鼠疫实验室检测技术
鼠疫实验室检测技术PPT文档26页
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
鼠疫实验室检测技术
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生
鼠疫诊断问诊十条内容
鼠疫诊断问诊十条内容引言鼠疫是一种由鼠疫杆菌引起的严重传染病，可以导致高热、淋巴结肿胀和严重的呼吸道症状。
及时进行鼠疫的诊断和问诊对于快速确定病情和采取有效治疗非常关键。
本文将介绍鼠疫的诊断方法和问诊事项，以帮助医生和患者更好地了解和应对这一疾病。
诊断方法1. 临床症状鼠疫主要表现为高热、淋巴结肿胀和呼吸道症状。
患者常有寒战、头痛、恶心和呕吐等症状。
淋巴结肿胀通常发生在腹股沟、腋窝和颈部等部位，可伴有局部红肿和疼痛。
呼吸道症状包括咳嗽、咳痰和呼吸困难等。
2. 实验室检查鼠疫的诊断需要通过实验室检查来确认。
常用的实验室检查包括：•血液培养：用于分离和鉴定鼠疫杆菌。
•淋巴结活检：可观察到鼠疫杆菌的特征结节形成。
•血清学检测：检测患者的血清中是否存在鼠疫抗体，包括鼠疫抗原和鼠疫抗体。
问诊事项1. 发病情况医生需要详细了解患者的发病情况，包括发病时间、症状的严重程度和发展情况等。
这对于确定疾病的阶段和采取相应的治疗措施非常重要。
2. 接触史医生需要询问患者是否有过与疫区人员或鼠类接触的情况。
鼠疫的传播主要是通过被感染的跳蚤叮咬或直接接触感染动物的分泌物、组织或血液而引起的。
了解患者的接触史有助于确定感染途径和采取相应的预防措施。
3. 呼吸道症状询问患者是否有咳嗽、咳痰和呼吸困难等呼吸道症状。
这些症状有助于确定疾病的类型和严重程度，并指导后续的治疗方案。
4. 体征检查医生需要对患者进行全面的体征检查，包括测量体温、观察淋巴结肿胀和检查呼吸道情况等。
这些检查有助于确定病情和指导治疗。
5. 辅助检查除了实验室检查外，医生还需要根据患者的具体情况进行其他辅助检查，如X线检查、CT扫描和超声检查等。
这些检查可提供更详细的信息以辅助诊断和指导治疗。
6. 身体状况评估鼠疫是一种高传染性的疾病，医生需要评估患者的身体状况和免疫功能，以确定其是否需要采取特殊的治疗措施或进行隔离。
7. 既往病史了解患者的既往病史，特别是是否有其他传染病或免疫系统相关疾病，有助于确定病情和指导治疗。
布病检测方法
布病检测方法布病，又称为鼠疫，是一种由鼠疫耶尔森菌引起的传染病，主要通过啮齿类动物传播给人类。
布病的早期症状包括发热、头痛、肌肉疼痛等，如果不及时治疗，可能会导致严重的并发症甚至死亡。
因此，及时准确地进行布病检测对于预防和控制疾病的传播至关重要。
本文将介绍几种常见的布病检测方法，帮助大家了解如何进行有效的检测和诊断。
1. 血清学检测方法。
血清学检测是目前常用的布病检测方法之一。
通过检测患者的血清中是否含有鼠疫耶尔森菌的特异抗体，可以确定是否感染了布病。
这种方法的优点是操作简便、结果快速，可以在短时间内得出初步诊断。
但是，血清学检测方法也存在一定的局限性，例如在感染初期可能无法检测出抗体，容易产生假阴性结果。
2. 细菌培养检测方法。
细菌培养检测是通过将患者的组织样本或体液样本进行培养，观察是否能够分离出鼠疫耶尔森菌来进行诊断的方法。
这种方法的优点是可以直接获得病原体，对于确诊布病具有重要意义。
然而，细菌培养检测需要较长的培养周期，通常需要数天甚至数周才能得出结果，且操作复杂、耗时。
3. 分子生物学检测方法。
分子生物学检测方法是近年来发展起来的一种新型检测方法，通过检测患者组织样本或体液样本中的鼠疫耶尔森菌的DNA或RNA来进行诊断。
这种方法具有高度的特异性和敏感性，能够快速准确地检测出病原体，对于布病的早期诊断具有重要意义。
然而，分子生物学检测方法需要专业的实验室设备和技术支持，成本较高，限制了其在临床上的推广应用。
4. 免疫组化检测方法。
