酶工程的研究及进展
酶工程技术的研究及其在医药领域的应用

酶工程技术的研究及其在医药领域的应用一、本文概述随着生物技术的飞速发展,酶工程技术作为其中的重要组成部分,已经在医药领域展现出广阔的应用前景。
酶,作为生物体内的一类特殊蛋白质,具有高效、专一和温和的催化特性,因此被广泛用于医药、化工、食品等多个领域。
本文旨在探讨酶工程技术的最新研究进展,并重点分析其在医药领域的应用现状和发展趋势。
本文将对酶工程技术的基本原理和方法进行简要介绍,包括酶的来源、分离纯化、固定化以及酶反应器的设计等。
在此基础上,文章将重点论述酶工程技术在医药领域的多个应用方面,如药物合成、药物转化、药物分析和疾病诊断等。
通过具体案例和数据分析,展示酶工程技术在提高药物生产效率、降低药物成本、改善药物质量和提高疾病诊疗准确性等方面的积极作用。
本文还将对酶工程技术在医药领域面临的挑战和未来发展方向进行深入探讨。
随着生物技术的不断进步,酶工程技术的研究和应用将更加深入和广泛。
例如,新型酶的发现与改造、酶固定化技术的创新、酶反应器的优化以及酶工程技术在基因治疗和细胞治疗等新兴领域的应用等,都将成为未来研究的热点和方向。
酶工程技术在医药领域的应用已经取得了显著成果,并展现出广阔的发展前景。
本文将从多个角度全面分析酶工程技术在医药领域的应用现状和发展趋势,以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考和借鉴。
二、酶工程技术的基础理论酶工程技术,作为一门应用生物技术的分支,其基础理论主要涵盖酶学基本原理、酶反应动力学、酶分子设计和改造以及酶固定化技术等方面。
酶学基本原理是酶工程技术的基石。
酶是生物体内具有催化功能的蛋白质,具有高度专一性和高效性。
酶通过降低反应的活化能来加速生物化学反应,使得原本难以进行的反应在温和条件下也能迅速进行。
了解酶的结构、催化机制以及影响因素,对于酶工程技术的应用至关重要。
酶反应动力学是研究酶催化反应速率与反应物浓度关系的科学。
通过对酶反应动力学的研究,可以了解酶催化反应的速度控制步骤、反应速率常数以及反应机制等,为酶工程技术的优化提供理论依据。
酶工程技术在医药制药领域的应用论文(共2篇)

酶工程技术在医药制药领域的应用论文(共2篇)本文从网络收集而来,上传到平台为了帮到更多的人,如果您需要使用本文档,请点击下载按钮下载本文档(有偿下载),另外祝您生活愉快,工作顺利,万事如意!第1篇:酶工程技术在医药制药领域的应用一、酶工程技术研究进展1固定化酶酶工程的最初10年,主要兴趣在发展固定化方法和载体,探索其应用的可能性。
第一代固定化生物催化剂的特征是单酶的固定化,发展了吸附、共价、交联和包埋等数十种固定化方法。
现已有20多种利用单酶活力的固定化生物催化剂在世界上获得工业应用。
2多酶系统的固定化固定化单酶不可能引起发酵工业的根本变革。
大多数生物化学产品的合成和转化必须依赖一连串酶反应,而且需要辅助因子和ATP的参与。
早在70年代初已尝试将催化顺序反应的几种酶共固定,发现物质转化的速度比溶液中酶混合物高。
70年代后期,辅酶的保持和再生又特别受到重视。
ATP和NAD在大分子化后可保持在半透膜内,往返于催化合成的酶与再生它们的酶之间。
已知的酶有50%以上需要辅因的存在参与酶促反应。
