霍乱弧菌
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霍乱弧菌
培养特性：耐碱怕酸，pH 8.8-
9.2，可在无盐环境中生长
抗原构造与分群：
H抗原：无特异性 O抗原：分群
一、生物学特性
古典生物型
O-1群
EL Tor 生物型
非O-1群 引起散发性胃肠炎。
O-139型，1992年起引起 霍乱流行。
与人类感染有关的主要弧菌
弧菌
人类疾病
霍乱弧菌O1和O139 血 清群
霍乱
• 剧烈的喷射状呕吐 • 休克、电解质紊乱及酸中毒 • 腹泻物呈米泔水样 • 不治疗，死亡率达60%
致病性与免疫性
• 所致疾病： 霍乱
易感者：人类是霍乱弧菌的唯一易感者 传播途径：消化道
可疑水、食物（菌 103—105，108—1010）
2-3天突然出现剧烈腹泻与呕吐
严重脱水，电解质紊乱，肾衰、死亡
甘油盐水缓冲保存液直接镜检革兰染色阴性弧菌悬滴法观察细菌呈鱼群穿梭样运动有助于诊断分离培养接种碱性蛋白胨水增菌目前常用的选择培养基为tcbs硫代硫酸钠柠檬酸胆盐蔗糖培养基霍乱弧菌因分解蔗糖呈黄色菌落挑选可疑菌落进行生化反应血清学反应玻片凝集反应35形成菌膜在ph8890碱性蛋白胨水中生长表面形成菌膜霍乱弧菌在tcbs琼脂平板上的菌落特征1824h在选择培养基琼脂平板tcbs上生长形成较大黄色菌37霍乱弧菌血清学反应凝集反应肌肉注射保护率5036个月口服保护率82100b亚单位灭活菌细胞3年以上基因工程菌苗39致病性与免疫性治
病例分析
一名在印度某水电站工作的44岁工程师，突 发大量水样泻，由于每小时约0.5L液体的丢失， 患者很快出现紫绀及重度脱水症状，肠鸣音减 弱，低血压，血容量减少，其排出物呈等渗， 暗视野显微镜检查，发现逗点状微生物。
Q1、患者最有可能患有何种疾病？ Q2、如何确诊？
9.2，可在无盐环境中生长
抗原构造与分群：
H抗原：无特异性 O抗原：分群
一、生物学特性
古典生物型
O-1群
EL Tor 生物型
非O-1群 引起散发性胃肠炎。
O-139型，1992年起引起 霍乱流行。
与人类感染有关的主要弧菌
弧菌
人类疾病
霍乱弧菌O1和O139 血 清群
霍乱
• 剧烈的喷射状呕吐 • 休克、电解质紊乱及酸中毒 • 腹泻物呈米泔水样 • 不治疗，死亡率达60%
致病性与免疫性
• 所致疾病： 霍乱
易感者：人类是霍乱弧菌的唯一易感者 传播途径：消化道
可疑水、食物（菌 103—105，108—1010）
2-3天突然出现剧烈腹泻与呕吐
严重脱水，电解质紊乱，肾衰、死亡
甘油盐水缓冲保存液直接镜检革兰染色阴性弧菌悬滴法观察细菌呈鱼群穿梭样运动有助于诊断分离培养接种碱性蛋白胨水增菌目前常用的选择培养基为tcbs硫代硫酸钠柠檬酸胆盐蔗糖培养基霍乱弧菌因分解蔗糖呈黄色菌落挑选可疑菌落进行生化反应血清学反应玻片凝集反应35形成菌膜在ph8890碱性蛋白胨水中生长表面形成菌膜霍乱弧菌在tcbs琼脂平板上的菌落特征1824h在选择培养基琼脂平板tcbs上生长形成较大黄色菌37霍乱弧菌血清学反应凝集反应肌肉注射保护率5036个月口服保护率82100b亚单位灭活菌细胞3年以上基因工程菌苗39致病性与免疫性治
病例分析
一名在印度某水电站工作的44岁工程师，突 发大量水样泻，由于每小时约0.5L液体的丢失， 患者很快出现紫绀及重度脱水症状，肠鸣音减 弱，低血压，血容量减少，其排出物呈等渗， 暗视野显微镜检查，发现逗点状微生物。
Q1、患者最有可能患有何种疾病？ Q2、如何确诊？
霍乱的名词解释
霍乱的名词解释霍乱（Cholera）是一种由霍乱弧菌引起的传染病，主要通过食物和饮水传播。
这种疾病常常在一些卫生条件恶劣的地区蔓延，尤其是缺乏饮用水和卫生设施的贫穷地区。
霍乱的病原体是一种名为霍乱弧菌（Vibrio cholerae）的细菌。
这种细菌存在于污染的水源中，包括被排泄物污染的水井、河流和湖泊中。
一旦人们通过口腔摄入被污染的水源或食物，霍乱弧菌就会进入人体，而在胃酸的作用下，细菌将释放出毒素。
霍乱的主要传播途径是粪-口传播，即将被霍乱弧菌污染的食物或水摄入口中。
因此，卫生条件薄弱的地区，尤其是没有接入清洁饮用水和卫生设施的贫困地区，更容易发生霍乱疫情。
这也是为什么霍乱通常成为发展中国家的一大公共卫生威胁的原因之一。
患有霍乱的人通常会出现剧烈的腹泻、呕吐和腹部痉挛等症状。
这些症状导致患者失去大量体液，引发脱水，严重时可能导致虚脱和死亡。
因此，及时补充体液和电解质对于治疗霍乱病例至关重要。
预防霍乱的关键是改善卫生条件和饮用水质量。
这包括建立健全的卫生设施，如厕所和洗手设施，以及提供清洁的饮用水供应。
此外，宣传卫生教育也非常重要，教导人们正确的饮食和卫生习惯，避免摄入被细菌污染的食物和水。
世界卫生组织（WHO）和其他组织积极致力于减少霍乱的传播和控制。
他们在霍乱疫苗研发、提供紧急医疗援助和推动卫生改善方面发挥着关键作用。
此外，加强国际合作，改善落后地区的卫生设施和饮水条件，也是解决霍乱问题的重要措施。
尽管霍乱仍然是一个全球性的公共卫生挑战，但在过去几十年中，由于全球努力的结果，霍乱的发病率和死亡率已经显著下降。