免疫组化检测方法是通过检测患者的组织样本中是否含有鼠疫耶尔森菌的特异抗原来进行诊断的方法。
这种方法具有较高的特异性和准确性，可以帮助医生进行准确的病理诊断。
然而，免疫组化检测方法需要专业的实验室设备和技术支持，且操作复杂，不适合于临床快速诊断。
总结。
布病的及时检测对于预防和控制疾病的传播至关重要。
目前，血清学检测、细菌培养检测、分子生物学检测和免疫组化检测是常用的布病检测方法。
实验室判定鼠疫标准
实验室判定鼠疫标准# 实验室判定鼠疫标准## 一、前言嘿，朋友！你知道鼠疫吗？这可是个相当厉害的传染病呢。
在历史上，鼠疫那可是造成了不少的大灾难。
现在虽然医疗水平进步了很多，但鼠疫依然是我们需要高度重视的疾病。
实验室判定鼠疫标准就像是一个特殊的“侦探指南”，它能帮助科学家和医生们准确地发现鼠疫病菌的踪迹，搞清楚一个人是不是真的感染了鼠疫。
这标准可是非常重要的，就像一把精确的尺子，能够准确测量出鼠疫的存在与否，这样才能及时采取措施，防止鼠疫的传播，保护大家的健康。
## 二、适用范围（一）临床疑似病例的确诊比如说，有一个病人出现了高热、淋巴结肿大、咳嗽等症状，这些症状有点像鼠疫，但又不能确定。
这时候，实验室判定鼠疫标准就派上用场了。
医生会采集病人的血液、痰液或者淋巴结穿刺液等样本送到实验室，按照这个标准进行检测，如果符合标准中的判定，那就可以确诊为鼠疫病例了。
（二）疫情监测在一些鼠疫可能流行的地区，像草原、山区等地，卫生部门会定期进行疫情监测。
他们会捕捉一些老鼠或者其他可能携带鼠疫病菌的小动物，采集它们的组织或者粪便样本。
实验室就会依据判定鼠疫的标准来检测这些样本，看看这个地区是否存在鼠疫病菌的活动，就像给这个地区做一个“健康体检”一样。
（三）鼠疫研究对于研究鼠疫的科学家来说，这个标准就像是他们的研究手册。
不管是研究鼠疫病菌的生物学特性，还是探索新的治疗方法，准确判定鼠疫是基础。
科学家们在实验室里操作各种实验，根据这个标准来确定自己研究的样本是否为鼠疫病菌，确保研究方向的准确性。
## 三、术语定义（一）鼠疫耶尔森菌这是导致鼠疫发生的罪魁祸首，是一种细菌。
你可以把它想象成一个小小的、坏坏的微生物小怪兽。
它长得有点像小短杆，在显微镜下才能看到它的模样。
这种细菌特别狡猾，它能通过老鼠身上的跳蚤传播给人类，进入人体后就开始捣乱，引起各种严重的症状。
（二）血清学检测简单来说，就是通过检测血液中的一些成分来判断是否感染鼠疫。
鼠疫病原学检验的实验室质量控制
汇报人：可编辑 2024-01-10
目 录
• 引言 • 鼠疫病原学检验的基本原理 • 实验室质量控制的基本原则 • 鼠疫病原学检验的实验室质量控制 • 实验室质量控制的实践和案例分析 • 结论与展望
01
引言
目的和背景
鼠疫是一种由鼠疫杆菌引起的严重传 染病，具有高度传染性和致死性。实 验室质量控制是确保鼠疫病原学检验 准确性和可靠性的关键环节，对于疫 情的防控和诊断具有重要意义。
免疫学检测法
利用抗原-抗体反应的原理，通过检测疑似样本中的鼠疫菌抗原或抗 体，以确定是否感染鼠疫。
核酸检测法
通过检测疑似样本中的鼠疫菌核酸，以确定其是否存在和种类。该方 法具有较高的灵敏度和特异性。
细菌学检验法
通过对疑似样本进行细菌学检验，观察其形态、染色、生化反应等指 标，以确定是否为鼠疫菌。该方法较为传统，但准确度高。
未来将进一步推广和应用新的检测技术和方法，提高检测的灵敏度和特 异性，降低假阳性率和假阴性率，为鼠疫防控提供更加准确、可靠的检
测结果。
实验室质量控制将更加注重与国际标准和规范的接轨，加强国际合作与 交流，共同应对全球鼠疫防控的挑战。
THANKS
感谢观看
03
实验室质量控制的基本 原则
实验室质量控制的定义和重要性
01
实验室质量控制是指通过一系列 技术和程序，确保实验室检测结 果的准确性和可靠性。
02
实验室质量控制对于保证检测结 果的准确性和可靠性，以及维护 实验室声誉和客户信任至关重要 。
实验室质量控制的基本原则和方法
标准化
