衡量甲壳动物免疫机能的指标

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评价免疫功能的指标

评价免疫功能的指标

1.评价免疫功能的指标
采用环磷酞胺(Cy)诱导的免疫功能低下小鼠作为整体动物模型,进行脾淋巴细胞的定量溶血试验(QHs,抗体生成试验)
LPs、ConA 诱导的淋巴细胞增殖反应
以免疫功能低下的迟发型变态反应(DTH)小鼠脾淋巴细胞为靶细胞,测定腹腔巨噬细胞(PMФ)吞噬功能和NK细胞杀伤活性,脾淋巴细胞的定量溶血,采用DNFB诱导的DTH观察细胞免疫功能:采用三色流式细胞技术,分析肿细胞淋巴细胞CD3+、CD4+、CDS8+细胞亚群;ELISA 法检测脾细胞产生细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4水平,同时用RT-pcR 技术检测IL-2、IFN-γ、IL-4mRNA表达,以反映多糖对细胞因子分泌的及Thl、Th2细胞亚群功能的影响。

(学习的目的是增长知识,提高能力,相信一分耕耘一分收获,努力就一定可以获得应有的回报)
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不同温度条件下克氏原螯虾免疫酶活性变化

不同温度条件下克氏原螯虾免疫酶活性变化

不同温度条件下克氏原螯虾免疫酶活性变化王天神;周鑫;赵朝阳;徐增洪;水燕【摘要】研究克氏原螯虾在不同水温条件下免疫因子活性的变化规律,结果发现:温度变化对克氏原螯虾免疫力有显著影响.水温为10~15℃时,克氏原螯虾血液中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性保持稳定,20℃时两者活性达到峰值,水温继续升高时活性逐渐降低,水温达到30℃时酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性分别为74.6 U/L 和56.8金氏单位/L,与水温20℃时酶的活性相比差异显著(P<0.05);过氧化氢酶的活性随着温度的升高呈下降趋势,30℃时其活性最低(0.79 U/mL),与水温20 ~25℃时酶的活性相比差异显著(P<0.05);而超氧化物歧化酶在水温10℃时的活性较低,但其活性随着温度升高而增强,水温30℃时的活性为138.31 U/mL,与15~25℃时相比差异不显著(P>0.05),但高于水温为10℃的试验组,且差异显著(P<0.05);低温与高温环境下,血液中溶菌酶的活性降低,显著低于水温15 ~ 25℃的试验组(P<0.05).表明水温为20℃左右时克氏原螯虾相关免疫因子的各项指标较好,有较强的抗病能力.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2012(040)012【总页数】3页(P239-241)【关键词】克氏原螯虾;温度;免疫酶【作者】王天神;周鑫;赵朝阳;徐增洪;水燕【作者单位】中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,江苏无锡214081【正文语种】中文【中图分类】S917.4克氏原螯虾(Procambarus clarkii)属于变温动物,体温可随环境温度的变化而改变,在天然水域中可以自然越冬,生存水温为1~40 ℃,水温低于10 ℃时生长较慢,水温为 16~33 ℃ 时生长较快[1]。

在不同的环境温度条件下克氏原螯虾的新陈代谢和生理调节机制将发生改变,养殖结果表明,水温的变化已成为克氏原螯虾大批死亡的诱因,当水温低于10 ℃时克氏原螯虾抗应激能力提高,死亡率下降,当水温高于25 ℃时应激反应十分强烈,死亡率较高。

免疫增强剂在虾类养殖上的应用现状和研究进展_盛鹏程

免疫增强剂在虾类养殖上的应用现状和研究进展_盛鹏程

免疫增强剂在虾类养殖上的应用现状和研究进展盛鹏程,尹文林,姚嘉贇,徐洋,林锋,郝贵杰,潘晓艺,沈锦玉*浙江省淡水水产研究所,浙江湖州313001摘要从介绍虾类的免疫系统出发,阐述了虾类免疫增强剂的发展概况,对免疫增强剂在虾类养殖上的应用进行了总结和概括,并阐述了虾类免疫增强剂研究存在的问题和发展趋势。

