不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响浅析
骨组织的脱钙及其免疫组织化学技术的探讨
３ ．骨 组 织 的 快 速 脱 钙 方 法
仁 ，胞 浆 嗜酸 性 ，有突 起 ，电 镜 下 可 见 微 绒 毛 。破 骨 细 胞
含 有丰 富 的酸 性磷 酸 酶 和胶 原 酶 。骨 细 胞 间质 由有 机 质 和 无 机质 两种 成 分 紧密 结 合 而成 。无 机 质 是 骨 盐 （ 要 是 羟 主 基 磷灰 石 ） 。有机 质包 括骨 胶纤 维和 无定 形 的有 机 质 。骨 胶 纤维 即骨 中的胶 原纤 维 ，构成 骨 胶 原 纤 维 的 蛋 白质 为 Ｉ型
Ｃ ）技术是 用 已知的标 记的特异性 抗体 或抗 原对组 织 内相应 Ｓ 抗 原或抗 体进 行定 性 、定 位 或定 量 检 测 ，经 组 织化 学 反 应 ， 使标 记 于特异 性 抗 体 的 酶 、金 属 及 荧 光 素 等 呈 现 出某 种 颜 色 ，并 借助于 光镜 、荧 光显微镜 及 电子显微 镜等 观 察所 显示 的颜 色 和变化 ，从 而 了解抗原 或抗 体结 合部 位 和含 量 的一 门
面 ：一是 组织 块过 大 ，固定剂 未能充 分浸透使 组 织 中心 部位 的抗原溶 解 、弥散 或丢失 ；二 是福尔 马林 固定 时间 过长 ，因
百－ 茎氨基 交联 而 降低 抗 原 性 ；三 是 固定 液 的 种类 、浓度 和 温 度对一些 特殊 抗原 有很 大的 破坏 作用 ，如 浓 度超 过 ２ 的醛 类 固定剂 、０ ４ 苯 二酮 等对 ５羟色胺抗 原保存 不利 ［ ］ ． 一 １ 。
骨 是构 成 人 体 骨骼 的 主要 器 官 ，它 由骨 组 织 、骨 膜
关节 和 关节 软骨 构 成 。骨组 织 由骨 细 胞 和 细 胞 间 质 （ 称 又 骨 间质 ）构成 。骨 的细 胞成 分 有 ：① 成 骨 细 胞 ，其 形 态 与 静止 及 活跃状 态 有关 ，呈梭 形 。成 骨 细 胞能 产 生骨 样 基 质 ， 由骨 样 基质 与其 周边 的成 骨 细 胞 构 成 骨 样 组 织 ，Ｈ ・ 染 Ｅ 色呈 粉 红色 。② 骨 细胞 ，位 于 骨 陷 窝 内 ，呈 小 梭 形 。骨 细 胞 可 分成 最年 轻 的骨 细 胞 、较成 熟 的骨 细胞 和成 熟 的骨 细 三种形 态 结构 ，他们 的功 能 随 细胞 的 年 龄 而 不 同 。③ 破 骨 细胞 ，为 多 核 巨 细 胞 ，可 有 １ 一 ２ Ｏ Ｏ个 核 ，核 淡 染 ，有 核
快速脱钙液在骨组织脱钙中的应用效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文
快速脱钙液在骨组织脱钙中的应用效果-病理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——含有骨质的肿瘤，钙化组织及骨髓穿刺组织都很坚硬，要想制成几微米的漂亮HE 切片是很困难的。
脱钙液是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的关键技术之一。
目前使用的脱钙液大多数是无机强酸类制剂，虽然脱钙效果好，但造成组织形态，特别是细胞结构的破坏。
因此，在本实验中我们选择了传统的脱钙液和快速脱钙液两种脱钙液进行比较，进而寻找一种更适合于骨组织脱钙的方法。
研究中发现快速脱钙液在不破坏组织结构及影响染色的同时，它可促进脱钙并加快脱钙速度，防止纤维性组织过度膨胀，并且保证了切片的质量，现报道如下。
1 材料与方法1．1 材料收集内蒙古医科大学附属医院2009 －2011 年手术切除的骨肿瘤、病变骨及骨髓穿刺病人标本共40 例。
根据标本的不同将骨组织取成体积为1．5cm 1．5 cm 0．5 cm 的薄片( 骨髓一般直径均为0．1 cm) ，放入10% 中性福尔马林固定24 h，用于脱钙实验。
1．2 普通脱钙液及脱钙方法与步骤普通脱钙液是5%的硝酸，即5 ml 硝酸加入95ml 蒸馏水配制而成。
具体脱钙步骤: ①先把大块骨组织标本切成小段，小块骨组织标本不用改刀，然后放入10%中性福尔马林中固定24 h 左右后再进行脱钙。
②将待脱钙的标本放入5% 硝酸脱钙液中，脱钙液不少于待脱钙标本总体积的10 倍。
③室温下进行脱钙: 骨髓穿刺标本需30 －60 min，肋骨、指趾骨需3 －6 d，皮质骨需要5 －7 d。