确保实验操作和检测方法的标准化， 遵循国家和国际标准，以及行业最佳 实践。
鼠疫实验室检测技术
吸水纸
C区：羊抗 小鼠Ig
免疫荧光技术(IFT)
标记物-荧光素(如异硫氰荧光素 Yersinia pestis 免疫荧光染色 FITC)
荧光素标记抗体检测相应抗原-直 接法：如FITC-FIMcAb为异硫氰 酸荧光黄标记鼠疫F1单克隆抗体。
方法：固定好的玻片标本用1%牛 血清PBS浸洗5分钟，流水冲洗。 用FITC-FIMcAb适量（0.2ml）荧 光染色，室温作用30分钟，流水 冲洗。干燥，荧光显微镜油镜观 察，鼠疫菌染上翠绿色荧光
鼠疫噬菌体试验
➢ 在培基上密集平行划线培养鼠疫菌，鼠疫噬菌体滴 于上端划线中部，直立平板，使噬菌体液垂直划线 自然流下，置20℃培养24h,有明显的噬菌带。
➢ 在18~22℃鼠疫噬菌体只能裂解鼠疫菌而不裂解假 结核菌，具有较强的专一性(噬菌作用具有种的特异 性)，是鼠疫细菌学诊断中特异的鉴定方法之一。
目标基因
引物序列
产物长度
fra 1F 5’-GGAACCACTAGCACATCTGTT-3’
249 bp
1R 5’-ACCTGCTGCAAGTTTACCGCC-3’ pla 2F 5’-ACTACGACTGGATGAATGAAAATC-3’ 456 bp
2R 5’-GTGACATAATATCCAGCGTTAATT-3’
鼠疫菌染色方法有革兰氏染色（菌体染成红 色）、美兰染色（菌体染成兰色，两极浓染明 显）、姬姆萨染色（菌体染成色，荚膜染成色）
鼠疫菌染色检查(脏器压印片)
革兰氏染色
美兰染色
鼠疫菌染色
鼠疫菌涂片的革兰氏染色
鼠疫菌染色检查
Wayson stain(魏申氏染 荚膜染色—墨汁负染色 色)呈现的两极浓染特 征
鼠疫实验室检测技术共26页
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
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71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
传染病学-鼠疫
鼠 疫Plague鼠疫n是鼠疫耶尔森菌引起的烈性传染病。
n传染性强，病死率高，属国际检疫传染病和我国法定的甲类传染病。
n我国近十年人间鼠疫病例数逐年增多，以腺鼠疫为主，需引起高度重视。
【病原学】——鼠疫耶尔森菌（一）形态n属肠杆菌科，耶尔森氏菌属，革兰染色阴性。
n外观为两端钝圆，两极浓染的椭圆形小杆菌。
长约1～1.5μm，宽约0.5～0.7μm，有荚膜，无鞭毛、无芽胞。
【病原学】（二）培养n普通培养基n适宜温度为28～30℃n酸碱度为pH6.9～7.2n培养16～18h，用显微镜观察可见一层形状不一，浅灰色小菌落，是培养初期的菌落特征。
24～48h后可形成直径0.1～0.2mm，圆形，中心突出，透明的浅灰色小菌落。
72h后直径4mm。
【病原学】（三）抗原n荚膜FI抗原n毒力V/W抗原（四）两种毒素n鼠毒素或外毒素：毒性蛋白质n内毒素：脂多糖鼠疫耶尔森菌毒力有关抗原的编码基因【病原学】（五）抵抗力n对外界抵抗力较弱，对光、热、干燥及一般消毒剂均敏感。
n日光直射4～5小时即死，加热55℃ 15分钟或100℃ 1分钟、5%苯酚、5%甲酚皂，0.1升汞、5%～10%氯胺均可将病菌杀死。
n但在潮湿、低温与有机物内存活时间则较久，在痰和脓液中可存活10～20天，在蚤粪中可存活1个月，在尸体中可存活数周至数月。
【流行病学】（一）传染源主要传染源鼠类和其他啮齿动物主要储存宿主黄鼠属和旱獭属次要储存宿主褐家鼠、黄胸鼠（也是人间鼠疫的主要传染源）可能传染源猫、羊、兔、骆驼、狼、狐等（二）传播途径n动物和人间鼠疫的传播啮齿动物→鼠蚤→人鼠蚤叮咬是主要传播途径。
痰液、脓液或病兽的皮、血、肉n呼吸道飞沫传播人-飞沫-人之间肺鼠疫患者【流行病学】（三）易感人群n人群对鼠疫普遍易感，无性别年龄差别，存在一定数量的隐性感染。