这是卫生措施、卫生教育和疫苗接种等多方面努力的结果。
综上所述，霍乱是一种由霍乱弧菌引起的传染病，通过粪-口传播在人群中蔓延。
预防霍乱的关键是改善卫生条件和饮用水质量，加强卫生教育以及提供疫苗接种服务。
全球各方应加强合作，共同努力减少霍乱的传播，为全人类的健康福祉而努力。
霍乱
（四）生化反应
➢ Ｏ１群霍乱弧菌和非Ｏ１群霍乱弧菌均能发 酵蔗糖和甘露糖，不发酵阿拉伯糖。非Ｏ１ 群霍乱弧菌对蔗糖和甘露糖发酵情况不同。 此外埃尔托生物型能分解葡萄糖产生乙酰 甲基甲醇。Ｏ１３９群霍乱弧菌能发酵葡萄 糖、麦芽糖、蔗糖和甘露糖，产酸不产气， 不发酵肌醇和阿拉伯糖。氧化酶试验和明 胶试验阳性，对绵羊红细胞溶血试验结果 不定，对多粘菌素和复方新诺明不敏感， 鸡血球凝集试验阳性。
吐的症状，迅速出现严重脱水，循环衰竭和肌肉 痉挛者。虽然粪便未培养出霍乱弧菌，但并无其 他原因可查者。如有条件可作双份血清凝集试验， 滴度４倍以上者可诊断。 ３２.疫源检索中发现粪便培养阳性前５天内有腹泻 症状者，可诊断为轻型霍乱。
诊断
（二）疑似诊断 １.具有典型霍乱症状的首发病例，病原学检
查尚未肯定前。 ２.霍乱流行期间与霍乱患者有明显接触史，
发病机制与病理改变
霍乱肠毒素还能促使粘膜杯状细胞分泌粘 液增多，使腹泻水样便中含有大量粘液。 此外腹泻导致的失水，使胆汁分泌减少， 因而腹泻出的大便可成“米泔水”样。 除肠毒素外，内毒素和霍乱弧菌产生溶血 素、酶类及其他代谢产物，也有一定的致 病作用。
发病机制与病理改变
（二）病理生理 １.水和电解质紊乱 ２.代谢性酸中毒 （三）病理解剖
发病机制与病理改变
（一）发病机制 霍乱弧菌经口进入人体胃部，当胃酸缺乏或被稀释或 入侵菌量较多时，便经胃抵达肠道后通过鞭毛运动，以及弧菌产生的 蛋白酶作用，穿过肠粘膜上的粘液层，在毒素协同菌毛和胡乱弧菌血 凝素的作用下，粘附于小肠上段粘膜上皮细胞刷状缘上，并不侵入肠 粘膜下层，在小肠的硷性环境中大量繁殖，并产生大量的肠毒素，细 菌崩解还可释出内毒素。霍乱肠毒素为分子量84kd的蛋白质，由亚单 位A和B组成，肠毒素借助于亚单位B与细胞膜表面的单涎酸神经节苷 脂结合，使活性亚单位A进入细胞膜，A单位中具二磷酸腺苷（ADP） ―核糖基转移酶活性，刺激ADP―核糖，使其转移到具有控制腺苷环 化酶（AC）活性的三磷酸鸟呤核苷（GTP）结合蛋白中，使GTP酶 活性受到抑制，GTP不能水解成GDP，使AC活性相对增强，促使细 胞内三磷酸腺苷转变为环磷酸腺苷（cAMP）。cAMP浓度的急剧升 高，抑制肠粘膜细胞对钠的正常吸收，并刺激隐窝细胞分泌氯化物和 水，导致肠腔水份与电解质大量聚集，因而出现剧烈的水样腹泻和呕 吐。
致病性弧菌
霍乱弧菌包括两个生物型
古典生物型（Classical biotype） 埃尔托生物型（EL-Torbio-type）。
一、生物学性状
1、形态与染色
革兰染色阴性；弧性或逗点状；在病人“米泔水” 样便中呈“鱼群”样排列；
有一根单鞭毛，运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流 星状，
有菌毛和性菌毛，0139群有荚膜。
致病性弧菌
弧菌属（Vibrio）
弧菌属，为一大群菌体短小、弯曲成弧形的 革兰阴性菌
主要特点
有单鞭毛，运动活泼 培养要求为碱性环境 自然界广泛分布，以水中最多 只要有霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌
一、霍乱弧菌
霍乱主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，死亡率 甚高。属于国际检疫的烈性传染病。
诊断
标本采集：患者粪便、肛拭或剩余食物 分离培养：SS琼脂平板或嗜盐菌选择平板 嗜盐性试验与生化反应 诊断血清进行鉴定
防治
治疗可用抗菌药物 严重病例需输液和补充电解质
抵抗力
El Tor生物型和其它非01群霍乱弧菌 在外环境中的生存力较古典型为强
不耐酸，在正常胃酸中仅能存活4分钟 水中存活长，河水、井水、海水中1-3周 怕热，100℃1-2分钟死亡
致病物质
ToxR蛋白调控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基 因
不受ToxR蛋白调控的毒力因子基因hlyA和hap
生化反应：
过氧化氢酶、氧化酶阳性 发酵多种糖类，产酸不产气 还原亚硝酸盐，吲哚反应阳性 霍乱红反应阳性，不同生物型生化反应不同 （当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝
酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应）
抗原的构造与分群
有不耐热H抗原和耐热的O抗原。
古典生物型（Classical biotype） 埃尔托生物型（EL-Torbio-type）。
一、生物学性状
1、形态与染色
革兰染色阴性；弧性或逗点状；在病人“米泔水” 样便中呈“鱼群”样排列；
