实验八血型鉴定及交叉配血试验
血型鉴定与交叉配血试验
一、红细胞血型系统
（二）Rh血型系统
1.Rh血型系统的抗原和抗体 ➢ Rh遗传基因位于第1号染色体短臂上 ➢ 人类红细胞上的Rh抗原应有C、c、D、E、e 5种，抗原性强弱依次为D>E>C>c>e ➢ 含D抗原的红细胞为Rh阳性，不含D抗原的为Rh阴性 ➢ Rh血型形成的天然抗体极少，主要是由Rh血型不合输血或通过妊娠所产生的免疫性抗体
一、红细胞血型系统
（一）ABO血型系统
交叉配血的结果判断： ➢ 同型血 主侧管与次侧管均无凝集反应，表示配血完全相合，可以输血；不论何
种原因导致主侧管有凝集时，则绝对不可输用。 ➢ 异型血 主侧管无凝集及溶血，而次侧管出现凝集，但凝集较弱，效价<1∶200，
可以试输少量（不超过200ml）该型血液。
一、红细胞血型系统
3.Rh血型系统的临床意义
（1）Rh血型系统所致的溶血性输血反应。 ➢ Rh血型不合引起的溶血性输血反应，是一种血管外溶血反应，以高胆红素血症为其特征。 ➢ Rh阴性妇女曾孕育过Rh阳性的胎儿，当输入Rh阳性血液时也可发生溶血反应。 （2）新生儿Rh溶血病 母亲与胎儿的Rh血型不合，典型的病例为胎儿之父为Rh阳性（DD或Dd），母为Rh阴性 （dd），胎儿为Rh阳性（Dd）。
一、红细胞血型系统
（一）ABO血型系统
2.ABO血型的亚型 （1）A亚型 A1和A2 ➢ A1亚型：红细胞上具有A1和A抗原，其血清中含有抗B抗体 ➢ A2亚型：红细胞上只有A抗原，其血清中除含抗B抗体外，尚可有少量的抗A1抗体 （2）AB型 A1B和A2B ➢ A1B：红细胞上具有A1、A和B抗原，血清中无任何抗体 ➢ A2B：红细胞上具有A和B抗原，血清中虽多无任何抗体，但在约25%的A2B型人中含有抗
交叉配血实验的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解交叉配血实验的基本原理和操作方法。
2. 掌握交叉配血实验在临床输血中的应用和意义。
3. 培养实验操作技能，提高实验观察和分析能力。
二、实验原理交叉配血实验是输血前相容性检测的重要环节，目的是检查受血者和供血者血液中是否含有不相配合的抗原、抗体成分，以避免输血不良反应和输血性溶血反应的发生。
交叉配血实验包括主侧配血和次侧配血。
主侧配血：将受血者血清与供血者红细胞混合，观察有无凝集现象，以发现受血者血清中是否含有与供血者红细胞起反应的抗体。
次侧配血：将供血者血清与受血者红细胞混合，观察有无凝集现象，以发现供血者血清中是否有与受血者红细胞引起反应的抗体。
三、实验材料1. 受血者血液样本：A型Rh阳性2. 供血者血液样本：A型Rh阳性3. 抗凝剂：EDTA-K24. 配血试剂：凝聚胺试剂、生理盐水、抗A、抗B试剂5. 仪器：离心机、移液器、显微镜等四、实验步骤1. 准备工作：将受血者和供血者的血液样本分别采集，加入抗凝剂，离心分离血清和红细胞。
2. 主侧配血：a. 将受血者血清与供血者红细胞各取适量，分别加入试管中。
b. 加入凝聚胺试剂，混匀，室温下放置15分钟。
c. 观察有无凝集现象。
3. 次侧配血：a. 将供血者血清与受血者红细胞各取适量，分别加入试管中。
b. 加入凝聚胺试剂，混匀，室温下放置15分钟。
c. 观察有无凝集现象。
4. 结果判断：a. 主侧配血和次侧配血均无凝集现象，表示配血相合。
b. 主侧配血或次侧配血有凝集现象，表示配血不合。
五、实验结果受血者和供血者的血液样本经过交叉配血实验后，主侧配血和次侧配血均无凝集现象，表示配血相合。
六、实验分析本次交叉配血实验结果显示，受血者和供血者的血液样本配血相合，说明两者在ABO血型和Rh血型方面没有不相配合的抗原、抗体成分。
这为临床输血提供了重要依据，有助于保证输血安全。
七、实验结论1. 交叉配血实验是输血前相容性检测的重要环节，对于保证输血安全具有重要意义。
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤.doc
血型鉴定、不规则抗体筛查及交叉配血步骤一.1. 血型鉴定排管并标记患者红细胞悬液管、患者血浆管、患者ABO正定型试管、患者ABO反定型试管、患者RhD定型试管。
2.标本准备分离患者的血浆，取一滴压积红细胞，三次洗涤，制备患者 2%-5%红细胞悬液。
3.加样ABO正定型： 1 滴（ 50ul ）抗 A、抗 B 试剂加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。
ABO反定型： 1 滴（ 50ul ）患者血清加 1 滴（ 50ul ）反定型试剂红细胞。
