临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较
骨的煅烧和骨的脱钙实验
骨的煅烧和骨的脱钙实验骨骼是人体重要的组成部分，它不仅是身体的支撑系统，还有储存钙质、造血等重要功能。
骨骼中含有大量的有机和无机成分，其中有机成分主要是胶原蛋白，无机成分主要是磷酸钙。
骨的煅烧和骨的脱钙实验是研究骨骼组成的常用方法。
一、骨的煅烧实验骨的煅烧实验是一种通过高温处理来研究骨骼组成的方法。
该实验的原理是将骨骼样品加热至高温，使有机物质被分解，从而得到无机物质的残留物。
该残留物主要由磷酸钙和少量的其他无机盐组成。
该实验的步骤如下：1. 取骨骼样品，去除软组织，洗净并晾干。
2. 将样品放入炉中，加热至800℃左右，保持一定时间。
3. 取出样品，冷却后得到煅烧后的骨骼样品。
4. 对样品进行质量分析和化学分析。
通过煅烧实验得到的残留物主要是磷酸钙，因此可以通过测定残留物的重量和磷酸钙的含量来计算出煅烧前骨骼中磷酸钙的含量。
二、骨的脱钙实验骨的脱钙实验是一种通过化学方法去除骨骼中的钙质，从而研究骨骼有机成分的方法。
该实验的原理是将骨骼样品加入强酸中，使钙质溶解，从而得到有机物质的残留物。
该残留物主要由胶原蛋白等有机成分组成。
该实验的步骤如下：1. 取骨骼样品，去除软组织，洗净并晾干。
2. 将样品放入强酸中，如盐酸或硝酸，使钙质溶解。
3. 取出样品，冲洗干净，晾干。
4. 对样品进行质量分析和化学分析。
通过脱钙实验得到的残留物主要是胶原蛋白等有机成分，因此可以通过测定残留物的重量和有机成分的含量来计算出脱钙前骨骼中有机成分的含量。
总结骨的煅烧和骨的脱钙实验是研究骨骼组成的重要方法。
通过这些实验可以得到骨骼中有机和无机成分的含量，从而更深入地了解骨骼的构成和作用。
这些实验不仅可以用于医学研究，也可以应用于材料科学、地质学等领域的研究。
不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用
不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用【摘要】目的比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异，探讨其对HE染色的影响。
方法选取50例手术切除的新鲜骨标本，运用4种常用的脱钙液(14%硝酸、10%盐酸、20%甲盐酸和EDTA脱钙液)进行脱钙，比较其脱钙效果和对HE染色的影响。
结果不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别。
结论14%硝酸脱钙能力最强，用时间最短，染色的效果最差；10%盐酸对骨组织的损伤小，HE染色的效果最好，但用时较长；20%甲盐酸脱钙能力和HE染色效果都介于10%盐酸和EDTA脱钙液之间；EDTA脱钙液脱钙用时最长, 对骨组织的损伤最小。
【Abstract】Objective To investigate the different ability of four different decalcifying solutions to decalcify and their influence of HE stain and immunohistochemistry. Methods 50 cases of fresh human bone example are selected. The bones had been decalcified with four kinds of decalcifying solution (including 14% nitric acid, 10% hydrochloric acid, 20% a hydrochloric acid and EDTA). Results Different decalcifying solutions had the different decalcified ability and the influence of HE stain and immunohistochemistry. Conclusion 14% nitric acid can decalcify strongly and rapidly. But its deficiency is the infection of HE coloration and immunohistochemistry. 10% hydrochloric acid doesn’t destroy the tissue and has the best influence for HE stain. The effect of 20% a hydrochloric acid and HE stain between 10% hydrochloric acid and EDTA decalcifying acid. EDTA can decalcify for a long , have the minimum damage for bone tissue.【Key words】Decalcifying solution; HE stain; Bone tissue骨组织是一种坚硬的结缔组织，由骨细胞和骨基质组成，骨基质内含大量无机盐，主要是羟磷灰石-磷酸钙和碳酸钙。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响作者：张大贵等来源：《中国现代医生》2012年第24期[摘要] 目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
