湖南省柑橘茎陷点型衰退病为害情况调查及其弱毒系筛选研究
柑橘衰退病毒检测试剂研制及其分子特性研究
柑橘衰退病毒检测试剂研制及其分子特性研究
柑橘衰退病毒检测试剂研制及其分子特性研究
柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)广泛分布于世界各柑橘产区,其引起的衰退病是最具危害性的柑橘病害之一,该病毒主要通过蚜虫和带毒接穗传播.CTV存在明显的`株系分化现象,除少数株系在许多柑橘品种上不产生可见症状外,大部分株系能在柑橘上产生明显症状,常见症状可分为三大类型,即速衰型、茎陷点型和苗黄型.速衰型症状主要表现在以酸橙作砧木的甜橙等感病柑橘上;茎陷点症状的发生与砧木种类无关,常导致葡萄柚或甜橙产量降低、品质下降、植株矮化;苗黄症状在田间很少发生,主要是在酸橙、来檬或葡萄柚的苗期引起严重褪绿和矮化.。
基于2个保守基因分析湘赣南部区域野生柑橘上衰退病毒分离株的种群特征
果树学报2021，38（6）：957-966Journal of Fruit ScienceDOI:10.13925/ki.gsxb.20200539基于2个保守基因分析湘赣南部区域野生柑橘上衰退病毒分离株的种群特征王长宁，易龙*，周俊，钟可，陈毅群（赣南师范大学生命科学学院，江西赣州341000）摘要：【目的】比较分析湘赣南部地区野生柑橘上的CTV种群特征，为解析CTV种群的遗传进化提供重要依据。
【方法】应用RT-PCR对江西崇义、湖南道县、湖南莽山和湖南江永4个不同地理区域的野生柑橘CTV分离株的CP基因和p23基因进行扩增、测序，所获得序列与从GenBank下载的国内外具有代表性的分离株相应基因序列进行碱基组成、分子变异（AMOV A）分析、系统发育和中介网状关系结构分析。
【结果】碱基组成分析显示，4个地区的CTV分离株上2个基因的A+T碱基含量均高于G+C含量；CP基因和p23基因AMOV A分析结果显示，种群内分子变异分别占85.8%和82.38%，种群间分别占14.20%和17.62%，基因流Nm分别为6.749和1.475；碱基错配分析显示，2个基因均呈多峰分布曲线，表明4个地区CTV种群变化保持稳定；重组分析显示，2个基因均未检测出重组事件的发生，基于2个基因构建的系统发育树显示，相同地理来源的CTV种群大部分聚集在同一簇中，少部分分散在不同簇，表明研究分析的CTV 种群间亲缘关系与其地理来源存在相关性，中介网状关系结构图得出类似分析结果。
【结论】4个地区的野生柑橘上CTV种群间遗传变异主要来自种群内，各地区间基因交流频繁，遗传差异小，CTV种群保持稳定，CP基因和p23基因构建的系统发育分析和中介网状关系结构图表明，湘赣南部地区的野生柑橘上CTV种群间亲缘关系与其地理来源存在相关性。
关键词：野生柑橘；柑橘衰退病毒；种群特征；分子系统地理学中图分类号：S666S436.661文献标志码：A文章编号：1009-9980(2021)06-0957-10Population characteristics analysis of citrus tristeza virus isolates from wild citrus in southern Hunan and Jiangxi based on two conserved genes WANG Changning,YI Long*,ZHOU Jun,ZHONG Ke,CHEN Yiqun(School of Life Science,Gannan Normal University,Ganzhou341000,Jiangxi,China)Abstract:【Objective】The experiment aimed to clarify the population characteristics of Citrus tristeza virus(CTV)in wild citrus,and to provide an important basis for analyzing the genetic evolution of CTV population.