有一根单鞭毛，运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流 星状，
有菌毛和性菌毛，0139群有荚膜。
致病性弧菌
弧菌属（Vibrio）
弧菌属，为一大群菌体短小、弯曲成弧形的 革兰阴性菌
主要特点
有单鞭毛，运动活泼 培养要求为碱性环境 自然界广泛分布，以水中最多 只要有霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌
一、霍乱弧菌
霍乱主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，死亡率 甚高。属于国际检疫的烈性传染病。
诊断
标本采集：患者粪便、肛拭或剩余食物 分离培养：SS琼脂平板或嗜盐菌选择平板 嗜盐性试验与生化反应 诊断血清进行鉴定
防治
治疗可用抗菌药物 严重病例需输液和补充电解质
抵抗力
El Tor生物型和其它非01群霍乱弧菌 在外环境中的生存力较古典型为强
不耐酸，在正常胃酸中仅能存活4分钟 水中存活长，河水、井水、海水中1-3周 怕热，100℃1-2分钟死亡
致病物质
ToxR蛋白调控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基 因
不受ToxR蛋白调控的毒力因子基因hlyA和hap
生化反应：
过氧化氢酶、氧化酶阳性 发酵多种糖类，产酸不产气 还原亚硝酸盐，吲哚反应阳性 霍乱红反应阳性，不同生物型生化反应不同 （当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝
酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应）
抗原的构造与分群
有不耐热H抗原和耐热的O抗原。
霍乱弧菌实验室检测
分离培养（两管两板法）：
接种后的碱性蛋白胨水37℃培养过夜，取菌膜下表层培养物接种选择性培养 基（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板）．同时吸0.1～0.2 ml表层培养物转种于 10ml碱性胨水管中作二次增菌，37℃培养6～8h再划线接种于选择性培养基
平板分离及可疑菌落挑取
平板分离
选择性分离平板应采用9cm分离平板（不建议采用7cm平板），一个平 板分离一个样品（严禁一个平板分离2份或以上样品！！ ）。 样品平板分离时应进行分区划线分离，平板分离的单个菌落数量应该达到 50个以落挑取
经典的鉴定步骤要求每个平板应挑取5个以上可疑菌落,转种于克氏双糖斜 面或者普通琼脂斜面待分纯培养后,再进行O1、O139群血清玻片凝集试验， 鉴于对霍乱疫情应急处理的考虑,现大多数监测实验室一般采用将血清玻片 凝集试验前置的做法,作为快速筛查的手段,直接对平板上生长的单个可疑菌 落进行玻片凝集试验,出现明显凝集时可做初步报告,对平板上出现可疑凝集 的菌株必须马上转种于克氏双糖斜面或者普通琼脂斜面,待纯培养物生长良 好后再次进行玻片凝集试验加以确证。 庆大霉素平板和4号琼脂：多呈半透明状，菌落中央常呈灰色或灰黑色，并 随培养时间的延长而加深（由于这类培养基均含有亚碲酸盐成份）。 TCBS（硫代硫酸盐枸櫞酸盐胆盐琼脂）：菌落生长呈黄色发亮、表面光滑、 润湿、稍凸起、边缘整齐。 （TCBS平板生长的菌落不能直挑取进行玻片凝 集试验，需按经典方法进行纯培养后再进行玻片凝集试验）
分离培养要点（两管三板法）：
挑取粪便，直接接种于碱性蛋白胨水（第一管）中，同时划线分离选择 性平板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第一板）。 第一管碱性蛋白胨水在３７ ℃增菌６－８小时，沾取菌膜下表层液体， 划线分离选择性平板（庆大／四号／ＴＣＢＳ平板，第二板），同时吸取 0.1～0.2 ml表层培养物，接种碱性蛋白胨水（第二管）。 第二管碱性蛋白胨水增菌１８小时后划线分离选择性平板（庆大／四号 ／ＴＣＢＳ平板，第三板）。
霍乱弧菌检测
浓度的霍乱弧菌。
该方法适用于早期诊断和快速筛 查，尤其在爆发期间对于大量样
本的检测具有优势。
其他检测方法
01
其他检测方法包括免疫层析试纸 条、免疫荧光抗体染色、电子显 微镜观察等。
02
这些方法在某些情况下可能具有 一定的应用价值，但敏感性和特 异性相对较低，且操作较为繁琐 。
03
霍乱弧菌检测的临床意义
这种方法通常用于回顾性调查和 流行病学研究，因为抗体产生需 要一定时间，且在感染后数月仍
可能保持阳性。
血清学检测不能用于早期诊断， 但对于评估疫苗接种效果和群体
免疫水平具有一定的价值。
分子生物学检测
分子生物学检测利用核酸探针或 PCR技术检测霍乱弧菌的遗传物
质。
分子生物学检测具有高敏感性和 特异性，能够快速地检测出极低
02
霍乱弧菌检测方法
粪便培养检测
粪便培养是检测霍乱弧菌的传统方法 ，通过将粪便样本接种在选择性培养 基上，观察是否有霍乱弧菌生长。
粪便培养通常用于确诊霍乱病例，以 及在爆发期间对疑似病例进行筛查。
粪便培养具有较高的特异性，但敏感 性较低，且需要较长时间才能得到结 果。
