trap染色
TRAP染色与免疫组化套染技术在骨组织损伤修复染色中的应用
参考文献：
［１］ 何 佳，祁珊珊，李 鑫 鑫．抗 酒 石 酸 酸 性 磷 酸 酶 染 色 方 法 的 改良［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０１９，３５（７）：８６４－８６６．
［２］ 翁丹枫，张 声，李国平，等．改良 ＥＤＴＡ脱钙液在骨髓活检 组织中染色效果观 察 ［Ｊ］．临 床 与 实 验 病 理 学 杂 志，２０１８，３４ （４）：４６１－４６３．
临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ ２０２１Ｍａｙ；３７（５）
·６２３·
散在细胞胞质暗红色，细胞核蓝色，胞体大，核数量不等的破 骨细胞分布，其余细胞胞质不显色，ＴＲＡＰ染色与 ＶＥＧＦ免疫 组化套染可见兔股骨髁骨缺损处生物材料内 ＶＥＧＦ在新生 骨组织细胞、部分破骨细胞、新生血管内皮及部分炎细胞胞 质呈棕黄色表达，破骨细胞胞质暗红色，胞核蓝色，其余细胞 胞核蓝色、胞质不显色且背景干净（图 ２）。
［５］ 丁 伟，王德田．简明病理学技术［Ｍ］．浙江：科学技术出版 社，２０１４：４－７．
［６］ 李 丽，牛钰清，陈 菲，等．介绍一种细胞凋亡 ＴＵＮＥＬ检 测与 Ｋｉ６７ＤＡＰＩ三色荧光染色操作流程［Ｊ］．临床与实验病 理学杂志，２０１９，３５（８）：９８０－９８１．
［７］ 潘 琳．实验病理学技术图鉴［Ｍ］．北京：科学技术出版社， ２０１２：４３３－４３４．
３ 讨论
骨组织损伤修复基础研究中，ＶＥＧＦ增强缺损处血管通 透性，诱导新骨形成的同时也加速破骨细胞的骨吸收，促进 骨愈合［４］。破骨细胞起源于造血干细胞，与执行骨形成功能 的成骨细胞处于动态平衡。研究者试图在同一张脱钙骨组 织石蜡切片上观察破骨细胞与 ＶＥＧＦ的共表达。本实验采 用 ＴＲＡＰ染色与 ＶＥＧＦ免疫组化套染技术，经反复实验发现 该套染技术成 功 需 要 注 意 以 下 几 方 面。 （１）骨 组 织 离 体 后 处理：骨组织离体后除立即使用 １０％中性缓冲福尔马林固 定外［５］，还使用硬组织切片机将 骨 组 织 修 切 成 ３ｍｍ厚 薄 片，以便固定液充分渗透到骨组织内部得到最佳固定效果。 骨组织比软组织致密，若不切开固定，固定液渗透慢导致固 定欠佳，导致不能较好地 保 存 骨 组 织 内 部 细 胞 形 态 结 构、 ＴＲＡＰ酶及抗原。固定不佳的组织后续脱水处理不佳，增加 组织脱片的风险。本实验脱钙液选择文献报道的改良脱钙 液［２］，脱钙和固定同时进行，脱钙使用 ３７℃水浴加快脱钙速 度，以保证在最短的时间内脱钙完全。组织离体后进行该处 理方法可大 大 降 低 脱 片、ＴＲＡＰ酶 及 抗 原 丢 失 的 风 险。 （２） ＴＲＡＰ染色：ＴＲＡＰ染液容易失效，每次实验前待染切片置于 ３７℃水浴锅中静置 １５ｍｉｎ时即可配制 ＴＲＡＰ孵育液，现用
蛋白质银染原理与方法
蛋白质银染原理与方法2009-04-28 16:38:24 来源:未知【大中小】评论: 条-摘要：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。
原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。
①SDS-PAGE电泳。
注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与CommassieBlue染色比较，银染加样量要少。
否则难以得到清晰的电泳分辨率。
②电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。
加入25ml FixingSolution（固定液），室温振荡保温30min。
胶需要完全淹没在固定液中。
③彻底弃去固定液，加入25mlIncubationSolution（保育液），室温振荡保温30min。
胶需要完全淹没在保育液中。
④彻底弃去IncubationSolution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。
⑤准备：取2.5ml 10XSilvering Solution, 加入22.5mL水，混匀后使用。