ATP、FAD、NAD、PLP与PQQ的再生都可能通过固定化技术获得不同程度的解决,其中包括这些辅因的固定化与其他酶促反应相偶联或对辅因进行化学修饰及利用这些辅因的类似物与衍生物等。
实验发现应用固定化辅因及其衍生物对酶的活力具有良好作用,如thioNAD与A-PAD对马肝醇脱氢酶的活力比NAD更有效。
亚细胞成份都是天然地巧妙定位的多酶集合体,从理论上推测,固定化各种细胞器就可能有效地利用各种多酶系统。
我们曾固定化了羊精囊微粒体、鼠肝微粒体、线粒体和细胞质,为了克服固定化细胞器不够稳定的缺点,KangFuGu等人《构建了一种含有固定化多酶系统和NAD的人工细胞,用于将氨或尿素转变成必需的氨基酸,取得了良好结果。
3固定化细胞从单酶-多酶-细胞器固定化的进一步延伸就是进行完整细胞的固定化,其中包括微生物细胞,动物细胞与植物细胞的固定化。
酶的工程改造与应用研究进展

酶的工程改造与应用研究进展酶作为生物体内的催化剂,在生命活动中起着至关重要的作用。
随着科学技术的不断发展,酶的工程改造成为了现代生物技术领域的一个重要研究方向,并且在多个领域取得了显著的应用成果。
酶的工程改造旨在通过各种技术手段对天然酶的结构和功能进行修饰和优化,以满足不同的应用需求。
其中,蛋白质工程技术是酶工程改造的核心手段之一。
通过定点突变、基因重组等方法,可以有针对性地改变酶的氨基酸序列,从而影响其催化活性、稳定性、底物特异性等特性。
在酶的工程改造中,理性设计和非理性设计是两种常见的策略。
理性设计基于对酶的结构和催化机制的深入了解,通过计算机模拟和分析,预测可能的关键位点,然后进行有目的的改造。
例如,对于一个催化特定反应的酶,如果已知其活性中心的关键氨基酸残基,就可以对这些残基进行替换或修饰,以提高酶的催化效率。
非理性设计则是通过随机突变、基因重组等方法构建大量的酶突变体库,然后通过高通量筛选技术从中筛选出具有优良性能的突变体。
这种方法虽然具有一定的盲目性,但有时能够发现意想不到的改造效果。
酶的稳定性是其在工业应用中的一个关键因素。
通过工程改造,可以增强酶的热稳定性、酸碱稳定性和抗蛋白酶降解的能力。
例如,在一些工业生产过程中,需要在高温条件下进行反应,如果酶的热稳定性不足,就会导致酶的失活和反应效率的降低。
通过对酶的结构进行分析,引入一些稳定的化学键、增加疏水相互作用或者改善蛋白质的折叠方式,都可以有效地提高酶的热稳定性。
底物特异性的改造也是酶工程的一个重要方向。
通过改变酶的活性中心的结构和形状,可以使酶对不同的底物具有更高的选择性和亲和力。
这在生物制药、精细化工等领域具有重要的应用价值。
例如,通过改造酶的底物特异性,可以实现对特定药物分子的高效合成,提高药物的纯度和产率。
酶的催化活性是衡量其性能的一个重要指标。
工程改造可以通过优化酶的活性中心、改善底物结合口袋的形状和大小、增强酶与底物之间的相互作用等方式来提高酶的催化活性。
酶工程技术在现代生物化工中的研究与应用

酶工程技术在现代生物化工中的研究与应用第一篇范文酶工程技术在现代生物化工中的研究与应用随着科学技术的不断发展,生物化工领域的研究与应用日益广泛,酶工程技术作为一种具有高效、专一、温和的生物催化技术,在现代生物化工中发挥着越来越重要的作用。
本文将从酶工程技术的研究和应用两个方面进行探讨。
一、酶工程技术的研究酶工程技术的研究主要集中在酶的筛选、改造和固定化等方面。