RhD定型： 1 滴（ 50ul ）抗 D 血清加 1 滴（ 50ul ）患者红细胞悬液。
4.二. 结果判断离心（ 2 档）：轻摇试管，肉眼观察有无凝集，记录ABO、RhD血型结果。
不规则抗体筛查（生理盐水法+凝聚胺法）1.排管标记 01、 02、 03 及自身对照管2. 加样各试管分别加入相应的患者血清 2 滴（ 100ul ）及筛选细胞 1 滴（ 50ul ）。
3.结果观察离心（ 2 档），观察结果先看上清液有无溶血，轻轻混匀，肉眼观察有无凝集，结果判断并记录。
各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留约，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min 内消失显微镜检查三. 交叉配血试验（生理盐水法+凝聚胺法）1.标本准备分离供血者血浆与红细胞三次洗涤，制备供血者 2%-5%红细胞悬液2.排管标记排管，主侧、次侧及自身对照管3.加样各试管分别加入相应的备检血清 2 滴（ 100ul ）及 2%-5%备检红细胞悬液 1 滴（ 50ul ）4.结果观察离心（ 2 档），观察结果先看上清液有无溶血轻轻混匀，肉眼观察有无凝集结果判断并记录各试管分别加入低离子介质，轻轻混匀（参照试剂说明书）各试管再分别加凝聚胺溶液 2 滴（ 100ul ）混匀，离心先观察上清液有无溶血弃去上清液，留，轻轻混匀肉眼观察有无凝集（凝者继续试验，否则查找原因并重复试验）各试管分别加入重悬液 2 滴（ 100ul ），轻轻混匀肉眼观察凝集是否在1min 内消失肉眼观察阴性者，显微镜检查记录交叉配血结果A、 B、O试验红细胞悬液的制备1.分别采取已知A、 B、O 三种血型的红细胞，经盐水洗涤 3 次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（见表格）红细胞悬液的配置悬液浓度（ %）压实红细胞（滴）盐水（滴）2 1 （ 40）5 1 （ 16）10 1 （ 8）20 1 （ 4）2.为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取 3 个以上健康成人血液，按A、B、O 型分别混合后，按上法制备。
血型鉴定与交叉配血
结果
-
-+
+
-
O
+
--
+
-
A
-
++
-
-
B
+
+-
-
-
AB
Rh血型鉴定
一、试剂 1、IgM抗-D试剂血清 2、待检红细胞悬液
二、操作 1、取12×75mm干净小试管1支 2、滴入IgM抗-D试剂血清1~2滴 3、滴入红细胞悬液 4、混匀后3400转/分离心15秒 5、轻轻摇动试管，观察结果 6、凝集为阳性，不凝集为阴性
抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红 细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗 体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗 体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→ 从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B 抗原→判断血型。
实验原理
血型不相容的两人血液 混合,则红细胞可凝集成簇
含某种凝 集原的红 细胞
含相应凝
IgG structure
2、 IgM抗体
分子最大的一种Ig，多以五聚体形式存 在。在盐水介质中能直接连接相应的红细胞， 使之发生肉眼可见的凝集反应，因此又称为 完全抗体。
IgM structure
血型血清学检测的基本原理
Reaction of antibodies
（一）盐水介质法
ABO血型鉴定实验原理
+ 集素的血 清
红细胞凝集反应 (agglutination)
试剂
抗A、抗B试剂血清 5%的A型、B型红细胞悬液 受检者血清 5%的受检者红细胞悬液 取血一滴，加
入含1ml生理盐水的小试管内，混匀， 即得约5％红细胞悬液。
实验步骤
交叉配血实验笔记
实验八交叉配血试验交叉配血就是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合,观察有无凝集现象(见图4-3-1-1)。
输血时,一般主要考虑供血者的红细胞不要被受血者的血清所凝集;其次才考虑受血者的红细胞不被供血者的血清所凝集。
前者叫交叉配血试验的主侧(也叫直接配血),后者叫交叉配血的次侧(也叫间接配血)。