[关键词] 脱钙液；骨组织；免疫组化染色[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）24—0101—03骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
骨组织脱钙技术及其应用
骨组织脱钙技术及其应用张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【摘要】@@ 骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2011(024)011【总页数】4页(P1264-1267)【关键词】骨组织;脱钙技术;应用【作者】张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【作者单位】解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000【正文语种】中文【中图分类】R954.65;R392.1骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的。
无机盐以羟基磷灰石结晶的形式存在,其中绝大部分为水合磷酸钙,此外还包括微量碳酸盐和柠檬酸盐等[1,2],因此骨和其他一些已钙化的组织在脱水、透明等制片前必须将组织中的钙盐用脱钙剂除去,才能制成4～5μm厚的切片。
目前,常用的脱钙剂主要有单纯酸类、混合酸类、螯合剂、离子交换树脂和电解脱钙等方法[3～6],尤其是近年来应用微波技术辅助脱钙明显缩短了脱钙时间,改善了HE、组织化学、免疫组织化学染色和原位杂交[7～11]。
现将骨组织的脱钙技术及应用等有关内容简介如下。
1 骨组织的组织学特点[1,2]骨组织由骨基质和骨细胞组成,骨基质是由有机物质和无机物质紧密结合而成,主要成分有:(1)胶原纤维:为Ⅰ型胶原;(2)粘蛋白:为胶原纤维间的无定型物质;(3)骨盐:主要是羟基磷灰石;(4)酶:包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和胶原酶等。
软骨基质是由软骨母细胞分泌丰富的蛋白多糖组成的,HE染色呈淡蓝色,A lcian蓝染色阳性(蓝色),甲苯胺蓝呈异染性反应(紫红色),软骨的胶原属Ⅱ型胶原。
骨组织脱钙方法
骨组织脱钙方法
一、化学脱钙法
化学脱钙法是一种常用的骨组织脱钙方法，通过使用酸性溶液或者强酸来溶解骨组织中的钙盐，从而去除骨组织中的钙离子。
常用的化学脱钙溶液包括盐酸、硝酸、硫酸等。
这种方法的优点是操作简单、脱钙效果好，但同时也存在一些缺点，如酸性溶液对骨组织本身有一定的损伤，且脱钙过程中会产生有毒气体，需要良好的通风设施。
二、酶解脱钙法
酶解脱钙法是一种较为温和的骨组织脱钙方法，通过使用酶制剂来分解骨组织中的胶原蛋白和钙盐，从而达到脱钙的目的。
常用的酶制剂包括胶原酶、弹性蛋白酶等。
酶解脱钙法的优点是操作简单、对骨组织损伤小、不产生有毒气体，但同时也存在一些缺点，如脱钙速度较慢，需要较长时间才能完成脱钙。
三、微波脱钙法
微波脱钙法是一种新型的骨组织脱钙方法，通过使用微波辐射来加速骨组织中的水分子运动，产生热量使骨组织内部的温度升高，从而加
速骨组织中的钙盐溶解和脱钙过程。
微波脱钙法的优点是脱钙效果好、速度快、对骨组织损伤小，但同时也存在一些缺点，如需要使用特殊的微波设备，且操作技术要求较高。
综上所述，不同的骨组织脱钙方法各有优缺点，应根据实际需求和实验条件选择适合的脱钙方法。
10％ EDTA、5％硝酸用于大鼠颞骨脱钙处理的效果对比观察