关键词虾类;免疫系统;免疫增强剂中图分类号S966.12文献标识码A文章编号2095-3305(2014)01-031-05基金项目湖州市一般科研(新农村建设)计划项目(2008YN15);浙江省淡水养殖科技创新团队项目(2012R10026-11)。

作者简介盛鹏程(1982-),男,山东荣成人,硕士研究生,研究方向:水产动物病害防治,E -mail :spc198696@ 。

*通讯作者,研究员,从事水产动物病害防治研究,E -mail :sjinyu@ 。

收稿日期2013-10-19农业灾害研究2014,4(01):31-35虾类养殖是我国水产养殖业的支柱产业,创造了显著的经济效益,但也引发了一系列问题,特别是传染性疾病,使虾类养殖业蒙受了巨大损失,尤其是病毒性疾病的暴发流行,到目前尚无有效的治疗方法。

自20世纪90年代初期全国范围内养殖对虾受到白斑综合症病毒感染,并造成暴发性流行疾病大规模发生以来,已发现能感染虾类的病毒有20多种,目前还没有药物可以有效地对付这些病毒,至使虾类年产量下跌严重,直接经济损失近40亿元。

抗生素对感染病毒的虾虽然能起到缓解的作用,但随着抗生素及其他药物的大量使用,水体受到了污染,产品质量下降。

由于抗生素在虾体内残留,人类的健康受到危害,抗生素的使用受到严格限制。

因此,开发抗菌、食用安全型免疫增强剂成为当前研究的重点。

笔者对虾类免疫增强剂的发展进行介绍,并对免疫增强剂在虾类养殖上的应用进行总结和概括,旨在为促进虾类养殖产业发展提供借鉴。

1虾类的免疫系统虾类的免疫系统主要以非特异性免疫为主。

甲壳类动物非特异性免疫的研究概况

甲壳类动物非特异性免疫的研究概况

甲壳类动物非特异性免疫的研究概况摘要:甲壳类动物的非特异性免疫系统在其自身抗病作用中较特异性免疫系统发挥更大作用。

本文从甲壳类动物免疫系统的防御功能分别综述了甲壳类动物的免疫器官,免疫细胞及体液免疫机理等甲壳类动物非特异性免疫的研究概况。

关键词:甲壳类动物非特异性免疫免疫器官免疫细胞体液免疫机理研究概况前言随着我国水产养殖业的快速发展,甲壳类动物养殖业也发展迅速,因此甲壳类动物的病害亦严重起来,如台湾省在1987年也曾经发生大规模虾病,使台湾的虾业养殖遭受了致命的打击,1993年4月~6月我国大陆沿海地区从南到北大面积虾池的虾发病,绝产的占50%以上。