n病后可获持久免疫力。
n预防接种可获一定免疫力，可降低易感性。
【流行病学】（四）流行特征n流行情况非洲、亚洲、美洲发病最多。
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鼠疫菌染色检查(脏器压印片)
革兰氏染色
美兰染色
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鼠疫菌染色
鼠疫菌涂片的革兰氏染色
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鼠疫菌染色检查
Wayson stain(魏申氏染 荚膜染色—墨汁负染色 色)呈现的两极浓染特 征
➢ 肉眼观察结果并用酶标仪检测每孔的 吸光度值(A)
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胶体金免疫层析法(GICA)
检测鼠疫菌特异性抗原、抗体的金标技术以 GICA广泛用于实践。基本原理均为夹心法。
双抗体夹心法测抗原：固定于NC膜上的单抗 (F1McAb)+标本中待测抗原(F1Ag)+金标记的另 一株单抗(金标-F1McAb)显色。
双单抗夹心法： F1-McAb包被反应 板，加入标本28℃反应1.5h洗板，加 入HRP-F1McAb 28℃反应1h洗板， 加入底物OPD蔽光反应30min后加终 止液。
➢
间接法： 已知F1抗原包被反应板， ➢ 加标本37℃反应1h洗板，加入酶标 二抗37℃反应1h洗板，加入底物 (如OPD或TMB)蔽光反应30min显 色后加终止液。
鼠疫F1抗原检测
鼠疫F1抗体检测
1.反向血球凝集试验(RIHA) 1.间接血球凝集试验(IHA)
2.酶联免疫吸附试验(ELISA) 2.酶联免疫吸附试验(ELISA)
3.胶体金免疫层析法(GICA) 3.胶体金免疫层析法(GICA)
4.免疫荧光技术(IFT)
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间接红血球凝集试验(IHA)
鼠疫菌特异性F1抗原致敏经单宁酸鞣化 处理的醛化绵羊红血球，制备成F1抗原 致敏血球，检查鼠疫特异性F1抗体。试 验方法和结果判定均为常规操作。
➢ 鼠疫噬菌体试验可快速诊断鼠疫菌。对被检材料作 细菌分离培养的同时作噬菌体裂解试验，20h左右 即可获得结果。
➢ 分离到鼠疫噬菌体，可以间接判定检材中存在鼠疫 菌。
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鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验
典型鼠疫菌菌落形态 噬菌带
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鼠疫菌培养及鼠疫噬菌体试验
鼠疫菌培养特征
鼠疫噬菌体试验
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三、鼠疫F1抗原、抗体检测
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二、鼠疫菌的培养特性
鼠疫菌是典型的异养菌。 鼠疫菌为需氧菌，亦为兼性厌氧菌。 鼠疫菌在普通培基上生长良好，培养的最适温度为28℃，最适
pH为6.9-7.1，发育初期的最适氧化还原电位（Eh）约为 100~150mV，接种后至少20h以上才能形成肉眼可见的菌落， 一般24~48h形成肉眼可见的小菌落。 强毒鼠疫菌对钙离子有半依赖性，缺乏时生长不良。37℃缺钙 条件下强毒鼠疫菌生长受限并释放大量Yops,表现很强的表达 和分泌毒力蛋白V抗原（LcrV）。此现象称传基因控制。 典型鼠疫菌培养18-20h光镜下呈透明的碎玻璃片状。培养24h 以上菌落在透过光线下呈灰白色略带淡青色，反射光线下菌落 圆形隆起呈淡灰白色，镜下见菌落中心发暗，有黄褐色粗糙颗 粒，周边围绕一圈宽窄不等，边缘不整呈锯齿状、薄而透明的 花边。
