骨组织电镜脱钙技术在免疫组化中的应用
初级(士)卫生资格初级病理学技术士模拟题2021年(3)_真题-无答案
初级(士)卫生资格初级病理学技术士模拟题2021年(3) (总分97.XX01,考试时间120分钟)A1/A2题型1. 合成结构蛋白的细胞器是A. 微粒体B. 游离核糖体C. 高尔基复合体D. 固着核糖体E. 滑面内质网2. 用于电镜标本后固定的试剂是A. 戊二醛B. 多聚甲醛C. 丙酮D. 锇酸E. 酒精3. 下列哪一项符合抗原的物理状态分类法分类A. 颗粒性抗原B. 多糖抗原C. 异种抗原D. 半抗原E. 天然抗原4. 一般死后多长时间开始出现尸斑A. 2～4小时B. 6～8小时C. 14～16小时D. 10～12小时E. 18小时以上5. 碱性品红属于A. 吖啶染料B. 偶氮染料C. 苯甲烷染料D. 醌亚胺染料E. 硝基染料6. Bouin液是一种良好的固定液，它常用的pH为多少A. 2～2.5B. 3.6～4.0C. 4.7～5.0D. 3～3.5E. 4.0～4.57. 作为乳腺癌和子宫内膜癌的病理检验的重要项目之一的是A. 催乳素（PRL）B. 促黄体生成激素（LH）C. 滤泡刺激激素（FSH）D. 雌孕激素受体（ER和PR）E. 雄激素受体（AR）8. 肥大细胞中不含有何种成分A. 多巴胺B. 组胺C. 血清素D. 肝素E. 黑色素9. 目前，最常用的石蜡切片机是A. 轮转式切片机B. 滑走式切片机C. 恒冷切片机D. 超薄切片机E. 骨组织切片机10. 戊二醛储存时间过长会使溶液颜色变黄，原因是戊二醛发生了A. 氧化B. 交联C. 聚合D. 吸水E. 还原11. 下列病理大体标本的固定原则中错误的是A. 固定标本的容器宜宽大，口不宜过小B. 固定液的量要充足C. 较贵重的固定液亦不能少于标本体积的4倍D. 固定液的性质及温度与固定时间有关E. 各类标本固定的时间要一致12. 下列不是广谱上皮细胞标志物的是A. 细胞角蛋白B. 上皮特异抗原C. 波形蛋白D. 癌胚抗原E. 上皮肿瘤相关抗原13. 原位杂交固定是为了()。
TRAP染色与免疫组化套染技术在骨组织损伤修复染色中的应用
参考文献：
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临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ ２０２１Ｍａｙ；３７（５）
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散在细胞胞质暗红色，细胞核蓝色，胞体大，核数量不等的破 骨细胞分布，其余细胞胞质不显色，ＴＲＡＰ染色与 ＶＥＧＦ免疫 组化套染可见兔股骨髁骨缺损处生物材料内 ＶＥＧＦ在新生 骨组织细胞、部分破骨细胞、新生血管内皮及部分炎细胞胞 质呈棕黄色表达，破骨细胞胞质暗红色，胞核蓝色，其余细胞 胞核蓝色、胞质不显色且背景干净（图 ２）。
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３ 讨论
骨组织损伤修复基础研究中，ＶＥＧＦ增强缺损处血管通 透性，诱导新骨形成的同时也加速破骨细胞的骨吸收，促进 骨愈合［４］。破骨细胞起源于造血干细胞，与执行骨形成功能 的成骨细胞处于动态平衡。研究者试图在同一张脱钙骨组 织石蜡切片上观察破骨细胞与 ＶＥＧＦ的共表达。本实验采 用 ＴＲＡＰ染色与 ＶＥＧＦ免疫组化套染技术，经反复实验发现 该套染技术成 功 需 要 注 意 以 下 几 方 面。 （１）骨 组 织 离 体 后 处理：骨组织离体后除立即使用 １０％中性缓冲福尔马林固 定外［５］，还使用硬组织切片机将 骨 组 织 修 切 成 ３ｍｍ厚 薄 片，以便固定液充分渗透到骨组织内部得到最佳固定效果。 骨组织比软组织致密，若不切开固定，固定液渗透慢导致固 定欠佳，导致不能较好地 保 存 骨 组 织 内 部 细 胞 形 态 结 构、 ＴＲＡＰ酶及抗原。固定不佳的组织后续脱水处理不佳，增加 组织脱片的风险。本实验脱钙液选择文献报道的改良脱钙 液［２］，脱钙和固定同时进行，脱钙使用 ３７℃水浴加快脱钙速 度，以保证在最短的时间内脱钙完全。组织离体后进行该处 理方法可大 大 降 低 脱 片、ＴＲＡＰ酶 及 抗 原 丢 失 的 风 险。 （２） ＴＲＡＰ染色：ＴＲＡＰ染液容易失效，每次实验前待染切片置于 ３７℃水浴锅中静置 １５ｍｉｎ时即可配制 ＴＲＡＰ孵育液，现用