⑥弃去洗涤的水，加入25mlSilvering Solution (银染液)。
室温振荡保温20min。
⑦彻底弃去银染液，加入25mLDevelopingSolution（显色液），室温振荡保温1~10min。
注意观察目的条带。
如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。
显色时间不要过长，否则本底较深。
⑧彻底弃去显色液,加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。
⑨彻底弃去StoppingSolution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。
弃去洗涤的水，加入25mL PreservingSolution（保护液），室温振荡保温20min。
银染PAGE 胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。
今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。
血液学检验测试题与答案
血液学检验测试题与答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.在FⅫ缺陷时，实验室或临床表现为 ( )A、APTT正常B、STGT正常C、PT异常D、没有临床出血症状E、以上均不是正确答案：D2.多发性骨髓瘤根据形态分为四型，下列哪一型除外 ( )A、幼浆细胞型B、浆细胞型C、网状细胞型D、火焰细胞型E、原浆细胞型正确答案：D3.下述不符合血细胞发育过程中形态演变规律的是A、颗粒从无至有B、核染色质由粗糙至细致C、胞体由大至小D、核仁从有至无正确答案：B4.出血时间测定器法的参考范围 ( )A、20～40秒B、大于20秒C、1～6分钟D、2.5～9.5分钟E、1～3分钟正确答案：D5.正常骨髓象粒系统占骨髓细胞百分之多少A、40%～60%B、60%～70%C、40%～50%D、50%～70%正确答案：A6.缺铁性贫血的细胞形态学表现为 ( )A、大细胞性贫血B、正细胞正色素性贫血C、大细胞低色素性贫血D、小细胞低色素性贫血E、小细胞正色素性贫血正确答案：D7.下列哪一疾病的确诊主要依靠淋巴结病理活检 ( )A、骨髓纤维化B、恶性淋巴瘤C、脂质代谢障碍性疾病D、毛细胞白血病E、恶性组织细胞病正确答案：B8.纤维蛋白(原)降解产物的生理功能是A、促进血液凝固B、抑制血液凝固C、抑制纤维蛋白溶解D、促进纤维蛋白溶解正确答案：B9.下列哪项符合类白血病反应 ( )A、外周血中白细胞明显增加，红细胞及血小板也常有明显变化B、血象中幼稚细胞常在30%以内C、骨髓象变化不大D、粒细胞常无明显的毒性改变E、NAP积分常正常正确答案：C10.传染性单核细胞增多症患者血清中存在嗜异性抗体，该抗体属于A、IgAB、IgMC、IgGD、IgE正确答案：B11.下列哪项检查结果不符合再生障碍性贫血 ( )A、骨髓活组织检查发现骨髓造血面积缩小B、血浆和尿中促红细胞生成素水平减低C、HbF增高D、中性粒细胞碱性磷酸酶活性增高E、骨髓活组织检查时急性再生障碍性贫血改变尤为明显正确答案：B12.某细胞，胞体35μm，胞体椭圆形；胞质蓝色，无颗粒，有少许空泡；核大，椭圆形，双核(形态特点对称)，核染色质呈颗粒状，每个核有1个核仁(大而清楚)。
关于trap染色的可行性分析
关于trap染色的可行性分析引言在纺织行业中，染色是一项重要的工艺，其目的是使纺织品具有丰富的颜色，提高产品的附加值。
然而，传统的染料染色存在着环境污染、染色效果不稳定等问题，因此新型的染色技术备受关注。
本文将就一种名为trap染色的新型染色技术进行可行性分析，并讨论其应用前景和挑战。
trap染色的原理trap染色是一种通过陷阱分子在纺织品表面形成的微量圆环结构实现颜色变化的染色技术。
其原理基于纳米技术和光学原理，通过控制不同波长的光线在陷阱分子的干涉作用下的可见光吸收特性，实现颜色的切换。
trap染色的优势相比传统染色技术，trap染色具有以下优势：1. 环境友好：trap染色不需要使用有害的化学染料，避免了废水污染和对环境的危害。
2. 染色效果稳定：由于陷阱分子在纺织品表面形成的微量圆环结构具有较高的稳定性，trap染色的染色效果更加持久，不易褪色。
