微生物标准操作流程纲要.docx
标准微生物操作
标准微生物操作
1、在进行有关培养物及样品实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
2、进行活体处理后，实验人员要洗手；离开实验室前脱手套。
3、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。
不允许在工作区存放食物和日常生活用品。
在实验室中，戴隐型眼镜的人，也需戴口罩或面罩。
食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
4、不能用嘴移液，只能用机械装置移液。
5、制定锐器安全使用规范。
6、所有的操作过程应尽量细心，避免产生溅出和气溶胶。
7、至少一天一次、活体溅出时，都应进行台面消毒。
8、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。
转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室，其包装应符合有关地方、州、联邦法规。
9、当存在传染源时，应在实验室入口处贴生物危险标志，并显示以下信息：实验中的源名称、研究者姓名及电话号码。
10、实施控制昆虫和龋齿动物的程序。
微生物实验室操作规程【SOP】2024
正文内容：1. 培养基和试剂的制备和保存1.1 培养基的制备- 确保实验室用水质量符合要求，执行水质监测。
- 配制培养基时，按照配方的比例准确称量和混合各种成分。
- 制备后的培养基要经过高温高压灭菌处理，并记录相关信息。
1.2 试剂的准备与保存- 确保试剂的纯度和质量。
- 试剂的保存应遵循相应的储存条件，如低温、干燥、避光等。
2. 微生物实验室的清洁和消毒2.1 实验台面和设备的清洁- 实验结束后，及时清洁实验台面和设备，移除残余的微生物和污渍。
- 使用合适的清洁剂和消毒剂，遵循正确的清洁和消毒程序。
2.2 垃圾处理和废弃物管理- 将实验室生活垃圾与实验废弃物分类投放，遵循垃圾分类和废物管理的要求。
- 在实验室内配备明显的废弃物容器，并定期清理和更换。
3. 生物安全操作和防护3.1 实验室内的个人防护- 实验室工作人员应穿戴实验室指定的个人防护装备，包括实验服、手套、口罩等。
- 定期检查和更换个人防护装备，确保其完好无损。
3.2 操作台上的生物安全柜使用- 使用生物安全柜操作时，按照正确的使用方法进行操作。
- 养生物安全柜使用后，要及时清洁和消毒。
4. 微生物实验的准备和操作4.1 实验准备- 在进行微生物实验前，要仔细阅读实验方案和相关文献，了解实验目的和操作步骤。
- 准备所需的培养基、试剂、设备等，并确认其完整性和有效期。
4.2 微生物实验操作- 操作前要洗手并戴好手套，保持操作台面的清洁。
- 严格按照实验方案的指导进行操作，确保实验过程的准确性和可重复性。
- 实验过程中注意观察实验样品的变化，并记录相关数据和观察结果。
5. 实验数据记录和结果分析5.1 数据记录- 在实验过程中，实验人员要及时、准确地记录实验数据和观察结果。
- 记录的数据要清晰可辨，并加以正确的标注和注释，以便后续的数据分析和结果验证。
5.2 结果分析与总结- 在实验完成后，仔细整理和分析实验数据，得出结论并进行结果的可靠性评估。
微生物检验标准操作程序
微生物检验标准操作程序（一）菌落总数标准操作程序1 范围本操作程序规定了食品中菌落总数（aerobic plate count）的测定方法。
本操作程序适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语和定义下列术语和定义适用于本操作程序。
菌落总数aerobic plate count食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4 天平：感量0.1 g。
3.5 均质器。
3.6 振荡器。
3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9 无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
3.11 放大镜或/和菌落计数器或Petrifilm TM自动判读仪。
4 培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2。