1. 酶的筛选:通过基因工程、蛋白质工程等手段,筛选具有特定催化活性和适应性的酶。
近年来,随着测序技术的不断发展,越来越多的酶被鉴定和描述,为酶工程提供了丰富的资源。
2. 酶的改造:通过基因突变、蛋白质工程等方法,对酶的结构进行改造,提高其催化效率、稳定性和底物范围。
目前,已成功改造了许多酶,如脂肪酶、蛋白酶、淀粉酶等。
3. 酶的固定化:将酶固定在一定载体上,使其具有更好的稳定性和重复使用性能。
固定化酶技术已成为现代生物化工领域的关键技术之一,常用的固定化方法有物理吸附、共价结合、包埋等。
二、酶工程技术在现代生物化工中的应用酶工程技术在现代生物化工中的应用广泛,涵盖了食品、医药、环保、能源等多个领域。
1. 食品工业:酶工程技术在食品工业中主要用于面包制作、乳品加工、饮料生产等。
如使用酵母酶改善面团性质,使用乳糖酶分解乳糖,提高乳制品的口感和营养价值。
2. 医药领域:酶工程技术在医药领域具有重要作用,可用于药物合成、基因治疗、生物制药等。
如使用酶催化合成抗生素、激素等药物,使用重组酶治疗遗传病、心血管疾病等。
3. 环保领域:酶工程技术在环保领域具有广泛应用前景,可用于废水处理、废气净化等。
如使用微生物酶分解石油烃类污染物,使用纤维素酶降解农业废弃物,实现资源化利用。
4. 能源领域:酶工程技术在能源领域也有所应用,如生物燃料的生产、生物燃气的研究等。
通过改造酶的结构,提高其对底物的催化活性,从而提高能源转化效率。
第二篇范文探索酶工程技术:现代生物化工的加速器想象一下,如果我们能够精确地调整和优化自然界中最优秀的催化剂——酶,会发生什么?答案是,我们可以解锁生物化工领域的无限潜力。
酶工程学的研究及应用

酶工程学的研究及应用酶工程学是一门旨在利用酶及其工程化应用的科学,是生物技术领域中不可或缺的一部分。
酶是一种在生命过程中必不可少的生物催化剂,其具有高效、高选择性、易获得和易控制等优势。
酶工程学则是通过各种技术手段去优化酶的性能,使其更好地发挥其催化功能,从而将其广泛应用于生物制药、食品工业、环境保护、化工产业等领域。
如今,酶工程急速发展,其应用已经涵盖了各个领域。
下面,将从以下三个方面阐述酶工程学的研究及应用。
一、酶的发现和鉴定酶的概念最早可以追溯到19世纪,但它们的分离和植物酶的化学性质一直是未解之谜,直到20世纪初才有了突破性进展。
如今,科学家们可以通过基因工程、蛋白质工程等方法,大量地生产不同效力的酶,使得酶的研究和应用变得更加方便和高效。
酶的鉴定也是酶工程学发展的重要方面。
通过酶学方法,科学家们可以从不同的微生物和生物组织中分离纯化出酶,从而得到各种酶的特性如酵素动力学参数、结构和功能等等,这对于酶的应用和开发是非常重要的。
二、酶的应用酶工程学的应用范围非常广泛。
其中最广泛和最重要的领域是生物制药。
酶制剂被用于生产临床上广泛使用的治疗药物,如克仑霉素、曲唑酮酸钠和乙酰胆碱等,它们的催化效率高,能够大量生产,并且具有高度的安全性。
在食品工业中,酶被广泛地用于酿造啤酒、酒精和乳酸,同时还可以用来生产一些其他的食品,比如面包、面条和糖果等。
这一方面的应用已成为食品生产的重要一环。
在环境保护中,酶被用于处理工业废水和固体废弃物,如蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶等可以加速废物的分解,减轻环境污染。
