广东省柑橘炭疽病病原菌的形态与分子鉴定

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柑橘炭疽病高效杀菌剂的筛选及抗药性菌株的发现-华南农业大学学报

柑橘外，还可为害香蕉、苹果、梨、柿、杏、桃、番茄、草
㊀收稿日期：２０１２０６１２㊀㊀网络出版时间：２０１３０１１１㊀网络出版地址：ｈｔｔｐ：ｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／４４．１１１０．Ｓ．２０１３０１１１．０９２６．００９．ｈｔｍｌ ∥ｗ㊀作者简介：杨㊀媚（１９６５ —），女，实验师；冯淑杰（１９７８ —），女，副教授，博士；对本文贡献相同；通信作者：周而勋（１９６３ —），男，教授，博士，Ｅｍａｉｌ：ｅｘｚｈｏｕ＠ｓｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
－１／（ｇ ·ｍＬ） ρ μ １００．００２００．００３００．００４００．００５００．００
７］毒力测定采用生长速率法［．具体方法如下：在４９ｍＬ灭菌ＰＤＡ培养基中加入１ｍＬ５０倍于使用浓度的杀菌剂母液，充分摇匀，均匀倒入３个直径为９ｃｍ的培养皿中，冷却凝固，制备成含药ＰＤＡ平板；ＤＡ平板上培养了７ｄ的柑橘炭疽病菌菌丝块将在Ｐ（直径为５ｍｍ）放置于含药ＰＤＡ平板中央（以不含ＤＡ平板为对照），每皿１块，重复３次，于药的Ｐ２８ħ培养箱内培养，７ｄ后采用十字交叉法度量菌１㊀材料与方法计算公式如下：落直径，计算抑制率．１．１㊀供试菌株抑制率＝［（对照菌落直径－处理菌落直径）／对从广东省柑橘各主产区采集具有典型症状的柑照菌落直径］ˑ １００％．橘炭疽病样本（枝条或叶片）进行病原菌分离，得到以杀菌剂有效成分质量浓度对数值为自变量的菌株经过纯化后，再进行单孢分离，选取其中１０ｘ），相对抑制率的几率值为因变量（ｙ），计算出毒力（个具代表性的单孢菌株作为本研究的供试菌株．这回归方程式和相关系数．由毒力回归方程计算ＥＣ．５０些供试菌株的详细情况如下：ＣＣＤＱ０１３菌株，分离自［８］广东肇庆的贡柑Ｃｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓｃｖ．Ｇｏｎｇｇａｎ；ＣＣＦＳ０１４参考杨叶等所使用的芒果炭疽病菌对多菌灵的抗ＥＣ大于１００μ ｇ／ｍＬ的为高抗；ＥＣ为５０５０菌株，分离自广东佛山的年橘Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ；ＣＣＺＪ００３药性分级标准：００μ ｇ／ｍＬ的为抗性；ＥＣ小于１μ ｇ／ｍＬ的为敏５０菌株，分离自广东湛江的红江橙Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓｃｖ．１１以此为标准对柑橘炭疽病菌的抗药性进行分级．Ｈｏｎｇｊｉａｎｇｃｈｅｎｇ；ＣＣＺＪ０３４菌株，分离自广东湛江的红感．．ｅｒｙｔｈｒｅｓａ；ＣＣＭＺ０３５菌株，分离自广东梅州的四２橘Ｃ㊀结果与分析季柚Ｃ．ｇｒａｎｄｉｓｃｖ．Ｓｉｊｉｙｏｕ；ＣＣＭＺ００４菌株，分离自．１㊀多菌灵对柑橘炭疽病菌不同菌株的毒力及抗．ｇｒａｎｄｉｓｃｖ．Ｓｈａｔｉａｎｙｏｕ；２广东梅州的沙田柚Ｃ药性分析ＣＣＨＺ００１菌株，分离自广东惠州的春甜橘Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａ１０个菌株对多菌灵的敏感性（抗ｔａｃｖ．Ｃｈｕｎｔｉａｎｊｕ；ＣＣＨＺ０２０菌株，分离自广东惠州的㊀㊀从表２可看出，其中菌株ＣＣＤＱ０１３、ＣＣＦＳ０１４、存在明显差异．天草Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａｃｖ．Ｔｉａｎｃａｏ；ＣＣＳＴ００３菌株，分离自药性）ＣＺＪ００３、ＣＣＺＪ０３４、ＣＣＨＺ００１和ＣＣＨＺ０２０的ＥＣ分５０广东汕头的蕉柑Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａｖａｒ．ｔａｎｋａｎ；ＣＣＳＴ０２６Ｃ１２５０、００５１０、００３２４、００４８６、００６１５和菌株，分离自广东汕头的脐橙Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ．根据其形别为００１２２２ｇ／ｍＬ，均小于１ｇ／ｍＬ，说明这些菌株仍保 μ μ ＴＳ序列，上述１０个供试菌株被鉴定为态学特征和Ｉ［１］ＣＭＺ０３５、而菌株Ｃ盘长孢状刺盘孢（胶孢炭疽菌），保存于华南农业持了对多菌灵的高度敏感性；ＣＣＳＴ０２６、ＣＣＭＺ００４和ＣＣＳＴ００３的ＥＣ则分别达到大学资源环境学院热带亚热带真菌研究室．５０了９６３７７２０、８３２６６５３、６１２３１４２和２００５３９５１．２㊀供试药剂ｇ／ｍＬ，ＥＣ均大于１００μ ｇ／ｍＬ，表现出了对多菌灵５０％多菌灵可湿性粉剂（ＷＰ，江苏苏化集团新 μ ５０

