脱钙骨组织的染色方法
快速脱钙骨组织病理切片台盼蓝-伊红染色方法研究
Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｃ ｌ ｉ ｎＬ ａ ｂＭｇ ｔ （ Ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ） ， Ａ ｕ ｇ ｕ ｓ ｔ ２ ０ １ ７ ， Ｖ ｏ １ ． ５ ， Ｎ ｏ ． ３
［ Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｘ ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｆ ｅ ａ ｓ ｉ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ａ ｐ ｐ ｌ ｙ ｉ ｎ ｇ ｔ ｒ ｙ ｐ ａ ｎ ｂ ｌ ｕ ｅ ａ ｎ ｄ ｅ ｏ ｓ ｉ ｎ ｓ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ
Ｔｒ ｙｐａ ｎ ｂｌ ｕｅ ａ ｎｄ ｅ ｏｓ ｉ ｎ ｓ ｔ ａ ｉ ｎｉ ｎ ｇ ｔ ｅ ｃ ｈｎｉ ｑｕｅ ｆ ｏｒ ｒ ａ ｐｉ ｄ ｄｅ ｃａ ｌ ｃ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏｎ ｂｏｎ ｅ ｓ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎｓ Ｌｉ ｕ Ｙ ａｎ ｇ ，Ｋｅ Ｓｈ ｉ ｙｕ ｎ￣
的 巨 噬细 胞 等 结 构 特 征 清 晰 可 辨 。 结 论 本 研 究 所 用 的Ｔ Ｅ 染 色 法 适 用 于 强 酸 脱 钙 处 理 的骨 组 织 病 理
制片 。
【 关键词 】 快速脱钙 ； 苏木素． 伊红染色 ；
甲苯 胺 蓝 染 色 ；
台盼 蓝 一 伊 红 染 色
后 的 骨 组 织 病 理 切 片 染 色 ， 以 提 高 制 片 质 量 。 方 法 对 １ ０ 只 大 鼠胫 骨 进 行 ５ ％硝 酸 脱 钙 、 石 蜡 包
埋 、连续切 片后 ，对每份胫 骨标本 分别进 行苏木 素． 伊 ￣（ ｈ ｅ ｍａ ｔ ｏ ｘ ｙ ｌ ｉ ｎ ａ ｎ ｄ ｅ ｏ ｓ ｉ ｎ ， ＨＥ ） 染色和 甲苯胺
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响张大贵;林小芳;张普;周婵萍【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2012(50)24【摘要】目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响.方法选择12例骨组织,随机分为3组.A组用14％硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色.结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大.PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好.结论室温条件下,三种脱钙液巾PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好.但南于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查.硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差.【总页数】3页(P101-103)【作者】张大贵;林小芳;张普;周婵萍【作者单位】温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院泌尿外科,浙江温州 325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000【正文语种】中文【中图分类】R446.4+1【相关文献】1.三种脱钙液对免疫组化染色效果的比较 [J], 孙庆妹;刘军2.三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析 [J], 连丽琴;夏凌志;钟惠霞3.四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响 [J], 李锐;金玉兰;韩一丁;刘红刚4.混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析 [J], 吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣5.八种脱钙液对骨组织制片后HE染色质量影响的实践探究 [J], 方皓;云杰苗;王雄;袁滋铎;林俞辰;陶子春;薛逢贵;胡爱华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
trap染色
trap染色答案：Trap染色是用于检测骨组织、骨细胞中特征物质的染色，使破骨细胞呈红色，背景呈绿色或蓝色。
抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap）为破骨细胞的标志酶，特异地分布于破骨细胞中，为破骨细胞所特有，通常作为鉴别破骨细胞的重要标志物。
在含酒石酸的酸性条件下，trap能将萘酚AS-BI 磷酸盐水解，产生的萘酚AS-BI立即与fast red或六偶氮副品红结合，在酶活性部位形成不溶性的红色染料，通过观察红色染料的形成可间接了解酸性磷酸酶的活性，进一步鉴别及分析破骨细胞的状态。
分析：骨组织切片及trap染色实验步骤1、骨组织脱钙：新鲜骨组织固定于4%多聚jia醛24h 以上。
将组织从固定液取出置于EDTA脱钙液内脱钙（不能用含酸的脱钙液脱钙），每3天换一次脱钙液，至骨组织针扎可以顺利通过为止。
2、取材：在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
3、脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。
75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。
4、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。
先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。
于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
5、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。
切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃ 烘箱内烤片。
待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
6、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20m in-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
脱钙液在微波辐射下对骨组织作用效果及免疫组织化学染色的影响.