这些数字已足以说明防治甲壳类动物疾病的重要性。

但由于甲壳类动物不存在免疫球蛋白,缺乏抗体介导的免疫反应,因而不能像脊椎动物那样通过接种达到自我保护的目的。

由于甲壳类的防御系统具有非特异性免疫,适当的诱导可以提高血细胞及多种免疫因子的数量和活性,从而达到识别非己物质,抵抗病原体侵袭的目的。

甲壳类动物的非特异性免疫机制包括:皮肤、甲壳和粘液的屏障作用、网状内皮系统的吞噬作用以及非特异性体液分子等。

它们对自然感染具有先天的无选择性的免疫功能,形成了甲壳类动物体内强大的多功能防御机制。

非特异性防御机制在甲壳类动物防止感染中扮演重要角色,潜在的非特异性防御机制可以在微生物入侵时发生作用,能更有效地清除、降解病原微生物和其它有害物质。

鉴于甲壳类动物自身特点,本文就甲壳类生物非特异性免疫的研究进展作一简要概述。

1、甲壳类动物的免疫系统免疫系统是生物抵御异物入侵的防御机构。

甲壳类动物的免疫系统主要包括免疫器官、免疫细胞、可溶性血淋巴因子和有关的酶类。

1.1免疫器官甲壳类动物的免疫器官几乎都是兼职免疫功能更具其它功能的器官。

主要包括甲壳、鳃、血窦和淋巴样器官。

1.1.1 甲壳甲壳类动物的甲壳(皮肤)充当外骨骼,起支持和保护作用。

主要成分是几丁质及其结合钙。

甲壳分为4层,由外而内依次是表皮层、外皮层、内皮层和内膜层。

甲壳动物免疫力综合指标定量研究

甲壳动物免疫力综合指标定量研究

so so t ie y u ig dfe e te au to d x sc n n tb o a e be tv l n ce tf al.Gi— in b an d b sn i r n v [a in i e e a o ec mp r do jcieya ds in i c ly f n i v
力是 一 个综合 指标 , 并具体 定 义 了免 疫 力综合 指数 , 定 了计 算 方法 , 规 明确 了 2种 计 算权 重的 步骤方 法 , 即层 次分 析 法和主 成 分分析 法. 通过 对 文献数 据 的 实际计算 , 阐明 了计 算 方 法的 具体 步 骤 , 到 了免 疫 力 综合 指 得 数, 以定 量数据 表 明 实验 结 果对 免疫 力的 影响 , 为客观 评 价所 采取 的 实验 措施 提供 量化 结 果. 关键 词 : 疫力 ; 免 综合 指 数 ; 次分 析法 ; 层 主成分分 析
2. Cole e o f i n e ,H e iUni e st l g f Lie Sce c s be v r iy,Ba i 1 02,Ch na od ng 07 0 i )
Ab ta t Thr gh t e a l ss o ur e tr s a c nd x,t f c sa epo nt d o ti o p e nsv sr c : ou h na y i fc r n e e r h i e wo de e t r i e u n c m r he i e
J NG i n M A aip , I A — , qi Zh — u ZHAO i — u ,W U n 。, Jan h a Lig SHICh n — a 。 ZHANG u ・ u n a gc n , Ch n i t c n l g 1 Re e r h Ce t r o o e h o o y,H e e n v r i bi U i est y,Ba d n 7 0 2,Ch n ; o ig0 1 0 ia

嗜水气单胞菌对克氏原螯虾免疫相关因子活性的影响

嗜水气单胞菌对克氏原螯虾免疫相关因子活性的影响
国内人工养 殖克 氏原 螯 虾 的热 潮 正在 兴 起 , 湖北 嗜水气 单胞 菌后 1 9 仅 ~ 6h总血 细胞 数量 ( HC ) 酚 T s、 省在 2 0 0 8年的克 氏原 螯 虾养 殖 面积就 达 到 了数 万 氧化 酶活性 ( o)抗 菌活力 、 菌酶活 性 、 氧 化物 P 、 溶 超
低于对照组。
关 键 词 嗜水 气 单 胞 菌 ;克 氏原 螯 虾 ; 疫 相 关 因 子 ; 氧 化 酶 活 性 ; 氧 化 物歧 化 酶活 性 ; 菌酶 活性 ; 免 酚 超 溶 抗 菌 活力 中 图分 类 号 S9 2 5 4 . 文 献标 识码 A 文 章编 号 10-4 1 2 1 )30 5—6 002 2 (0 1 0—3 80
气单 胞菌 属的细菌 被认 为不是 克 氏原 螯虾 的主要致
收稿 日期 : 0 01—5 2 1 —21 基 金 项 目 : 北 省 重 点科 技 攻 关 项 目(0 9 3 1 ) 湖 20 0 0 3
采用 已被证 实对淡 水螯虾 以及淡 水鱼类 具有 高
第 3卷 第 3 O 期
21 0 1年 6月