双抗原夹心法测抗体：固定于NC膜上的鼠疫F1 抗原(F1Ag)+标本中待测抗体(F1Ab)+金标记的 F1抗原(金标-F1Ag)显色。
夹心法测抗体：固定于膜上的鼠疫F1抗原＋标 本中的相应抗体＋金标记的SPA显色。
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GICA双抗体夹心法—测抗原
标本
G区：金标特异性抗体 (鼠型F1McAb)
T区：特异性单 克隆抗体 (F1McAb)
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吸水纸
C区：羊抗 小鼠Ig
免疫荧光技术(IFT)
标记物-荧光素(如异硫氰荧光素 Yersinia pestis 免疫荧光染色 FITC)
荧光素标记抗体检测相应抗原-直 接法：如FITC-FIMcAb为异硫氰 酸荧光黄标记鼠疫F1单克隆抗体。
方法：固定好的玻片标本用1%牛 血清PBS浸洗5分钟，流水冲洗。 用FITC-FIMcAb适量（0.2ml）荧 光染色，室温作用30分钟，流水 冲洗。干燥，荧光显微镜油镜观 察，鼠疫菌染上翠绿色荧光
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鼠疫噬菌体试验
➢ 在培基上密集平行划线培养鼠疫菌，鼠疫噬菌体滴 于上端划线中部，直立平板，使噬菌体液垂直划线 自然流下，置20℃培养24h,有明显的噬菌带。
➢ 在18~22℃鼠疫噬菌体只能裂解鼠疫菌而不裂解假 结核菌，具有较强的专一性(噬菌作用具有种的特异 性)，是鼠疫细菌学诊断中特异的鉴定方法之一。
双抗体夹心法(改良法-美国CDC鼠疫 诊断技术实验室操作手册)：鼠疫免疫 血清特异性抗体( F1Ab)包被反应板， 加标本37℃反应1h洗板，加小鼠 F1McAb 液37℃静置1h洗板，加
➢ 用肉眼观察结果并用酶标仪检测每 孔的吸光度值(A)
HRP标记的羊抗小鼠IgG 37℃反应1h 洗板,加底物OPD蔽光反应30min显色， 加终止液。
IHA微量法结果：
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反向血球凝集试验(RIHA)
用F1抗体致敏血球，检查鼠疫特异性F1 抗原。试验方法和结果判定与IHA相同。
RIHA微量法结果：
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酶联免疫吸附试验(ELISA)
测抗体.
测抗原
➢
双抗原夹心法：F1抗原包被反应板，➢ 加入待测标本28℃反应1.5h洗板， 加入HRP-F1抗原28℃反应1h洗板， 加入底物OPD蔽光反应30min后加 终止液(2mol/L硫酸)。
鼠疫实验室检测技术
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鼠疫实验室检测
针对病原体本身的生长繁殖、生理生化特性 的检测：鼠疫菌的染色检查；鼠疫菌的培养 及鼠疫噬菌体试验；鼠疫菌的生化检查、营 养需求、毒素检测、毒力测定等。
针对病原体特异性抗原结构的检测：鼠疫F1 抗原抗体检测；鼠疫菌外膜蛋白的检测。
针对病原体遗传基因的检测：鼠疫菌的质粒 检测；鼠疫菌特异性核酸片断的检测；鼠疫 菌全基因组测定；插入序列的检测。
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一、鼠疫菌菌体形态检查
典型的鼠疫菌呈短而粗，菌体长1~2µm，宽 0.5~0.7µm,中段膨大，两端钝圆，且两极浓染 的卵圆形小杆菌，有荚膜，无鞭毛，无芽胞。 革兰氏染色阴性。
染疫动物或患者及其尸体的新鲜脏器制备的压 印片，可见到两端钝圆、两极浓染的典型鼠疫 菌。压印标本中可在吞噬细胞内外见到鼠疫菌， 对于鉴别杂菌污染材料极有价值。