④脱钙后的组织经流水冲洗后进行取材、脱水、透明、常规石蜡包埋、制片。
1．3 快速脱钙液及脱钙方法与步骤快速脱钙液是由36% －38% 盐酸8 ml、冰醋酸5 ml、水杨酸10 g 、蒸馏水87 ml 混合而成。
用微波炉进行微波时，微波辐射可加速组织内部分子运动，加快脱钙速度，因标本在酸性溶液中滞留的时间短，所以对组织的损伤小。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响作者：张大贵等来源：《中国现代医生》2012年第24期[摘要] 目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
[关键词] 脱钙液；骨组织；免疫组化染色[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）24—0101—03骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。
临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较_曹颖
文章编号：1000-5404（2009）23-2399-02短篇论著临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较曹颖（第三军医大学西南医院病理学研究所，重庆400038）摘要：目的比较几种骨组织的脱钙溶液与脱钙方法的效果，获得快捷、简便、适用于临床病理检验的脱钙技术。
方法考察在常温、恒温、搅拌状态下，几种常用的脱钙液对猪干骨中段脱钙、染色效果。
结果40ħ恒温搅拌条件下，盐酸-氯化钠脱钙液（脱钙液Ⅰ）、高浓度盐酸-甲酸-氯化钠脱钙液（脱钙液Ⅳ）、低浓度盐酸-甲酸-氯化钠脱钙液（脱钙液Ⅶ）、Plank-Rycho 脱钙液（脱钙液Ⅸ），都具有脱钙时间短、组织损伤小、不影响染色效果。
结论恒温搅拌条件下，脱钙液Ⅰ是最适合于临床病理检验的脱钙溶液。
关键词：脱钙液；骨组织；临床病理中图法分类号：R446文献标识码：A脱钙是决定骨骼、牙齿、病理性钙化或骨化组织切片质量、染色效果的重要技术关键之一。
简单、便捷、快速、有效的骨组织脱钙方法，有利于保持骨组织结构和组织中的抗原物质，对于临床正确诊断具有重要的意义。
目前报道的脱钙液和脱钙方法比较多［1－8］，但尚无公认的理想方法［2］，为此我们拟在恒温搅拌条件下，对几种备受推崇的脱钙液进行实验比较，期望获得适合于临床病理检验的骨组织脱钙液组成与脱钙方法。
报告如下。
作者简介：曹颖，女，湖南省长沙市人，主管技师，主要从事临床病理技术方面的研究。
电话：（023）68765462，E-mail ：chenji63@ 收稿日期：2009-06-22；修回日期：2009-07-131材料与方法1.1材料取新鲜的猪干骨，手术刀去除软组织与骨膜，大量水漂洗，用骨锯切取干骨中段，获得组织体积为10mm ˑ5mm ˑ1.5mm 的骨块，在4%中性甲醛液内固定24h ，用于脱钙实验。
1.2脱钙液组成选取文献报道比较多的几种脱钙溶液，用于考察操作条件、脱钙溶液组成对骨组织的脱钙效果。
各种脱钙溶液的组成及配制如下：盐酸-氯化钠脱钙液（脱钙液Ⅰ）：5ml HCl +15g NaCl +H 2O 至100ml 。
大鼠关节组织硝酸＼EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较
大鼠关节组织硝酸＼EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较标签：大鼠关节组织;硝酸脱钙;EDTA脱钙;石蜡制片骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一。
它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的。
适用组织化学、免疫组化等技术的染色。
大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败。
现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色。
对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果。
1 材料与方法1.1 材料大鼠30只、出生10周,平均体质量400 g(购自中山大学动物实验)。
雌雄不限,随机分组。