只有主侧与次侧均无凝集,称为“配血相合”,才能进行输血;如果主侧凝集,称为“配血不合”或“配血禁忌”,绝对不能输血;如果主侧不凝集,而次侧凝集,可以认为“基本相合”,但输血要特别谨慎,不宜过快过多,密切注视有无输血反应。
【实验目的】学习交叉配血的三种常用方法。
【实验对象】人体(学生自愿者)。
【实验器材与药品】1.仪器显微镜,离心机。
2.器械采血针,消毒注射器,双凹玻片,小试管,竹签,棉球,腊笔。
3.药品标准A血清,标准B血清,生理盐水,75％酒精,碘酒。
【实验步骤与观察指标】图4-3-1-1 交叉配血示意图(一)红细胞悬浮液的配制按需要型别,取全血1ml,加等渗盐水2 ～3ml,充分摇匀离心沉淀,弃去上清液,然后再加生理盐水2 ～3ml按上述方法洗涤,共三次,取压积红细胞5 滴,加新鲜等渗盐水4 ml ,即成5 ％红细胞悬液。
(二)交叉配血基本原理见图4-3-1-1示。
盐水介质交叉配血试验实验原理天然IGM类血型抗体与对应的红细胞抗原在室温下盐水介质中发生凝集现象。
可以检查供、受者血清中就是否存在破坏对方RBC 的IgM抗体(ABO血型中抗A抗B抗体以IgM抗体为主)。
实验步骤取二试管,分别注明“主”、“次”字样,主侧滴入供血者红细胞悬液一滴与受血者血清一滴;次则滴入受血者红细胞悬液一滴与供血者血清一滴。
混匀后1000rpm离心1min,取出观察结果。
如两侧均无凝集现象,可多量输血;如主侧无凝集而次侧有凝集只可考虑少量输血;如主侧凝集则不能输血。
低离子聚凝胺介质交叉配血试验实验原理红细胞表面带有大量的负电荷,以避免其产生自发性聚集,当红细胞悬浮在电解质时,阳离子会被红细胞的负电荷所吸引,形成Zeta电位,Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。
血型鉴定和交叉配血试验培训课件
血型鉴定和交叉配血试验
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（二）Rh血型系统
Rh血型系统的鉴定 仅用抗D血清进行鉴定，粗略地分为Rh阳性和阴
性两类。 鉴定方法
完全抗体：生理盐水凝集试验 不完全抗体：胶体介质法、木瓜酶法、抗人球蛋 白法等
血型鉴定和交叉配血试验
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（二）Rh血型系统 Rh血型系统的临床意义 Rh血型系统所致的溶血性输血反应：第一次输血
最可能是那一种疾病？
A、新生儿Rh 溶血病 B、新生儿 ABO溶血病
C、新生儿自身免疫性溶血性贫血 D、遗传学球 形红细胞增多症 E、珠蛋白生成障碍性贫血
血型鉴定和交叉配血试验
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最可能产生的是哪一种并发症：
A、胆红素脑病
B、休克
C、心功能不全 D、肾功能不全 E、 肝功能 不全
哪种诊断最有价值？
新生儿同种免疫溶血病：是指母亲与胎儿血型不 合引起血型抗原免疫所致的一种溶血疾病。ABO 血型系统和Rh系统引起的溶血病常见。
ABO血型与器官移植。
其他：亲缘鉴定、法医鉴定、疾病相关性调查。
血型鉴定和交叉配血试验
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（二）Rh血型系统
Rh血型系统的抗原和抗体
抗原主要有5种。抗原性强弱依次为D、E、C、c、e，以 D抗原性最强。
不必考虑Rh血型，第二次输血需考虑Rh血型是否 相同。 新生儿Rh溶血病：Rh-的母亲 ①若输过血，怀孕 后其孕儿为Rh+者，孕妇的抗Rh的抗体，可通过 胎盘导致胎儿溶血。②第一次孕儿为Rh+，胎儿 的RBC因某种原因(如胎盘绒毛脱落)进入母体，或 分娩时进行胎盘剥离过程中血液挤入母体,孕妇体 内产生抗Rh的抗体。第二次妊娠时,孕妇体内的抗 Rh的抗体，通过胎盘导致胎儿溶血。
血型及交叉配血实训报告
一、实训目的通过本次实训，了解和掌握血型鉴定的基本原理和方法，熟悉交叉配血的操作步骤和注意事项，提高对输血安全性的认识。
二、实训时间2023年11月15日三、实训地点XX医学院检验科实验室四、实训人员XXX、XXX、XXX五、实训材料1. 血液样本：A型、B型、AB型、O型2. 试剂：抗A、抗B、抗D标准血清，生理盐水，玻片，竹签等3. 仪器：显微镜，离心机等六、实训内容1. 血型鉴定（1）操作步骤1）取玻片一张，用蜡笔将其分为三等份，分别标记为A、B、D。
2）分别加入抗A、抗B、抗D标准血清。
3）分别滴入待测血液样本。
4）用洁净竹签将试剂和血液充分混匀。
5）轻轻连续倾斜转动玻片25分钟，观察并记录。
