人血丙种球蛋白制造及检定规程
人血丙种免疫球蛋白说明书
人血丙种免疫球蛋白说明书
人血丙种免疫球蛋白的取得主要通过人血浆的捐血者捐赠，并经过一系列的净化和处理步骤。
这些步骤包括：离心、沉淀、超滤、离子交换层析、色谱层析等。
通过这些步骤的处理，可以使得人血丙种免疫球蛋白的质量得到控制和保证。
人血丙种免疫球蛋白主要通过增加体内抗体的水平来发挥作用。
它可以增强机体免疫功能，增加抗体水平，抑制病原体的生长和繁殖，提高患者的抵抗力。
因此，人血丙种免疫球蛋白主要用于治疗免疫功能低下的患者，例如原发性免疫缺陷病、继发性免疫缺陷病等。
但是，人血丙种免疫球蛋白的使用也存在一些潜在的风险。
在使用人血丙种免疫球蛋白之前，应进行血液传染性疾病的筛查，以确保安全。
此外，人血丙种免疫球蛋白还可能引发过敏反应，对于过敏体质的患者，应特别注意。
对于孕妇和哺乳期妇女，使用前应谨慎，并在医生的指导下进行。
总之，人血丙种免疫球蛋白是一种用于预防和治疗与免疫功能相关疾病的药物。
它通过增加体内抗体水平来提高机体的免疫功能，帮助患者抵抗感染，是一种重要的治疗手段。
但它的使用也需要谨慎，严格按照医生的指导来进行，以保证疗效和安全。
丙种球蛋白的制备(电泳)
丙种球蛋白的制备任务1 丙种球蛋白分离制备方案的制定丙种球蛋白类药物丙种球蛋白（1）概念中文简称：“丙球”英文名称：γ-globulin、gamma globulin【别名】免疫血清球蛋白，普通免疫球蛋白，人血丙种球蛋白，丙种球蛋白，静脉注射用人免疫球蛋白（pH4）丙种球蛋白预防传染性肝炎，预防麻疹等病毒性疾病感染，治疗先天性丙种球蛋白缺乏症，与抗生素合并使用，可提高对某些严重细菌性和病毒性疾病感染的疗效。
注：由于人血中的免疫球蛋白大多数为丙种球蛋白（γ-球蛋白），有时丙种球蛋白也被混称为“免疫球蛋白”(immunoglobulin) 。
（2）药理作用注射丙种球蛋白是一种被动免疫疗法。
它是把免疫球蛋白内含有的大量抗体输给受者，使之从低或无免疫状态很快达到暂时免疫保护状态。
由于抗体与抗原相互作用起到直接中和毒素与杀死细菌和病毒。
因此免疫球蛋白制品对预防细菌、病毒性感染有一定的作用。
（3）适应症丙种球蛋白是血液中一种蛋白质，它通常来源于许多人献的血液，常被用来防止和治疗感染，对慢性疲劳症有显著的改善作用。
适用于预防传染性肝炎，麻疹等病毒性疾病感染,，治疗先生性丙种球蛋白缺乏症，可提高对某些严重细菌性和病毒性疾病感染的疗效。
制备丙种球蛋白的方法丙种球蛋白的两种分离制备的方法①层析法（如：Sephadex G-50）定义:是一种利用混合物中诸组分在两相间的分配原理以获得分离的方法。
②电泳法（如：聚丙烯酰胺凝胶电泳)定义：利用溶液中带有不同量的电荷的阳离子或阴离子，在外加电场中以不同的迁移速度向电极移动，而达到分离目的的分析方法。
sephadexG-50Sephadex是由葡聚糖通过环氧氯丙烷交联形成的三维网状凝胶颗粒。
Sephadex凝胶按交联度不同，用Sephadex G加一个数字来区别型号,数字越小,表示介质交联度, 分级范围越小，反之亦然。
电泳作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。
作用原理聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。
血液制品生产单位必备条件和验收细则
血液制品生产单位必备条件和验收细则颁布日期：1988-09-01 执行日期：1988-09-01 时效性：现行有效效力级别：部门规章目前国内生产血液制品的单位较多，但一些制品质量不能保障人民用药安全有效，甚至危害人民生命。