骨组织的脱钙及其免疫组织化学技术的探讨
３ ．骨 组 织 的 快 速 脱 钙 方 法
仁 ，胞 浆 嗜酸 性 ，有突 起 ，电 镜 下 可 见 微 绒 毛 。破 骨 细 胞
含 有丰 富 的酸 性磷 酸 酶 和胶 原 酶 。骨 细 胞 间质 由有 机 质 和 无 机质 两种 成 分 紧密 结 合 而成 。无 机 质 是 骨 盐 （ 要 是 羟 主 基 磷灰 石 ） 。有机 质包 括骨 胶纤 维和 无定 形 的有 机 质 。骨 胶 纤维 即骨 中的胶 原纤 维 ，构成 骨 胶 原 纤 维 的 蛋 白质 为 Ｉ型
Ｃ ）技术是 用 已知的标 记的特异性 抗体 或抗 原对组 织 内相应 Ｓ 抗 原或抗 体进 行定 性 、定 位 或定 量 检 测 ，经 组 织化 学 反 应 ， 使标 记 于特异 性 抗 体 的 酶 、金 属 及 荧 光 素 等 呈 现 出某 种 颜 色 ，并 借助于 光镜 、荧 光显微镜 及 电子显微 镜等 观 察所 显示 的颜 色 和变化 ，从 而 了解抗原 或抗 体结 合部 位 和含 量 的一 门
面 ：一是 组织 块过 大 ，固定剂 未能充 分浸透使 组 织 中心 部位 的抗原溶 解 、弥散 或丢失 ；二 是福尔 马林 固定 时间 过长 ，因
百－ 茎氨基 交联 而 降低 抗 原 性 ；三 是 固定 液 的 种类 、浓度 和 温 度对一些 特殊 抗原 有很 大的 破坏 作用 ，如 浓 度超 过 ２ 的醛 类 固定剂 、０ ４ 苯 二酮 等对 ５羟色胺抗 原保存 不利 ［ ］ ． 一 １ 。
骨 是构 成 人 体 骨骼 的 主要 器 官 ，它 由骨 组 织 、骨 膜
关节 和 关节 软骨 构 成 。骨组 织 由骨 细 胞 和 细 胞 间 质 （ 称 又 骨 间质 ）构成 。骨 的细 胞成 分 有 ：① 成 骨 细 胞 ，其 形 态 与 静止 及 活跃状 态 有关 ，呈梭 形 。成 骨 细 胞能 产 生骨 样 基 质 ， 由骨 样 基质 与其 周边 的成 骨 细 胞 构 成 骨 样 组 织 ，Ｈ ・ 染 Ｅ 色呈 粉 红色 。② 骨 细胞 ，位 于 骨 陷 窝 内 ，呈 小 梭 形 。骨 细 胞 可 分成 最年 轻 的骨 细 胞 、较成 熟 的骨 细胞 和成 熟 的骨 细 三种形 态 结构 ，他们 的功 能 随 细胞 的 年 龄 而 不 同 。③ 破 骨 细胞 ，为 多 核 巨 细 胞 ，可 有 １ 一 ２ Ｏ Ｏ个 核 ，核 淡 染 ，有 核
电镜制片技术在骨组织免疫组化中的应用
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三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响作者：张大贵等来源：《中国现代医生》2012年第24期[摘要] 目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。
方法选择12例骨组织，随机分为3组。
A组用14%硝酸脱钙液进行处理，B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理，同时对CD3、CD68、Ki—67 和TTF—1染色。
结果室温条件下，硝酸脱钙液的脱钙时间最短，但对组织损伤最大。
PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好，组织结构完整，形态清晰，免疫组化染色较好。
结论室温条件下，三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。
但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长，PLANK脱钙液脱钙均匀，速度快，更适合用于临床病理检查。
硝酸脱钙液脱钙最快，但是免疫组化染色效果较差。