V0 O No 3 L3 .
J u n l fHu z o gAgr ut rlUnv ri o r a ah n o i l a iest c u y
J n 0 1, 5  ̄ 3 3 u e2 1 3 8 6
a o cs s c) n my e t i 等 ] aa 。
1 料 与方 法
采用从 武汉 市 白沙 洲水 产批发 市场购 买 的平 均
原 体 (prpama 、 溶 血 弧 菌 ( i i a a a — 11 供试克 氏原 螯虾 的来源 si ls ) 副 o V b o p r h e . r l ) 拟态弧 菌 ( iromi c s 、 a、 V bi mi ) 螯虾 丝囊霉 ( h 质 量为 ( 52± 2 6 、 泼 而无 伤 残 的克 氏原 螯 u Ap — 1. . )g 活

甲壳素

甲壳素

四、甲壳素的应用
3)美容护肤
甲壳素对细胞无排斥力,具有修复细胞之功效,并 能缓解过敏性肌肤,且日本研究证实甲壳素具有抗氧 化的能力,能活化细胞,防止细胞老化,促进细胞新 生带。甲壳素中亦含有高效保湿成分,它的β葡聚糖 也有能使肌肤含水保湿作用。
五、特殊生物功能
(一)降血脂作用
血脂是指血液中脂类的含量。广义的脂类指中性脂肪(甘油和甘油 三酯)和类脂质(胆固醇、胆固醇酯和磷脂)。
六、甲壳素的来源及制取
除此之外,在植物中也发现低聚的甲壳素或壳聚糖 ,一种情况是植物细胞壁受到病原体侵袭时,一些细 胞壁中的多糖降解为有生物活性的寡糖,其中就有甲 壳六糖,典型的例子是树干受伤后,在其伤口愈合处 发现了甲壳六糖;另一种情况是根瘤菌产生的脂寡糖 ,也是甲壳四糖、甲壳五糖和甲壳六糖。
六、甲壳素的来源及制取
三、甲壳素的性质及化学结构
1)性质
甲壳素的分子为长链,由约8000个单体组成的多 糖,外观上为淡米黄色至白色,溶于浓盐酸、磷酸、 硫酸、乙酸,不溶于碱及其它有机溶剂,也不溶于水 ,是自然界的一种半透明而坚固的材料。甲壳素低聚 糖是由甲壳素经水解后产生的一类低聚合度、是指 2~10个单糖以糖苷键连接而成的糖类总称,分子式 为(C6H11O4N)n。
(一)原料分布
(1)节肢动物,主要是甲壳纲,如虾、蟹等,含甲 壳素达58%~85%;(2)软体动物 、环节动物 ,包 括原环虫纲、毛足纲和蛭纲三纲; (3)原生动物 简 称原虫,是单细胞动物(4)腔肠动物包括水螅虫纲 、钵水母纲和珊瑚虫纲等,一般含甲壳素很少,但有 的也能达3%~30% ; (5)海藻 主要是绿藻,含少量 甲壳素; (6)真菌 包括子囊菌、担子菌、藻菌等, 含甲壳素从微量到45%不等,只有少数真菌如Olm ycetes和Triohamycetes不含甲壳素; (7)其他动 物的关节、蹄、足的坚硬部分,以及动物肌肉与骨接 合处均有甲壳素存在。

环境因子对甲壳动物免疫力和抗氧化酶活力的影响

环境因子对甲壳动物免疫力和抗氧化酶活力的影响

中国海洋大学硕士学位论文环境因子对甲壳动物免疫力和抗氧化酶活力的影响姓名:***申请学位级别:硕士专业:水产养殖指导教师:***20040601环境因子对甲壳动物免疫力和抗氧化酶活力的影响环境因子对甲壳动物免疫力和抗氧化酶活力的影响摘要本论文综述了环境因子对甲壳动物免疫力和抗氧化酶活力的影响,主要探讨了①盐度、pH对中国对虾和凡纳滨对虾免疫力的影响。