【Methods】With10positive CTV samples from four different geographic regions of Chongyi(Jiangxi),Daoxian(Hunan),Mangshan(Hunan)and Jiangyong(Hunan),the CP gene and p23 gene amplification were carried out.The samples were named Chongyi1-10(C-1to C-10),Daoxian1-10(D-1to D-10),Mangshan1-10(M-1to M-10),and Jiangyong1-10(Y-1to Y-10).The samples were preserved at-40℃for later assay.After purification and recovery,the PCR products were sent to Shanghai Bioengineering Company for paired and sequencing.MEGA-X was used to calculate the con-servative site,abbreviated information site,mutation site,descent locus and the ratio of the base transi-tion rate Ts to the transversion rate Tv.The software Arlequin3.1was used for the analysis of molecular variance(AMOV A),and GenAIEx6.5was used for gene flow Nm calculation.DnaSP was used to per-form three neutrality tests and mismatch analysis to infer population expansion and genetic evolution.RDP5was used to perform recombination event analysis.In order to clarify the genetic relationship收稿日期：2020-12-29接受日期：2021-03-03基金项目：国家自然科学基金（31860488）；赣州市科技创新人才计划（[2018]50）作者简介：王长宁，男，在读硕士研究生，主要从事柑橘病毒病害检测与防控研究工作。
柑橘衰退病和碎叶病复合感染病原的脱毒研究
柑 橘 衰 退 病 和 碎 叶病 复 合 感 染 病 原 的脱 毒 研 究
乔 芬 祁 鹏 志 伏 卉 张 鹏 吴 珊 姜 玲
华中农业大学 园艺林学学 院／ 国家果树 脱毒种质资源 室内保存 中心／
教 育 部 园 艺植 物 生物 学 重 点 实验 室 ， 汉 ４０ ７ 武 ３００
摘要
以带毒柑橘 品种 为试 材 ， 采用植物 中药制 剂处理与热处 理结合 、 茎尖 微芽嫁 接与植 物 中药 制剂处 理
结合 ， Ｒ － Ｃ 用 Ｔ Ｐ Ｒ法检测病原带毒情况 ， 并在药剂处理后 １ ３ ５ ７ ９ｄ取样 ， 、 、 、 、 检测抗 性相关 酶活 性的含 量变化 ，
结果表明 ： 采用板 蓝根和黄芩混合 中药制剂处理 ８次 ， 结合 热处理 ， Ｐ 在 Ｃ板 制成 的温室 （ 白天 ４ ０℃（ ／ ） 晚 ６ｈ ｄ ，
第３卷 第 ４ Ｏ 期
２１ 年 ０１ ８ 月
华
中
农
业
大
学
学
报
Ｖｏ ０ Ｎｏ ４ Ｌ３ ．
Ａｕ ． ２ １ ， １ ￣ ４ １ ｇ ０ １４ ６ ２