因此有必要对血液制品的生产进行整顿。
根据卫生部（８８）卫药字第１８号文要求，特制订《血液制品生产单位必备条件和验收细则》，作为各单位自查和卫生行政部门验收的根据。
血液制品生产单位必须具备以下基本条件１．有当地省、自治区、直辖市卫生厅（局）核发的《药品生产企业许可证》或《医疗单位制剂许可证》。
２．有适合生产品种的生产工艺，合乎无菌药品生产的车间，冷藏设施及相应配套设备，水、电、气供应良好。
３．根据生产规模，配备足够的，能胜任工作的人员，其中应有受过严格训练的主管技师或工程师以上的专业技术人员，能解决生产检定中出现的问题。
４．有科学管理的职能机构及健全的质量检定机构，完整的管理制度，保证制品质量符合《生物制品规程》的各项要求。
５．进入市场的制品应有生产批准文号。
血液制品生产单位整顿验收细则一、具有与生产血液制品相适应的技术人员及技术工人１．负责生产和检定的厂长应分开，他们应是具有或相当大专以上文化程度，从事血液制品工作３年以上，熟悉生产，有组织领导能力，保证出厂制品质量者。
２．生产或质检负责人分别由有实践经验的药师或助理工程师以上技术人员担任。
３．各工序负责人及质检人员应具有或相当中专以上的专业文化程度，并经专业培训能胜任工作者。
４．生产岗位应配备经过培训，能熟练操作的技术工人，未经培训及考核合格的工人不得独立顶岗工作。
５．工作人员应每年至少进行１次健康检查，并建立健康档案。
采浆及生产人员患有传染病或严重皮肤病者，应调离岗位。
６．以上技术人员必须长期坚持工作岗位，不得挂名。
二、应有与所生产的制品相适应的厂房、设施和卫生环境１．厂房周围环境要保持整洁，应与传染源、垃圾站、煤场、公厕等污染源相距２０米以上或采取相应封闭措施。
卫生部关于核发人血丙种球蛋白生产批准文号的通知-卫药发[1995]第30号
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卫生部关于核发人血丙种球蛋白生产批准文号的通知
正文：
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 卫生部关于核发人血丙种球蛋白生产批准文号的通知
（卫药发[1995]第30号）
各省、自治区、直辖市卫生厅(局)、各血液制品定点生产单位：
根据卫药发[1994]第18号“关于统一核发血液制品生产批准文号有关问题的通知”精神，中国药品生物制品检定所对部份血液制品定点生产单位报送的人血丙种球蛋白样品进行了检验，现根据检定结果予以核发生产批准文号(见附件)，并就有关问题通知如下：
一、自发文日期起，取消1992年以前(不含1992年)核发的丙种球蛋白生产批准文号＜包括地方、军内及部发批准文号＞。
自1996年1月1日起，市场流通使用的人血丙种球蛋白＜肌肉注射及静脉注射用＞均须使用我部统一核发的生产批准文号
；
二、自1996年1月1日起，凡标有1992年以前批准文号的丙种球蛋白，如继续在市场上流通使用的均按假药处理
；
三、请各省、自治区、直辖市卫生厅(局)认真做好监督检查工作，确保我国血液制品的生产质量。
特此通知。
1995年4月10日
——结束——。
项目三 丙种球蛋白的制备_聚丙烯酰胺凝胶电泳制备丙种球蛋白
• 聚丙烯酰胺凝胶电泳的凝胶体系有连续和不连 续电泳之分。不连续电泳系统由浓缩胶和分离 胶两种胶体组成，两种胶体分别由不同的pH 的缓冲液和胶贮液配制而成，形成孔径不同的 两种胶体。不连续电泳系统电泳分离过程中包 括三种物理效应，即样品的浓缩效应、电泳分 离的电荷效应和凝胶的分子筛效应。 • 本次试验采用不连续电泳系统PAGE，通过三 种效应将血清中各蛋白质组分按其分子大小、 电荷多少不同进行分离。
