为宜，在15-20℃下晒2-3天即可。
若气温超过20℃，采用间歇晒种方法，即每次晒几小时收藏起来，第二天再晒几小时，连晒2-3天。
（3）灭菌：清毒利用药剂杀灭烟种皮上附着的病菌和病毒。
常用药剂是稀释一千倍的硝酸银溶液，或稀释一百倍的硫酸铜溶液，或稀释五十倍的福尔马林溶液。
将需消毒的种子装入纱布袋内，浸入上述浓度的药液（温度为20℃左右）中，浸泡十五分钟。
浸泡时，将种子袋药液提出药液，再放入，重复几次，以使袋内种子充分接促药液。
取出种子袋占用清水充分冲洗净。
否则，易发生药害。
（4）催芽：催芽方法有布袋催芽和盆钵催芽。
布袋催芽要求装入种子的数量约为袋子容量的一半，布袋以能装0.25-0.5公斤干种大小为宜。
烟草幼苗的组织培养实验报告
烟草幼苗的组织培养实验报告一，实验名称：烟草幼苗的组织培养二，实验原理：植物组织培养是指在无菌条件下，分离并在培养基中培养立体植物组织（器官和细胞）的技术。
植物组织培养的理论基础是植物细胞具有全能型。
植物组织当中原本已经分化的细胞，在脱离原有机体环境成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表现出全能性，从已经分化的细胞发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞（本实验中用到的是愈伤组织，是由植物的一个离体的细胞，一块组织或一个器官的细胞脱分化形成的），并重新生长发育成完整的植株。
生长素，细胞分裂素浓度之间的平衡可以决定烟草组织幼苗的叶片或茎髓将产生根，茎或仅仅是愈伤组织。
三，实验材料和用具：1、材料：烟草幼茎2、用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术器械、20ml量筒、PH试纸、烧杯、玻璃棒、三角烧瓶、封口膜、高压橡皮筋。
3、试剂：MS培养基、NAA、6-BA四，实验步骤：1、培养基的配置成分实际称取量大量元素（10×）40 ml蒸馏水300 ml微量元素（100×） 4 ml有机成分（100×） 4 ml铁盐（100×） 4 ml蔗糖12 g定容至400 ml激素（1 mg/ml）每130 ml MS加：生根6-BA=13 μl NAA=65 μl生芽6-BA=65 μl NAA=13 μl对照组（不加激素）pH值 5.8分瓶30 ml/瓶琼脂0.24 g2、培养基、剪子、镊子、枪头需在高压灭菌锅120摄氏度灭菌20分钟。
3、接种前打开无菌间和超净台紫外灯照射30分钟4、肥皂洗手和手腕，关闭无菌间棚顶紫外灯，打开超净台风机，并关掉超净工作台上的紫外灯。
再用百分之七十的酒精喷手。
5、点燃酒精灯6、将橡皮筋解开（不掀开封口膜），放到无菌风道侧面。
将镊子见到放到酒精灯外焰灼烧，冷却后剪取外肢体。
迅速用另一手持三角瓶，去下封口膜，瓶口略倾斜，在酒精灯外焰上灼烧数秒。
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30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出 许多浅黄绿色芽点；
60d后，不仅从愈伤组织上分化出越来越多幼芽，芽 诱导频率(芽数/块愈伤组织)为25～35，而且还可观察 到，该愈伤组织较早分化产生的幼芽叶片呈现不同程度 白化（或缺绿）。但此时若将此缺绿幼芽切下，转接至 不加2,4-D的幼芽增殖培养基（2）上，
继代芽增殖培养：很多花卉植物经过2-6 周的培养即可分 化出大量的不定芽。根据情况可以将这些增殖了大量新芽的外 植体重新分割进行几代培养，以扩大繁殖规模直至满足繁殖需 要为止。
三、实验材料
植物材料：烟草植株
药品： 激素（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、 1N NaOH、 1N HCl 蒸馏水 、 70%酒精、 0.01%升汞 仪器：1 玻璃杯 、1玻璃棒、1pH试纸(5.5-9.0) 1瓶无菌水、1 个无菌烧杯、1包无菌滤纸、 1个无菌白瓷板 、 培养瓶若干 移液器、 微波炉、 灭菌器、 超净工作台、 酒精灯、 解剖 刀、 镊子
按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐 （FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物 可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小 口瓶中保存，贴上标签。 3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水 中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水 定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。 4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量 外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保 存，贴上标签。
将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至 80℃左右，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0， 过酸过碱则用1N NaoH和1N HCL调整。 二．分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装
到25-30个三角瓶中，每个三角瓶约30ml左右（一般占试管、三角瓶容 量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰瓶壁。 三. 包装：分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进 行灭菌。
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配 成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸 （NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米 素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。 激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸 需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母 液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃） 保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为 0.5mg时，则取1ml母液即可。
CuSO4.5H2O4 0.025 100 2.5
CoCL2.6H2O 0.025 100 2.5
4 铁 Na2-EDTA 盐 FeSO4.4H2O
37.3 100 3730 27.8 100 2780
甘氨酸
5 有 盐酸吡哆醇 机 物 盐酸硫铵素
烟酸
2.0 100 100 0.5 100 25 0.1 100 5 0.5 100 25
灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格， 无论哪种型号，操作的步骤都很相近。
进水→放进培养基→盖紧锅盖→关上放汽阀→检查安全阀→接上加热 源→待压力升至0.05MPa时排锅内冷空气，关上放气阀 →0.11MPa(121℃)下灭菌20~25分钟，保持稳定压力→除热源→逐渐打 开放气阀→锅内空气排除完后→开放锅盖→稍冷后取出培养基。
4.3植物材料表面灭菌——消毒剂灭菌
从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污 染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严