此外,酶还被广泛用于生物防治、制剂、组织修复、研究及医疗等广泛领域,可以说在现代生产中,酶已经成为了一种不可或缺的生物催化剂。
三、酶的设计与优化随着酶在各个领域中的应用越来越广泛,人们逐渐意识到,酶的性能和酶的结构紧密相关,因此,酶的设计和优化也成为了酶工程学发展的一个重要方面。
通过对酶的结构和性能的了解,科学家们可以通过计算机辅助设计酶的分子结构,从而提高酶的稳定性,活性,选择性等方面,使得酶的催化作用更加高效,从而满足不同行业和应用领域的需要。
酶学研究的新进展与应用前景

酶学研究的新进展与应用前景酶学作为生物化学的重要分支学科,一直受到科学家们的广泛关注。
酶是生物体内各种化学反应的催化剂,具有高效、特异性和可控性等特点,因此在医药、工业、环保等领域都具有重要的应用价值。
近年来,随着分子生物学、基因工程和生物晶体学等技术的发展,酶学研究取得了一系列突破性进展,同时也给酶学的应用前景带来了新的机遇和挑战。
一、酶学研究的新进展1. 酶的结构与功能研究生物晶体学技术的进步,使得科学家们可以高分辨率地解析酶的三维结构,加深对酶催化机制的理解和探究。
同时,在结构和功能的相关性方面也得到了深入的研究。
例如,最近一项研究发现人体中一种名为Itaconase的酶,可以将吡咯烷酮转化为丙烯酸,该过程对细胞代谢有重要意义。
这项发现揭示了酶的结构与功能之间的紧密联系,也为发掘新的生物催化反应提供了新思路。
2. 酶的进化研究生物体内的酶在长期的进化过程中,逐渐形成了丰富的多样性。
研究不同物种酶的特性和分化路径,有助于揭示酶的进化机制和适应环境的方式。
近来的研究表明,酶家族和基因家族的扩张与收缩,主要受到复制机制、自然选择和基因重组等因素的影响。
同时,比较酶家族和基因家族的演化,可以增加对生物种群进化的认识。
3. 酶的催化机理研究酶对化学反应的催化机制一直是酶学研究的中心问题。
近年来,随着理论计算、光谱学和微观动力学等技术的发展,研究人员对酶的催化机理有了更深入的认识。
例如,最近的一项研究证实了酶催化反应中的亲核攻击能够通过核子挪移(即原子的转移)的方式实现。
这一发现提供了新的理论基础,可以推动酶学的更深入研究和应用。
二、酶学研究的应用前景1. 医药领域由于酶具有高效、特异和可控的特性,成为医药领域的重要催化剂。
例如,酶抑制剂可以抑制某些疾病的发生,如癌症、糖尿病、肝炎等。
另外,酶在药物合成、药代动力学、药物传输等方面也有着重要的作用。
例如,酶可用于合成特定的药物分子,同时可以加速药物分子的代谢和排泄,从而减少不良反应和毒性。
酶的应用及酶工程的研究进程

酶的应用及酶工程的研究进程第一部分:酶的应用酶是生物催化剂,可以加速化学反应的速率,并在温和条件下进行。
由于其高效、选择性和环境友好性等特点,酶在许多领域都有广泛的应用。
以下是一些常见的酶应用:一、食品工业:酶在食品加工中起到重要作用。
例如,淀粉酶可将淀粉分解为糖类,增加产品甜度;蛋白酶可用于肉类嫩化或乳制品凝固等。
是的,酶在食品工业中发挥着重要作用。
以下是一些常见的酶在食品加工中的应用:1.淀粉酶:淀粉酶可以将复杂的淀粉分子降解为较简单的糖类,如葡萄糖和麦芽糖。
这种转化过程被广泛应用于面包、啤酒、乳制品和果汁等产品中,以增加甜度、改善口感或促进发酵。
2.蛋白酶:蛋白质水解酶可以将肉类中较大分子量的蛋白质分解成更小的片段。
这种嫩化处理可使肉质变得更加柔软,并提高其口感和咀嚼性。