[关键词] 脱钙液；骨组织；免疫组化染色[中图分类号] R446.4+1 [文献标识码] B [文章编号] 1673—9701（2012）24—0101—03骨组织内含有大量无机钙盐，结缔组织坚硬，难以直接制片[1]。
如果强制切片，在蓝色钙盐背景下，往往无法看清细胞结构，所以需要选择一种能保持骨组织形态结构和染色后有利于保持细胞结构清晰度和对比度的脱钙液。
本文研究14%（体积分数）硝酸脱钙液、EDTA脱钙液、PLANK脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响，以期寻找一种效果比较理想的脱钙液，对病理诊断工作提供帮助。
1 材料与方法1.1 标本选择12例骨组织标本均来源于我院，切成1 cm×1 cm×0.3 cm的骨块，在福尔马林中性液内固定24 h，用于脱钙及免疫组化染色实验。
1.2 三种脱钙液①脱钙液Ⅰ：14%（体积分数）硝酸脱钙液，配制方法为14 mL浓硝酸加入86 mL蒸馏水；②脱钙液Ⅱ：EDTA脱钙液，配制方法为EDTA10 g，蒸馏水100 mL，加NaOH充分搅拌溶解，在用10 mol/L的HCl调pH为8.0，最后加入4%甲醛15 mL。
骨组织脱钙技术及其应用
骨组织脱钙技术及其应用张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【摘要】@@ 骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2011(024)011【总页数】4页(P1264-1267)【关键词】骨组织;脱钙技术;应用【作者】张绪斌;熊正文;张华东;解放军第【作者单位】解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000;解放军第251医院,河北省张家口市,075000【正文语种】中文【中图分类】R954.65;R392.1骨组织不同于一般的软组织,是一种坚硬的结缔组织,由粘多糖和一些胶原纤维样骨胶纤维构成的骨样组织和沉着于其中的无机盐(骨盐)形成的。
无机盐以羟基磷灰石结晶的形式存在,其中绝大部分为水合磷酸钙,此外还包括微量碳酸盐和柠檬酸盐等[1,2],因此骨和其他一些已钙化的组织在脱水、透明等制片前必须将组织中的钙盐用脱钙剂除去,才能制成4～5μm厚的切片。
目前,常用的脱钙剂主要有单纯酸类、混合酸类、螯合剂、离子交换树脂和电解脱钙等方法[3～6],尤其是近年来应用微波技术辅助脱钙明显缩短了脱钙时间,改善了HE、组织化学、免疫组织化学染色和原位杂交[7～11]。
现将骨组织的脱钙技术及应用等有关内容简介如下。
1 骨组织的组织学特点[1,2]骨组织由骨基质和骨细胞组成,骨基质是由有机物质和无机物质紧密结合而成,主要成分有:(1)胶原纤维:为Ⅰ型胶原;(2)粘蛋白:为胶原纤维间的无定型物质;(3)骨盐:主要是羟基磷灰石;(4)酶:包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶和胶原酶等。
软骨基质是由软骨母细胞分泌丰富的蛋白多糖组成的,HE染色呈淡蓝色,A lcian蓝染色阳性(蓝色),甲苯胺蓝呈异染性反应(紫红色),软骨的胶原属Ⅱ型胶原。
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响
三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响张大贵;林小芳;张普;周婵萍【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2012(50)24【摘要】目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响.方法选择12例骨组织,随机分为3组.A组用14％硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色.结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大.PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好.