柑橘、柚子炭疽病

汇报人：日期:contents •柑橘、柚子炭疽病概述•柑橘、柚子炭疽病的症状识别与诊断•柑橘、柚子炭疽病的防治方法•柑橘、柚子炭疽病的预防措施•柑橘、柚子炭疽病的研究进展•柑橘、柚子炭疽病的防治案例分析•参考文献目录柑橘、柚子炭疽病概述01定义与症状定义柑橘、柚子炭疽病是一种由真菌引起的常见病害，主要危害柑橘和柚子等果树的叶片、枝条和果实。

症状炭疽病在叶片上通常表现为圆形或不规则形的病斑，边缘褐色，中央灰白色，后期病斑上会产生黑色小点。

枝条受害后，会出现溃疡或腐烂，严重时导致枯死。

果实受害后，会出现圆形或不规则形的褐色病斑，病斑凹陷，中央灰白色，有轮纹状排列的小黑点。

炭疽病可通过风雨、昆虫等媒介传播，从伤口或自然孔口侵入植株体内。

炭疽病会对柑橘和柚子的生长和发育产生严重影响，导致树势减弱，果实品质下降，甚至造成整株死亡，给果农带来严重的经济损失。

传播途径与危害危害传播途径防治意义与现状防治意义有效防治柑橘、柚子炭疽病可以保障果树的正常生长和发育，提高果实品质和产量，增加果农的经济收益。

防治现状目前，对于柑橘、柚子炭疽病的防治主要采用化学防治方法，通过喷洒杀菌剂来抑制病原菌的生长和传播。

然而，长期使用化学药剂会导致病原菌产生抗药性，降低防治效果。

因此，需要探索新的防治方法，如生物防治、农业防治等，以实现绿色防控。

柑橘、柚子炭疽病的症状识别与诊断02枝条症状病斑多发生在枝条分叉处，症状与叶片相似，但通常更严重，病斑可蔓延至整个枝条并引起枯萎。

叶片症状初始症状为暗绿色、水渍状小斑点，随后逐渐扩大为圆形或不规则形病斑，病斑边缘褐色，中间灰白色，并产生小黑点（分生孢子盘）。

果实症状病斑同样为暗绿色、水渍状，随后扩大并凹陷，中间产生小黑点，病果最终会脱落。

症状识别根据上述症状特点，可以初步判断为柑橘、柚子炭疽病。

观察症状观察病组织切片或培养物中的分生孢子盘和分生孢子，进一步确认诊断。

显微镜检查诊断方法疮痂病主要发生在果实上，病斑呈疮痂状，不会出现小黑点。

柑桔炭疽病

柑桔炭疽病【病害名称】柑桔炭疽病【病原】学名Colletotrichum gloeosporioides Penz. 属半知菌【为害症状】可为害叶片、枝梢、花和果实。

叶片感病：①病斑多从叶尖开始，初呈水渍状暗绿色，后变为淡黄色或黄褐色，以后小斑迅速扩展为不规则形大斑，边缘不明显，似云纹状，其上产生大量朱红色带粘性的小液点，病叶易脱落；②叶尖或叶缘出现半圆或近圆形黄褐色病斑，以后扩大成不规则形，病健组织分界明显。

天气潮湿时，病部出现朱红色带粘性小液点，天气干旱时，干枯病部呈灰白色，表面密布同心轮纹排列的小黑点。

病叶脱落较慢。