10％ EDTA、5％硝酸用于大鼠颞骨脱钙处理的效果对比观察卓洋;王巧;杨聪颖;陈昊;李爱民【摘要】目的观察并比较10％乙二胺四乙酸二钠(EDTA)和5％硝酸脱钙处理大鼠颞骨的效果.方法 SD大鼠10只,随机分为EDTA组和硝酸组,取出大鼠颞骨后分别置于10％ EDTA、5％硝酸脱钙液中进行脱钙处理.观察两组脱钙效果,记录脱钙时间,采用甲苯胺蓝染色进行颞骨组织形态学观察,采用免疫荧光双标染色检测α-tubulin蛋白、水通道蛋白1(AQPl).结果两组取材过程中,颅骨硬度适当,颞骨可轻松切下,无砂砾感,切下的颞骨无松散及组织脱落.硝酸组脱钙所需时间分别为(11.20±0.83)d、(26.20 ±2.38) min,两组相比,P＜0.05.EDTA组颞骨整体形态保持完好,蜗管、镫骨肌、岩动脉、神经元、雪旺细胞、郎飞结、神经干可清晰辨识;硝酸组颞骨整体结构保存较理想,神经元形态保持尚可,但存在骨质染色不均、雪旺细胞崩解、轴突肿胀、郎飞结消失现象.EDTA组颞骨脱钙后AQP1、α-tubulin蛋白定位准确,组织区分度高;硝酸组由于细胞膜中AQP1遭受破坏、位于微管内的α-tubulin蛋白漏出细胞,荧光消减明显,组织形态保持较差.结论 10％ EDTA和5％硝酸用于大鼠颞骨脱钙处理效果均较好,两种脱钙液均适用于普通病理及结构观察,若用于蛋白定量及定性方面研究,应首选10％ EDTA.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(056)031【总页数】3页(P43-45)【关键词】骨脱钙技术;乙二胺四乙酸二钠;硝酸;颞骨【作者】卓洋;王巧;杨聪颖;陈昊;李爱民【作者单位】徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000;徐州医学院附属连云港医院,江苏连云港222000【正文语种】中文【中图分类】R446.6颞骨参与构成头颅的侧部与颅底，其中穿行面神经、脑膜中动脉及分支，颞骨同时容纳听觉器官及其附属结构，颞骨骨折可造成上述结构损伤，引起相应并发症[1]。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA 脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK 脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK 脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
标签：脱钙液；骨组织；免疫组化染色骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
③脱钙液Ⅲ：PLANK脱钙液，配制方法为氯化铝10 g，甲酸50 mL，10%福尔马林10 mL，冰乙酸1.5 mL，加蒸馏水至总体积100 mL。
骨组织脱钙液介绍
骨组织脱钙液介绍骨组织脱钙液概述在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。
由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。
骨组织含钙量最多。
除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。
脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的织固定之后再进行脱钙或采用固定兼有脱钙的液体处理，固定并脱钙。
然后再行常规制片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid EDTA）除此之外还有电解脱钙法。
强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。
令人遗憾的是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。
细小的组织，例如，骨髓组织不推荐用强酸脱钙。
虽然可以使用各种附加剂，如缓冲液具有保护组织的作用，但也降低了脱钙速度。
因此，各种脱钙液的配方都围绕着脱钙速度和消除对组织的不良影响而设计。
在酸类脱钙液中醋酸和甲酸比较适合于骨髓组织脱钙。
甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂。
甲酸脱钙 10% 浓度比较合适。
醋酸和甲酸的作用比较弱，脱钙速度比较慢，它们不适合密皮质骨的脱钙。
EDTA 是一种比较温和的脱钙剂（EDTA 不是酸）。
对组织的渗透性差，作用慢。
大剂量使用价格较贵。
电解脱钙对组织损害最小，因为它的脱钙速度太慢，所以，不适合常规使用。
不同的脱钙液对骨组织的脱钙作用不同，脱钙效果也不完全相同。
为了达到良好的脱钙效果，建议使用EDTA脱钙液，该脱钙液对组织损伤较小，缺点就是脱钙时间会比较长些，但脱钙时间也要根据组织块大小而定。
目前国内生产EDTA脱钙液的公司也很少，个人感觉上海舜百生物的EDTA脱钙液使用效果还不错，脱钙脱的比较彻底，而且对组织损伤很小，就是周期长了些。
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临床病理检验常用骨组织脱钙液效果的比较
摘要：目的：探讨临床病理检验常用骨组织脱钙液的临床效果。
方法：选取在2013年12月-2014年12月在我院行手术切除的骨病变、骨肿瘤以及骨髓穿刺患