在麻醉状态下经心脏注射生理盐水及1%多聚甲醛处死动物,取关节组织、标本置10%甲醛固定液中固定24 h。
10%的硝酸脱钙液。
EDTA脱钙液,微波炉。
1.2 方法10%硝酸脱钙液的配制及脱钙方法将1份的硝酸溶液加入到9份的蒸馏水中搅拌均匀即可。
将大鼠关节组织放入是组织体积20倍量的10%硝酸溶液中,浸泡16～18 h,浸泡中无需更换脱钙液,用针能刺入即可。
取出组织置流水中冲洗碱化2 h。
取材,入脱水机石蜡包埋、切片、染色。
1.3 EDTA脱钙液的配制及脱钙方法用PBS缓冲液(pH7.2)100 ml、加NaOH 搅拌溶解至饱合状态,再加入EDTA10 g溶解后用1 mol/L Hcl调节pH值至7.2,加甲醛15 ml即可。
把脱钙液装入小烧杯中,将大鼠关节组织放置其中,脱钙液需充足。
放入微波炉中调节微波功率50℃,微波照射50 s即可达到脱钙的目的。
取出无需流水冲洗、直接取材、入脱水机、石蜡包埋、切片、染色。
2 结果10%硝酸脱钙处理的大鼠关节组织切片组织结构尚完整,组织块也能顺利连续切片,镜下:细胞形态、结构尚清,HE着色较淡,有时细胞核仁及膜边界不太清晰,分界不清,对比度不强。
在特殊染色和免疫组化染色中,着色较困难,效果欠佳。
三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析
顺利制 出一张质量较好的组织切片并非 易事 ， 本要 求是切 基
片 完整 ， 色后 各 种 骨 细 胞 的 细 胞 核 及胞 浆 清 晰 ， 胞 外 胶 染 细
原对 比度好 。 目前使用的脱钙方法有很 多种 ， 以分 为酸类 可 脱钙液 、 螯合剂脱钙液、 电解法脱钙液等 。
右， 辐射 ５ｍｎ测量脱钙液的温度（ （ ， ｉ， ＜６℃）间隙 ３ｍｎ ） ｉ 。用同
钙的效果 （ ２ 。 表 ）
表 ２ 三种 脱 钙 液 不 同 时 间效 果分 析
ＬｉＡ Ｐ０ ｅ ａＳ ３（ 自动脱水机 ；４ Ｌ ＩＡ全 自动包埋机 ；５ 东 ｃ ￣全 （ ）ＥＣ （） 方 一Ａ型恒温干燥箱 ；６ Ｏｙ ｐｓ （ ） ｌ ａ 显微 镜及 Ｃ ＩＳ图像 分析 ｍ ＭＡ 仪 ；７Ｒ ｎｓｅｇＣ （） ｏｇｈｎＢ Ｄ一１５ ６０冰箱 ；８ Ｎ一６０ （） ８３自动 温度控 制漂 片烤片仪。
２０ｍ ， ０ ｌ盐酸 ８ ５｜ ， ． Ｔ 甲酸 ５ｎ Ｉ ２ １％ 甲醛 ＋５ １ ｌ ｄ （ ）０ ％硝 酸液 ：
４ ％ 甲醛 ，５ ０ ６ ％硝 酸 ，０ ｌ 馏 水 ；３ Ｅ Ｔ 中性 液 ： Ｄ Ａ １０ｍ 蒸 （ ）Ｄ Ａ ＥＴ １ ， 馏 水 １０ｍ ， Ｎ Ｏ ０ｇ蒸 ０ ｌ加 ａ Ｈ搅 拌 溶 解 后 ， １ ｏ Ｌ的 Ｈ Ｉ 用 ０ｍ ｌ ／ Ｃ 调ｐ Ｈ为 ７ ０ 然后 加 ４ 甲醛 ｌ ｒ 。 ．， ％ ５ｎ ｌ １ １３ 仪 器 ．． （ ）ｉ ０微 波 炉 ；２ Ｌｉ Ｒ ２３ 片 机 ；３ １ｒ ２ ｐ （ ）ｅ ａ Ｍ １５切 ｃ （）
３ 讨 论
１２２ 脱钙方法 ．．
见表 １ 。
骨组 织分别按 以下方 法脱钙 ， 脱钙 时间
表 １ 三种 脱 钙 方 法 脱 钙 时 间表
不同脱钙液对骨髓组织切片HE染色效果的对比研究
ｍ ｙ ｌ ｉ ｉｓ ｅ ｔ ｎｆｕｅ ｅ． Ｍ ｅ ｈｅ ｔ １
Ｌａ ｉｏ ｎＭ ａ Ａ ＢＳ ＴＲＡＣＴ Ｇｏ ｎｇ Ｌｉ ＬｉＹ ａ ｏ ｅ ｌ ｎｈ ｎｇ ｔａ
Ｏｂｅ ｔ ｅ： ｓ ｕ ｓ ｓ ｔ ｅｄｆｅ ｅ ｔｄ ｃ ｌｉｙ ｆｕｄ ｔ ｌ ｅｔ ｅ ＨＥ ｄ ｅｎ ｕ ｌ ｙ ｔ ｈ ｊｃ ｉ Ｄｉｃ ｓｅ ｈ ｉｆｒ ｎ ｅ ａｃｆ ｌｉ ｏ ｓｉ ｈ ｙ ｉｇ ｑ ａｉ ｏ ｔ ｅ ｖ ｃ ｔ
【 图 分 类 号 １ Ｒ４ ６ ８ 【 献 标 识 码 】 Ａ 中 ４． 文
【 章 编 号 １ １ ０ — ３ ７ ２ １ ） ０１ ９ —２ 文 ０ ０ ７ ７ （ ０ ０ １ — ２ ９０
Ｔｈｅ ｄ ｆ ｅ ｅ ｃ ｌ ｉ ｙ ｆ ｕ ｄ ｓ ｉ ｅ ｈｅ Ｈ Ｅ ｙ ｉ ｆ ｅ ｔ ｔ ｈｅ ｉ ｆ ｒ ｎｔｄｅ ａ ｃ ｆ ｌ ｉ ｌｃ ｓ ｔ ｄ ｅ ｎｇ ｅ ｆ ｃ ｏ ｔ
摘 要 目的 ： 讨 不 同脱钙 液对 骨髓 组织切 片 ＨＥ染 色质量 的影 响 。 探 方法 ： 选用 １ 乙二 ０
胺 四 乙酸 钠 （ ＥＤＴＡ） ＨＡＳ复 合 酸 脱 钙 液 和 １ 硝 酸 ３种 不 同的 脱 钙 液 ， 成 Ａ、 Ｃ ３组 用 于 、 Ｏ 分 Ｂ、
