乳腺生物反应器的相关技术及前景展望
动物乳腺生物反应器的研究概况
动物乳腺生物反应器的研究概况摘要：转基因动物乳腺生物反应器是利用动物乳腺特异性启动子调控元件指导外源基因在乳腺中特异性表达，并从转基因动物乳汁中获取重组蛋白。
近年来，生物学和分子生物学研究领域的成就促进了该技术的蓬勃发展。
本文简要概述了转基因动物乳腺生物反应器的基本概念、原理、特点及应用，并重点阐述了其研究现状及前景，从而探讨其存在的问题。
关键词：转基因动物；乳腺生物反应器；进展Abstract：Mammary gland bioreactor of transgenic animals is a useful biological technology, which expresses foreign genes under the direction of special promoters of the mammary gland as regulating components in the mammary gland and produces functional pharmaceutical proteins in milk．In recent years，achievements of biology and molecular biology accelerate the development of this technology. This paper briefly reviews the basic concepts, principle, chara- cteristics and applications of the mammary gland bior- eactor of transgenic animals，especially summarizing its current research status and bright future，meanwhile discusses the problems existed．Key words:transgenic animals；mammary gland bioreactor；progress前言21世纪是生命科学突飞猛进的时代，生命科学在人类生活中占有极为重要的位置。
动物乳腺生物反应器
动物乳腺生物反应器黄泠淇 16302010054技术原理乳腺生物反应器的原理是应用重组DNA技术和转基因技术,将目的基因转移到尚处于原核阶段(或1～2细胞的受精卵)的动物胚胎中,经胚胎移植,得到转基因乳腺表达的个体,其乳腺组织即可分泌生产目的产品进入奶中。
在构建乳腺表达的外源基因时,外源基因在乳腺特异性表达需要乳蛋白基因的一个启动子和调控区,即要有一个引导泌乳期乳蛋白基因表达的序列,这样才能将外源基因置于乳腺特异性调节序列控制之下,使其在乳腺中表达,再通过回收奶得到目的蛋白。
转基因动物乳腺生物反应器建立后尚需进一步鉴定。
可分别从DNA，RNA及表达的目的蛋白等不同水平进行检测，从而确保能得到具有生物活性的目的蛋白。
目的蛋白的分离和纯化的基本路线可以分为：收集转基因动物奶液，离心去脂肪，酸处理去除酪蛋白，盐析、透析、超滤，以及各种层析技术来提纯，最后得到成品。
技术应用工业上，动物乳腺生物反应器主要应用于生产活性蛋白。
大量抗体，抗生素，疫苗被成功生产出来。
腺反应器生产的抗胰蛋白酶，凝血因子更是帮助无数遗传病患者摆脱病痛。
同时经营养改造过的乳腺生产的奶液可以为免疫系统功能不全的人和接受放疗化疗的病人提供优良的营养物质和安全的药物服用途径。
动物乳腺生物反应器除了用于大量生产蛋白质，还是研究基因的理想工具，利用这项技术能够方便研究基因功能，整合，翻译，修饰，表达，调控等。
也为其他生物反应器的研究和商业应用开辟道路。
技术优点1.动物乳腺的表达可进行翻译后修饰，如信号肽切除，蛋白的糖基化，羟基化及羧基化等，相比原核生物生产的外源蛋白，这种方法生产的蛋白具有生物活性和稳定性。
2.这种蛋白表达体系简单，一旦建立转基因动物乳腺生物反应器，只要简单地饲养好动物，利用动物乳腺的高表达能力，即可源源不断地得到贵重的药物蛋白。
3.转基因动物乳腺反应器的生产过程是一个畜牧业过程，饲养费用低廉，对环境没有污染，有广阔的发展前景。