用 7%乙酸浸泡数次，直至背景蓝色脱去。
结果示意图：
γ
β
α 2 α1
清蛋白
注意事项
由于与凝胶集合有关的硅橡胶条、玻璃板 表面不光滑洁净，在电泳时会造成凝胶板与玻 璃板或硅橡胶条剥离，产生气泡或滑胶；剥胶 时凝胶板易断裂，为防止此现象，所用器材均 应严格地清洗。 安装电泳槽和镶有长、短玻璃板的硅橡胶 框时，位置要端正，均匀用力旋紧固定螺丝， 以免缓冲液渗漏。 用琼脂（糖）封底及灌凝胶时不能有气泡， 以免影响电泳时电流的通过。
聚丙烯酰胺凝胶电泳分类
按凝胶装置分为
盘状电泳及板状电泳
盘状电泳通常是
不连续系统，利用缓
冲液离子成分、pH、 凝胶孔径进行电泳，
带电颗粒电泳时具有
电荷效应、分子筛效
应、 浓缩效应。
盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳 1.凝胶的制备： （1）安装圆形玻管
将洗净的玻璃管烘干 后用橡胶玻璃头封严，放 置在一边等待灌胶。
项目三 丙种球蛋白的制备
任务1
丙种球蛋白分离制备方案
Sephadex G-50分离制备丙种球蛋白
聚丙烯酰胺凝胶电泳制备丙种球蛋白
实验原理
• 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载 体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰胺（Acr） 和交联剂N，N—甲叉双丙烯聚酰胺（Bis）聚 合而成。聚丙烯酰胺凝胶电泳利用电泳和分子 筛的双重作用分离物质。 • Acr和Bis单独存在或混合在一起时是稳定的， 但在具有自由基团体系时就能聚合。引发自由 基团的方法有化学法和光化学法两种。化学法 的引发剂是过硫酸胺（Ap），催化剂是四甲基 乙二胺（TEMED）；光化学法是以光敏感物核 黄素来代替过硫酸胺，在紫外光照射下引发自 由基团。
丙种球蛋白的制备综述
—预习方案
指导老师：韦平和 彭佳平
组别：第二组
成员：张婉月 臧赢 徐洁 严梦迎
陈孝颜
丙种球蛋白概念
• 中文简称：“丙球” 英文名称：γ-globulin、 gamma globulin 别名： 免疫血清球蛋白，普通免 疫球蛋白，人血丙 种球蛋白，丙种球蛋白，静脉 注射用人免疫球蛋白 （pH4） 丙种球蛋白预防传 染性肝炎，预防麻疹等病毒性疾 病感染，治疗先 天性丙种球蛋白缺乏症 ，与抗生素 合并使用，可 提高对某些严重细菌性和病毒性疾病 感染的疗效。 注：由于人血中的免疫球蛋白大多数为丙种球蛋 白 （γ-球蛋白），有时丙种球蛋白也被混称为 “免疫球 蛋白”(immunoglobulin) 。
• 垂直平板： 1多个样品在同一块凝胶上，电泳条 件一致－－便于利用各 种鉴定方法，直接比较各 种样品区带，保证结果的准确可靠 2可以进行双 向电泳 3电泳时热量容易消散，凝胶结果便于照 相和易于制成干胶 圆盘电泳： 1、缺点是由于聚 合效应，凝胶的长度和直径有细微差别， 即使同 一样品在两个凝胶柱上以同样的条件电泳，其结 果也 会不同 2、但是研究工作中还会用到圆盘电 泳，例如 测定放射性标 记的样品测定蛋白质的生 物活性；测定蛋白质分离的最适pH， 凝胶浓度； 双向电泳中第一相的分离。
电泳