血清学检测
血清学检测通过检测患者血清中 的抗霍乱弧菌抗体来诊断霍乱。
加强国际合作与交流，共享先进的检 测技术、试剂和仪器资源，提高全球 霍乱弧菌检测能力。
培训与能力建设
通过国际培训和能力建设项目，提高 各国实验室检测人员的技能和水平， 促进检测技术的普及和应用。
05
案例分析
某地区霍乱弧菌检测案例
01
02
03
背景
某地区出现霍乱疫情，需 要对当地水源、食品和人 群进行霍乱弧菌检测。
特异性
该方法适用于早期诊断和快速筛 查，尤其在爆发期间对于大量样
本的检测具有优势。
其他检测方法
01
其他检测方法包括免疫层析试纸 条、免疫荧光抗体染色、电子显 微镜观察等。
02
这些方法在某些情况下可能具有 一定的应用价值，但敏感性和特 异性相对较低，且操作较为繁琐 。
03
霍乱弧菌检测的临床意义
这种方法通常用于回顾性调查和 流行病学研究，因为抗体产生需 要一定时间，且在感染后数月仍
可能保持阳性。
血清学检测不能用于早期诊断， 但对于评估疫苗接种效果和群体
免疫水平具有一定的价值。
分子生物学检测
分子生物学检测利用核酸探针或 PCR技术检测霍乱弧菌的遗传物
质。
分子生物学检测具有高敏感性和 特异性，能够快速地检测出极低
02
霍乱弧菌检测方法
粪便培养检测
粪便培养是检测霍乱弧菌的传统方法 ，通过将粪便样本接种在选择性培养 基上，观察是否有霍乱弧菌生长。
粪便培养通常用于确诊霍乱病例，以 及在爆发期间对疑似病例进行筛查。
粪便培养具有较高的特异性，但敏感 性较低，且需要较长时间才能得到结 果。
血清学检测
血清学检测通过检测患者血清中 的抗霍乱弧菌抗体来诊断霍乱。
加强国际合作与交流，共享先进的检 测技术、试剂和仪器资源，提高全球 霍乱弧菌检测能力。
培训与能力建设
通过国际培训和能力建设项目，提高 各国实验室检测人员的技能和水平， 促进检测技术的普及和应用。
05
案例分析
某地区霍乱弧菌检测案例
01
02
03
背景
某地区出现霍乱疫情，需 要对当地水源、食品和人 群进行霍乱弧菌检测。
特异性
霍乱弧菌
3、食品标本：收到标本应立即检验。先在灭菌的容 器中将固体脏器剪碎后接种碱性胨水。增菌量一 般是检体的5~10倍。为防止食品在培养过程中变 酸影响细菌生长，可将首次增菌的碱性胨水 PH9.2，二次增菌用PH8.6。液体食品可按水样进 行增菌分离。
4、水生动物：选取活的活新鲜的标本。贝类可取壳 内软组织剪碎后增菌，鱼类剪取腮部和肠内容物 投入PH9.2的碱性胨水增菌后再作二次增菌分离。
5、物体表面标本：可用无菌棉拭蘸以碱性胨水涂擦 采样后接种到碱性胨水管中增菌分离。
（三）菌株鉴定
对检出的可疑菌落，以血清学性状为主，结合形 态学和生化性状作出判断。血清学性状以玻片凝 集试验为主，形态学可做革兰氏染色、观察形态、 检查动力；生化学上辅以氧化酶试验和粘丝试验 即可。
谢谢！ 谢谢！
（二）检查方法
1、病人粪便标本：所有的大便标本都应经过增菌， 尤其时恢复期病人、带菌者或用过抗菌药物的病 人。急性期病人水样便标本在增菌的同时直涂选 择性培养基培养。 常用的强选择性琼脂：庆大霉素琼脂、四号琼脂 和TCBS琼脂。 弱选择性琼脂：碱性琼脂和碱性胆盐琼脂。
• 霍乱弧菌在庆大霉素琼脂上生长快，36℃ 8~10小 时可出现小菌落，16小时菌落直径达2mm 。菌落 略带灰色、半透明、扁平或稍凸起，光滑湿润。 培养时间延长或室温放置后，菌落略带黄色，中 心厚儿周围透明。 • 霍乱弧菌在四号琼脂上菌落大，带灰黑色，半透 明，光滑湿润，呈水滴样。
1、形态与染色：霍乱弧菌呈弧形或逗点状，长 1~3µm，宽0.3~0.6µm.自病人新分离的霍乱弧菌 形态比较典型，人工培养基上培养稍久即失去弧 形，变成杆状，若直接用病人米泔水样粪便做涂 片镜检，常可见弧菌互相衔接，平行排列如“鱼 群”样。霍乱弧菌革兰氏染色阴性，无芽孢，无 荚膜。菌体单端有一根鞭毛，可达菌体4~5倍， 运动极为活泼。在暗视野显微镜下观察，有如夜 空中的流星。
《霍乱弧菌》课件
霍乱毒素。
霍乱弧菌的防治措施
01
02
03
04
预防接种
接种霍乱疫苗，提高人群免疫 力。
饮食卫生
保持良好的饮食卫生习惯，避 免食用生冷食物。
水源管理
加强水源管理，保证饮用水安 全。
环境卫生
保持环境卫生，减少霍乱弧菌 的传播。
霍乱弧菌的疫苗研究
传统疫苗
利用灭活或减毒的霍乱弧菌作为疫苗，已取得一定效果。
控制霍乱弧菌的传播需要国际社会的合作，共同 加强出入境检验检疫，防止疫情跨国传播。
THANKS
感谢观看
《霍乱弧菌》PPT课件
• 霍乱弧菌简介 • 霍乱弧菌的生物学特性 • 霍乱弧菌的致病性 • 霍乱弧菌的检测与防治 • 霍乱弧菌的流行病学
01
霍乱弧菌简介
霍乱弧菌的发现与命名
发现
1817年，印度恒河三角洲地区首 次发现霍乱弧菌感染的人类病例 。
命名
由英国医生John Snow在1854年 正式命名为“霍乱”。
霍乱弧菌的抵抗力
霍乱弧菌对干燥、阳光和一般消毒剂 较为敏感，但在水体中可存活数周至 数月之久，甚至在污染的食物或水中 也能存活较长时间。
霍乱弧菌的抵抗力与其变异有关，变 异株可能具有更强的抵抗力，需要引 起关注。