3.凝固剂:某些特定类型的微生物产生了能够凝结牛奶或豆浆等液体的特殊凝固剂(例如拉丁语"rennet")。
这些凝固剂主要含有胰凝乳素(chymosin),它可以水解牛奶中存在的一种叫做κ- 链球菌素(k-casein) 的蛋白质,在此过程中形成凝固物。
4.果汁澄清酶:果汁中的浑浊物质可以通过果汁澄清酶来降解和去除。
这种酶能够分解果胶、纤维素等多糖类,从而使果汁更加透明和清澈。
这些是食品工业中常见的一些酶应用,它们帮助改善产品的口感、稳定性和质量,并提高生产效率。
二、制药工业:许多药物合成过程需要使用特定的酶来催化关键步骤。
此外,生产抗体、激素和维生素等也需要借助酶。
在制药工业中,酶的应用非常广泛。
以下是一些常见的酶在制药工业中的应用:1.合成酶:许多药物的生产需要使用特定的酶来催化关键步骤。
例如,通过利用氨基转移酶和脱水氢化酶等,可以合成抗生素、激素和维生素等重要药物。
2.抗体生产:单克隆抗体是治疗和诊断许多疾病所需的重要工具。
在抗体生产过程中,将目标蛋白注射到动物或人体内后,通过特定细胞分泌出相应抗体。
酶工程和生物反应器的研究进展

酶工程和生物反应器的研究进展酶工程和生物反应器是现代生物技术发展中的两个重要分支,一直以来,这两个领域的研究不断深入,产生了许多重大的科研成果和应用价值。
本文将从理论原理、实验技术、应用前景三个方面论述酶工程和生物反应器的研究进展。
一、理论原理酶工程是研究酶催化机理、结构与功能关系、工业应用等方面的学科,涵盖了生物化学、生物学、化学工程、计算机科学等多学科交叉。
酶作为一种特殊的蛋白质分子,在生物大分子的研究领域中占有重要地位。
酶活性的高效性和特异性使其在生物学、医学、食品工业、化学制药、环境保护、能源开发等应用领域中起到了不可或缺的作用。
酶催化反应的速率受多个因素影响,如酶底物浓度、温度、酸碱度、离子强度、酶浓度等,研究这些影响因素的作用机理有助于优化反应条件、提高反应效率和选择性。
生物反应器是一种可以控制反应条件、维持生物体生存和繁殖的装置,主要由反应容器、传质设备、搅拌设备、调节设备、控制系统等组成。
生物反应器可用于培养分泌蛋白、合成有机物、发酵工艺、废弃物处理等应用领域。
生物反应器的研究重点包括反应物质的传输、代谢途径、生物物理学、细胞生物学等方面,其中最重要的是控制生物反应器中微生物的环境,以维持细胞代谢和增殖的活力。
生物反应器的设计、优化和运行需要深入了解微生物的生物学特性和反应机理,同时也需要考虑设备的结构和性能等工程问题。
二、实验技术酶工程和生物反应器的研究离不开实验技术的支持。
随着实验技术的不断更新和发展,酶工程和生物反应器的研究方向和方法也在不断改进和创新。
近年来,利用基因工程手段生产重组酶的方法得到广泛应用,通过改造目标酶的分子结构和催化特性,可实现对反应条件的微调和目标产物的优化。
同时,化学修饰和材料膜技术也被广泛应用于酶的固定化和改性,通过改变酶的空间构型和化学性质,可以提高酶的稳定性和抗污染性,从而克服制约酶应用的一些技术难题。
生物反应器方面的研究技术也在不断发展,微生物发酵技术、细胞培养技术、组织工程技术等新兴技术为生物反应器研究提供了新的途径和手段。