动物乳腺生物反应器的现状和趋势
（ 国农 业 大 学农 业生 物 技 术 国 家 重 点 实 验 室 ． 物科 技 学 院 ． 京 Ｉ￣９ 中 动 北 Ｏ ４
摘
要
利 用转 基 因家 畜 的乳 腺 生 产 人 类 重 组 蛋 白 ， 可 高 效 获 得 安 全 、 量 的药 用 蛋 白 本 文 针 对 乳 腺 生 物 反 足
维普资讯
Ｉ 卷 ２ 期 ８ ２０ ０ ２年 ３ 月
生物工程学 Nhomakorabea报
Ｖｏｌ ８ ｌ
Ｎｏ． ２
Ｃ ｉｅ ｏ ｒ ｌｆＢｏ ｃｎ ｌ ｙ ｈ ｓ Ｊ ＊ｎ ｉ ｅ ｏ ｇ ｎ ｅ ｔａ ｏ ｔｈ ｏ
Ｍ ａｃ ２ ２ ｒｈ ∞
动 物乳腺 生物反 应 器 的现 状 和趋 势
化 乳 品生 产 和 加 工 早 已 实 现 机 械 化 ， 成 熟 的 技 术 和 设 有
容 是 通 过 各 种 转 基 技 术 ， 将乳 腺 组 织 特异 性启 动 子驱 动 的 外源基因 ， 在动 物乳 腺 组 织 高 效 表 达 乳 汁 中 生 产 目的 产 在 品 。 １８ ９７年 ， 学 家 酋先 从 转 基 因 小 鼠 的乳 汁 中获 得 了』 类 科 、 ｔＡ蛋 白 （ 织 型纤 藩 酶 原 激 活 剂 ） 此后 十 多年 的 科 学 实 Ｐ 组 … 践证 明， 动物 乳 腺 有 广 泛 表达 外 源 基 因 的能 力 ， “ 生 产 各 可 种 蛋 白质 和 多 肽 ． 小 分 子Ｊ＝ 大 分 子 蛋 白 质 ， 分 泌 型 蛋 Ｉ到 ６ 从 白到 内膜 蛋 白 多 聚 蚩 白 、 价 抗 体 等 显 示 动 物 乳 腺 是 二
一
施 ． 过 传 统 的 制 酪 技 术 去 除奶 中 酪 蛋 白 之 后 ， 通 目的 产 品 留
动物乳腺生物反应器
动物乳腺生物反应器动物物乳腺生物反应器是基于转基因技术平台，使外源基因导入动物基因组中并定位表达于动物乳腺，利用动物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力，在动物的乳汁中生产一些具有重要价值产品的转基因动物的总称。
乳腺生物反应器生产的外源蛋白种类广泛，从小分子肽到大分子复杂蛋白质，从生物活性酶到抗体、病毒抗原蛋白均可有效生产。
利用动物乳腺生物反应器生产重组蛋白的优点有：（1）生物活性高，无污染。
动物乳腺有完整的蛋白质翻译后修饰系统，包括糖基化、磷酸化、羧基化等，从而保证了产品的高生物活性。
（2）易分离提纯，成本低廉。
现有的一些人药物蛋白之所以昂贵，除了原料难以收集外，另一原因是分离提纯极为困难成本极高。
而动物乳腺生物反应器的产物直接经乳汁分泌出体外，只需用常规方法除去酪蛋白沉淀乳清，再经层析即可得到重组蛋白，已经建立起完整的分离纯化生产程序。
（3）产量高。
外源基因在动物乳腺中的表达量可以达到每升几克到几十克，小群转基因大家畜的产量即可满足全世界市场的需求。
动物乳腺生物反应器已经成为生物技术领域最具开发应用前景的尖端方向。
动物乳腺生物反应器发展简史转基因动物的研究始于20世纪80年代初。
1980年，Gordon等将重组DNA用显微注射法导入小鼠受精卵原核，首次获得了整合有外源基因的小鼠。
1982年，Palmiter等将大鼠生长激素基因显微注射到小鼠受精卵中，首次获得了体重为正常小鼠2 倍以上的“超级小鼠”并提出了从转基因动物中提取药物蛋白的设想。
此后几年的许多研究奠定了转基因动物技术体系的基础，但真正的乳腺生物反应器研究则始于1987 年Gordon 等的工作，他们将组织型纤溶酶原激活剂（tPA）与小鼠乳清酸蛋白（WAP）基因的启动子构成重组基因，成功地培育出了37只在乳汁中能表达tPA 的转基因小鼠，同年，世界上第一只能从乳汁中分泌α1-抗胰蛋白酶（AAT）的转基因绵羊在英国罗斯林研究所诞生。
从此，开始了乳腺生物反应器的实用性研究。
药用蛋白质乳腺生物反应器的制作技术及新方法进展
生物技术通报BIOTECHNOLOGYBULLETIN2009年增刊·技术与方法·1前言蛋白质在人类个体的生长发育与健康生活方面扮演着及其重要的角色。
所有人的绝大部分蛋白质水平几乎是相同的,估计约有0.2%的调节蛋白质可能有差别。
这几十个调节蛋白质在人的生命活动中起着重要的作用,对人的神经系统、血液循环系统、消化代谢系统、免疫系统等的正常活动发生重要的影响。