霍乱弧菌对某些抗生素如四环素和氟 喹诺酮类具有抗性，但仍然对一些抗 生素如多黏菌素和磺胺类药物敏感。
霍乱弧菌的形态与结构
形态
霍乱弧菌呈逗点状或弯曲的杆状，大 小约1.5-3微米 x 0.3-0.4微米。
结构
单极鞭毛，无芽孢，无荚膜，革兰氏 染色阴性。
霍乱弧菌的分类地位
01
02
03
生物型
根据其抗原特性和生化反 应的不同，霍乱弧菌可分 为O1型和O139型。
霍乱弧菌的防治措施
01
02
03
04
预防接种
接种霍乱疫苗，提高人群免疫 力。
饮食卫生
保持良好的饮食卫生习惯，避 免食用生冷食物。
水源管理
加强水源管理，保证饮用水安 全。
环境卫生
保持环境卫生，减少霍乱弧菌 的传播。
霍乱弧菌的疫苗研究
传统疫苗
利用灭活或减毒的霍乱弧菌作为疫苗，已取得一定效果。
控制霍乱弧菌的传播需要国际社会的合作，共同 加强出入境检验检疫，防止疫情跨国传播。
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01
霍乱弧菌简介
霍乱弧菌的发现与命名
发现
1817年，印度恒河三角洲地区首 次发现霍乱弧菌感染的人类病例 。
命名
由英国医生John Snow在1854年 正式命名为“霍乱”。
霍乱弧菌的抵抗力
霍乱弧菌对干燥、阳光和一般消毒剂 较为敏感，但在水体中可存活数周至 数月之久，甚至在污染的食物或水中 也能存活较长时间。
霍乱弧菌的抵抗力与其变异有关，变 异株可能具有更强的抵抗力，需要引 起关注。
霍乱弧菌对某些抗生素如四环素和氟 喹诺酮类具有抗性，但仍然对一些抗 生素如多黏菌素和磺胺类药物敏感。
霍乱弧菌的形态与结构
形态
霍乱弧菌呈逗点状或弯曲的杆状，大 小约1.5-3微米 x 0.3-0.4微米。
结构
单极鞭毛，无芽孢，无荚膜，革兰氏 染色阴性。
霍乱弧菌的分类地位
01
02
03
生物型
根据其抗原特性和生化反 应的不同，霍乱弧菌可分 为O1型和O139型。
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–1817年开始的六次大流行（古典型霍乱） –1961年开始的第七次大流行（El-Tor霍乱） –1992年O139霍乱开始流行（第八次大流行？）
World-wide cholera pandemic
Time (Y)
1st
1817-1823
2nd
1829-1852
3rd
1852-1859
4th
1863-1879
疑似诊断
符合以下其中一项：
①有典型症状，但病原学检查未明确 ②流行期间有明显接触史，且出现泻吐症状，不能
• 包括O2、O3、、、O138等200以上个血清型， 一般无致病性
• 其中的O139血清型具有特殊性
O139群霍乱
• 1992年10月19日开始，沿孟加拉湾的沿岸城市包括印度 的马德拉斯和加尔各答以及孟加拉国南部发生典型霍乱 样腹泻病流行，发生10万余例，分离的124株霍乱弧菌 在O1群霍乱弧菌诊断血清中不凝集，在非O1群(O2O138)诊断血清也不能分群，这种细菌属于尚未记载的 新型，后被命名为O139血清群。
5th
1881-1896
6th
1899-1923
7th
1961-present
8th?
1992-
Note: 1883 - Robert Koch cultured V. cholerae
V. cholerae
O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/El Tor biotype O139 serogroup
• 1993年5月我国新疆发生200余例，广东同年发生 • 1994年浙江省杭州市发生 • 近几年来发病逐年增多，地区不断扩大
O139的生物学特征
▪ 生化特征与O1群基本相同。 ▪ 含有与O1群霍乱弧菌相同毒力基因 ▪ 除O抗原不同外，其它性状均与El-Tor生物型相似。 ▪ 毒力蛋白及其调控因子与El-Tor霍乱弧菌高度同源。 ▪ O139菌可以产生荚膜 ▪ 与O1群霍乱无交叉免疫力 ▪ 环境适应能力强 ▪ 耐药性强
二、致病性
1.致病物质
(1)与定居有关的致病物质 脂多糖 毒素共协调菌毛 可溶性血凝素、鞭毛及外膜蛋白
霍乱弧菌进入小肠后，依靠活泼的鞭毛运动穿过粘膜表面 粘液层而接近肠壁上皮细胞；通过菌毛粘附于肠壁上皮细 胞刷状缘的微绒毛上，并在其上繁殖。
(2)小带连接毒素Zot （Zonula occludents toxin，Zot） 和辅助肠毒素Ace（Accessory cholera enterotoxin， ACE）
3. 生化反应特性
鸟氨酸及赖氨酸脱羧酶试验
4. 粘丝试验
用于测定霍乱弧菌形成粘丝的特性。将0.5％去氧胆酸钠水溶液与霍乱弧 菌混匀制成浓厚菌液，1min内悬液由混变清，并变得粘稠，以接种环挑取 时可以拉出丝来。霍乱弧菌古典生物型和El Tor生物型均呈阳性。
5. 抵抗力
自然环境中存活时间较长 – 河水、井水中，埃尔托生物型存活1～3周 – 当粘附于藻类或甲壳类动物时，存活期延长 – 当外环境合适，甚至可存活1年以上
古典生物型和El-Tor生物型的区别