枝梢感病：①病梢由上而下枯死，多发生在寒害后的枝梢上，初期病部为褐色，后呈灰白色，其上散生许多小黑点，病健组织分界明显。

②多从叶柄基部腑芽处或从受伤皮层开始发病。

病斑初为淡褐色，椭圆形，后变长梭形，当病斑环绕枝梢时，病梢由上而下枯死。

花开后，病菌侵染雌蕊柱头，呈褐色腐烂，引起落花。

幼果受害，初呈暗绿色油渍状不规则形病斑，后扩展至全果。

天气潮湿时，病果上长出白色霉状物及淡红色小液点，以后病果腐烂干缩成僵果，不脱落。

长大后的果实受害，其症状表现有干疤、泪痕和腐烂3种类型，果梗受害，造成“枯蒂”，果实随之脱落。

苗木多在离地6～10cm处或嫁接口处开始发病。

病斑深褐色，形状不规则，严重时可引起上部枝梢死亡。

【防治方法】农业措施：①加强栽培管理，柑桔园要深翻改土，增施有机肥和磷钾肥，避免偏施氮肥，及时排灌、防旱保湿及防虫；②及时修剪衰弱枝，改善通风透光条件，增强抗病能力；③剪除病梢、病叶、病果梗，清除落叶、落果，清园后喷1次波美1～2度的石硫合剂或40%灭病威500倍液；④采后处理，防止贮藏期发病，用特克多浸果。

化学防治：在落花后及落花后一个半月内进行喷药，每隔10d左右喷1次，连续喷2～3次，在7、8月间再喷1次，以防落果。

药剂可用40%灭病威500倍液，65%代森锌可湿性粉剂500倍液，70%甲基托布津可湿性粉剂800～1000倍液，50%多菌灵800倍液。

广东特色柑橘品种贡柑的研究进展

广东特色柑橘品种贡柑的研究进展郭雁君;吉前华;蒋惠;郭丽英;周希琴;胡亚平【摘要】“贡柑”是我国特定历史文化条件下产生的我国特有的一个柑橘地方农家优良品种,并在近年来成功产业化发展的一个宽皮柑橘的新产品.综述了我国贡柑有关遗传和资源、栽培和病虫害、采后生理和商品化处理等方面的研究进展.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)016【总页数】4页(P4993-4995,5049)【关键词】广东;贡柑;地方品种;研究进展【作者】郭雁君;吉前华;蒋惠;郭丽英;周希琴;胡亚平【作者单位】肇庆学院生命科学学院/肇庆学院果树研究所,广东肇庆526061;肇庆学院生命科学学院/肇庆学院果树研究所,广东肇庆526061;肇庆学院生命科学学院/肇庆学院果树研究所,广东肇庆526061;肇庆学院生命科学学院/肇庆学院果树研究所,广东肇庆526061;肇庆学院生命科学学院/肇庆学院果树研究所,广东肇庆526061;肇庆学院生命科学学院/肇庆学院果树研究所,广东肇庆526061【正文语种】中文【中图分类】S666.1贡柑是我国特定历史文化条件下产生的我国特有的一个柑橘地方农家优良品种。