• 作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。 原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛 效应。 它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺 凝胶及SDS-聚丙烯 酰胺凝胶（SDSPAGE）；非变性聚丙烯酰胺凝胶， 在电 泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态， 并依 据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形 状及其所附带 的电荷量而逐渐呈梯度分开。
实验步骤
• （1）溶液的配制 a) a贮液为49.5%T,3%C b) b贮液为49.5%T,6%C。 c) 胶缓冲液为3molTris d) 0.3g/LSDS用HCl调pH值至8145 e) 阳极缓 冲液为0.2molTris f) 用HCl调pH值至8.9。 g) 阴极缓冲液为0.1molTris h) 0.1molTricine i) 0.13g/LSDS用HCl 调pH值至8125。 j) 样品缓冲液 为3molTris(pH8.45) k) 0.8gSDS l) 0.3molDTT m) 少许溴酚蓝,定容至 10ml。 n) 胶的制备:按文献分别配制分离胶、间隙胶和浓缩胶,依次 灌胶。 • (2)样品处理 • 去除血清Байду номын сангаас蛋白后的样品与2倍体积 U9缓冲液 (9molUrea,2%CHAPS,1%DTT) 混匀,400～600r/min冰浴振荡30min 变性。取变性后样品与样品缓冲液 等体积混匀,60℃水浴加热5min。 • (3)电泳 • 内槽装阴极缓冲液,外槽用阳极缓冲液恒压 电泳,先40V约1.5h,当样品 进入分离胶时,电 压升至60V约1.5h。
人血丙种球蛋白
人血丙种球蛋白*导读：免疫增强剂可用于治疗先天性全丙种球蛋白低下血症，又名Bruton。
……人血丙种球蛋白(别名：普通丙种球蛋白、人血丙球、免疫血清球蛋白、丙种球蛋白)Human Normal Immunoglobulin(Human Normal γ-Globulin)【作用与用途】本品为专供静脉注射用免疫球蛋白制剂，是以低温乙醇法从健康人鲜血浆分离制备的制品，可增加机体免疫力，有补充抗体和免疫调节作用，从而提高机体对多种细菌、病毒的抵抗能力，主要用于预防麻疹、传染性肝炎、脊髓灰质炎、水痘等，也可用于其他细菌性、病毒性感染。
【剂量与用法】预防麻疹，仅用于未注射过麻疹活疫苗而又与麻疹病人密切接触的儿童，一般在接触麻疹病人5日内肌注效果较好，超过7日仅可减轻症状。
用量 0.2ml～0.3ml/kg。
或5岁以下注射5ml，6岁以上最高不超过10ml。
预防传染性肝炎，最好于接触后5日内注射，最多不超过15日，用量为儿童0.1ml～0.2ml/kg，成人3ml～6ml/次，可起到延长潜伏期、减轻症状和防止发病的作用，1次注射的有效期为4～6周。
治疗传染性肝炎，肌注，5ml～6ml/次，6日1次，6次为1疗程，也可每日或隔日注射。
【副作用】1 注射部位有发红、疼痛、硬结。
2 偶见暂时性红斑、咳嗽、呼吸困难、紫绀及休克等过敏反应。
3 恶心、呕吐、腹痛、腹泻等消化道反应。
4 上述剂量均为血清丙种球蛋白(含蛋白10%)的剂量，如用胎盘血丙种球蛋白，应按比例增加。
本品仅供肌注。
【规格】注射剂:肌注用10%3ml(300mg), 1.5ml(150mg). 冻干低pH静注用2.5g, 1.5g.【类别】免疫增强剂。
冻干组织胺丙种球蛋白制造及检定规程
冻干组织胺丙种球蛋白制造及检定规程本品系由人血丙种球蛋白、磷酸组织胺（或盐酸组织胺）配制而成。
能刺激机体产生抗组织胺的抗体，从而消除内源性组织胺的致病作用，用于治疗过敏性疾病。
1制造1.1原料要求1.1.1配制用水应符合《中国药典》要求。