脱钙液在微波辐射下对骨组织作用效果及免疫组织化学染色的影响中华病理学杂志/990220 骨组织脱钙常规多采用酸性液体(如硝酸、盐酸、甲酸等)进行脱钙，一般需较长时间，组织细胞结构很难保持完整清晰，有些甚至破坏组织结构很严重，从而影响病理学的诊断和研究。
骨组织中的蛋白抗原得不到很好的保存，有时甚至丢失。
为此我们对9例骨组织用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)作为脱钙液，利用微波辐射脱钙[1，2]并进行免疫组织化学方法定位，观察骨组织结构改变和蛋白抗原保存情况，得到较满意的结果。
一、材料与方法1.材料：9例骨组织为我科活检标本(骨肉瘤3例，肋骨2例，胫骨2例，股骨2例)，其组织大小为1.0 cm×1.0 cm×0.2 cm；微波炉为浙江临安生产的YWY781B型；EDTA为进口分装，购于北京化学试剂公司；免疫组化试剂为福州迈新生物技术开发公司赠。
2.脱钙液配制：A液：EDTA10 g，PBS缓冲液(pH 7.2)100 ml，加NaOH搅拌溶解后，用1 mol/L HCl调pH至7.2，再加甲醛15 ml。
B液：甲酸15 ml，甲醛10 ml，蒸馏水75 ml。
C液：硝酸5 ml，甲醛10 ml，蒸馏水85 ml。
D液：甲酸10 ml，硝酸3 ml，盐酸5 ml，冰醋酸2 ml，甲醛10 ml，蒸馏水70 ml。
3.脱钙方法：本实验9例骨组织各分两组，即微波脱钙组和室温脱钙组。
微波组：将骨组织放入平底小烧杯内，分别装有上述各种脱钙液，表面加一层液体石蜡[3]，以微波4档间歇脱钙，每次辐射1分钟，每次辐射之间都将烧杯移至室温冷却5分钟，以保证每次的微波辐射脱钙液的温度不至于太高。
室温组：每隔4小时更换一次脱钙液。
以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
4.免疫组织化学方法：组织脱钙后经常规组织处理切片，枸橼酸微波恢复抗原后，应用SP法进行免疫组织化学反应[4]，检测骨组织中骨形成蛋白(BMP单抗)和波形蛋白(Vimentin单抗)。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。
介绍一种简易快速的骨髓组织脱钙法
介绍一种简易快速的骨髓组织脱钙法骨髓组织脱钙法是一种用于骨髓组织样品制备的技术。
它的目的是去除样品中的钙，以便进一步研究骨髓细胞的形态学和功能。
下面将介绍一种简易快速的骨髓组织脱钙法。
步骤1：收集骨髓样品首先，需要收集一定量的骨髓样品。
这可以通过骨髓穿刺或手术获取。
确保收集足够的样品以供后续实验使用。
步骤2：制备溶液接下来，需要制备脱钙溶液。
一般来说，脱钙溶液包含酸性溶液，如乙酸酸液、硝酸或盐酸溶液。
选择合适的酸性溶液取决于实验要求和个人偏好。
请注意，使用酸性溶液时要格外小心，避免与皮肤和眼睛接触，并在通风的地方操作。
步骤3：处理样品将收集的骨髓样品放入装有脱钙溶液的容器中。
确保溶液足够覆盖样品，并轻轻摇动容器以确保均匀混合。
将样品在室温下放置一段时间，以便溶液中的酸性成分可以与骨髓中的钙发生反应。
步骤4：取出样品通过滤纸或筛网等方法，将骨髓样品从溶液中分离出来。
确保尽可能去除样品中的酸性溶液以防止可能的干扰。
这可以通过将样品洗涤数次来完成，使用纯净水或盐水进行洗涤。
重复这个步骤，直到样品完全清洁为止。
步骤5：制备制片将脱钙后的骨髓样品制备成制片，以便进行形态学和功能性分析。
这可以通过将样品放在载玻片上，然后用染色剂进行染色来完成。
步骤6：观察和分析最后，使用显微镜观察制备好的制片。