3. 可控性强：通过控制陷阱分子的结构设计和光线波长，可以实现纺织品颜色的精准调节和切换。
4. 良好的耐洗性：经过模拟洗涤测试，trap染色纺织品表现出良好的耐洗性能，颜色不易褪变。
5. 适用范围广泛：trap染色技术可以应用于各类纺织品，包括服装、家居用品、工业用材料等。
trap染色的挑战虽然trap染色技术具有诸多优势，但在实际应用中仍然面临一些挑战：1. 成本问题：目前，trap染色技术的研发和生产成本相对较高，需要进行进一步的经济性评估和工艺改进。
2. 缩放效果：在实际生产中，如何保持trap染色技术的均一性和批量性仍然需要改进。
3. 技术标准和验证：尚需制定相应的技术标准，建立评价trap染色产品质量的验证体系。
trap染色的应用前景随着消费者对环境友好产品的需求不断上升，trap染色技术有望在纺织行业得到广泛的应用。
特别是在高端品牌和可持续发展理念倡导下，trap染色技术具备市场竞争力和可持续发展的优势。
此外，trap染色技术还可以与其他纺织工艺相结合，例如纳米抗菌、防蚊虫等，实现多重功能的纺织品生产。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色方法的改良
临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ ２０１９Ｊｕｌ；３５（７）
·８６５·
①
②
图 １ 大鼠股骨的破骨细胞，传统 ＴＲＡＰ染色：组织切片表面有颗粒 沉淀 图 ２ 大鼠股骨的破骨细胞，改良 ＴＲＡＰ染色：组织切片表 面干净整洁，无颗粒沉淀
色液（ｐＨ５０～５２）为亮红色，切片染色后背景出现颗粒沉 淀，且染色液不易冲洗，导致水洗时间延长，易脱片。当染色 液 ｐＨ值逐渐升高时，染液逐渐由亮红色转变为淡黄色，组 织上非特异性沉淀密集，背景干扰严重，染色效果不理想，脱 片严重。当 ＴＲＡＰ染色液 ｐＨ值调至 ５０以下时，随着 ｐＨ值 的下降染色液颜色逐渐变浅，且切片染色后非特异性沉淀逐 渐减少，当 ｐＨ４６时，染色液呈淡红色，切片染色后无非特 异性沉淀产生，组织不脱片（表 ２）。
３７℃温箱中温育 ３ｈ，使盐酸副品红充分溶解，冷却至室温 经 ０２２μｍ微孔滤膜制成盐酸副品红溶液，置于 ４℃避光贮 存；称取亚硝酸钠 ４００ｍｇ，溶解于 １０ｍＬ蒸馏水中，制成 ４％ 亚硝酸钠溶液（现用现配）；临用前取 １ｍＬ新配置的亚硝酸 钠溶液，缓慢滴加到等量的盐酸副品红溶液中，边滴加边搅 拌，静置 １ｍｉｎ后备用。（３）萘酚 ＡＳＢＩ磷酸盐溶液配制：称 取萘酚 ＡＳＢＩ磷酸盐 １０ｍｇ，溶解于 ０５ｍＬ的 Ｎ，Ｎ二甲基 甲酰胺中，混匀备用。（４）ＴＲＡＰ染色液：将 ９ｍＬ乙酸铵缓 冲液与 ０５ｍＬ六偶氮副品红溶液混合，微调 ｐＨ４６（传统 方法 ｐＨ５０～５２），再加入 ０５ｍＬ萘酚 ＡＳＢＩ磷酸盐溶液 混匀，后加入酒石酸钾钠 １４１ｍｇ，充分溶解经 ０２２μｍ微孔 滤膜配制成 ＴＲＡＰ染色液。 １．２．２ 取材与固定 采用 ＣＯ２麻醉法处死大鼠，取其股骨， 剔除周边软组织，经 ４％多聚甲醛固定，１０％ＥＤＴＡ脱钙（２８ 天），梯度乙醇脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋等步骤后，制 成厚度为 ５μｍ的组织切片。 １．２．３ ＴＲＡＰ染 色 取 大 鼠 骨 组 织 切 片，使 用 改 良 后 的 ＴＲＡＰ染色方法染色。切片于二甲苯Ⅰ脱蜡 ８ｍｉｎ，二甲苯Ⅱ 彻底脱蜡 ８ｍｉｎ，随后经 １００％ Ⅰ、１００％ Ⅱ、９５％ Ⅰ、９５％ Ⅱ、８０％梯 度 乙 醇 中 逐 步 水 化 （各 ５ｍｉｎ），水 洗 ３ｍｉｎ，用 ＴＲＡＰ染色液（传统方法 ｐＨ５０～５２）３７℃避光浸染 ３ｈ， 蒸馏水充分水洗，Ｈａｒｒｉｓ苏木精复染 １ｍｉｎ，蒸馏水充分水 洗，最后切片经梯度乙醇（８０％、９５％ Ⅰ、９５％ Ⅱ、１００％ Ⅰ、 １００％ Ⅱ）逐步脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，置于 ４５℃ 烤片机中烤片 １ｈ，光镜下观察（表 １）。
骨小梁染色方法
骨小梁染色是一种常用的组织学技术，用于观察和分析骨骼组织的结构和特征。
以下是常见的几种骨小梁染色方法：
1.基本的酸性染色方法：经典的酸性染色方法包括贝尔马红（Carmine）染色、赖氏银染