这些调节蛋白质由于遗传、环境或年龄等因素引起基因突变、缺失、或表达不正常,就会导致人类疾病。
因此这些蛋白质成了治疗这类治病的不可缺少的药物。
然而,这些天然蛋白质往往含量极低,提取极其困难,价格非常昂贵,令人望而生畏。
例如,美国红十字会两年前公布的用于治疗血友病的蛋白药物Factor VIII (F8)[1]价值每克为收稿日期:2009-02-26作者简介:吴应积(1946-),男,内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室特聘教授,研究方向:精原干细胞基因工程;E-Mail :wuyj1211@药用蛋白质乳腺生物反应器的制作技术及新方法进展吴应积张学明杨东山罗奋华旭日干（内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室，呼和浩特010021）摘要：用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白已经构成了现代生物技术的一个重要领域。
与其他的生物工程方法比起来，用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白具有更多的优点。
这一生物技术的实际应用依赖于基因的时空表达调控操作和可靠的转基因动物制作方法。
综述了这一技术的优点，概括描述了了乳腺生物反应器表达载体的构建方法，及转基因动物的制作方法。
讨论了这些方法的优缺点及技术改进的发展方向，特别是介绍了最近出现的、有研究和应用价值的用精原干细胞制作转基因动物的方法。
关键词：乳腺生物反应器载体构建转基因技术Progress in Technologies and Novel Approach for PreparingMammary Gland Bioreactors ProducedPharmaceutical ProteinsWu YingJi Zhang Xueming Yang Dongshan Luo Fenhua Xu Rigan（Key Laboratory of China Education Ministry for Research of Mammal Reproductive Biology and Biotechnology Inner MongoliaUniversity,Hohhot 010021）Abstract ：Production of pharmaceutically human valuable proteins using mammary gland bioreactors constitutes an important field of modern pare with other bioengineering technologies,using mammary gland bioreactor to produce the proteins possess more advantages.The practical applications of the biotechnology depend on regulation of the developmental stage and tissue specific gene expression and reliable techniques to prepare transgenic animals.In the present review,the advantages of this technology are described;the methods for constructing the expression vectors of mammary gland bioreactors and for creating transgenic animals are outlined.The strongpoint and shortcoming as well as the progress orientation of each method are discussed.Especially,newest