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LUOYANG NORMAL UNIVERSITY 2010年酶工程学年论文分子酶工程研究进展院(系)名称生命科学系专业名称生物科学学生姓名李艳艳学号101314022指导教师程彦伟完成时间2013年12月分子酶工程研究进展李艳艳(生命科学系生物科学专业学号:101314022)摘要:酶工程的研究已经发展到分子水平,通过基因操作,已实现了许多酶的克隆和表达定点突变成为研究酶结构与功能的常规手段,并被广泛用于改善酶的性能。
体外分子进化方法则大幅提高了酶分子的进化效率,并有可能发展新功能酶。
融合蛋白技术的发展使构建新型多功能融合酶成为可能。
这里对分子酶工程学的研究与发展情况进行了综述。
关键词:分子酶工程;基因克隆;改造;定向进化;融合;人工模拟酶,由于其特异和高效的催化作用,在生命活动中扮演重要的角色。
其中,尤其是源于微生物的酶。
很早就被广泛开发服务于人类的各种需求,如酿造、酶法转化、疾病诊断与治疗、药物生产、环境污染物去除,等等。
然而,天然酶常常十分昂贵,且大多数酶由于非常“娇嫩”而难以实际应用。
近年来,结构生物学和基因操作技术的发展使得科学家能够对酶分子进行有效地改造,甚至开始为“目的”而设计,从而导致了分子酶工程学的发展。
概括地说,分子酶工程学就是采用基因工程和蛋白质工程的方法和技术,研究酶基因的克隆和表达、酶蛋白的结构与功能的关系以及对酶进行再设计和定向加工,以发展性能更加优良的酶或新功能酶。
当前的研究热点可以概括为3个方面:一是利用基因工程技术大量生产酶制剂;二是通过基因定点突变和体外分子定向进化对天然酶蛋白进行改造;三是通过基因和基因片段的融合构建双功能融合酶。
1 酶的基因克隆与异源表达天然酶在生物体中含量一般较低,难以提取和大量制备。
限制了它的推广应用。
重组DNA技术的建立,使人们可以较容易地克隆各种各样天然的酶基因,并将其在微生物系统中高效表达,从而在很大程度上摆脱对天然酶源的依赖。
这一技术已成功地应用于酶制剂的工业生产。
世界上最大的工业酶制剂生产商丹麦Novozymes公司生产的酶制剂80%为基因工程产品。
我国在这个领域中也取得了令世人瞩目的研究成果。
黄日波教授研究小组从广西象州温泉中分离到一株硫矿硫化叶菌,并根据基因序列库Genbank中提供的麦芽寡糖基海藻糖合酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶的DNA基因序列,利用PCR技术从中克隆到MTSase和MTHase,分别构建了含MTSase、MTHase基因的表达载体pHp-Jkint,将其分别整合到汉斯多形酵母染色体中,成功地构建了生产海藻糖工程菌,其表达量达60万U几MTSase和3万U/L MTHase。
经这2个酶的联合作用,使木薯淀粉中葡萄糖以80%的转化率转化为海藻糖,现已投入工业化生产。
2 酶分子的定向改造和进化酶分子本身蕴藏着很大的进化潜力,许多功能有待于开发。
分子酶工程设计可以采用定点突变和体外分子定向进化两种方式对天然酶分子进行改造。
定点突变需要知道酶蛋白的一级结构及编码序列,并根据蛋白质空间结构知识来设计突变位点。
体外定向进化是近几年新兴的一种蛋白质改造策略,可以在尚不知道蛋白质的空间结构,或者根据现有的蛋白质结构知识尚不能进行有效的定点突变时,借鉴实验室手段在体外模拟自然进化的过程(随机突变、重组和选择),使基因发生大量变异,并定向选择出所需性质或功能,从而使几百万年的自然进化过程在短期内得以实现。