②温度对凡纳滨对虾免疫力的影响。

③氨氮对凡纳摈对虾免疫力的影响。

④重金属离子对中华绒螫蟹组织抗氧化酶活力的影响。

主要结果如下:1、盐度、pH突变对中国对虾、凡纳滨对虾免疫力的影响。

结果表明:盐度、pH突变对两种养殖对虾抗菌活力、酚氧化酶活力的影响是显著的(P<0.05),而盐度突变对溶菌活力的影响也是显著的(P<O.05),对低pH突变影响明显,对高pH突变影响不明显。

随着盐度突变值和向低pH、高pH突变梯度的增加,两种养殖对虾的抗菌活力逐渐减小,酚氧化酶活力逐渐增大,而溶菌活力则随着盐度突变值和向低pH突变梯度的增加呈逐渐下降。

在各实验梯度中,随着盐度、pH突变后时间的增加,突变组两种养殖对虾的抗菌活力呈下降趋势,酚氧化酶活力呈上升趋势,而溶菌活力在盐度突变和向低pH突变实验组中呈递减趋势,其它实验组变化不明显;未突变组两种养殖对虾的免疫力指标变化很小。

在同一实验梯度中,中国对虾的抗菌活力和溶菌活力要比凡纳滨对虾的低,而其酚氧化酶活力则比凡纳滨对虾的高。

2、温度对凡纳滨对虾免疫力的影响。

结果表明:经单因素方差分析(ANOVO),温度对凡纳滨对虾血细胞数量、溶菌活力、抗菌活力的影响显著(F>Fo*),无论向低温还是高温突变,温度突变值越大,各免疫指标变化越大。

在实验时间内各免疫指标呈峰值变化,但是达到峰值和趋于稳定的时间不具有同步性。

血细胞数量至1d时达到最低值,3d或9d后保持稳定,且在实验温度范围内与温度呈正相关性;酚氧化酶活力至1d时达到最高值值,3d或6d后趋于稳定,之后除了温度为18V的处理组明显高于对照组外,其它各处理组与对照组差异不显著:溶菌活力在第12h或1d时达到最低值,3d后各处理组趋于稳定,其中向高温突变的组与对照组差异不显著,向低温突变的组与对照组差异显著。