特征 羊红细胞溶血 鸡红细胞凝集 V-P试验 CAMP试验 多粘菌素B敏感试验 Ⅳ组噬菌体裂解 Ⅴ组噬菌体裂解
古典生物型 ＋ ＋ -
El-Tor生物型 β ＋ ＋ ＋ ＋
霍乱弧菌El-Tor生物型鸡红细胞凝集试验
多粘菌素B敏感试验
非O1群霍乱弧菌
• 不与O1群的多价血清发生凝集反应
口唇 前囟、眼窝 肌肉痉挛 脉搏 血压
尿量 血浆比重
霍乱的临床分型
轻型 10次以下 5%以下 清 稍干
稍干 稍陷 无 正常 正常
稍减少 1.025～1.030
中型 10~20次 5%～10% 不安或呆滞 干燥，弹性差
干燥，发绀 明显下凹 有 稍细，快 12～9.3 kPa
少尿 1.030～1.040
临床表现
• 潜伏期：1-3d（数小时-7d）
• 突然起病
• 临床表现与感染菌型相关 ——古典生物型与O139型症状较重 ——埃尔托生物型所致者常为隐性感染者
典型霍乱的分期 （一）泻吐期 （二）脱水虚脱期 （三）恢复期（反应期）
（一）泻吐期 • 持续数小时或1~2日 • 先泻后吐 • 一般无发热
5、低血钾
– 肌张力减低，腱反射消失 – 鼓肠，肠鸣减弱 – 心律失常、心动过速
（三）恢复及反应期
——少数病人有反应性低热（持续1-3天， 体温38-39℃）
循环改善致残余毒素吸收
O139型霍乱的临床特征
• 症状较重 • 腹痛比较常见 • 可并发菌血症等肠道外感染
表现 大便次数 脱水(体重%) 神志 皮肤
发病机制 发病与否取决于：
– 机体胃酸分泌程度 – 霍乱弧菌的数量和致病力
发病机制
霍乱弧菌突破胃酸屏障，进入小肠
穿过肠粘膜的粘液层
在小肠的碱性环境下大量繁殖，并 产生霍乱肠毒素
刺激隐窝细胞分泌水、氯化物及碳酸 氢盐。 促使杯状细胞分泌粘液增多
临床表现
上吐下泻,无痛性腹泻，不伴里急后重，米泔水样腹 泻物 大量水分和电解质丧失 ，低容量性休克及心力不齐 和肾衰竭（死亡率高达60%） 腓肠肌痉挛
（一）泻吐期
腹泻的特点：
– 量多次频 – 无粪臭
• 黄色清水样便 • 米泔水样便 • 血水样便
– 少有腹痛（无痛性 、无里急后重）
（一）泻吐期
呕吐的特点：
– 不伴恶心，次数不多 – 喷射性呕吐 – 呕吐物初为胃内容物，
后为米泔水样
（二）脱水虚脱期
1、脱水 ——皮肤弹性差 ——眼窝凹陷 ——声音嘶哑 ——尿量减少
(3) 霍乱肠毒素（choleragen； cholera toxin，CT）
A亚单位（毒性亚单位）
B亚单位（结合亚单位）
霍乱肠毒素的结构模式图
霍乱肠毒素致病机理
1、CT＝1个A亚基＋5个B亚基； 2、蛋白酶裂解A亚基成A1和A2两个多肽； 3、B亚基结合细胞表面GM1神经节苷脂受体；
4、CT-GM1复合物被内吞 到细胞内； 5、A1具有ADP-核糖转移 酶活性，可活化腺苷酸环 化酶，使ATP以不正常的 高效率转化为cAMP，导致 肠腺上皮细胞分泌功能亢 进，大量水和电解质在肠 腔堆积，引起剧烈腹泻。
选择培养基TCBS （硫代硫酸盐-枸 橼酸盐-胆盐-蔗糖 琼脂平板）： 霍乱弧菌形成较大 菌落，发酵蔗糖产 酸使菌落呈黄色
/ddimg/uploadimg/20050519/063450452.jpg
霍乱弧菌菌落特征（4号琼脂）
灰褐色中心的菌落
原理：蛋白胨、牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压； 亚硫酸钠可刺激弧菌生长；十二烷基硫酸钠、猪胆汁粉、雷佛奴尔、庆大霉素和亚碲 酸钾及较高的pH可抑制革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性杂菌；霍乱弧菌对酸性环境比 较敏感，因此该pH值可增强其生长；琼脂是培养基的凝固剂。
对热、干燥、酸及一般消毒剂均敏感 – 干燥2小时或加热55℃10分钟，弧菌死亡 – 煮沸，立即死亡 – 在正常胃酸中，存活4分钟 – 常用消毒剂均敏感，如1%的漂白粉液内10分钟致死
6. 抗原结构
❖ 霍乱弧菌具有耐热的菌体抗原（O）和不耐热的鞭毛（H） 抗原。
❖ 根据菌体（O）抗原不同， 分为O1群霍乱弧菌和非O1群霍 乱弧菌。
* 液体中：运动非常活泼,呈穿梭样；
* 涂片中：排列整齐,呈鱼群状。
Hale Waihona Puke 霍乱弧菌革兰染色霍乱弧菌电镜图
2. 培养特性
需氧，营养要求不高。耐碱不耐 酸，在pH8.4～9.0的碱性蛋白胨 水或碱性琼脂平板上生长良好。 故常用碱性蛋白胨水作为选择性 增殖霍乱弧菌的培养基。
V. cholerae在碱性蛋白胨水培养基 中生长。液体呈均匀混浊，有菌膜 （6～8h），左侧为阴性对照。
第七次大流行概况
全球 中国
持续已五十多年; 波及5大洲140个以上的国家和地区; 报病470万例以上; 死亡12万例以上。
持续已五十多年; 波及29个省、自治区、直辖市; 报病34万例以上; 死亡5500例以上。
一一、、生生物物学性学状性状（熟悉）
1. 形态与染色
* 弧型或逗点状，G* 单鞭毛,有助于细菌穿过肠粘膜表面粘液层而 接近肠壁上皮细胞。
生化鉴定、血清学方法、分子生物学方法
鉴别试验