2.1 定点突变定点突变技术可以随心所欲地在已知DNA序列中取代、插入或缺失一定长度的核苷酸片段。
该方法与使用化学因素、自然因素导致突变的方法相比,具有突变率高、简单易行、重复性好的特点。
利用定点突变技术对天然酶蛋白的催化性质、底物特异性和热稳定性等进行改造已有很多成功的实例。
葡萄糖异构酶是工业上大规模以淀粉制备高果糖浆的关键酶,也是国际上公认的研究酶催化机制及建立蛋白质工程技术最好的模型之一。
为提高葡萄糖异构酶的热稳定性,朱国萍等人用双引物法对葡萄糖异构酶基因进行了体外定点诱变,以Pro138替代Gly138,在酶比活相近的情况下,突变型葡萄糖异构酶的热半衰期比野生型长一倍,最适反应温度提高10~12~C。
据分析,可能由于Pro138替代Gly138引入的一个吡咯环刚好能够填充Gly138附近的空洞,使突变蛋白的空间结构更具刚性,从而提高了酶的热稳定性。
然而,定点突变技术只能对天然酶蛋白中少数的氨基酸残基进行替换,酶蛋白的高级结构基本维持不变,因而对酶功能的改造较为有限。
同时,由于已有的结构与功能相互关系的信息远远不能满足当今人们对蛋白质新功能的要求,因此目前采用体外分子定向进化的方法来改造酶蛋白的研究越来越多,并已在短短几年内取得了令人瞩目的成就。
2.2 易错PeR易错PCR是一种相对简单、快速、廉价的随机突变方法。
它通过改变PCR 反应条件,如降低一种dN11P的量(降至5%~lO%)、以dI1]P来代替被减少的dN1P等,使碱基在一定程度上随机错配而引入多点突变。
Arnold等通过易错PCR 对枯草杆菌蛋白酶E进行了系列体外进化研究,经筛选得到几个在高浓度的二甲基甲酰胺(DMF)中酶活力明显提高的突变株181。
DNA改组则是1994年由美国的Stemmer提出的,这种方法不仅可以对从随机突变文库中筛选出来的一组突变基因人为进化,还可以将具有结构同源性的几种基因进行体外重组,共同进化出一种新的蛋白质。
通过这种方法产生的多样性文库,可以有效积累有益突变,排除有害突变和中性突变,同时也可实现目的蛋白质多种特性的共进化。
3 融合蛋白与融合酶蛋白质的结构常常可以允许某个结构域的插入与融合。
DNA重组技术的发展与应用使不同基因或基因片段的融合可以方便地进行,融合蛋白经合适的表达系统表达后,即可获得由不同功能蛋白拼合在一起而形成的新型多功能蛋白。
目前,融合蛋白技术已被广泛应用于多功能工程酶的构建与研究中,并已显现出较高的理论及应用价值。
随着基因组、后基因组时代的到来和重组酶生产技术的开发,必将会有大量的、新的酶蛋白被人类发现。
近来国际上又提出蛋白质全新设计(protein de o design)的概念,这一新技术可以用于组建自然界原先并不存在的、结构和功能全新的酶蛋白I 。
经计算,3oo个氨基酸残基可组成1039o种不同序列的蛋白质。
而整个生物出现的时期,自然界只发现有1055种蛋白质,绝大多数序列及新功能的蛋白质或酶在3O亿年生物进化中仍未发生,这有待于我们去开发和创造益于人类的新功能蛋白质。
4 酶的人工模拟模拟酶是根据酶作用原理,用人工方法合成的具有活性中心和催化作用的非蛋白质结构的化合物。
它们一般都具高效和高适应性的特点,在结构上比天然酶简单;由于不含氨基酸,其热稳定性与pH稳定性都大大优于天然酶。
目前用于构建模拟酶的模型有环糊精、冠醚、卟啉和分子印迹等。