脱 钙 ， 过记 录脱钙 时 间 ， 通 观察 ＨＥ 染 色效 果 ， 价 室 温下 （ ０ ８ 不 同脱钙 液 对 骨髓 组织 切 评 ２ ～２ ℃）
钙 液 。 结 论 ： 制 作 骨 髓 组 织 切 片 时 ， ＤＴ 脱 钙 液 和 ＨＡＳ复 合 酸 脱 钙 液 所 制 切 片 均 能 取 得 良 在 Ｅ Ａ
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不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响浅析
摘要目的分析不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学（免疫组化）染色抗原性的影响。
方法用8%硝酸分别于微波、光波及光波+微波组合Ⅰ、光波+微波组合Ⅱ的条件下对骨组织进行脱钙，并将室温（20℃）条件下脱钙的骨组织作为对照组，运用链霉菌素卵白素-生物素（LSAB）免疫组化染色技术，并对其染色效果进行分析比较。
结果微波、光波、光波+微波组合Ⅰ及光波+微波组合Ⅱ的脱钙时间显著低于对照组，且免疫组化染色效果显著优于对照组（P＜0.05）；光波+微波组合的免疫组化染色效果显著优于微波、光波（P＜0.05）；但微波与光波之间、光波+微波组合Ⅰ与光波+微波组合Ⅱ之间的免疫组化染色效果比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
结论光波+微波组合脱钙时间要明显短于微波、光波及室温脱钙，且具有良好的免疫组化染色效果。
关键词脱钙条件；骨组织；免疫组织化学染色；抗原性
【Abstract】Objective To analyze influence by different decalcification conditions on bone tissue antigenicity in immunohistochemical staining. Methods Decalcification was made through 8% nitric acid under microwave，light wave，light wave + microwave Ⅰand light wave + microwave Ⅱin bone tissue. Decalcification under room temperature （20℃）was taken as control group. Labelled streptavidin biotin method （LSAB）immunohistochemical staining was applied to analyze and compare stain effects. Results Decalcification time under microwave，light wave，light wave + microwave Ⅰand light wave + microwave Ⅱwere all shorter than control group，and their immunohistochemical staining effects were all better than control group （P＜0.05）. Light wave + microwave had better immunohistochemical staining effects than single microwave or light wave （P ＜0.05）. There was no statistically significant difference of immunohistochemical staining effects across microwave，light wave，light wave + microwave Ⅰand light wave + microwave Ⅱ（P>0.05）. Conclusion Light wave + microwave provides shorter decalcification time than microwave，light wave and room temperature，and it contains good immunohistochemical staining effect.