1.1.2化学药品应符合《中国生物制品主要原材料试行标准》要求，未纳入试行标准者应不低于化学纯。
组织胺应符合生化制剂要求。
1.1.3稀释液为生理盐水或注射用，可加0.5%（ml/ml）氯仿或0.009%（g/ml）硫柳汞作为防腐剂。
1.1.4丙种球蛋白应符合《人血丙种球蛋白制造及检定规程》要求。
1.2配制按每ml含磷酸组织胺（或盐酸组织胺）0.075～0.25μg，丙种球蛋白6.0mg，硫代硫酸钠（包括结晶水）8～30mg配制而成，冻干制剂可加入葡萄糖5mg，亦可浓缩配制。
1.3除菌过滤配制好的半成品应立即进行除菌过滤。
除菌过滤前应调pH为6.6～7.4。
1.4分批用同一工艺同一容器溶解、稀释的制品为一批，不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品分为亚批。
1.5半成品检定除菌过滤后每批半成品应做理化检定、无菌试验及热原质试验。
1.6冻干本品经各项检定合格后进行分装，或除菌过滤后及时分装，每支分装量为2.0ml。
冻干时制品温度不得超过35℃。
1.7规格每支装量2.0ml。
2成品检定2.1外观应为白色或淡黄色疏松体，无融化迹象。
溶解后溶液为无色或淡黄色，可带乳光，不应有异物、混浊或摇不散的沉淀。
2.2水分应≤5%（g/g）。
2.3溶解时间每支加灭菌注射用水2ml，应在10分钟内溶解，溶解后外观应符合2.1项要求。
2.4pH值pH值应为6.0～8.0.2.5蛋白质含量应≥0.6%(g/ml)。
2.6硫柳汞含量应≤0.01%（g/ml）。
2.7无菌试验按《生物制品无菌试验规程》进行。
2.8安全试验按《人血丙种蛋白制造及检定规程》2.7项进行。
2.9热原质试验按《生物制品热原质试验规程》进行。
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人血丙种球蛋白制造及检定规程
本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆或血清经低温乙醇法提取的免疫球蛋白制剂。
含两种球蛋白90%以上。
用于常见病毒性感染的被动免疫，主要用于预防麻疹和传染性肝炎。
1 制造
1.1制造要求
与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.1项规定相同。
1.2制造工艺
1.2.1采用低温乙醇法。
可含适宜稳定剂（如含甘氨酸，应为0.3或0.4mol/L）。
1.2.2分批
每批制品最少应由1000名以上健康献血员的血浆（清）混合制成。
同一制造工艺同一空中溶解稀释的制品作为一批，不同滤器除菌过滤或不同机柜冻干的制品应分为亚批。
1.2.3半成品检定
液体制剂于除菌过滤后应做理化检查（残余乙醇含量≤0.03%）及热原质试验，并按亚批抽样做无菌试验。
直接分装时应留样做上述实验。
1.2.4 冻干
半成品经检定合格后及时分装，并按《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》1。
2。
5项规定进行冻干，但制品温度不得超过35℃。
1.3剂型与规格
1.3.1剂型分为液体及冻干两种。
1.3.2规格
液体制剂蛋白质浓度为10%。
液体和冻干制剂每瓶（支）蛋白质装量均为150mg、300mg。
1.4制品重滤和再制
与《人血白蛋白（低温乙醇法）制造及检定规程》中1.4项相同。
2 成品检定
2.1抽样
每批成品应抽样做全面检定，不同机柜冻干的制品应分别抽样做无菌试验及水分测定。
2.2物理检查
2.2.1外观
冻干制剂应为白色或灰白色的疏松体，无融化迹象。