在历史上，因为其品质特别优良，被封建王朝列为贡品，并在民间发展成为著名土特产。

近年来，广东省利用贡柑地方品种进行产业化开发，取得巨大的商业性成功。

广东省肇庆市德庆县贡柑被誉为“中华柑王”称号，德庆县也获得“中国贡柑之乡”称号，并获得国家的“原产地域产品认证”，广东省肇庆市四会贡柑也获批“原产地注册证明商标”。

贡柑的科学和技术研究也逐渐丰富，取得了很好的进展。

贡柑果形靓丽，果色金黄，皮薄核少，肉脆化渣，高糖低酸，集橙类外形美和橘肉质细嫩、易剥皮的双重优点。

据清光绪《四会县志》记载贡柑原产四会，乃橙和橘的自然杂交种，但其亲本已无从考究。

贡柑作为一个地方农家品种，没有经过现代育种上严格的选育种程序，经历长久的栽培历史，贡柑在不同的栽培群体之间发生遗传的分化，表现较大的遗传多样性。

水果采后炭疽病病原鉴定

水果采后炭疽病病原鉴定杨友联;刘永翔;刘作易【摘要】为弄清导致柑橘、西柚、葡萄、枇杷、芒果、香蕉和杨桃等常见水果采收后腐烂的炭疽病病原,采用单胞分离法,从具有病斑或腐烂的果实上分离得到21株炭疽菌属真菌,通过显微形态特征和多基因分子系统学对其进行鉴定.结果表明:引起柑橘和西柚采后炭疽病的病原为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides),引起葡萄、枇杷、芒果、香蕉和杨桃采后炭疽病的病原分别为葡萄炭疽菌(C.viniferum)、荷花炭疽菌(C.nymphaeae)、亚洲炭疽菌(num)、香蕉炭疽菌(C.musae)和暹罗炭疽菌(C.siamense).【期刊名称】《西南农业学报》【年(卷),期】2014(027)003【总页数】10页(P1114-1123)【关键词】炭疽病;炭疽菌属;多基因分子系统学【作者】杨友联;刘永翔;刘作易【作者单位】六盘水师范学院生命科学系,贵州水城553004;贵州省农业科学院农业生物技术重点实验室,贵州贵阳550006;贵州省农业科学院农业生物技术重点实验室,贵州贵阳550006【正文语种】中文【中图分类】S436.8炭疽菌属真菌是一类全球性广泛分布的植物病原菌，常引起农作物、果树等植物炭疽病，在热带及亚热带地区尤为严重，导致巨大的经济损失，如2008年我国安徽砀山县砀山梨在采收前爆发炭疽病，导致高达7亿元的严重经济损失［1］。

炭疽菌属真菌对水果的危害既可发生在采收前，也可发生在采收后储存及货架期间［2～3］。

目前对水果炭疽病的研究主要是针对引起水果采收前腐烂的病原菌方面［4～9］，而对采收后引起腐烂的病原菌报道较少，仅少数研究者对采收后水果进行了研究［2～3］。

为此，笔者对引起柑橘、西柚、葡萄、枇杷、芒果、香蕉和杨桃7种水果采后腐烂的炭疽菌属真菌进行了分离和鉴定，旨在对水果采后仓贮期间果实腐烂的防治奠定病原学基础。

1 材料与方法1.1 标本采集与分离采用单胞分离法［10］，从采集自云南、贵州、广西3省6个地区有病斑或已经开始腐烂的柑橘、西柚、芒果、香蕉、葡萄、枇杷和杨桃7种水果中共分离到炭疽菌属真菌21株(表1)，菌株斜面4℃保存。