4.3 无菌生理盐水：称取8.5 g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
4.4 1 mol/L NaOH：称取40 g氢氧化钠溶于1000 mL蒸馏水中。
4.5 1 mol/L HCl：移取浓盐酸90 mL，用蒸馏水稀释至1000 mL。
2012 年食源性致病菌监测工作手册中国 CDC 营养与食品安全所24.6 Petrifilm TM菌落总数测试片和压板。
第一法平板计数法5 检验程序菌落总数平板计数的检验程序见图1。
36 ℃±1 ℃48 h±2 h检样25 g（mL）样品+225 mL稀释液，均质10倍系列稀释选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1 mL分别加入无菌培养皿内培养计数各平板菌落数计算菌落总数每皿中加入15 mL～20 mL平板计数琼脂培养基，混匀报告图1 菌落总数的检验程序6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。
微生物实验的操作规程
微生物实验的操作规程微生物实验的操作规程：一、实验前准备1. 确定实验目的、方法和所需试剂和设备。
2. 检查试剂和设备的完好性和有效期，确保实验所需的试剂和设备都齐全，并进行必要的消毒。
3. 穿戴实验室规定的实验服装和个人防护用品，如实验手套、护目镜和口罩等。
4. 确保工作台面和实验器具的清洁度，并做好实验台面的消毒。
5. 准备好所需的培养基及其他辅助试剂，并按照实验要求进行必要的消毒和灭菌。
二、实验操作1. 在无菌条件下，将所需试剂和设备放入实验台面上，并进行必要的消毒处理。
2. 操作前需洗手，并在工作台上喷洒70%乙醇或其他消毒剂，然后用纸巾擦拭干净。
3. 遵守无菌操作原则，使用无菌技术进行培养基的制备和菌落的分离。
4. 操作时注意防止细菌的污染，尽量避免开启试管、培养皿等时将手放入危险区域。
5. 操作过程中不得随意触摸自己的面部，以免将细菌带入自己的身体。
6. 注意实验室中的气流，尽量避免在通风不良的地方进行操作。
7. 实验操作结束后，将使用过的器材进行清洗和消毒处理，并保持实验室台面的清洁。
三、实验后处理1. 实验完成后关闭实验台面上的灯和电源，将所有试剂、实验器具和废液放置在指定的位置，并进行必要的消毒处理。
2. 将使用过的培养基和细菌培养物放入指定的消毒容器中，并进行高温高压灭菌处理。
3. 清洁和消毒实验室的工作台面和地面，保持实验室的整洁。
4. 将实验室废液倒掉并进行必要的处理，注意不要将废液倒入下水道或环境中。
5. 清洗和消毒使用过的实验服装和个人防护用品，如实验手套、护目镜和口罩等。
6. 定期对实验室进行全面清洁和消毒，并确保消毒剂的有效时间。
四、安全注意事项1. 不得进行未经指导的实验操作，以免发生意外或造成伤害。
2. 遵守实验室的安全规定，不得从事与自己能力和资质不相符合的实验操作。
3. 严格遵守实验室的消防和紧急救援措施，了解实验过程中的风险并采取相应的措施。
4. 遵守个人防护措施，使用必要的个人防护用品，如实验手套、护目镜和口罩等。
微生物实验室标准操作程序手册
微生物实验室标准操作程序质量手册实验操作者：XXXXXXXX执行日期：X 年X 月X 日启用日期：XX 年X 月X 日标准操作程序文件01 试剂贮存和配制区工作制度02 标本处理区工作制度03 细菌自动分析区工作制度04 试剂贮存和配制区标准操作程序05 标本处理区标准操作程序06 细菌自动分析区标准操作程序07 紫外消毒标准操作程序08 消毒液配制使用标准操作程序09 普通冰箱使用标准操作程序10 超低温冰箱标准操作规程11 洁净工作台使用操作规程12 VITEK32 型自动分析系统标准操作程序13 移液器使用标准操作程序14 高速离心机操作标准操作程序15 冰箱维护和保养标准操作程序16 电热恒温水浴箱操作程序17 洁净工作台维护和保养程序18 可移动紫外消毒车使用操作程序19 加样器校准标准操作程序20 离心机维护保养操作程序21 温度计校准程序22 试剂的质检操作程序23_微生物实验室岗位职责(暂行)24 临床标本的保存程序25 临床检验及收费程序26 微生物检验收收费价格27 普通培养阴性操作程序28 真菌培养阴性操作程序29 苛养菌培养阴性操作程序30 抗酸杆菌培养阴性操作程序31 支原体培养检验操作程序标本处理区工作制度进入本区需穿工作服、工作鞋。