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＨ ｕ ｚ ｏ ｇ Ａｇ ｉｕｔ ｒ ｌ ｉｅｓｔ ｏ ｒ ａ ａ ｈ ｎ ｒ ｌｕ ａ ｖ ｒｉ ｏ ｃ Ｕｎ ｙ
ｃ Ｌ 等病害 。柑橘 黄龙病是 目前柑 橘生产上致 ４ Ｔ Ｖ） ０℃处理 １ ， 周 成功 脱 除 了 Ｃ Ｖ， 是 有大 约 ５ Ｔ 但 ０ 命 的病 害 。近些 年 来 ， 橘 衰 退 病 和柑 橘 碎 叶病 病 的柑橘 苗在 处理 过程 中死 亡 。上述 方法 单独 使用 难 柑
原 复合感 染 日趋 严重 。推 行无 病毒 苗木 繁育 制度 仍 以彻 底 和安全 地 脱除柑 橘 衰退病 毒 与碎 叶病 复合感 然是 新 时期柑 橘 品种 结构 调整 和 大规模 基 地建设 的 染 病原 ， 脱毒 方法 面 临着新 的挑 战 。
柑橘衰退病毒株系分化及检测方法研究进展
中所必须的 １ ３ １ ； Ｏ Ｒ Ｆ １ ０ 编码的 ｐ ２ ０为一种疏水性蛋 白， 是Ｃ Ｔ Ｖ诱导产生内含体的主要组成部分 ， 而内含体
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ３—０ ４—１ ３ （ ２ ０ １ ０ Ｄ Ｑ ０ ２ ３ ０ ０）
网 络 出 版 日期 ： ２ ０ １ ３—０ ６— ０ ９
基 金项 目： 国家 自然 科学 基 金青 年 基 金项 目（ ３ ０ ９ ０ ０ ９ ７ ７ ）； 教 育 部科 学 技术 研 究 重点 项 目（ ２ １ ０ １ １ １ ） ； 江西 省 青年 科 学 家培 养计 划
作者简介 ： 刘 志芳 ， 女， 江西 吉安人 ， 赣南 师范学 院生命 与环境科学学 院化学生物学专业硕士研究生， 主要从事病原微生物研究 ．
中图分类号 ： ￥ ４ ６ ６ ． ６ 文献标 志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ４—８ ３ ３ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３— ０ ０ ４ １ — ４ ０
１ 前言
柑橘作为一类重要 的经济作物在全世界范围内广泛种植 ， 在我 国四川 、 重庆 、 浙江 、 江西 、 福建、 广西 、 贵 州、 湖南 、 湖北等省市均有大面积种植 ． 赣南地 区更凭借其得天独厚 的地理位置和气候条件 ， 成为全世界 最大的脐橙主产区． 随着柑橘产业 的扩展 ， 越来越多的病害开始阻碍其发展 ， 其中柑橘衰退病毒（ Ｃ ｉ ｔ ｒ ｕ ｓ ｔ ｒ ｉ ｓ ｔ ｅ — ｚ ａ ｖ ｉ ｒ ｓ， ｕ ｃ Ｔ Ｖ ） 对柑橘生产具有严重危害 ， 它可侵染多种柑橘种 ， 杂种及近缘种 ， 在果园主要通过嫁接传播 ］ ， 在 田间通过褐色桔蚜 （ Ｔ ｏ ｘ ｏ ｐ ｔ ｅ ｒ ａ ｃ ｉ ｔ ｒ ｉ ｃ ｉ ｄ ａ ） 、 棉蚜 （ Ａ ｐ ｈ ｉ ｓ ｇ ｏ ｓ ｓ ｙ ｐ ｉ ｉ ） 、 橘二叉蚜（ Ｔ ｏ ｘ ｏ ｐ ｔ ｅ ｒ ａ ａ ｕ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ｉ ） 、 绣线菊蚜 （ Ａ ． ｐ ｈ ｉ ｓ ｓ ｐ ｉ ｒ ａ ｅ ｃ ｏ ｌ ａ ） 等 以非循环半持久方式进行有效传播 Ｉ ４ Ｊ ， 其 中又以褐色桔蚜传毒力最强 ］ ． 柑橘衰退病在 中国柑橘产 区均有不同程度的发病情况 ， 严重影响当地的柑橘种植 ， 对衰退病进行有效的防治已成为柑橘产 业的当务之急． 本文结合 目 前 的研究报道对柑橘衰退病毒 的分子特性及株 系分化情况 ， 以及衰退病毒 的检
不同致病力柑橘衰退病毒株系诱导甜橙表达差异蛋白质组学研究的开题报告
不同致病力柑橘衰退病毒株系诱导甜橙表达差异蛋白质组学研究的开题报告研究背景与意义：柑橘是全球最重要的经济作物之一，在国际贸易中占据重要地位。
然而，柑橘衰退病病害不仅在中国南方和其他亚洲国家的柑橘生产中造成了很大的损失，而且也引起了全球性的关注。