柑桔炭疽病的识别与防治

柑桔炭疽病会导致果实表面出现圆形或椭圆形的病斑，颜色呈淡褐色或
灰白色，病斑上会有轮纹或小黑点。随着病情加重，病斑会逐渐扩大，
导致果实软化、腐烂。
柑桔炭疽病的病原识别
病原菌
柑桔炭疽病的病原菌是Colletotrichum gloeosporioides，属于半知菌亚门、腔孢纲、黑盘孢目、炭疽菌科。该病原菌在自然界中广泛存在，是柑桔生长过程中常见的真菌病害之一。
柑桔炭疽病的识别与防治
汇报人：日期:
• 柑桔炭疽病简介 • 柑桔炭疽病的识别 • 柑桔炭疽病的防治方法 • 柑桔炭疽病的防治实践 • 柑桔炭疽病的防治案例分析
01
柑桔炭疽病简介
柑桔炭疽病的症状和危害
症状
柑桔炭疽病会导致叶片、枝条、果实等部位出现圆形或近圆形的病斑，叶片上的病斑常有同心轮纹，中心灰白色，边缘褐色；枝条上的病斑呈长条形，褐色；果实上的病斑常呈凹陷状，有裂口，易腐烂。
柑桔炭疽病的发生规律和影响因素
发生规律
柑桔炭疽病的发生与环境条件密切相关。高温、高湿、多雨、寡日照的天气条件有利于病原菌的繁殖和传播。
影响因素
土壤贫瘠、排水不良、树势衰弱等因素也会影响柑桔炭疽病的发生和流行。此外，品种差异也会影响柑桔对炭疽病的抗性。
02
柑桔炭疽病的识别
柑桔炭疽病的症状识别
病菌滋生。
清除病源
及时摘除病叶、病果和枯枝，并集中销毁，减少病菌来源。在采收后，及时修剪果树，并做好清
园工作。
化学防治
预防为主
在果树生长期间，定期喷洒保护性杀菌剂，如波尔多液、代森锰锌等，以预防病害的发生。
治疗为辅
在发现病害后，及时喷洒治疗性杀菌剂，如苯醚甲环唑、咪鲜胺等，以控制病害的蔓延。但是需要注意，在使用化学药剂时需要严格按照说明书上的使用方法和浓度进行配制，避免产生药害和污染环境。

柑橘炭疽病菌的分离、鉴定及在果实上的潜伏侵染特性

柑橘炭疽病菌的分离、鉴定及在果实上的潜伏侵染特性李菲菲;龙超安【期刊名称】《果树学报》【年(卷),期】2015(0)1【摘要】【目的】明确柑橘炭疽病原菌的种类及其潜伏侵染特性,为柑橘病害防控提供理论依据。

【方法】对采自湖北省3个地区的炭疽病样品进行病原菌的分离、形态学特征观察和致病性测定并采用r DNA-ITS序列分析法对代表菌株T4进行分子鉴定。

此外,通过组织分离法,研究炭疽病菌在柑橘花器和发育期果实上的潜伏情况。

【结果】获得的19株致病菌均为胶孢炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides),但菌株间的致病力存在明显差异;T4菌株的测序结果与NCBI已登录的胶孢炭疽菌序列(FJ459917.1,FJ459916.1)比对发现,一致性达100%。