利用环糊精已经成功地模拟了胰凝乳蛋白、转氨酶等。
下面主要介绍抗体酶和分子印迹技术。
4.1 抗体酶制备抗体酶的方法主要有诱导法、拷贝法、插入法、化学修饰法和基因工程法。
这些方法综合运用了现代化学、免疫学和现代分子生物学的成就,使抗体的类型越来越多。
此外用基因工程法改造或构建全新抗体酶是很有前途的方法,建立抗体基因组合文库,对单抗及其相应基因的序列分析,对建立抗体结合部位进行基因定位突变及臵换有催化功能的氨基酸,是制备基因工程抗体酶的主要内容。
国内也有许多学者在进行此类研究。
廉革伟等模拟生物体内一族重要的含硒酶——甲状腺素脱碘酶,制备催化甲状腺素脱碘的含硒抗体酶。
他们用杂交瘤技术制备出抗甲状腺素的单克隆抗体4C5,再用化学修饰法将催化基团硒代半胱氨酸引入到抗体的抗原结合部位,得到含硒抗体酶Se4 C5;通过RIA方法测定抗体酶活力。
4.2 分子印迹技术分子印迹技术是将待分离的目标分子(模板分子)与交联剂在聚合物单体溶液中进行聚合制备得到固体物质,然后通过物理或化学手段除去介质中的目标分子,便得到“印迹”有目标分子空间结构和结合位点的分子印迹聚合物。
目前,分子印迹技术已被应用于手性物质拆分、仿生传感器、固相萃取、抗体模拟、酶催化模拟以及控释药物等领域中。
清华大学隋洪艳等利用分子印迹技术的共价法制备了对L一特丁氧羰基色氨酸或D一特丁氧羰基色氨酸印迹的丙烯酰胺分子印迹聚合物,目的是利用分子印迹技术手性分离氨基酸衍生物。
色谱评价结果表明,印迹分子L—Boc—Trp的离解常数(3.287 mmol/L) 要小于非印迹分子D—Boc —Trp的离解常数(4.379 mmol/L),说明分子印迹聚合物对印迹分子具有特异亲和作用。
采用扫描电镜和红外光谱等物理化学表征技术从结构上对这种特异性作了进一步的分析。
结果表明,分子印迹聚合物是一种具有多层次结构的聚合物,为溶质的扩散提供了良好的通道;在聚合物表面存在可与印迹分子相互作用的官能团。
系统研究了乙腈流动相中甲醇、乙酸和水的体积分数变化对分子印迹聚合物手性拆分效果的影响。
分子印迹技术可用于合成稳定性好的人工酶,也可用于手性药物及化合物的分离纯化及生物分子的识别检测,并可作为生物传感器检测的分子识别元件。
Mosbach发展了一种基于分子印迹技术的光纤传感器装臵,具有手性识别能力,能识别荧光标记的氨基酸衍生物。
总之,分子印迹技术自问世以来,便得到了人们的广泛关注,它将在酶工程发展中发挥越来越重要的作用。
5 展望随着基因组、后基因组时代的到来和重组酶生产技术的开发,必将会有大量的、新的酶蛋白被人类发现,一个重要的表现是从极端环境微生物或不可培养微生物获得酶的努力正在迅速增长。
而体外指导进化与高效筛选方法的结合,则大幅度提高了酶分子的进化效率,加速了人类改造蛋白质旧功能和开发新功能的步伐。
当然,分子酶工程学的进一步发展还要依赖于各种酶分子结构生物学数据的完善以及蛋白质空间结构预测和蛋白质结构和功能关系的深入研究。
近来国际上又提出蛋白质全新设计的概念,这一新技术可以用于组建自然界原先并不存在的、结构和功能全新的酶蛋白。
尽管目前对蛋白质全新设计的理论基础的认识还不够深入,蛋白质全新设计还处在探索阶段。
然而,我们相信,即使无法准确地从蛋白质序列预测蛋白质的结构及功能,对蛋白质折叠规律的不断了解及酶蛋白设计经验的不断积累必将使蛋白质全新设计的成功率不断提高。