结论室温条件下,三种脱钙液巾PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好.但南于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查.硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差.【总页数】3页(P101-103)【作者】张大贵;林小芳;张普;周婵萍【作者单位】温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院泌尿外科,浙江温州 325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000;温州医学院附属第二医院病理科,浙江温州325000【正文语种】中文【中图分类】R446.4+1【相关文献】1.三种脱钙液对免疫组化染色效果的比较 [J], 孙庆妹;刘军2.三种脱钙液对骨组织脱钙后切片染色效果分析 [J], 连丽琴;夏凌志;钟惠霞3.四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响 [J], 李锐;金玉兰;韩一丁;刘红刚4.混合脱钙液与EDTA脱钙液对骨组织切片HE染色影响的分析 [J], 吴拮;孙立国;赵成相;李静;郭国峰;吕荣5.八种脱钙液对骨组织制片后HE染色质量影响的实践探究 [J], 方皓;云杰苗;王雄;袁滋铎;林俞辰;陶子春;薛逢贵;胡爱华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
病理学技术士《专业知识》模拟试卷二
病理学技术士《专业知识》模拟试卷二[单选题]1.在免疫组织化学染色中，引起交叉反应的是（江南博哥）A.半抗原B.异种抗原C.超抗原D.共同抗原E.特异性抗原参考答案：D参考解析：共同抗原引起交叉反应。
[单选题]2.网状纤维染色中，10%中性甲醛的作用是A.氧化B.漂白C.媒染D.还原E.镀银参考答案：D参考解析：甲醛的作用是将银离子还原成金属银。
[单选题]3.临床常用的上皮源性肿瘤标记抗体，最常用于鳞癌诊断的是A.上皮膜抗原（EMA）B.细胞角蛋白（LowMW）C.细胞角蛋白7D.细胞角蛋白（Pan）E.细胞角蛋白（HighMW）参考答案：E[单选题]4.骨组织作免疫组化染色时，常用的脱钙剂是A.硝酸B.盐酸C.EDTAD.蚁酸E.硫酸参考答案：A参考解析：骨组织作免疫组化染色时，常用的脱钙剂是硝酸。
[单选题]5.以下哪项对于冰冻切片的描述是正确的A.所有病例均需进行冰冻诊断报告B.60分钟内完成C.提供最后病理诊断D.提供初步病理诊断E.原位杂交等结果参考答案：D参考解析：冰冻切片提供初步病理诊断。
[单选题]6.目前使用计算机不能储存的病理资料是A.病理特殊检测病例资料B.消化道肿瘤好发部位资料C.图文报告资料D.病理切片资料E.肉瘤的索引资料参考答案：D参考解析：病理切片资料不能用计算机存储。
[单选题]7.肝细胞癌的特异性标记抗体是什么A.CEAB.CKC.AFPD.VimentinE.Actin参考答案：C参考解析：肝细胞癌的特异性标志是AFP。
[单选题]8.下面不属于胞质染色剂的染料是A.橘黄GB.酸性品红C.伊红YD.水溶性苯胺蓝E.核固红参考答案：E参考解析：ABCD都是染细胞质的染料。
[单选题]9.可使G+菌着色的染料是A.碱性复红B.酸性复红C.结晶紫D.石碳酸复红E.亚甲蓝参考答案：C参考解析：结晶紫可使G+菌着蓝色或紫色。
[单选题]10.HE染色中脱蜡不彻底会出现的结果是A.核染过深B.核染色淡C.成地图样染色D.质不染色E.质染色深参考答案：C参考解析：脱蜡不彻底会导致组织着色不均。
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骨组织电镜脱钙技术在免疫组化中的应用朱礼国，汤显斌，张健，赵伦华，程少华
【关键词】骨组织
［关键词］骨组织；电镜；脱钙