本区只能进行：临床标本的保存，标本接种、培养、及其菌株检验前处理、菌悬液制备、染色标本检查、非上机鉴定与药敏试验操作等危险操作，其它操作不得在此区进行。
在整个本区的实验操作过程中，操作者必须戴手套、口罩和帽子，严格按照操作规程进行。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁或消毒。
非本实验室工作人员未经允许不得进入。
试剂配制和无菌区工作制度进入该区需穿专用工作服和工作鞋。
本区只能进行贮存试剂的制备、试剂的分装和平板的制备。
在整个本区的实验操作过程中，操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程进行。
工作结束后必须立即对工作区进行清洁和消毒。
非本实验室工作人员未经允许不得进入。
1.9微生物控制标准操作程序
6.18.5、如果发现有霉菌生长，并且覆盖住整个薄膜表面，同时又看不到有截然不同
的菌落，则按一个霉菌菌落计数；
6.18.6、如果观察到的微生物生长是来自于外部污染或不令人满意的其它原因，则按“实验室事故”（LA）记录和通报，如果需要用显微镜鉴别再生微生物，则参阅TM701.014再生有机物和沉积物的显微镜载片准备方法；
6.5、如果采用发酵液进行培养，则按无菌方式向培养皿中分液2毫升，均匀地使吸附垫饱合。如果采用琼脂进行培养，则要取得预制的含有相应培养基的培养皿；
6.6、用75%的乙醇（酒精）对不锈钢过滤装置（滤头）进行灭菌；
6.7、将样品倒入滤杯。（相应的样品量请参阅微生物取样计划，如对于完成饮料为100 毫升；对于糖浆20毫升用100ml无菌水混匀；白砂糖10g用100ML无菌水溶解，然后对此溶液过滤；
酵母菌、霉菌和嗜酸细菌
251C (772F)
1203小时
耐防腐剂酵母菌
251C (772F)
1203小时
大肠菌群
351C (952F)
241小时
6
6.16、如果每个滤膜表面上的菌落数少于100个，则清点所有菌落，并按单位体积样品的菌落数记录和通报，如果菌落数超过100但少于300，则将薄膜分成四个区，并清点一个区上的菌落数，将清点数乘以4，并按单位体积样品的菌落数记录和通报，如果总菌落数超过300，则按单位体积样品的TNTC记录和通报。
≤30cfu/100 ml
每班
酵母菌/霉菌
封盖后
≤15cfu/100 ml
微生物检测操作规程
微生物检测操作规程《微生物检测操作规程》一、目的微生物检测操作规程旨在规范微生物检测实验的操作流程，确保检测结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本规程适用于实验室内进行微生物检测实验的操作人员，包括但不限于食品、医药、环境等领域的微生物检测。
三、操作流程1. 实验前准备（1）检查所需物品和设备的完整性和清洁度；（2）准备好所需的培养基、培养皿、移液器等实验用品；（3）佩戴实验服和手套，保持操作环境清洁。
2. 样品处理（1）按照标准操作程序采集样品，并确保准确记录样品信息；（2）样品处理前进行必要的预处理，如稀释、离心等。
3. 培养和检测（1）按照操作规程在培养基上均匀涂布样品；（2）标注培养皿的信息，包括样品编号、培养基种类、培养温度等；（3）放置在适当的培养温度下培养一定时间；（4）观察培养皿的生长情况，记录培养时间和结果。
4. 结果分析（1）根据培养结果进行初步鉴定和计数；（2）必要时进行进一步的分离、鉴定和鉴定。
四、质控要求（1）实验操作人员应具备相应的微生物检测知识和技能，并接受相关的培训；（2）严格遵守操作规程，确保实验操作的准确性和一致性；（3）定期对实验室设备、试剂和培养基等进行检查和质量控制，确保其完好和有效。
五、记录和报告实验过程中产生的数据和结果应当及时记录，并进行审查和验证。
对于检测结果，应当制作详细的技术报告，包括检测方法、样品信息、结果分析和结论等内容。
六、实施本规程由实验室主管负责组织实施，并由实验室操作人员严格遵守。
七、附则本规程自发布之日起施行，如有变动将另行制定修订，并及时通知相关人员。
以上即为《微生物检测操作规程》的内容，希望广大实验室操作人员严格按照规程执行，确保微生物检测工作的准确性和可靠性。
微生物标准操作流程