柑橘炭疽病菌在花器和果实上的潜伏侵染呈一定的规律性:花器官中,花瓣的带菌率最高;果实上,果蒂和脐部带菌率最高,其次为果柄部位。

【结论】研究区域的柑橘花和果实均携带胶孢炭疽病菌,该病菌具有潜伏侵染的特性。

生产上要重视花期的病害防控,果实采后贮藏时需重视对果蒂部、脐部及果柄部位的消毒处理。

【总页数】8页(P108-114)【关键词】柑橘;炭疽病菌;致病性;r;DNA-ITS;潜伏侵染【作者】李菲菲;龙超安【作者单位】湖南省农业科学院园艺研究所;华中农业大学园艺林学学院.园艺植物生物学教育部重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S436.66【相关文献】1.红富士苹果果实中炭疽病病菌的分离与鉴定 [J], 陈汝;翟浩;聂佩显;薛晓敏;王贵平;王金政2.红富士苹果果实炭疽病病菌的分离与鉴定 [J], 陈汝;王金政;薛晓敏;王贵平3.不同地区潜伏侵染香蕉果实的炭疽菌生物学特性研究 [J], 刘秀娟;黄圣明4.蓝莓果实潜伏侵染病原真菌的分离与鉴定 [J], 秦士维;夏秀英;安利佳5.香蕉采后果实炭疽病菌的鉴定及其生物学特性 [J], 张德涛;高艳丽;黄永辉;杨媚;周而勋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

柑橘病虫害

●柑橘花蕾蛆
1.形态识别
成虫形似蚊子。雌虫体长约1.9～2.2mm，黄褐色。体、翅被黑色细毛。前翅膜质透明，有紫色金属闪光，腹末有一剌状产卵器。雄虫体长约1.2～ l.5mm，灰黄色，腹部末端椭圆形，具l对向上弯曲的抱握器。成熟幼虫体长约3 mm，长纺锤形，橙红色，前胸腹面有一褐色“Y”状剑骨片。
柑橘溃疡病
柑橘溃疡菌Xanthomonas campestris PV.citri(Hasse)Dye，属细菌薄壁菌门、黄单胞菌属。
2.病原
3.发病特点
病菌在病组织内越冬。次年春季溢出菌脓，借风、雨、昆虫和枝叶接触而传播。病菌由气孔、水孔、皮孔和伤口侵入。细菌侵入后经4～6d的潜育期，出现新病斑。雨后溢出菌脓，又可进行多次再侵染。并随苗木、接穗、果实的调运作远距离传播。高温、多湿有利于此病的发生。柑橘类果树的属或种之间的抗病性有差异。柑橘属与枳壳属易感病，而金柑属抗病力很强。
3.防治要点
柑橘黑刺粉虱Aleurocanthus spiniferus Quaintance属同翅目，粉虱科。分布于西南、华南、华东、华中等地。除危害柑橘、金橘、柚、橙等果树外，还危害月季、蔷薇、白兰、玫瑰、米兰、山茶等花卉植物。以成虫和若虫群集于植物叶背吸食汁液，并排出蜜露，诱发煤污病，使叶变黄脱落。严重时导致枯枝甚至全株枯死。
●柑橘溃疡病
柑橘溃疡病是柑橘重要病害之一。我国广东、广西、福建、浙江、湖南、江西、四川、贵州等地都有分布。是国内检疫对象。
1.症状识别
危害橘、橙、柚、柠檬等植物的叶片、嫩梢、果实。叶片受害，最初在正面生针头大的黄色小点，背面出现黄色或暗绿色油渍状斑点。逐渐扩大为近圆形的木栓化灰褐色病斑，正反两面突起，中央凹陷破裂如火山口状，并有细轮纹，周围有黄绿色晕圈。有时几个病斑愈合成不规则形的大病斑。果实、枝梢发病，病斑与叶上相似，但木栓化程度更高，裂口大且深，无晕圈。枝梢发病，多发生于夏梢上，常多个病斑环绕枝梢而枯死。

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M ycosystema菌物学报15 July 2010, 29(4): 488-493jwxt@ISSN1672-6472 CN11-5180Q©2010 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.广东省柑橘炭疽病病原菌的形态与分子鉴定王震杨媚杨迎青彭正凯周而勋*华南农业大学资源环境学院热带亚热带真菌研究室广州 510642摘要：炭疽病是柑橘的主要真菌性病害之一。