（2）结果分析根据红细胞凝聚类型，可鉴别出A型、B型、AB型、O型。
2. 交叉配血（1）操作步骤1）取玻片一张，分为三等份，分别标记为主侧、次侧、对照。
2）主侧：分别滴入献血者红细胞和受血者血清。
3）次侧：分别滴入受血者红细胞和献血者血清。
4）对照：分别滴入生理盐水和抗A、抗B、抗D标准血清。
5）轻轻连续倾斜转动玻片25分钟，观察并记录。
（2）结果分析1）主侧、次侧均无红细胞凝聚，为配血相合。
2）主侧或次侧有红细胞凝聚，为配血不合。
七、实训结果1. 血型鉴定结果（1）待测样本1：A型（2）待测样本2：B型（3）待测样本3：AB型（4）待测样本4：O型2. 交叉配血结果（1）献血者A型，受血者B型：配血不合（2）献血者B型，受血者A型：配血不合（3）献血者AB型，受血者O型：配血相合（4）献血者O型，受血者AB型：配血相合八、实训总结1. 血型鉴定和交叉配血是输血安全的重要保障，必须严格按照操作规程进行。
2. 实训过程中，应注意观察红细胞凝聚情况，确保配血准确性。
3. 交叉配血实验结果对输血安全至关重要，必须严格执行。
4. 通过本次实训，加深了对血型鉴定和交叉配血的理解，提高了操作技能。
九、实训建议1. 增加实训次数，提高操作熟练度。
血型鉴定及交叉配血
一、盐水介质法
原理：ABO血型天然IgM类抗体与对应的RBC
抗原特异性结合时，在盐水介质中出现肉 眼可见的凝集。通过判断是否凝集，判断 是否有血型不合的情况
（一）盐水介质法
操作： 1、取两只小试管，标明主和次侧 2、主侧：受血者血浆2滴，献血者红细胞1滴
次侧：献血者血浆2滴，受血者红细胞1滴 3、混匀，离心，1000r/min,离心1min 4、观察结果：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC
中可产生负电荷，中和红细胞表面的负电荷，减 轻细胞间排斥力，缩短红细胞距离，在离心力作 用下，可使红细胞发生发生可逆性、非特异性凝
集。低离子液可降低可增强抗原、抗体间的吸引
力，促进血型抗体与红细胞膜上相应抗原结合。
离心后加入再悬液（枸橼酸钠），可中和聚凝胺
的正电荷，正常红细胞表面恢复表面的负电荷， 使非特异性凝集散开，而特异性的抗原抗体结合 引起的凝集仍然存在。
Rh（D）血型鉴定
原理：IgM型抗D标准血清与被检者RBC表面D抗原在
室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否 出现凝集判断是否有D抗原的存在。
Rh（D）血型鉴定
加抗D血清1滴
加红细胞悬 液1滴（5%）
轻轻摇动玻片混匀， 2min内判断结果， 有凝集（＋），无凝 集需按照说明书进一 步实验确认是否为阴 性
浮起，观察有无凝集或溶血，
如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为 凝集（＋）；
如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮 起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；
若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。
（二）聚凝胺介质法
原理：聚凝胺是一种高价阳离子多聚物，在液体
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2．血型鉴定方法 • 标记凹载玻片：左上角写A，右上角写B。 • 分别吸取标准A血清和标准B血清各1滴滴于双凹载玻片左端和右端。 • 采血针刺破左手无名指尖，待血液出来后，用2支毛细滴管吸取血
液，分别加入到玻片左、右两侧的血清内，并用牙签搅拌，使标 准血清与血液混匀。（切勿混用毛细滴管和牙签！） • 手持玻片转动数次，转动时玻片应保持在一个水平面上，然后置 室温下5min后观察结果。 • 肉眼观察：如果外观略呈花边状或锯齿状，看上去有沉淀，则多 为凝集；如果血滴呈均匀状态，边缘整齐，则多为不凝集。 • 进一步在低倍镜下观察：在低倍镜下，如果观察到红细胞凝集成 团，或尚有少数游离细胞，则为凝集现象；如果红细胞均为游离 状态，则为不凝集。根据镜下所见有无凝集现象判定血型。
部位，然后再取一滴血液于抗B或A上。
抗A
医学课件ppt
抗B
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观察有无凝集，并按下表判定结果。
血型
A B O AB
抗A试剂
+ +
抗B试剂
+ +
呈现均匀的淡红色时，表明不凝集，用“一”号表示。