微生物标准操作流程(总18页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--目录生物安全柜操作规程及维护 (4)实验室高压蒸气灭菌器操作程序 (8)物体表面细菌监测 (10)医护人员手指细菌监测 (11)空气中细菌含量的监测 (12)环境卫生学监测质控标准 (14)使用中消毒剂与无菌物品保存液的质控程序 (15)一次性医疗用品微生物监测 (16)紫外线消毒质量控制程序 (17)污水的细菌监测 (总大肠菌群) (18)正确洗手的手法 (20)生物安全柜操作规程及维护1.目的：为了满足生物安全操作的要求，并且达到在操作时保护操作人员的目的，使细菌操作达到无菌操作的要求，便于操作的标准化。
2.原理：通过使用空气超高过滤器（ULPA）的过滤，使仪器内部的空气洁净度达到100级，使细菌的一般操作限制在一个相对密闭的环境中，不但保护操作人员，还可满足操作的标准化。
3.工作条件：环境温度：18－30℃相对湿度：<80%安装的环境必须达到一定的洁净度；远离人员通道及有潜在干扰气流的位置；柜后及两侧各留30cm的空隙，顶部30-35cm空隙。
环境必须有良好的通风设备。
4、操作步骤：生物安全柜的设置已经设置完全，如果需要重新设置请参看HFsafe生物安全柜使用说明。
具体操作步骤为：4.1将电源插头插入准备好的固定插座，连通电源。
4.2有系统管理员(即本室负责人)开启玻璃门门锁，并将总开关置于开位置“！”，此时系统开始上电。
4.3检查显示及按钮的各项功能，具体见后附注（注意：UV灯的测试除外，开启UV灯时必须将前玻璃门关闭）。
4.4当系统稳定后，对设备进行安全性检查。
（检查项目包括：工作室平均垂直风速；工作室内可操作区域洁净度达到100级；设备的密封有没有被破坏。
所有的安全检查项目中的洁净度建议由当地卫生防疫部门来进行尘埃粒子数、沉降菌和菌落数的检测，看是否符合其工作室的洁净度要求）。
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目录生物安全柜操作规程及维护............................................................................错误 ! 未定义书签。
实验室高压蒸气灭菌器操作程序....................................................................错误 ! 未定义书签。
物体表面细菌监测. .............................................错误 ! 未定义书签。
医护人员手指细菌监测. .........................................错误 ! 未定义书签。
空气中细菌含量的监测. .........................................错误 ! 未定义书签。
环境卫生学监测质控标准. .......................................错误 ! 未定义书签。
使用中消毒剂与无菌物品保存液的质控程序. .......................错误 ! 未定义书签。
一次性医疗用品微生物监测. .....................................错误 ! 未定义书签。
紫外线消毒质量控制程序. .......................................错误 ! 未定义书签。
污水的细菌监测(总大肠菌群) . ..................................错误 ! 未定义书签。
正确洗手的手法................................................错误 ! 未定义书签。
生物安全柜操作规程及维护1.目的：为了满足生物安全操作的要求，并且达到在操作时保护操作人员的目的，使细菌操作达到无菌操作的要求，便于操作的标准化。
2.原理：通过使用空气超高过滤器（ ULPA）的过滤，使仪器内部的空气洁净度达到100 级，使细菌的一般操作限制在一个相对密闭的环境中，不但保护操作人员，还可满足操作的标准化。
3. 工作条件：环境温度： 18－ 30℃相对湿度：<80%安装的环境必须达到一定的洁净度；远离人员通道及有潜在干扰气流的位置；柜后及两侧各留30cm 的空隙，顶部30-35cm 空隙。
环境必须有良好的通风设备。
4、操作步骤：生物安全柜的设置已经设置完全，如果需要重新设置请参看HFsafe 生物安全柜使用说明。