emerged technology for creating transgenic animals by using spermatogonial transplantation,which is valuable in research and application,are introduced.Key words ：Mammary gland Bioreactor Vector construction Cransgenic technology2009年增刊吴应积等:药用蛋白质乳腺生物反应器的制作技术及新方法进展2,900,000美元,这也许是地球上最贵的物品。
乳腺生物反应器技术与前景
乳腺⽣物反应器技术与前景乳腺⽣物反应器技术与前景前⾔：暑期讲座班上听了唐克轩教授对于⽣物反应器的介绍后，本⼈对乳腺反应器有了很⼤兴趣。
于是假期整理了关于乳腺反应器的相关资料，作为学习报告。
摘要:报告分析了乳腺⽣物反应器的发展背景、研究概况；从定义、原理、建⽴乳腺反应器的基本⽅法⽅⾯详细的讲解了相关知识；从现在应⽤的相关⽣物⼯程技术⼊⼿，分析了各种⽅法的可借鉴优点以及存在的不⾜，并且提出了可以解决的办法；展望将来乳腺⽣物反应器的科研前景。
关键词：乳腺⽣物反应器；⽣物⼯程；转基因技术1国际国内背景1.1 ⽣物⼯程发展在新技术⾰命的影响下，传统的化学药物模式正在为⽣理药学模式逐步替代，预⽰着医药⼯业体系的划时代变⾰。
在⽣物⼯程药物的⽣产中，基因⼯程技术的运⽤显⽰出了其⽆与伦⽐的优越性：基因⼯程技术能明显提⾼⽣化药物的⽣产效率；基因⼯程提供了⼤规模制取传统技术难以制备的⼈体内活性物质的技术；基因⼯程药物对过去难以治疗的⼀些病症有特殊效果。
基因⼯程药物⼀般毒副作⽤较⼩。
1.2 乳腺⽣物反应器的研究概况1980年Gordon ⽤显微注射法将外源胸苷激酶基因转⼊⼩⿏基因组,⾸开转基因⼩⿏之先河。
1982年,Ｐalmiter 等成功地获得了转⼈⽣长激素的“硕⿏”轰动了整个⽣命科学领域。
1987年Ｇordon 将⼈组织纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA与⼩⿏乳清酸蛋⽩(WAP)基因启动区构建融合表达结构,⾸建乳腺⽣物反应器⼩⿏模型。
1991年Wright等在⽺的乳腺中表达了⼈抗胰蛋⽩酶基因，且其含量⾼达35g/L。
此后，转基因动物乳腺⽣物反应器的研究进⼀步深⼊，相继获得了多种珍贵蛋⽩，⼈α1-抗胰蛋⽩酶、⼈尿激酶、⼈凝⾎因⼦Ⅸ等诸多重要蛋⽩在转基因动物中业已获得有效表达,显⽰出乳腺⽣物反应器美好的应有前景。
2 乳腺⽣物反应器2.1 乳腺⽣物反应器定义及特点动物乳腺⽣物反应器是基于转基因技术平台，使外源基因导⼊动物基因组中并定位表达于动物乳腺，利⽤动物乳腺天然、⾼效合成并分泌蛋⽩的能⼒，在动物的乳汁中⽣产⼀些具有重要价值产品的转基因动物的总称。
乳腺生物反应器的原理和概念
乳腺生物反应器的原理和概念
乳腺生物反应器是一种用于研究乳腺组织生物学活性的实验装置。
其原理是将乳腺组织或细胞培养于三维支架中，提供适宜的环境条件，以模拟体内乳腺组织的微环境，使其能够维持其生物反应，进而进行生物学研究。
具体而言，乳腺生物反应器的原理包括以下几个方面：
1. 支架结构：乳腺组织被培养于三维支架中，该支架可以提供细胞附着和生长的支持，并且能够模拟组织的结构和力学环境。
2. 细胞培养条件：为了维持乳腺组织的生物反应，需要提供适宜的培养条件，包括培养基、营养物质、氧气和二氧化碳浓度等。
3. 生理刺激：乳腺组织生物反应器可以提供一定的生理刺激，例如适当的流动剪切力、机械压力、电刺激等，以模拟体内的生理环境，促进乳腺组织的生物学功能。
通过乳腺生物反应器，可以实现对乳腺组织生物学的研究和探索。
例如，可以研究乳腺组织在不同环境条件下的生长、分化、迁移、转化等生物学过程，进而深入了解乳腺组织的发育和疾病发生机制。
此外，乳腺生物反应器还可以用于药物筛选和新药研发，以提高乳腺癌的治疗效果和优化乳腺重建技术。
总之，乳腺生物反应器作为一种模拟体内乳腺组织生物学环境
的实验装置，可以为乳腺组织相关研究提供可靠的平台，并在生理和病理状态下模拟和研究乳腺组织的生物学反应。
乳腺反应器应用的技术原理