鉴别试验 Ⅰ组霍乱噬菌体裂解试验 Ⅴ组霍乱噬菌体裂解试验 多粘菌素Ｂ敏感试验 鸡血清凝集试验 Ⅴ－Ｐ试验 绵羊血球溶血试验 Ｏ１３９弧菌抑制试验 Ｏ１３９血清凝集试验
古典型 埃尔托型
＋
－（＋）
－
＋
＋
－（＋）
－（＋） （＋）－
－
＋（－）
－
＋（－）
＋
＋
－
－
Ｏ１３９ － － － ＋ ＋（－） ＋ － ＋
噬菌体-生物分型
✓噬菌体型：32个噬菌体型(1-32)，1-5为流行株。 ✓生物分型： 12个生物型(a-L)。前6个(a～f)为 流行株。 ✓噬菌体-生物分型： 噬菌体1～5型－生物型a～f为流行株， 其中噬菌体1～3型－生物型a～d为常见的流行株， 噬菌体6～32型－生物型g～L为常见的非流行株
• 我国生食、半生 食所致霍乱占饮 食感染的80%；泥 鳅、鳝鱼是保存 宿主
• 日常的生活接触
人群易感性
• 普遍易感
• 隐性感染者多，显性感染者少
• 病后获得免疫力，但持续时间短，可再次感染 （再感染率0.22%）
流行特征
• 热带地区：全年发病 • 我国：夏秋季流行，高峰期7～9月 • 地理特点:分布在沿江沿海
World-wide cholera pandemic
Time (Y)
1st
1817-1823
2nd
1829-1852
3rd
1852-1859
4th
1863-1879
疑似诊断
符合以下其中一项：
①有典型症状，但病原学检查未明确 ②流行期间有明显接触史，且出现泻吐症状，不能
• 包括O2、O3、、、O138等200以上个血清型， 一般无致病性
• 其中的O139血清型具有特殊性
O139群霍乱
• 1992年10月19日开始，沿孟加拉湾的沿岸城市包括印度 的马德拉斯和加尔各答以及孟加拉国南部发生典型霍乱 样腹泻病流行，发生10万余例，分离的124株霍乱弧菌 在O1群霍乱弧菌诊断血清中不凝集，在非O1群(O2O138)诊断血清也不能分群，这种细菌属于尚未记载的 新型，后被命名为O139血清群。
5th
1881-1896
6th
1899-1923
7th
1961-present
8th?
1992-
Note: 1883 - Robert Koch cultured V. cholerae
V. cholerae
O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/classical biotype O1/El Tor biotype O139 serogroup
• 1993年5月我国新疆发生200余例，广东同年发生 • 1994年浙江省杭州市发生 • 近几年来发病逐年增多，地区不断扩大
O139的生物学特征
▪ 生化特征与O1群基本相同。 ▪ 含有与O1群霍乱弧菌相同毒力基因 ▪ 除O抗原不同外，其它性状均与El-Tor生物型相似。 ▪ 毒力蛋白及其调控因子与El-Tor霍乱弧菌高度同源。 ▪ O139菌可以产生荚膜 ▪ 与O1群霍乱无交叉免疫力 ▪ 环境适应能力强 ▪ 耐药性强
二、致病性
1.致病物质
(1)与定居有关的致病物质 脂多糖 毒素共协调菌毛 可溶性血凝素、鞭毛及外膜蛋白
霍乱弧菌进入小肠后，依靠活泼的鞭毛运动穿过粘膜表面 粘液层而接近肠壁上皮细胞；通过菌毛粘附于肠壁上皮细 胞刷状缘的微绒毛上，并在其上繁殖。
(2)小带连接毒素Zot （Zonula occludents toxin，Zot） 和辅助肠毒素Ace（Accessory cholera enterotoxin， ACE）
3. 生化反应特性
鸟氨酸及赖氨酸脱羧酶试验
4. 粘丝试验
用于测定霍乱弧菌形成粘丝的特性。将0.5％去氧胆酸钠水溶液与霍乱弧 菌混匀制成浓厚菌液，1min内悬液由混变清，并变得粘稠，以接种环挑取 时可以拉出丝来。霍乱弧菌古典生物型和El Tor生物型均呈阳性。
5. 抵抗力
自然环境中存活时间较长 – 河水、井水中，埃尔托生物型存活1～3周 – 当粘附于藻类或甲壳类动物时，存活期延长 – 当外环境合适，甚至可存活1年以上
古典生物型和El-Tor生物型的区别
特征 羊红细胞溶血 鸡红细胞凝集 V-P试验 CAMP试验 多粘菌素B敏感试验 Ⅳ组噬菌体裂解 Ⅴ组噬菌体裂解
古典生物型 ＋ ＋ -
El-Tor生物型 β ＋ ＋ ＋ ＋
霍乱弧菌El-Tor生物型鸡红细胞凝集试验
多粘菌素B敏感试验
非O1群霍乱弧菌
• 不与O1群的多价血清发生凝集反应
口唇 前囟、眼窝 肌肉痉挛 脉搏 血压
尿量 血浆比重
霍乱的临床分型
轻型 10次以下 5%以下 清 稍干
稍干 稍陷 无 正常 正常
稍减少 1.025～1.030
中型 10~20次 5%～10% 不安或呆滞 干燥，弹性差
干燥，发绀 明显下凹 有 稍细，快 12～9.3 kPa
少尿 1.030～1.040
临床表现
• 潜伏期：1-3d（数小时-7d）
• 突然起病
• 临床表现与感染菌型相关 ——古典生物型与O139型症状较重 ——埃尔托生物型所致者常为隐性感染者
典型霍乱的分期 （一）泻吐期 （二）脱水虚脱期 （三）恢复期（反应期）
（一）泻吐期 • 持续数小时或1~2日 • 先泻后吐 • 一般无发热
5、低血钾