具体操作步骤为：将电源插头插入准备好的固定插座，连通电源。
有系统管理员( 即本室负责人) 开启玻璃门门锁，并将总开关置于开位置“！”，此时系统开始上电。
检查显示及按钮的各项功能，具体见后附注（注意：UV 灯的测试除外，开启UV灯时必须将前玻璃门关闭）。
当系统稳定后，对设备进行安全性检查。
（检查项目包括：工作室平均垂直风速；工作室内可操作区域洁净度达到100 级；设备的密封有没有被破坏。
所有的安全检查项目中的洁净度建议由当地卫生防疫部门来进行尘埃粒子数、沉降菌和菌落数的检测，看是否符合其工作室的洁净度要求）。
如果安全性测试通过，系统已经可以使用，请在《使用记录》上写下相应的信息。
在使用时需要注意的是，操作必须在工作台板无孔区域进行，物品也必须放置于无孔区域。
操作者应先把手臂放进安全柜内大约 1 分钟，以使柜子适应并且让气流扫过手臂手臂移入移出柜内应保持前门气流的连续性，应缓缓移入移出，并且方向和前门垂直；为使跨越前门的动作量降低，在实验开始前应把所需的物品放入柜子；柜子在开始工作前以及完成后至少要运行 5 分钟是，使柜子净化，以便于污染空气从柜内排出。
实验操作方向应从清洁区到污染区，一般要求为左→右。
当工作完成后需要关机前，将试验使用的所有材料和其他物品从设备中取出。
关闭前玻璃门前，需要维持气流循环一段时间（时间长短视所操作材料的危险性而定）。
关闭风机，停止气流循环。
每日使用后维护( 见后面维护中的第一二步) 。
维护完成后，关闭电源开关。
锁住前玻璃门，并如实填写《使用记录》。
5、仪器的维护：基本保养：清洁：在通常的情况下，清洁只需要用少量家用或商用的碗碟清洗剂，将它溶于水后直接擦洗，就可将设备表面的污染擦掉。
请不要擦拭任何玻璃，以免产生摩擦。
在使用过程中每日或每周的清洁:清洁工作室消毒（一般使用1000mg/L 的次氯酸钠溶液）和对操作面板进行消毒和清洗。
用柔性的清洁剂或玻璃专用清洁剂清洗箱体外表面和玻璃。
对照说明书对设备的各种功能进行检查。
将本次工作记录下来。
月清洗：用清洁剂将所有外表面的尘埃清除。
对设备内部进行消毒处理。
对设备进行功能检验，并在通常使用时检查设备的安全。
将本次清洗记录下来。
每月必须对紫外灯进行照射强度检测。
每年维护：对设备进行安全性全面的检查，对设备进行维护。
包括柜体防泄露、高效过滤器的完整性、人员保护能力、产品保护能力、下降气流流速、流入气流流速、负压、气流模式、警报和联锁等的检测。
一般安全检测由仪器公司进行。
检查前玻璃门驱动装置的松劲程度。
检查紫外灯管。
将本次维护记录下来。
每两年更换日光灯管。
故障的维护处理：当故障发生时必须停止一切操作，尽量维持设备内部空气的循环过滤，将正在进行的试验材料和工具全部取出并妥善管理，然后通知有关部门前来维修。
每次仪器出现故障时必须填写故障登记表，注明故障情况及处理情况。
常见的故障，原因及其处理方法见下表：现象原因处理方法备注照明光源或紫外灯无线路故障检查线路法点亮灯管坏更换灯管镇流器失效更换镇流器蜂鸣器间断报警过滤器失效更换过滤器安全检查蜂鸣器连续报警可能玻璃门过高向下调整玻璃门6、注意事项：只有负责管理本设备的人员才有权关闭风机。
只有经过培训和指导的人员才能操作本设备。
顶部通风口不能被任何东西覆盖以保证排气通畅。
当系统失效时会发出声讯号，此时不能继续操作，否则会导致材料的损失，污染和人身安全方面的危险。
如果发现过滤器失效，要更换过滤器时，必须由专业人员进行更换。
柜内溅出物的处理：在柜内如果出现危险生物材料溅出，应该不能关闭风机继续运行，覆盖滤纸或吸水纸于溅出物表面，然后向滤纸上滴加消毒液（1000mg/L 的次氯酸钠溶液）浸泡 5 分钟，用钳子钳取滤纸丢入感染性废物收集袋中，然后用浸泡了消毒液的干净抹布擦拭柜内表面。
生物安全柜内避免使用明火，因为使用明火会破坏柜内的气流方向。
也禁止使用易挥发易燃易爆物品，以免造成危险。
接种环可以使用微波炉或“电炉”，最好使用一次性接种环。
实验室高压蒸气灭菌器操作程序1．目的：培养基等的液体灭菌，溶解。
器具等的灭菌。
1.3废弃物的处理灭菌。
2．原理：高压蒸气灭菌。
灭菌温度105℃-135 ℃，溶解温度60℃ -100 ℃，保温温度45℃ -60 ℃；压力兆帕3．工作条件 :环境温度 :5 ℃ -35 ℃背面距离墙10 厘米以上 , 右侧距离墙 5 厘米以上。
需放置在无阳光直接照射及湿度不高, 灰尘少的地方。