柑橘衰退病是一种危害严重的病害，而柑橘衰退病毒（CTV）是柑橘衰退病的主要病原体。
目前众多的研究表明，不同的CTV株系之间具有显著的致病力和传播性差异，这些差异主要由CTV的遗传特征和宿主因素相互作用导致。
但是，CTV致病的分子机制仍不完全清楚。
因此，通过分析不同致病力CTV株系对柑橘植株的差异影响，加深对CTV致病机理的了解对于在柑橘衰退病防治和控制方面具有重要意义。
研究内容和方法：本研究将利用蛋白质组学技术，选取柑橘中具有重要生物学功能的不同耐受性差异蛋白，通过差异表达分析和生物信息学分析，探究由不同致病力CTV株系所感染的甜橙的蛋白差异表达情况。
具体研究步骤如下：1.选择致病力差异较大的CTV株系进行柑橘接种试验，筛选出不同致病力的CTV株系。
2.将甜橙接种不同CTV株系，分别收集CTV感染期和健康期的叶片样品。
3.构建甜橙差异蛋白组，采用二维凝胶电泳技术将不同CTV株系感染的甜橙叶片蛋白进行差异分析，寻找与感染相关的蛋白质。
4.将差异表达蛋白进行质谱鉴定，并运用生物信息学技术对其进行功能预测和代谢通路分析，探索CTV对甜橙植株生理、代谢功能影响的机制。
预期研究结果：通过本研究的实验设计，预期可以挖掘CTV对甜橙植株影响的新的可能机制，得出与CTV致病性相关的不同差异蛋白，加深对CTV对柑橘的致病机理的理解，有助于进一步研究CTV的治疗和治理策略，为柑橘生产提供科学依据。
柑橘衰退病
柑橘衰退病柑橘是全球四大农产品贸易之一，柑橘衰退病是一种全球性的柑橘病害，全球各地的柑橘产区都会发病，对全球种植的柑橘构成严重威胁，对果农也造成了严重损失。
近年来，全球各地都对柑橘衰退病的研究一直在进行，不断的深入，对柑橘衰退病防治已经有不错的防治方法。
今天就从表现症状、发病规律及防治方法简单地讲讲柑橘衰退病的防治吧表现症状一、速衰型柑橘衰退病的主要症状：柑桔树慢慢地或快速地衰退，病情严重的死亡。
二、茎陷点型的柑橘衰退病主要症状：成年树：砧木的木质部有比较明显凹点或凹沟。
枝条脆弱，易断。
红桔的主要症状：叶脉上的叶片黄化，病果的果梗呈现红色。
黄桔的主要症状：叶片的叶尖、叶缘黄化甜橙的主要症状：跟缺锌的叶片黄化类似发病初期柑橘树结果数量多，但随后下降幅度大，所结果的果实变小，形状不好看。
发病规律柑橘衰退病是由一种寄生于韧皮部的病毒，能感染大部分的柑橘类的果树。
它主要通过蚜虫或嫁接带毒苗木的方式来传播，病枝叶、种子、土壤不会传播此病。
柑橘衰退病的病毒会破坏砧木的树皮，严重阻碍养分的运输，还能引起根系的腐烂。
防治方法上个世纪，巴西、智利等国家由于使用了酸橙作为砧木，大量柑橘感染柑橘衰退病。
而我国大多数地区选用的是抗病的砧木品种，如枳壳、红桔、酸桔等，所以柑橘衰退病就较少发生。
可见砧木的选择还是很有讲究的。
具体哪些砧木抗病呢？枳、枳橙、酸桔、红桔、枸头橙和檫檬等抗病能力较强，可选择它们做柑橘嫁接的砧木。
而酸橙和葡萄柚的抗病能力较低，如果用来做砧木，容易感染衰退病。
如果柑橘发病严重，建议清除销毁，不要觉得可惜。
若是枝梢发病，发病程度较轻，可以剪除发病枝梢，并涂抹促进伤口愈合的药剂。
在种植之前做好柑橘苗木的植物检疫，选择安全无毒的苗木，从而防止柑橘衰退病的传入。
防治病虫传播，如桔蚜、棉蚜、桔二叉蚜、绣线菊蚜等传播病毒的蚜虫。
杀灭蚜虫的药剂有：抗蚜威、水胺硫磷倍等。
合理施肥，增强柑橘树的抗病能力。
花期和幼果期，要喷施壮果肥；采果后，要及时补充肥料保持树势；寒冷地区要对树体刷白防寒越冬。
湖南省柑桔种质资源抗寒性调查
湖南省柑桔种质资源抗寒性调查
湖南省柑桔遭受了50年代以来最为严重的冻害。
据调查，长沙绝对低温为-11.7℃。
1992年5月中旬，对湖南省园艺研究所柑桔品种资源圃附近果园的柑桔种类(一般为枳砧)或品种的抗冻能力进行了调查。
调查结果表明，甜橙最不抗冻，均为五级冻害。
实生酸橙一般为三四级冻害，不同类型抗冻能力不同，枸头橙较沅江酸橙抗冻；酸柚及其杂种自根(实生或压条)成年树表现出很强的抗冻力，为一至三级冻害。