2007年春，广东省德庆县名优柑橘品种贡柑炭疽病暴发流行。

为了明确该县及广东省其他地区柑橘炭疽病菌的种类，为防治提供依据，对采集自广东省6个地区柑橘属10个栽培品种上的炭疽病样本进行病原菌分离，共获得柑橘炭疽病菌单孢菌株75株，对其中10株代表性的菌株进行了种类鉴定。

通过培养性状和形态学特征观测、核糖体DNA（rDNA）内转录间区（ITS）序列分析、ITS区特异性引物PCR检测和系统发育关系比较等方面的研究，结果表明：10个柑橘炭疽病菌菌株均为盘长孢状刺盘孢Colletotrichum gloeosporioides，未发现国际上其他国家报道的严重危害柑橘花器和幼果部位的柑橘花后落果病病原菌——尖刺盘孢C. acutatum。

关键词：盘长孢状刺盘孢，形态学特征，核糖体DNA内转录间区序列分析Morphological and molecular identification of citrus anthracnose pathogen from Guangdong ProvinceWANG Zhen YANG Mei YANG Ying-Qing PENG Zheng-Kai ZHOU Er-Xun*Laboratory of Tropical & Subtropical Fungi, College of Natural Resources and Environment, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, ChinaAbstract: Anthracnose is one of the major fungal diseases of citrus. A large-scale outbreak of anthracnose in Citrus sinensis cv. gonggan, the high-yield and high-quality cultivar of citrus, occurred in Deqing county, Guangdong Province in the spring of 2007. For identifying the pathogen so as to control this disease effectively, samples of citrus anthracnose were collected from ten cultivars of the genus Citrus in six areas of Guangdong Province, and a total of 75 single-conidial isolates were obtained, among them 10 representative single-conidial isolates were identified at the species level. Based on cultural and morphological characteristics, ribosomal DNA (rDNA) internal transcribed spacer (ITS) sequence analysis, ITS-specific primers PCR detection and phylogenetic relationships with other species of Colletotrichum, the 10 isolates were identified as Colletotrichum gloeosporioides, whereas C. acutatum, the causal agent of postbloom fruit drop of citrus seriously occurring in some countries in the world, was not yet found in this research.Key words: morphological characteristics, Colletotrichum gloeosporioides, rDNA ITS sequence analysis*Corresponding author. Tel: +86-20-38297832, E-mail: exzhou@收稿日期: 2010-01-11, 接受日期: 2010-03-15Vol.29 No.4 489菌物学报柑橘是世界第一大果树品种，在世界百果中，其种植面积和产量均居首位。

我国是柑橘的原产国之一。

2007年，我国柑橘种植面积194.14万hm 2，产量2,058.72万t ，分别占世界柑橘种植面积和产量的23.3%和17.75%（沈兆敏 2009）。

广东是我国柑橘的主产区之一。

上世纪90年代初期是广东柑橘种植面积最高峰时期，之后由于种植品种、病虫害等原因，柑橘种植面积和产量逐年萎缩。

从2000年开始，广东柑橘产业步入恢复发展时期，至2006年，全省柑橘种植面积恢复至高峰时期的20万hm 2，总产量达180万t （广东省统计局 2007）。

在柑橘病害中，不同国家和地区的病害种类和危害程度不同。

在中国，柑橘黄龙病是柑橘上的重要病害（Chen et al . 2009），但在北美洲的美国和南美洲的巴西等美洲湿润地区，柑橘花后落果病（postbloom fruit drop of citrus ，简称PFD ，由Colletotrichum acutatum 引起）则对该地区的柑橘生产造成了非常严重的危害（Timmer et al. 1994；Brown et al.1996；Theodoro et al. 2004；Peres et al. 2008），我国目前尚无PFD 病害的报道。

而柑橘炭疽病（病原菌Colletotrichum gloeosporioides ）是世界性的、潜伏性侵染柑橘的常发性病害，该病可危害叶、梢、花、果等部位，潜伏的病原菌在果实贮运期可继续危害（Timmer et al. 1994）。