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Hultmark 等人的改进方法测定溶菌酶(LSZ)活性,
血球计数板法测定总血淋巴细胞密度( THCs)
离体淋巴细胞的培养技术的不成熟,在短时间内离 体血淋巴细胞的生物学活性就会丧失,因此离体细 胞的吞噬功能检测及细胞毒活性氧的检测结果重复 性差
一些酶指标要能科学准确反映机体的免疫水平,仍存在 两个重要的问题有待解决;
在致病原的人为攻击下,免疫水平高的动物表现为延迟死 亡或低死亡率或高的半致死浓度
但进行一次成功的攻毒实验相对较耗时
尽管有多种指标已被用于衡量甲壳动物的免疫水平, 但是,由于某些相关的基础研究还不十分完善,如 何运用这些指标正确科学评价甲壳动物的免疫状态, 在实际评价中仍有待于进一步的提高。主要表现在 如下方面:
THCs和DHCs是近几年国外使用较多的一个衡量甲壳 动物的免疫状况的指标
但研究也发现,甲壳动物的THCs和DHCs水平容易受 正常蜕皮周期,理化条件,营养水平等因素的影响 而发生较大的变异
1、酚氧化酶活力(APO)及酚氧化酶原(AproPO)
酚氧化酶原激活系统是甲壳动物体内重要的异物识别系统,系统 组分具有抗微生物活性免疫调理作用,促进血淋巴细胞的吞噬作 用
• 正常机体的酶活力水平没有确定,客观上给机体免疫水平的评 价带来盲目性。在很多评价中,酶活力水平高被认为是机体免 疫水平高。实际上,某些酶活力水平过高是机体非健康的生理 表现
• 在所采用的免疫水平评价指标中,很多指标(如酶)会随机体 正常生理活动(如:蜕皮)而发生变化,也给机体免疫水平的 比较评价带来难度
因此,在如何准确科学评价甲壳动物的免疫水 平,还有许多基础性的工作有待开展
在甲壳动物的基础免疫水平尚未探明之前,攻 毒试验仍是评价甲壳动物免疫力的最有说服力 的方法
1、衡量甲壳动物免疫机能的指标 2、评价甲壳动物免疫机能的注意事项
第二节 衡量甲壳动物免疫机能的指标
一、衡量甲壳动物免疫机能的指标 二、甲壳动物免疫机能衡量指标的科学应用
与评价
开展甲壳动物免疫系统和免疫机理研究目的之一:为 开展甲壳动物免疫防病提供理论基础
而选择一个合适的指标进行科学正确地评价甲壳动物 免疫状况,则是有效开展免疫防病治病的前提
迄今为止,报道用于衡量甲壳动物免疫机能的指标主要 可分四大类:
细胞吞噬过程中伴随活性氧的产生,活性氧对异物细胞有 杀伤作用
2、离体血淋巴细胞的吞噬功能的检测
丫啶橙检测法(杜爱芳,1997) ,并以血淋巴细胞的吞噬率、 吞噬指数、杀伤率和杀伤指数四指标衡量
TTC还原法(江晓路等1999) 吞噬细胞花环试验(江晓路等1999)来衡量
活体攻毒实验是最能直观反映机体综合免疫机能的实验手 段
有学者检测到对虾的血清中存在能够与人 的某些抗抗体发生作用后产生沉淀反应的 物质,通常称之为类免疫球蛋白样物质
血淋巴蛋白含量 血蓝素含量 可凝固蛋白(CP)含量 血细胞转移酶(Tgase)活力 血清溶血素 血淋巴凝固时间等指标也被尝试用于描述对虾的免
疫机能的状况
1、细胞毒活性氧
甲壳动物是较低等的无脊椎动物,种内个体的遗 传差异很大,且属于变温动物,生长过程中又存 在蜕皮等生理活动,过小的样本容量可能影响评 价的准确性
在数理统计中,当测量值的预设置信区间完全位于允许的测量误差范围之内, 测量结果能够反映群体的真实水平,即测量值具有代表性
黄嘌呤氧化法(试剂盒)测定超氧化物歧化酶(对虾体 内的ACP和ALP活性在一定时间内也均较对照组高
凝集素是甲壳动物体内又一重要的异物识别物质,血 淋巴血凝效价的大小可反映机体对非己细胞的免疫灵 敏性
甲壳动物体内存在多种抗菌肽及其他抗 微生物成分,这些物质的抗微生物作用 可用抗菌活力或溶菌活力衡量
主要病害的发生与机体免疫参数的实时变化 特征性指标的筛选 溶菌酶活性可很好的表征中国对虾抗弧菌的能力
免疫防病的根本途径是提高机体的免疫力, 提高机体免疫力的本质不是单纯提高某个免
疫指标的水平,而是提高机体免疫的灵敏 性和平衡性,即机体对侵入体内的异物能
够迅速产生充分的反应并在异物清除后能恢 复正常状态
甲壳动物的酚氧化酶活性也因环境条件、生理状态和营养水平的 不同而不同
SOD及POD都是机体内的抗氧化酶,过多的氧自由基能 导致机体免疫力下降,因此,机体SOD及POD活力能反 映机体的免疫机能
甲壳动物的SOD或POD活性也受环境、营养等因素的影响 而发生变化
患病对虾血清和小颗粒细胞内ACP及ALP阳性反应 的产物增多
(一)、总血淋巴细胞密度和分血淋巴细胞密度 (二)、免疫相关酶的活性及血淋巴细胞分泌物水平 (三)、体外血细胞吞噬功能检测 (四)、活体攻毒试验
血淋巴细胞是甲壳动物的免疫系统的核心组分,
甲壳动物所具有的三种血淋巴细胞(透明细胞,小颗粒细胞, 大颗粒细胞)在机体免疫防御中所起的作用不同
血淋巴中总淋巴细胞密度(THCs)和分淋巴细胞的密度 (DHCs)在一定程度上反映了机体的免疫应激能力或健康状 况
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