– 肌张力减低，腱反射消失 – 鼓肠，肠鸣减弱 – 心律失常、心动过速
（三）恢复及反应期
——少数病人有反应性低热（持续1-3天， 体温38-39℃）
循环改善致残余毒素吸收
O139型霍乱的临床特征
• 症状较重 • 腹痛比较常见 • 可并发菌血症等肠道外感染
表现 大便次数 脱水(体重%) 神志 皮肤
发病机制 发病与否取决于：
– 机体胃酸分泌程度 – 霍乱弧菌的数量和致病力
发病机制
霍乱弧菌突破胃酸屏障，进入小肠
穿过肠粘膜的粘液层
在小肠的碱性环境下大量繁殖，并 产生霍乱肠毒素
刺激隐窝细胞分泌水、氯化物及碳酸 氢盐。 促使杯状细胞分泌粘液增多
临床表现
上吐下泻,无痛性腹泻，不伴里急后重，米泔水样腹 泻物 大量水分和电解质丧失 ，低容量性休克及心力不齐 和肾衰竭（死亡率高达60%） 腓肠肌痉挛
（一）泻吐期
腹泻的特点：
– 量多次频 – 无粪臭
• 黄色清水样便 • 米泔水样便 • 血水样便
– 少有腹痛（无痛性 、无里急后重）
（一）泻吐期
呕吐的特点：
– 不伴恶心，次数不多 – 喷射性呕吐 – 呕吐物初为胃内容物，
后为米泔水样
（二）脱水虚脱期
1、脱水 ——皮肤弹性差 ——眼窝凹陷 ——声音嘶哑 ——尿量减少
(3) 霍乱肠毒素（choleragen； cholera toxin，CT）
A亚单位（毒性亚单位）
B亚单位（结合亚单位）
霍乱肠毒素的结构模式图
霍乱肠毒素致病机理
1、CT＝1个A亚基＋5个B亚基； 2、蛋白酶裂解A亚基成A1和A2两个多肽； 3、B亚基结合细胞表面GM1神经节苷脂受体；
4、CT-GM1复合物被内吞 到细胞内； 5、A1具有ADP-核糖转移 酶活性，可活化腺苷酸环 化酶，使ATP以不正常的 高效率转化为cAMP，导致 肠腺上皮细胞分泌功能亢 进，大量水和电解质在肠 腔堆积，引起剧烈腹泻。
选择培养基TCBS （硫代硫酸盐-枸 橼酸盐-胆盐-蔗糖 琼脂平板）： 霍乱弧菌形成较大 菌落，发酵蔗糖产 酸使菌落呈黄色
/ddimg/uploadimg/20050519/063450452.jpg
霍乱弧菌菌落特征（4号琼脂）
灰褐色中心的菌落
原理：蛋白胨、牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压； 亚硫酸钠可刺激弧菌生长；十二烷基硫酸钠、猪胆汁粉、雷佛奴尔、庆大霉素和亚碲 酸钾及较高的pH可抑制革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性杂菌；霍乱弧菌对酸性环境比 较敏感，因此该pH值可增强其生长；琼脂是培养基的凝固剂。
对热、干燥、酸及一般消毒剂均敏感 – 干燥2小时或加热55℃10分钟，弧菌死亡 – 煮沸，立即死亡 – 在正常胃酸中，存活4分钟 – 常用消毒剂均敏感，如1%的漂白粉液内10分钟致死
6. 抗原结构
❖ 霍乱弧菌具有耐热的菌体抗原（O）和不耐热的鞭毛（H） 抗原。
❖ 根据菌体（O）抗原不同， 分为O1群霍乱弧菌和非O1群霍 乱弧菌。
* 液体中：运动非常活泼,呈穿梭样；
* 涂片中：排列整齐,呈鱼群状。
Hale Waihona Puke 霍乱弧菌革兰染色霍乱弧菌电镜图
2. 培养特性
需氧，营养要求不高。耐碱不耐 酸，在pH8.4～9.0的碱性蛋白胨 水或碱性琼脂平板上生长良好。 故常用碱性蛋白胨水作为选择性 增殖霍乱弧菌的培养基。
V. cholerae在碱性蛋白胨水培养基 中生长。液体呈均匀混浊，有菌膜 （6～8h），左侧为阴性对照。
第七次大流行概况
全球 中国
持续已五十多年; 波及5大洲140个以上的国家和地区; 报病470万例以上; 死亡12万例以上。
持续已五十多年; 波及29个省、自治区、直辖市; 报病34万例以上; 死亡5500例以上。
一一、、生生物物学性学状性状（熟悉）
1. 形态与染色
* 弧型或逗点状，G* 单鞭毛,有助于细菌穿过肠粘膜表面粘液层而 接近肠壁上皮细胞。
生化鉴定、血清学方法、分子生物学方法
鉴别试验
鉴别试验 Ⅰ组霍乱噬菌体裂解试验 Ⅴ组霍乱噬菌体裂解试验 多粘菌素Ｂ敏感试验 鸡血清凝集试验 Ⅴ－Ｐ试验 绵羊血球溶血试验 Ｏ１３９弧菌抑制试验 Ｏ１３９血清凝集试验
古典型 埃尔托型
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Ｏ１３９ － － － ＋ ＋（－） ＋ － ＋
噬菌体-生物分型
✓噬菌体型：32个噬菌体型(1-32)，1-5为流行株。 ✓生物分型： 12个生物型(a-L)。前6个(a～f)为 流行株。 ✓噬菌体-生物分型： 噬菌体1～5型－生物型a～f为流行株， 其中噬菌体1～3型－生物型a～d为常见的流行株， 噬菌体6～32型－生物型g～L为常见的非流行株
• 我国生食、半生 食所致霍乱占饮 食感染的80%；泥 鳅、鳝鱼是保存 宿主
• 日常的生活接触
人群易感性
• 普遍易感
• 隐性感染者多，显性感染者少
• 病后获得免疫力，但持续时间短，可再次感染 （再感染率0.22%）
流行特征
• 热带地区：全年发病 • 我国：夏秋季流行，高峰期7～9月 • 地理特点:分布在沿江沿海