近年来，随着优质柑橘品种的大面积推广种植，一些地方的柑橘炭疽病危害非常严重，甚至在某些地区和某些柑橘品种上大规模爆发流行，但我国有关柑橘炭疽病的研究不多。

2007年春，广东省德庆县名优柑橘品种德庆贡柑大面积暴发炭疽病，据不完全统计，发病面积近500hm 2，果园损失2,000多万元，给当地农业生产造成了很大的经济损失（彭埃天等 2008）。

究竟是什么原因造成该地区贡柑炭疽病大流行？彭埃天等（2008）对该病的发病条件和发生规律进行了一些探讨，对该病的防治具有一定的指导意义，但该研究主要从外因方面来分析其爆发流行的原因。

笔者认为，除了外因之外，是否存在新的刺盘孢种类（如C. acutatum ）？该地区的炭疽病菌与本省其他地区的柑橘炭疽病菌有何不同？为了弄清楚这些问题，笔者奔赴广东省各柑橘主产区，采集不同柑橘种类上的炭疽病样本，分离其病原菌，然后通过对不同地区、不同柑橘种类上的炭疽病菌进行培养性状和形态学等方面的比较，并采用分子生物学手段、利用特异性引物PCR 扩增等技术，对这些炭疽病菌菌株进行鉴定，为今后对症下药、有效地控制柑橘炭疽病害的发生和危害，保证柑橘产业的健康发展提供科学依据。

1 材料和方法1.1 供试菌株参照方中达（1998）有关病原真菌的组织分离方法，对从广东省柑橘各主产区采集到的柑橘炭疽病样本进行病原菌分离。

当菌落在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA ）培养基长出后，用灭菌的接种针挑取菌落边缘的菌丝进行病原菌的初步纯化，将纯化后的菌株，再进行单孢分离，共获得柑橘炭疽病菌单孢菌株75株，在PDA 试管斜面中培养好后，于4℃冰箱中保存，备用。

选取其中10株具有代表性的单孢菌株作为本研究的供试菌株，其详细情况见表1。

表1 供试刺盘孢菌株的详细情况Table 1 Detailed information of isolates of Colletotrichum used in this study菌株编号 Isolate No. 寄主 Host采集地点 Sampling locality采集时间 Sampling date CCDQ013 贡柑 Citrus sinensis cv. gonggan 广东肇庆Zhaoqing, Guangdong 2008.04.21 CCFS014 年桔 Citrus reticulata广东佛山Foshan, Guangdong 2008.10.31 CCZJ003 红江橙Citrus sinensis cv. hongjiangcheng 广东湛江Zhanjiang, Guangdong 2008.08.14 CCZJ034 红桔Citrus erythrosa广东湛江Zhanjiang, Guangdong 2008.08.14 CCMZ035 四季柚 Citrus grandis cv. sijiyou 广东梅州Meizhou, Guangdong 2008.08.19 CCMZ004 沙田柚 Citrus grandis cv. shatianyou 广东梅州Meizhou, Guangdong 2008.08.19 CCHZ001 春甜桔 Citrus reticulata cv. chuntianju 广东惠州Huizhou, Guangdong 2008.08.21 CCHZ020 天草 Citrus reticulata cv. tiancao 广东惠州Huizhou, Guangdong 2008.08.21 CCST003 蕉柑 Citrus reticulata var. tankan 广东汕头Shantou, Guangdong 2008.08.20 CCST026脐橙 Citrus sinensis广东汕头Shantou, Guangdong2008.08.20490 Mycosystema/jwxtcn1.2 培养性状观察和形态学鉴定1.2.1 病菌菌落观察：将保藏于4℃冰箱中的菌种移植到直径9cm 的PDA 平板上活化后，用打孔器在其菌落边缘切取直径为5mm 的菌丝块，转接到新的PDA 平板上，置于28℃、黑暗条件下培养。