乳腺反应器应用的技术原理1. 介绍乳腺反应器是一种用于研究乳腺生物学的实验设备。
它模拟乳腺的生理环境，包括细胞生长、分化、迁移等过程。
乳腺反应器的应用在乳腺癌研究、乳腺组织工程等方面具有重要意义。
2. 技术原理乳腺反应器的技术原理基于以下几个方面：2.1 细胞培养乳腺反应器使用细胞培养技术，通过培养乳腺上皮细胞、间质细胞等乳腺组织相关的细胞种类，模拟乳腺生物学过程。
细胞培养需要一定的培养基和培养条件，以提供细胞生长所需的养分和环境。
2.2 恒定流体环境乳腺反应器模拟乳腺的内部流体环境，通过流体的输送和流动控制，为细胞提供养分和氧气，同时带走废物和代谢产物。
通过恒定流体环境，可以更加准确地研究乳腺细胞的生长、分化及相关生物学过程。
2.3 细胞-基质相互作用乳腺反应器模拟乳腺组织中细胞与基质的相互作用。
基质是乳腺组织中的非细胞组分，包含蛋白质、胶原等。
乳腺反应器中的基质可以通过特定的材料或涂层来模拟乳腺组织的基质，并提供细胞黏附和生长所需的信号。
2.4 多维环境乳腺反应器可以创造多维环境，模拟乳腺组织的复杂性。
多维环境包括三维细胞培养、流体环境和细胞-基质相互作用。
这种多维环境可以更好地模拟乳腺组织中细胞之间的相互作用和组织结构，有助于更准确地研究乳腺生物学。
3. 应用乳腺反应器的技术原理可以应用于以下领域：3.1 乳腺癌研究乳腺反应器可以模拟乳腺癌的发生、发展和转移过程，研究乳腺癌的相关机制。
通过模拟乳腺微环境，可以更深入地理解乳腺癌细胞生长、迁移和侵袭的本质，并为乳腺癌治疗提供新的策略和方法。
3.2 乳腺组织工程乳腺反应器可以用于乳腺组织工程的研究。
通过构建三维的乳腺组织模型，并在乳腺反应器中培养和分化细胞，可以实现乳腺组织的原位再生和修复。
这对乳腺缺损的修复、乳腺重建等有重要意义。
3.3 药物筛选和毒性测试乳腺反应器可以用于药物筛选和毒性测试。
通过在乳腺反应器中培养细胞并加入不同的药物或化合物，可以评估药物的疗效和毒性。
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乳腺生物反应器的相关技术及前景展望
摘要：文章分析了乳腺生物反应器的发展背景、研究概况；从定义、原理、建
立乳腺反应器的基本方法方面详细的讲解了相关知识；从现在应用的相关生物工
程技术入手，分析了各种方法的可借鉴优点以及存在的不足，并且提出了可以解
决的办法；展望将来乳腺生物反应器广阔的科研前景和巨大的经济潜力
关键词：乳腺生物反应器；生物工程；转基因技术
1国际国内背景
1.1 生物工程发展
在新技术革命的影响下，传统的化学药物模式正在为生理药学模式逐步替代，预示着医药工业体系的划时代变革。
在生物工程药物的生产中，基因工程技术的
运用显示出了其无与伦比的优越性：基因工程技术能明显提高生化药物的生产效率；基因工程提供了大规模制取传统技术难以制备的人体内活性物质的技术；基
因工程药物对过去难以治疗的一些病症有特殊效果。
基因工程药物一般毒副作用
较小。
1.2 乳腺生物反应器的研究概况
1980年Gordon 用显微注射法将外源胸苷激酶基因转入小鼠基因组,首开转基
因小鼠之先河。
1982年,Ｐalmiter 等成功地获得了转人生长激素的“硕鼠”轰动了
整个生命科学领域。
1987年Ｇordon 将人组织纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA与小鼠
乳清酸蛋白(WAP)基因启动区构建融合表达结构,首建乳腺生物反应器小鼠模型。
1991年Wright等在羊的乳腺中表达了人抗胰蛋白酶基因，且其含量高达35g/L。
此后，转基因动物乳腺生物反应器的研究进一步深入，相继获得了多种珍贵蛋白，人α1-抗胰蛋白酶、人尿激酶、人凝血因子Ⅸ等诸多重要蛋白在转基因动物中业
已获得有效表达,显示出乳腺生物反应器美好的应有前景。
2 乳腺生物反应器
2.1 乳腺生物反应器定义及特点
动物乳腺生物反应器是基于转基因技术平台，使外源基因导入动物基因组中
并定位表达于动物乳腺，利用动物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力，在动
物的乳汁中生产一些具有重要价值产品的转基因动物的总称。
乳腺生物反应器生