宽皮柑桔类不同品种抗冻能力差异明显，抗冻力从强到弱依次为团年桔、本地早、温州蜜柑、克里迈丁红桔、梅柑、永顺蜜桔、大庸光桔、朱砂桔、南丰蜜桔、福桔。
温州蜜柑品系间，龟井树势弱，最不抗冻；兴津抗冻能力最强；宫川和尾张抗冻能力没有差异。
金柑各品种中以金弹抗冻力最强，为三级冻害，而四季桔和寿星桔均为五级冻害。
柑桔野生资源抗冻表现：道县野桔、立花桔(幼树)、莽山野桔分别为三、五、零级冻害。
慈利香橙、大叶香橙、罗汉橙和蟹橙4个香橙品种，蟹橙为一级冻害，余者无冻害表现。
小叶宜昌橙树势弱，为一级冻害。
野生金柑为一二级冻害，其中山金柑较抗冻。
枳橙(甜橙×枳)、枳柑(温州蜜柑×枳)无冻害症状。
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柑橘衰退病的防治对策
柑橘衰退病的防治对策
柑橘衰退病是由柑橘衰退病毒侵染引起的世界性病害，在我国各柑橘产区普遍发生。
衰退病毒为害柑橘有三种形式，有时分别称为速衰病，茎陷点病和苗黄病。
发病症状：
速衰型主要症状为柑橘树体逐渐或快速的衰退甚至死亡。
苗黄型主要症状为苗木的叶片黄化。
茎陷点型主要症状为植株矮化，树势衰退，剥开枝梢的皮层，可见木质部有明显的陷点或陷条，有时充胶，枝条脆弱极易折断，叶片呈现主脉黄化，果实变小。
发病规律：
衰退病通过带毒的苗木嫁接材料或蚜虫传播，传毒的蚜虫有桔蚜、棉蚜、桔二叉蚜等。
病毒侵入寄主后，一般先从顶部往下运行，破坏砧木的韧皮部，阻碍养分输送，引起根部腐烂，后引起地下部发病。
种子、汁液和土壤不传病。
防治措施：
1.加强植物检疫，防治可以引起甜橙严重茎陷点的强株系的传入。
2、对于发病严重的应铲除发病树体，建议更新抗病性强的树种作为主打品种。
3、对于发病较轻的枝梢，应及时修剪并在修剪口涂愈伤防腐膜促进伤口愈合。
4、防治传毒昆虫。
田间防治蚜虫的主要药剂有抗蚜威、中西杀灭菊酯或、灭扫利、水胺硫磷倍液等轮换使用，建议添加新高脂膜增强药效。
5、防治的同时不能忽视保护。
在花期和幼果期后喷施壮果地灵增粗果蒂，加大营养输送量。
强化树体，增强树体抗病菌感染能力。
采果前后及时而适当地增施肥料以增强树势。
冬季温度较低的地区，在树体涂刷护树将军做好防寒工作。
柑橘衰退病交叉保护研究进展
因 组 由含 １ ９ ２ ９ ６个 核 苷 酸 的 正 义 单 链 Ｒ Ｎ Ａ （ ＋ ｓ ｓ Ｒ Ｎ Ａ ） 组成 ， 是已知植 病毒 中基因组最大 的病 毒。 到目前为止已有 ５ 种分离物的基因组序列 已被测
的柑橘 产 业造成 了严 重威 胁 。各 国研究人 员为防 治 Ｃ Ｔ Ｖ进行 了细致 的研 究。本文从 Ｃ Ｔ Ｖ 的分子 生
物学特征、 株 系分化、 传播途径和弱毒株 系交叉保护综述了国内外的科研进展。 关键词： 柑橘衰退病（ Ｃ Ｔ Ｖ） ； 株 系； 交叉保护
柑橘衰退病 （ Ｃ ｉ ｔ ｒ ｕ ｓ ｔ ｉ ｆ ｓ ｔ ｅ ｚ ａ ｖ ｉ ｒ ห้องสมุดไป่ตู้ ｓ ， ｃ ， Ｉ ｖ） 又称速衰 病， 是世界性 的柑橘病毒病害， 广泛分布于世界各柑 橘产地， 对全世界的柑橘产业造成了严重威胁。我国
的蛋 白质。Ｃ Ⅳ 的基 因组可能分为两大区域 ： 靠近 ５ ’
端的 Ｏ Ｒ Ｆ ｌ ａ和 Ｏ Ｒ Ｆ ｌ ｂ的 负责 编 码 与 Ｃ Ｔ ｖ 复制 相 关
种类型的序列。 仅含有 ｔ ｐｅ ｙ Ｉ ｌ Ｉ 序列的分离物在墨西哥 来檬上仅引起微弱或中等症状 ， 而弓 ｌ 起甜橙或葡萄柚
茎陷点症 状 的分离物 一般含 有 ｔ ｙ ｐ ｅ Ⅱ序列 。 现 已成 功
交 叉保 护研究 进展进 行综述 。
１ 柑橘 衰退 病 的分 子生 物学特 征
３ ’ 端 序列同源性为 ８ ５％ ９ Ｏ％而 ５ ’ 端仅为 ６ ０％～
８ ０％ ， Ｓ Ｙ ５ ６ ８与 Ｔ ３ ６的 ３ ’ 端 序 列 同 源 性 高于 ９ ０％， 而 ５ 。 同源性仅 为 ５ ６％ 蚓 。 出人 意 料 的 是 Ｔ ３ ０和
柑桔衰退病毒分子快速检测方法研究的开题报告