通过观察细胞的形态学特征和功能性变化，可以获得关于骨髓组织的更多信息。
这种简易快速的骨髓组织脱钙法是比较常见和简单的方法之一、然而，不同的实验要求可能需要不同的脱钙方法。
因此，在进行特定实验之前，请确保了解实验的要求，并选择合适的方法。
另外，注意在操作过程中的安全措施，避免对自己和他人带来任何伤害。
临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较
临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较李玉莲;徐晓艳【摘要】目的对两种脱钙方法进行比较,获得简单、便捷、快速适用于临床病理制片的脱钙方法. 方法观察两种脱钙液:5％硝酸脱钙液(硝酸5ml加入95 ml蒸馏水)和快速脱钙液(含36％-38％盐酸8ml、冰醋酸5ml、水杨酸10 g、蒸馏水87ml),在常温及微波条件下对骨组织脱钙及HE切片染色效果的影响. 结果常温条件下,5％硝酸使组织结构有些破坏,染色效果不佳.微波条件下,使用快速脱钙液对骨组织结构损伤小,染色效果佳,适合于临床病理的骨组织制片. 结论标本经快速脱钙液处理后,其切片质量大大提高并远远优于普通脱钙液.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2014(045)010【总页数】3页(P996-997,1004)【关键词】骨组织;脱钙液;HE切片【作者】李玉莲;徐晓艳【作者单位】内蒙古医科大学病理学教研室,呼和浩特010059;内蒙古医科大学第一附属医院病理科;内蒙古医科大学病理学教研室,呼和浩特010059;内蒙古医科大学第一附属医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R361.2含有骨质的肿瘤，钙化组织及骨髓穿刺组织都很坚硬，要想制成几微米的漂亮HE 切片是很困难的。
脱钙液是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的关键技术之一。
目前使用的脱钙液大多数是无机强酸类制剂，虽然脱钙效果好，但造成组织形态，特别是细胞结构的破坏。
因此，在本实验中我们选择了传统的脱钙液和快速脱钙液两种脱钙液进行比较，进而寻找一种更适合于骨组织脱钙的方法。
研究中发现快速脱钙液在不破坏组织结构及影响染色的同时，它可促进脱钙并加快脱钙速度，防止纤维性组织过度膨胀，并且保证了切片的质量，现报道如下。
1 材料与方法1.1 材料收集内蒙古医科大学附属医院2009-2011年手术切除的骨肿瘤、病变骨及骨髓穿刺病人标本共40例。
根据标本的不同将骨组织取成体积为1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm的薄片(骨髓一般直径均为0.1 cm)，放入10%中性福尔马林固定24 h，用于脱钙实验。
脱钙方法总结
（1）该液对细胞核作用较慢，使细胞核着色较差。
（2）要用5%硫酸钠液中和，然后充分流水冲洗至少12小时。
4．Perenyi’s液：
10%硝酸4份，0.5%铬酸3份，无水乙醇3份。
5mm厚的骨组织块脱钙时间需要2-7天。
优点：
（1）该液是一种暖和的脱钙液，可能由于铬酸和乙醇的存在可以抑制组织泡软。
厚度5mm骨组织块脱钙3-7天。
优点：
（1）细胞核染色相当好。
（2）不需要水洗，脱水时酸就会首先被脱出来。
缺点：使用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
6．甲酸液：
甲酸10ml，10%福尔马林盐90ml。
厚度5mm骨组织块脱钙时间需要3-7天。