产的外源蛋白种类广泛，从小分子肽到大分子复杂蛋白质，从生物活性酶到抗体、病毒抗原蛋白均可有效生产。
2.3乳腺生物反应器的应用现状
乳腺生物反应器的应用主要体现在四个方面：建立转基因动物生物反应器模型；生产药用珍稀蛋白；提高乳汁的营养价值，并降低有达物质的含量，如导入
乳铁蛋白基因以提高乳铁蛋白在乳中的含量，导入溶酶基因以降低乳中细菌的含量；改变乳汁的组成成分，使其性质更接近人乳，提高乳汁的应用价值。
2.4表达载体}
制备乳腺生物反应器的关键是保证目的蛋白特异性在乳腺中的高效表达，传
统表达载体都是选用某种乳蛋白基因的调控序列作为启动子元件。
目前，已经克
隆并用作构建载体的乳蛋白基因主要有β-乳球蛋白（BLG）基因、aS1-酪蛋白基因、β-酪蛋白基因、乳清酸蛋白（WAP）以及乳清白蛋白基因。
3 常用的转基因技术及其应用前景
3.1 常用的转基因技术种类
转基因技术是制备乳腺生物反应器的核心技术。
目前制备动物乳腺生物反应
器的转基因方法除了显微注射法外，还有逆转录病毒介导的转基因、精子介导的
转基因和胚胎干细胞(ES细胞)介导的转基因等。
3.1.1 显微注射技术（microinjection）
以显微注射法转外源基因没有长度上的限制，目前已证明数百kb之DNA片
段均可以成功产制出转基因动物。
但随机整合可能破坏重要的内源性DNA 序列或激活细胞的致癌基因；产生的转基因动物常常是嵌合体；不能在胚胎早期确定性
别等缺点。
3.1.2 逆转录病毒介导法（RMGT）
逆转录病毒介导的基因技术，是目前将外源基因导入细胞的最有效的方法。
此法优点在于转染谱广，可感染包括人体在内的多种动物细胞类型，一次可感染
大量细胞，转染率高达100%。
但载体的滴度较低，且此载体容纳的外源基因量
较少，不利于较大的基因的插入。
3.1.3 精子介导的转基因
包括精子载体技术和胞内精子注射技术(ICSI)。
前者尚未得到多数科学家的认可；后者于1999年由Perry等建立，转基因效果尚不确切。
3.1.4 胚胎干细胞介导的转基因
该方法是从胚泡期胚胎的内细胞群中分离细胞，培养这些细胞，并用外源基
因进行转染，外源基因通过随机插人或同源重组的方式整合到干细胞的基因组中；通过抗生素筛选、富集被转染的细胞，把被转染的细胞转移进感受态胚囊，将其
移人假孕个体的体内，从而获得转基因动物。
4 转基因技术目前存在的问题
核移植技术的常规化需要在众多方面加以改进，特别是针对围产期胚胎死亡
和细胞体外长期培养对克隆胚胎造成的不利影响，说明对早期胚胎发生和核移植
中供体细胞核与受体卵母细胞质的细胞周期协调关系的研究还须进一步阐明。
5前景展望
目前成功的实例说明体细胞打靶和核移植相结合制备乳腺生物反应器是发展
的重要趋势。
许多国家政府和大型制药企业竞相投入巨资资助乳腺生物反应器产
品的开发和生产，使乳腺反应器研制和产业化呈现日益加速的趋势。
利用乳腺反
应器生产营养活性蛋白，如需求量极大的护肤品中的活性蛋白，或者改造奶质而
使其具备营养和药用双重功能，或者直接生产口服生物制品，都具有极大的市场
潜力。
相信乳腺生物反应器产业不仅会成为有高额利润回报的新型行业，而且将
会带动整个国民经济的发展，形成全新的产业结构模式。
因此，我们应当抓住机遇，增加投资力度，大力兴办乳腺反应器产业，以在未来的生物高技术竞争中夺
得主动权。
参考文献：
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[4] Wight.G..High expression of active human α1-amtitrypsin in the milk of transgenics sheep[J].1991,9:830-834
[5] 孙怀昌，陈刚，张磊，宋红芹，施伟庆．动物乳腺特异表达载体的构建及其表达特性研究[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版),2003,24(4)：1-4.
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[7] 张克忠，邱信芳．乳腺生物反应器的基础研究—载体构建，检测及反应器的建立方法[J]．国外医学遗传学,1997,20（6）：314-319.。