【Key words】Decalcification condition；Bone tissue；Immunohistochemical staining；Antigenicity
目前，免疫組化染色技术是临床病理鉴别及诊断的重要手段，骨组织由于含有丰富的钙盐，因此其免疫组织化学染色自然与常规石蜡切片有所区别，通常需要先去除钙盐后才可制成比较薄的切片，然后再进行常规脱水、透明处理等操作[1]。
本研究旨在分析探讨不同脱钙条件对骨组织免疫组化染色抗原性的影响，现报告如下。
1 材料与方法
1. 1 材料选取2012年4月～2015年8月骨外科送检的人骨组织，脱钙液为硝酸10 ml+蒸馏水190 ml制成的硝酸液。
Panasonic NN-DF382M光波/微波炉1台，微波额定输入功率为1400 W，光波额定输入功率为1050 W，微波额定输出功率为900 W，额定输出频率为2450 MHz，输出功能共分为微波、光波及光波+微波组合Ⅰ、光波+微波组合Ⅱ。
微波输出功率为5个调节档，光波输出功率为单一光波管发光，光波+微波组合Ⅰ为微波输出时间的30%+光波输出时间的70%，光波+微波组合Ⅱ为微波输出时间的55%+光波输出时间的45%。
1. 2 方法将1.0 cm×0.5 cm×0.3 cm的骨组织分别用8%硝酸分别于微波、光波及光波+微波组合Ⅰ、光波+微波组合Ⅱ的条件下进行脱钙。
将脱钙后的骨组织常规制成切片，经复合酶消化石蜡切片后，运用LSAB免疫组化进行免疫酶细胞化学染色。
1. 3 统计学方法采用SPSS19.0统计学软件处理数据。
计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，采用t检验；计数资料以率（%）表示，采用χ2检验。
P ＜0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
微波、光波、光波+微波组合Ⅰ及光波+微波组合Ⅱ的脱钙时间显著低于对照组，且免疫组化染色效果显著优于对照组（P＜0.05）；光波+微波组合的免疫组化染色效果显著优于微波、光波（P＜0.05）；但微波与光波之间、光波+微波组合Ⅰ与光波+微波组合Ⅱ之间的免疫组化染色效果比较差异无统计学意义（P>0.05）。
见表1。
3 讨论
骨组织含有大量的钙，质地坚硬，一般不可直接进行制片染色，需要经过脱钙处理的特殊工序。
对病理活检苏木精-伊红染色（HE染色）的效果不会构成比较大的影响，但是在很大程度上会影响到免疫组化染色抗原性[2]。
近些年，微波辐射技术逐步深入应用到骨组织脱钙、免疫组化染色、抗原修复等，且效果突出，特别是EDTA快速脱钙、微波-低温硝酸等技术对最大化地保留脱钙组织的抗原性做出了重要的贡献[3，4]，而光波+微波脱钙到底对免疫组化染色抗原性的实际影响在文献报道中鲜见。
本组研究中光波-微波组合Ⅱ脱钙时间在集中脱钙方法中是最短的，而室温下的骨组织与切片呈现出淡黄色，脱钙时间最长。
就免疫组化染色效果来说，室温条件下的脱钙组织最差，微波、光波条件下的脱钙组织相对较好，光波+微波组合Ⅰ、光波+微波组合Ⅱ条件下的脱钙组织最好，主要是因为微波与光波的双重作用促使了骨组织的钙盐的反应速度进一步加快，使得过去的常规脱钙方法少至数小时多则几天的反应时间大大缩短以致在短时间内便可完成，因而最大化地保留了抗原性，提高了免疫组化染色的效果。
在光波+微波-硝酸脱钙的应用过程中应注意如下几方面：①微波与光波的双重作用会使得脱钙液温度在短时间内迅速升高，因此结合预冷降温措施可很好地减轻温度对抗原性的影响[5]。
②不宜使用金属容器盛装脱钙液，且要保证充
足的脱钙液量，通常情况上要达到标本的20～30倍左右，并要更换1～2次新液。
③骨组织厚薄适宜， 5 mm左右为最宜，以防脱钙时间过长而损及组织形态结构、影响染色效果。
综上所述，8%硝酸光波+微波组合脱钙时间要明显短于微波、光波及室温脱钙，且具有良好的免疫组化染色效果。
参考文献
[1]杨传红，赖晃文，唐云，等.微波快速脱钙及其脱钙液的选择. 临床与实验病理学杂志，2010，12（4）：357-358.
[2]刘海芳. HE染色切片褪色后免疫组化染色方法研究.中国现代医生，2011，49（17）：81-82.
[3]熊正文，李宏伟，黄勇，等.骨組织脱钙技术及在免疫组化染色中的应用研究.中国比较医学杂志，2011，14（3）：175-178.
[4]熊正文，朱光君，黄勇，等.骨组织的脱钙及其免疫组织化学染色技术探讨.中国组织化学与细胞化学杂志，2010，11（3）：347-349.
[5]张绪斌，熊正文，张华东.骨组织脱钙技术及其应用.医学理论与实践，2011，24（11）：1264-1267.。