4.操作步骤：放置排气储存桶注意 : 不得在灭菌器附近放置或放入可燃性物质 , 爆炸性物质 , 氧化性物质 ,易燃性物质 , 可燃性气体。
在排气容器孔中务必插入排气软管添密件, 关紧盖罩 ,接通电源开关注意 : 安装专用电源连接插口, 安装地线 , 可靠接地。
发生异常情况时立即停止运转, 切断电源。
检修时要切断电源。
打开盖子注入加热用水注意 :需采用蒸馏水或自来水。
放入灭菌物品;注意 :不得将灭菌物品装入蒸气不能进入的容器和袋子, 否则无法灭菌装盛灭菌物品的容器不得密封。
不要让灭菌物品堵塞和挤压灭菌器内的孔和温度传感器。
仅对试管 , 烧瓶等容器本身灭菌时, 开口要向下或横放。
物品灭菌时，应同时放入监控指标。
用对热敏感的染料标记的变色带子。
灭菌时，将变色带夹放在试验包裹中,以监视灭菌效果，关闭盖子选择过程 ( 变更设定内容 )( 设定预定运行作业)注意 :运行中要开启排水阀。
按下操作按钮R1 或 b1C1D1灭菌.保温灭菌.溶解器具灭菌运行注意 : 运行中如有蒸气泄漏时，不要靠近安全阀排气口。
运行完毕 ,打开盖子,取出灭菌物品注意 : 不要被烫伤 , 脸不要靠近灭菌器。
切断电源开关排放加热用水物体表面细菌监测1.目的规范物体表面采样及监测标准操作规程。
2.适用范围医院感染监控重点科室，每月常规监测。
发生医院感染暴发流行。
3、职责医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。
4.程序方法监测对象：选择有代表性的可能污染表面采样时间：选择消毒处理后， 4 小时内进行采样面积： 100cm225cm 2细菌定量采样皿培养法：①使用时将采样器去盖，在待测物品上直接接触10 秒钟后加盖（采样皿为一样本面积不得少于 10cm2）。
②将采样皿置35～ 37℃温箱培育18－ 24 小时，直接细菌计数（细菌个数／cm2）和分离鉴定细菌。
棉拭子涂擦法：对物体表面采样时，将内径为5× 5 cm2的灭菌规格板放在被检物表面，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板空心处涂抹 5 次（往返为一次）；移动规格板，按同样方法涂抹采样，连续采样 4 次（采样 4 次为一样本）剪掉或烧去手接触部分。
将棉拭子放入装有10 亳升的灭菌生理盐水的采样管中，送实验室进行培养鉴定细菌和细菌计数。
门把手等小型物体则用棉拭2子直接涂擦物体表面，以每件为单位计算，较大门把手等则按面积（cm）计算。
一、二类区域细菌总数≤ 5 CFU/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
三类区域细菌总数≤ 10 CFU/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
四类区域细菌总数≤ 15 CFU/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
母婴同室、婴儿室、新生儿室及科病房的物体表面不得检出沙门菌为合格。
医护人员手指细菌监测1.目的规范医务人员手采样标准操作程序。
2.适用范围手卫生监测。
3.职责医院院感管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。
4.程序采样时间：在接触病人，人事医疗活动前进行采样面积及方法：被检人五指并拢，将带有无菌生理盐水的棉拭子放在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各 2 次（往返算一次）并随之转动采样拭子剪去手接触部分，将棉拭子放入10ml30 cm2）采样液试管内送检（每只手面积均为结果计算：手污染细菌菌落数（Cfu/cm2）＝平器上菌落数×稀释倍数305 结果判断一、二类区域工作人员细菌总数≤ 5 CFU/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及铜绿假单胞菌为消毒合格。
三类区域工作人员细菌总数≤ 10 CFU/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及铜绿假单胞菌为消毒合格。
四类区域工作人员细菌总数≤ 15 CFU/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及铜绿假单胞菌为消毒合格。