者标本70例，把70例标本随机分成两组，观察组和对照组，每组分别35例标本。
给予对照组硝酸脱钙液检验，观察组快速脱钙液检验，比较观察两组标本在
微波以及常温条件下骨组织脱钙和切片染色效果。
结果：使用快速脱钙液处理的
观察组标本组织切片在4μm-5μm之间，切片完整平坦，薄厚均匀并且颜色新鲜，细胞核有清晰染色；使用硝酸脱钙液处理的组织切片薄厚不均匀，没有完整切片，染色较模糊并且没有清晰的核着色，会对病理诊断造成相应的影响。
结论：将快
速脱钙液运用在临床病理检验中，可将切片质量显著提高，有推广运用意义。
关键词：临床病理检验；常用骨组织脱钙液；效果；比较
因骨组织中有大量钙盐沉淀，形成坚硬的结缔组织，实施直接切片治疗非常复杂，选取对
保护骨组织形态结构有利并且制片效果较好的脱钙方式是当前重点研究的问题，这对临床检
验中诊断病理有重要意义。
当前众多研究中使用的改良脱钙方式较多，但具体何种方式可保
证取得良好的检验效果仍不明朗[1]。
为研究临床病理检验常用骨组织脱钙液的临床效果，选
取在2013年12月-2014年12月在我院行手术切除的骨病变、骨肿瘤以及骨髓穿刺患者标本70例，现将结果报告如下：
1资料与方法
1.1一般资料选取在2013年12月-2014年12月在我院行手术切除的骨病变、骨肿瘤以
及骨髓穿刺患者标本70例。
将70例标本随机分成两组，每组35例。
按照标本的差异把骨
组织切取为体积是1.5×1.5×0.5cm的标本薄片，通常骨髓的直径为0.1cm，将所有标本放入到
浓度为10%的福尔马林中固定24h，随后运用到脱钙实验中。
1.2方法
1.2.1对照组给予对照组标本使用硝酸脱钙液临床病理检验。
硝酸脱钙液是5%的硝酸5ml
溶于95ml蒸馏水中。
脱钙步骤如下：（1）将大块骨组织切成小片，对小块骨组织标本无需
改刀，随后放入到10%的福尔马林中固定24h，随后进行脱钙步骤。
（2）将等待脱钙的标本
放入到硝酸脱钙液中，其中脱钙液不能少于待脱钙标本体积的10倍。
（3）在室温下脱钙骨
髓的穿刺标本需要在30min-60min内完成；皮质骨脱钙标本需要在5d-7d内完成；指耻骨脱
钙标本需要在3d-6d内完成。
（4）脱钙之后的骨组织经过水冲洗后进行取材、脱水、透明、
石蜡包埋、制片等一系列技术。
1.2.2观察组给予患者标本使用37%的8ml盐酸、5ml冰醋酸、10g水杨酸、87ml蒸馏水混合。
使用微波炉加热可使组织内部分子运动加速并把脱钙的速度加快，因为标本在酸性溶液
中滞留时间较短，因此对骨组织的副作用较小。
具体脱钙步骤如下：（1）将大块骨组织切
成小片，对小块骨组织标本无需改刀，随后放置到装有脱钙液的耐高温玻璃或者塑料容器内，脱钙液不得少于待脱钙标本总体积10倍。
（2）随后把容器放入到功率为850W的医用微波
炉中实施微波脱钙工作。
（3）入微波炉之后使用高档加热5min使温度达到100℃，将骨髓
的穿刺标本继续保留10min，把其他标本留置30min，对脱钙效果进行检查。
（4）脱钙之后
的标本不需要水洗，直接按照病理进行取材、脱水、透明、包埋、制片[2]。
2结果
使用快速脱钙液处理之后的标本组织切片的厚度在4μm-5μm之间，切片完整平坦，薄厚
均匀并且颜色新鲜，细胞核有清晰染色，具体情况见图1；使用硝酸脱钙液处理的组织切片
薄厚不均匀，没有完整切片，染色较模糊并且没有清晰的核着色，会对病理诊断造成相应的
影响，具体情况见图2。
3讨论
脱钙是指使用物理或者化学的方式把骨组织成分中的胶原纤维以及钙盐分离，将钙盐去除。
快捷、简单、有效的脱钙方式是当前医学研究中重点关注的问题。
近年来，广大病理研究人
员也进行了大量实验以及探索，比如当前在临床检验中使用的微波脱钙技术等方式，但是因
微波处理需要多次操作并且需专人看护，制约了在实际操作中的使用[3]。
但无论何种脱钙方
式都是为了减少骨组织钙盐并且保证骨组织变软进行的切片。
在临床检验中使用方便、优质
以及快捷的脱钙方式对骨组织方面疾病实施病理诊断非常重要。
硝酸脱钙方式是把标本取好后直接放入到硝酸液中脱钙，其中脱钙时间在1d-10d之间，
随后经脱水、包埋切片等步骤，切片厚度均在6μm以上，并且因切片时没有完整的组织，厚度不均匀容易致使脱片，无法准确掌握脱钙时间[4]。
快速脱钙液进行脱钙时通常需要10min-40min，可将脱钙时间有效缩短并保证制片质量。
因快速脱钙液中含有水杨酸物质并且有一定松懈作用，可将酸性溶液有外至内的将钙盐溶解，被溶解的钙盐会迅速出现沉淀，减少和溶剂胶原混合，可把水盐酸的胶原作用充分发挥并把
组织间隙疏通，保证钙盐快速脱钙[5]。
同时还因组织在酸性溶液中滞留的时间较短，对组织
的伤害较小，会最大限度的保证切片平整，有较好的染色效果。
此种脱钙方式便捷、简单、
快速，属于有效的骨组织脱钙方式。
综上所述，将快速脱钙液运用在临床病理检验中，可将切片质量显著提高，有推广运用意义。
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