骨组织的免疫组化一直是病理技术中的一大难题。
由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶，因此骨组织固定、脱钙都是制备标本的重要环节。
一些强酸如盐酸、硝酸等虽能快速有效除去骨组织中的钙盐，但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏［1，2］;近几年进展的微波辅助EDTA脱钙技术［3］，尽管可实现较好地爱惜组织抗原性且快速的成效，但操作程序复杂。
骨组织的电镜制片技术对组织固定与脱钙要求均远高于常规染色与免疫组化，其脱钙液与固定液均与其他方式有较大不同，本实验用该方式进行骨组织免疫组化，取得了较理想的成效，现报导如下。
1 材料与方式
1．1 材料
健康成年日本大耳白兔60只，体重±0．25)kg，雌雄不限，
依如实验要求分为对照组与对照组；由武汉大学动物实验中心提供。
一抗为兔VEGF单克隆抗体，美国Neo Markers公司(Ab3，JH121)；二抗为鼠抗兔VEGF单克隆抗体，迈新公司(KIT9701SPMouse)试剂盒。
1．2 固定液配制
固定液配方如下：多聚甲醛2 g，蒸馏水25 ml，lN氢氧化钠1滴~3滴，25％戊二醛10 ml，依次加入后加入0．2 mol磷酸缓冲液至50 ml［4］。
1．3 脱钙液配制
脱钙液配方如下EDTA2 Na 40 g~50 g，蒸馏水500 ml， g NaOH 350 ml，再加蒸馏水至1 000 ml［4］。
1．4 组织处置程序
实验终止后处死大白兔，取后腿骨，将股骨头沿正中冠状面劈开，然后将其截成0．5 cm×0．3 cm× cm大小骨片，生理盐水清洗后当即投入强冷后固定液中，4 ℃固定12 h~24 h；固定终止后骨片在0．2 mol磷酸缓冲液中充分漂洗后，投入脱钙液中，4 ℃下脱钙，每日检查脱钙情形，直至骨片脱钙完全为止，密质骨大约3周~4周，
松质骨约7 d~10 d;脱钙终止后，骨片用蒸馏水冲洗20 min，然后进入常规脱水处置程序并包埋、切片。
免疫组化
依照试剂盒说明，进行常规SP免疫组化操作。
2 结果
正常兔股骨头VEGF免疫组化染色以胞浆和(或)胞膜、核膜有明确棕黄色着色者为阳性细胞，VEGF阳性部位要紧位于胞浆，(见图1)。
实验组动物股骨头中可见成骨母细胞呈多层粘贴在骨小梁表面，并成批演化为骨细胞，同时在染色阴性的区域显现点状新生的毛细血管(见图2)，所有切片染色均无背景，阳性病例显色强，定位准确。
3 讨论
免疫组化成效好坏关键取决于抗原维持的结果，这就需要在组织制片进程中将抗原最大程度地爱惜好。
因骨组织含有大量的钙盐，组织较致密，在制片前要延长固按时刻并经历漫长脱钙处置进程，而大多数酸性脱钙液对抗原均有破坏作用，而且脱钙时刻太长又进一步无益于抗原性的爱惜。
鉴于上述缘故，强酸快速脱钙在骨组织免疫组化中已被弃用。
近些年显现的微波(MW)-EDTA快速脱钙技术虽可使脱钙时刻缩短为8 h~10 h［5］，但操作程序比较复杂，脱钙时需较好地
操纵脱钙液温度不能超过15 ℃，不然也易致使假阴性，背景色深等缺点［6］。
因此，在时刻要求不紧迫的前提下，该方式也不该是首选。
电镜制片进程中由于要极大程度地保留组织的超微结构，因此骨组织的电镜制片进程中必然最大限度地爱惜抗原不受破坏，从而对免疫组化大有裨益；本实验中固定液中含有多聚甲醛与戊二醛，前者具用较强的穿透力，能够缩短固按时刻，而戊二醛对蛋白及糖原有较好的固定作用，且在4 ℃条件下进行固定，如此最大程度地减少了组织自溶与抗原弥散；脱钙液中要紧成份是EDTA，其脱钙作用较温和，对组织没有损伤；因该步骤时刻较长，必需尽可能去除脱钙液中一切可能对组织有破坏作用的因素。
脱钙液中少量NaOH就起到中和残留在组织中的固定液中的酸性物质，另外脱钙液的温度也是阻碍抗原性维持的重要因素，尽管高温有利于缩短脱钙时刻，但会加速抗原弥散，因此在4 ℃条件下进行脱钙是适合的选择。
经本方式固定、脱钙后的骨组织用于免疫组化的最大优势是最大限度地爱惜了组织的抗原性，因此取得了比较完美的结果。
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