液体制剂和冻干制剂溶解后溶液应为接近无色，可带乳光，或淡黄色澄明液体，不应含有异物、混浊或摇不散的沉淀。
2.2.2冻干制剂溶解时间
冻干制剂加入20～25℃标示量的灭菌注射用水后，应在15分钟内完全溶解。
2.2.3热稳定性试验
液体制剂置57±0.5℃水浴保温4小时后，应无凝胶化或絮状物。
2.3化学检定
按《生物制品化学检定规程》进行。
2.3.1水分
冻干制剂的水分含量应≤3%（g/g）。
2.3.2pH值
用生理盐水稀释成1%蛋白质浓度，在20±℃测定，pH值应为6.4～7.4。
2.3.3蛋白质含量
用钨酸沉淀法测定。
蛋白质含量应不低于标示量的95%。
2.3.4纯度
丙种球蛋白含量应不低于蛋白总量的90%。
2.3.5硫柳汞含量
若制品中加硫柳汞，其含量应≤0.01%（g/ml）。
2.3.6IgG各组分含量测定
IgG单体及二聚体含量之和应≥90%。
2.4抗体测定
2.4.1抗-HBs测定
用RIA法测定。
抗-HBs应≥6IU/g蛋白质。
2.4.2白喉抗体测定
用PHA法测定。
白喉抗体应≥2HAU/g蛋白质。
2.5鉴别试验
用免疫双扩散法。
仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛血清不产生沉淀线。
2.6无菌试验
按《生物制品无菌试验规程》进行。
2.7安全试验
2.7.1豚鼠试验
用体重300～400g健康豚鼠2只，每只腹腔注射检品5ml，注射后半小时内动物不应有明显的异常反应，观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。
如不符合上述要求，用4只豚鼠复试一次，判定标准同前。
2.7.2小白鼠试验
用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射检品0.5ml，半小时内动物不应有明显的异常反应，继续观察7天，动物均健存，每只体重增加者判为合格。
如不符合上述要求，用10只小白鼠复试一次，判定标准同前。
2.8热原质试验
按《生物制品热原质试验规程》进行。
注射剂量按家兔体得注射0.15g/kg。
判定标准按该规程4.2项要求进行。
3 保存与效期
液体制剂保存于2～8℃暗处，冻干制剂保存于10℃以下。
效期自效价检定合格之日起，液体制剂为3年，冻干制剂为5年。
人血丙种球蛋白使用说明书
本品系由乙型肝炎疫苗免疫的健康人血浆经低温乙醇法分离提取的免疫球蛋白制剂（主要为IgG），液体制剂为接近无色、可带乳光或淡黄色的澄明液体，含硫柳汞防腐剂。
冻干制剂为白色或灰白色疏松体。
成品含10%蛋白质，其中90%以上为丙种球蛋白。
主要用于预防麻疹、传染性肝炎等，若与抗生素合并使用，可提高对某些严重细菌及病毒性感染的疗效。
用法
本品只限于肌内注射，不得用于静脉输注。
冻干制剂可用灭菌注射用水溶解。
一切溶解、注射等操作均应按严格的消毒手续进行。
预防麻疹：为预防发病或减轻症状，可在与麻疹患者接触7日内按每kg体重注射0.05～0.15ml，或5岁以下儿童注射1.5～3ml，6岁以上儿童最大量不超过6ml。
一次注射预防效果通常为2至4周。
预防传染性肝炎：按每kg体重注射0.05～0.1ml，或儿童每次注射1.5～3ml，成人每次注射3ml。
一次注射预防效果通常为1个月左右。
注意事项
1.液体制剂和冻干制剂溶解后应为澄明或可带乳光液体，可能出现微量沉淀，但一经摇动应即消散。
如有摇不散的沉淀、异物或安瓿有裂纹、过期失效者均不可使用。
2.安瓿打开后，制品应一次输注完毕，不得分次使用。
保存
液体制剂保存于2～8℃暗处，冻干制剂保存于10℃以下干燥处。