在试剂里凝结成絮团状，形成鲜明的对比，表明凝集，用
“十”号表示。
医学课件ppt
11Leabharlann 二）交叉配血试验患 者– 菠萝酶，无花果酶，木瓜酶 • 抗球蛋白介质配血
– 经典方法，加LISS（低离子介质溶液）的方法 • 聚凝胺介质配血 • 凝胶方法配血
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15
盐水介质配血方法
患 者
主
侧 离心
次 看结果
献
侧
血
者
医学课件ppt
阳 性
阴 性
16
抗球蛋白配血方法
患
者
37 ℃
主
侧
献
次
37℃
侧
水浴30分钟
三洗
血
者
医学课件ppt
17
抗球蛋白方法配血方法
阳
加
性
抗 球 蛋
离心 看结果
白
阴 性
医学课件ppt
18
酶介质配血方法
患 者
主 侧
次
主次侧
献
侧
均加酶
血
者
医学课件ppt
19
酶介质配血方法
37 ℃
阳
性
37℃
离心
水浴30分钟
看结果
阴
性
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20
二、Rh定型 1、使用盐水介质试剂
用LIM配制的红细胞悬液，可以代替 由生理盐水配制的红细胞悬液在盐水介质 试剂中进行Rh定型，两者定型方法和效果 均相同。
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聚凝胺(Polybrene)配血方法
患
者
主
侧
献
次 侧
室温放置 1 分钟
主次侧均 加聚凝胺
血
者
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22
聚凝胺(Polybrene)配血方法
离 心 聚凝胺引起
红细胞非特 异性凝集
主次侧均 加重悬液
看结果
医学课件ppt
阳 性
阴 性
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13
交叉配血的目的
交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受 血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要 目的是为了防止输血后产生溶血性反应。
尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血 不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持 最长的存活时间。
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交叉配血试验方法
• 盐水介质配血 • 酶介质配血
医学课件ppt
5
实验步骤
取干净载玻片
滴加定型剂
取血
消毒
取血
观察
记录结果
消毒 消毒
医学课件ppt
6
①
② 抗A 医学课件ppt
抗B 7
③用70－75％的酒精消毒取血部位
消毒取血部位
医学课件ppt
8
④ 用针扎一下消毒部位，使血冒出， 立即滴一滴血液在抗A或B上。
抗A
医学课件ppt
抗B
9
⑤ 再用70－75％的酒精擦洗消毒刚用针扎的
献 血 者
• 主侧配血
用患者血清与供
主
者红细胞进行试验
侧
次 • 次测配血
侧
供血者血清与患
者红细胞进行试验
医学课件ppt
12
交叉配血的要求
• 主侧配血要求：
凝
– 绝对不可以有凝集或溶 血现象。
集
• 次测配血要求：
– 供血者血清加受血者红
细胞在允许范围内，可
不
以有凝集现象，但不可 以有溶血。
凝
集
医学课件ppt
进而引起红细胞破裂，产生溶血。
• ABO血型鉴定的原理是利用红细胞凝集试验，将待测血
液分别与已知含A抗体和B抗体的标准血清混合，观察
是否发生凝集现象，判断待测血液红细胞上有何种抗原，
由此确定待测血液的血医型学。课件ppt
2
ABO血型分类
医学课件ppt
3
ABO血型正反定型结果
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4
（一）ABO血型鉴定
实验八 血型鉴定及交叉配血
实验
医学课件ppt
1
（一）ABO血型鉴定
1．实验原理
• 红细胞膜上具有血型糖蛋白，作为抗原，也称为凝集原；
ABO血型就是根据红细胞表面抗原来确定的，根据红细
胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、
AB型及O型四种。
• 血清中含有相应的特异性抗体称为凝集素。
• 凝集原和相应的凝集素特异性结合，使红细胞凝集成团，