格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上，这一过程叫做接 种。 1.接种步骤： 第一步：清理材料→→流水冲洗→→加入吐温（或洗衣粉）清洗 →→ 自来水冲洗 第二步：对材料的表面浸润灭菌 ： 70%酒精浸10-30秒→→无菌水 第三步：灭菌剂处理→→ 0.1-1%升汞5-8 min（或其他灭菌剂） 第四步：无菌水进行冲洗 注意事项： １.灭菌剂一般要临时配制，现配现用．升汞可以短期储存． ２.对去除较容易的灭菌剂灭菌后无菌水冲洗３-４次，升汞一般５-８ 次，每次不少于３min ３.灭菌时要轻轻的搅拌，消除气泡，使消毒更彻底． ４.灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。 ５.灭菌液要充分浸没材料 2.无菌操作可按以下步骤进行： （1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外 线灯进行杀菌； （2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯； （3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； （4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工 作台面； （5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； （6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽 等； 材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切 割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要 剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉 污染。 （7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连 续接种，每5天要大强度灭菌一次。
6
肌酸
100 100 5000
1000 10 500 10 500 10
注意： 1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量 后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量 蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至 刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍 数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2．微量元素母液的配制
(三) 配制培养基（1000ml） 1. 琼脂: 称取5~7g琼脂，加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全 溶解为止. 2. 蔗糖3%用质量较好的白糖代替，称取30g白糖，溶于溶有琼 脂的300ml蒸馏水中。 3. 各种母液的吸取（培养基1L） （1） 用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母 液（B）各100ml （2） 分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐 （D）母液各10ml （3） 用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml （4） 移取激素
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态 发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过 脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。从一 块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动 期、分裂期和形成期。
培养基配方设计是组培法育苗中的关键步骤。根据理论与 实际经验，对不同种类的花卉及不同的取材部位，需设计出相 适应的配方，并从中筛选出最佳者。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜 过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就 不能再使用。
1． 制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准 要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
2． 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制：
母液浓缩倍数
培养基要求的含量 公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂）
母液每CC的含量
（二） 各种母液按顺序编号排列 A. 大量元素；B.CaCl2.2H2O； C.微量元素 ；D.铁盐； E.有机 物； F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA 用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、 激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后, 加蒸馏水定容至100ml。
浓缩 倍数
称取量 （mg）
母液 体积 （ml）
配制1 升培 养基 吸取 量定 容
10 19000 10 16500 1000
100 10 3700
10 1700
10 4400 1000 100
100 2230
100 860
100 620 100 83
1000 10
素 Na2MoO4·7H2O 0.25 100 25
4.2 培养基配制和灭菌
4.2.1培养培养基配制程序
本次实验使用 （1）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L； （2）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L； （3）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、 烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。
4.2.2 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（高压蒸汽灭
菌锅的使用方法）
具体操作步骤： 1. 高压锅放水至平把架； 2. 把包扎好的培养基装入高压锅; 3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀. 4. 然后接通电源. 5. 压力计升至0.05MPa时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。 6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到0.11MPa位置时，开始计算灭 菌时间，具体方法：当压力锅指针升至0.12MPa时，关闭电源，待指针 下降至0.11MPa时接通电源，不断重复此操作过程，维持20分钟。 7. 灭菌时间达到20分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待 高压锅内的空气完全排除后，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍 待冷后再把培养基取出。 8. 经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用 前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25℃下保存4天，如 果培养基需要贮存较长时间，可在4℃低温下保存。