优点：
（1）脱钙同时可以对组织固定。
（2）对细胞核染色比较好。
（2）细胞核和细胞浆细微结构着色均好。
（3）推荐该液作为常规脱钙使用。
（4）组织脱钙后不需要碱性液中和和流水冲洗。脱钙组织直接移到90%乙醇中。
缺点：
（1）脱钙较慢，因此，紧急情况下不能使用。
（2）用化学方法测试不能确定脱钙的终点。
5．Von Ebener’s液：
饱和水溶液氯化钠50ml，蒸馏水50 ml，浓盐酸8 ml。
9．AFIP甲酸-柠檬酸钠液：
A液：甲酸25ml，蒸馏水25ml。B液：枸橼酸钠（结晶）10g，蒸馏水50ml。
临用时A液和B液等量混合，每日换1次，因为柠檬酸钠可以和钙离子螯合，具有促进脱钙的作用。
10．蒋维中（Jangweizhong’s）液：
盐酸80ml。甲酸70ml，三氯化钙50g，冰醋酸25ml甲醛100ml，生理盐水900ml。
缺点：脱钙时间必需仔细控制防止过度脱钙损害组织。
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脱钙骨组织的染色方法
一、引言
脱钙骨组织的染色方法是一项重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究领域。
通过染色可以使骨组织的细胞和结构更加清晰可见，有助于研究人员观察和分析骨组织的形态、结构和功能等方面的信息。
本文将介绍几种常用的脱钙骨组织染色方法。
二、酸性染色法
酸性染色法是一种常见的脱钙骨组织染色方法，主要利用酸性染料对骨组织中的细胞和结构进行染色。
该方法的步骤如下：
1. 取得骨组织样本后，首先进行固定处理，常用的固定剂有甲醛和乙酸乙酯等。
2. 将固定后的骨组织进行脱脂处理，常用的脱脂剂有乙醇和二甲苯等。
3. 将脱脂后的骨组织进行脱钙处理，常用的脱钙剂有盐酸和酸性醇等。
4. 脱钙后的骨组织进行酸性染色处理，常用的酸性染料有伊红和快速绿等。
5. 染色后的骨组织进行脱水处理，常用的脱水剂有乙醇和丙酮等。
6. 最后进行封片处理，使骨组织样本可以长期保存。
三、碱性染色法
碱性染色法是另一种常用的脱钙骨组织染色方法，与酸性染色法相比，碱性染色法主要利用碱性染料对骨组织中的细胞和结构进行染色。
该方法的步骤如下：
1. 取得骨组织样本后，进行固定处理和脱脂处理，步骤与酸性染色法相同。
2. 将脱钙后的骨组织进行碱性染色处理，常用的碱性染料有甲苯胺蓝和噻唑蓝等。
3. 染色后的骨组织进行脱水处理和封片处理，步骤与酸性染色法相同。
四、免疫染色法
免疫染色法是一种基于免疫学原理的脱钙骨组织染色方法，通过特异性抗体与骨组织中的特定分子结合，使这些分子在显微镜下可见。
该方法的步骤如下：
1. 取得骨组织样本后，进行固定处理和脱脂处理，步骤与酸性染色法相同。
2. 进行抗原修复处理，以增强抗原的免疫反应性。
3. 将修复后的骨组织进行抗体处理，常用的抗体有一抗和二抗等。
4. 进行染色反应，通过显色剂使抗原与抗体结合的部位显色可见。
5. 最后进行脱水处理和封片处理，步骤与酸性染色法相同。
五、其他方法
除了上述常用的酸性染色法、碱性染色法和免疫染色法外，还有一
些其他方法也可以用于脱钙骨组织的染色。
例如，核酸染色法、荧光染色法等。
这些方法各有特点，可以根据具体实验目的选择合适的方法进行骨组织的染色。
六、总结
脱钙骨组织的染色方法是生物医学研究中常用的技术手段之一。
酸性染色法、碱性染色法和免疫染色法是常见的脱钙骨组织染色方法，每种方法都有其独特的优势和适用范围。
在实际应用中，研究人员可以根据具体需求选择合适的方法进行骨组织的染色，以获得清晰可见的骨组织结构和细胞信息，为骨组织相关研究提供有力的支持。