柑桔衰退病毒分子快速检测方法研究的开题报告摘要：柑橘衰退病毒是近年来威胁柑橘品质的重要病毒之一。
为了对该病毒进行快速检测，本文将研究分子生物学技术在柑橘衰退病毒分子快速检测中的应用。
具体研究内容包括柑橘衰退病毒RNA的快速提取方法、实时荧光PCR检测方法的建立及优化以及检测结果的验证。
通过本研究，可为柑橘衰退病毒的早期预警和控制提供科学依据和技术支持。
关键词：柑橘衰退病毒；分子生物学；实时荧光PCR检测；检测结果验证一、研究背景柑橘衰退病毒是柑橘生产中常见的一类病毒性病害，对柑橘品质和产量有较大的影响。
传统的柑橘衰退病毒检测方法包括ELISA、RT-PCR等，但这些方法都存在操作复杂、检测时间长、检测效果受干扰等缺点。
因此，利用分子生物学技术对柑橘衰退病毒进行快速、准确的检测具有重要的现实意义。
二、研究内容与方法本研究将采用实时荧光PCR技术对柑橘衰退病毒进行快速检测。
具体步骤如下：1. 柑橘衰退病毒RNA的快速提取方法。
采用TRIzol法或其他有效的RNA提取方法，从病毒感染的柑橘组织中快速、高效地提取RNA。
2. 实时荧光PCR检测方法的建立及优化。
设计柑橘衰退病毒基因序列特异性引物和荧光探针，建立实时荧光PCR检测方法，并进行反应体系优化。
3. 检测结果的验证。
通过对病毒感染样本和健康样本的检测，验证实时荧光PCR 检测方法的特异性和敏感性，并与传统检测方法进行比较和分析。
三、研究意义和预期目标本研究旨在建立基于实时荧光PCR技术的柑橘衰退病毒分子快速检测方法，为柑橘生产中的病毒防控提供科学依据和技术支持。
预期结果包括：1. 基于实时荧光PCR技术的柑橘衰退病毒分子快速检测方法的建立和优化；2. 验证检测方法的特异性、灵敏度和稳定性；3. 为柑橘衰退病毒的早期预警和控制提供科学依据和技术支持。
四、研究进展和计划目前，已完成柑橘衰退病毒基因序列特异性引物和荧光探针的设计和合成，反应体系的优化正在进行中。
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湖南省柑橘茎陷点型衰退病为害情况调查及其弱毒系筛选研究湖南作为中国柑橘栽培大省,柑橘产业近几年来得到了快速的发展,面积与产量均已跃居全国第一。
长期以来,由于抗柑橘衰退病(CTV)枳(Poncitrustrifoliate)砧的大量使用,使得CTV并未对湖南省的柑橘生产造成太大影响,但近年来随着茎陷点型的CTV强毒系的入侵,该病害对我省的柑橘产业所带来的危害越来越严重,并且由于该病可被蚜虫传播,无毒树也很容易被再感染,所以防治更为困难。
因此,本研究旨在摸清湖南省目前柑橘衰退病为害情况的同时,通过RT-PCR 结合测序的方法初步筛选出CTV的弱毒株系,为交叉保护试验在生产实践中的应用奠定基础。
本研究试验进程及结果如下:1.对湖南省各柑橘产业大县的主栽品种进行了茎陷点型CTV发生为害的初步调查,调查发现部分果园的强毒系病株已经完全失去生产价值,树势极其衰弱,枝叶稀疏黄化严重,茎陷点明显,甚至有完全无果的现象,并且其受害程度随时问的推移而加重。
2.通过RT-PCR结合测序的方法对其毒系进行分型研究,结果发现各地区的衰退株系并没有出现非常专一的地区特异性,这可能与目前各县市的品种交流开始频繁起来有关,而衰退株系本身具有特异性,优良但却未经过脱毒的品种通过嫁接繁殖将本地的衰退株系带到别地,成为强毒系。
3.初步筛选出CTV弱毒株系。
引用了Sambade设计的引物,通过RT-PCR法进行CTV株系鉴定,对经RT-PCR 法鉴定为弱毒的样品进行序列的测定,之后再对其进行系统发育树状图进行分析,同时对测得序列相应氨基酸序列的分析。
并同时结合酶切的方法,利用ScaⅠ酶及TaqⅠ酶对各株系进行酶切反应进行弱毒系的初步筛选,为CTV弱毒株系的筛选提供进一步的依据。
4.交叉保护试验。
利用3种常用的CTV指示植物进行了交叉保护(Mild StrainCross Protection,MSCP)试验,观察其筛选出的弱毒系的交叉保护作用能力。