色和邦纳金（Van Gieson）染色。
这些染色方法可以突出骨小梁的形态和颜色对比。
2.钙盐染色：钙盐染色是一种特殊的染色方法，用于显示骨小梁中的钙盐沉积。
一种常用
的方法是使用茜素红（Alizarin Red）或农夫黑（Von Kossa）染色来标记骨小梁中的钙盐。
3.免疫染色：免疫染色是利用特定抗体与骨组织中的目标蛋白结合，以显示其位置和表达
水平。
例如，可以使用抗体来标记骨基质蛋白、骨特异性蛋白等，并通过免疫组化染色方法进行可视化。
4.特殊染色方法：还有一些特殊的染色方法可用于观察骨小梁中的细胞和结构。
例如，使
用TRAP（酸性磷酸酶）染色来标记破骨细胞、用塔姆氏蓝（Toluidine Blue）染色来显示骨质基质等。
这些骨小梁染色方法可以根据需要和研究目的选择使用，并与其他组织学技术结合，如显微镜观察和图像分析等，以获取更详细的骨骼组织信息。
具体的实验步骤和条件会因染色方法的不同而有所变化，建议参考相关文献或专业实验室的指导进行操作。
端粒酶基本原理及技术方法
端粒酶基本原理及技术方法摘要：近几年研究表明端粒酶与肿瘤的发生发展密切相关，推测可能是一个广泛的肿瘤标志物。
本文就端粒酶活性检测的原理，端粒酶的提取方法，TRAP扩增技术，四种结果分析方法（同位素法、染色法、荧光法和ELISA法）以及如何进行质量控制与半定量测定进行综述。
端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶。
人端粒酶RNA组分（hTR）于1995年被克隆，其中含有端粒重复序列的模板（5′-CUAACCCUAAC-3′）；蛋白质组分具有RNA依赖的DNA多聚酶活性，结构尚不清楚。
端粒酶能以自身RNA的模板区为模板复制合成端粒序列。
在胚性细胞等增殖活跃的细胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟体细胞中端粒酶失活，同时还发现绝大多数肿瘤细胞都呈端粒酶阳性，而在癌旁组织和正常组织阳性率很低，推测端粒酶可能是一个广泛的肿瘤标志物1。
因此近几年端粒酶在各种肿瘤中的研究日益深入，同时促进了检测方法的改进与完善。
本文对其检测方法综述如下。
1基本原理端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板，在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列，用聚丙烯酰胺（PAGE）凝胶电泳可显示6个碱基差异的梯带。
1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法（telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP）。
TRAP反应原理见下图。
首先合成一个18nt的TS做上游引物，端粒酶结合TS末端的GTT并合成agggttag，然后每经过一次转位合成一个ggttag的6碱基重复序列，端粒酶灭活后，加入一个24nt的CX做下游引物，经过多次变性-退火-延伸，扩增端粒酶延伸产物。
2基本技术方法2.1标本来源手术摘除组织，针吸活检组织，胸水，腹水，膀胱或胰管冲洗液，棉拭子所取分泌物和尿液（尚有争议）等。
2.2端粒酶的提取方法早期采用超声等物理破碎的方法在不同细胞中的提取效率差异较大，此后采用去污剂（如CHAPS）裂解的方法在少量细胞获取了较稳定的端粒酶提取液。
破骨细胞trap染色步骤
破骨细胞trap染色步骤破骨细胞（osteoclasts）是一种在骨组织内进行重要功能的多核巨噬细胞。
破骨细胞能够吸附到骨表面，通过溶酶体释放酸性蛋白酶，降低骨矩阵的pH值，从而溶解败坏的骨组织。
trap染色是一种常用的破骨细胞特异性染色方法，能够准确地识别并观察破骨细胞的形态和活性。
trap染色的原理基于破骨细胞在酸性环境中释放的酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP）活性。
TRAP是一种破骨细胞特异性的酶，能够催化酸性磷酸酶反应。
在trap染色中，使用一种叫做红碱性磷酸酶耐受的反应试剂，能够在破骨细胞所在的区域产生红棕色沉淀物，从而可视化破骨细胞的分布和形态。
下面是trap染色的步骤：1. 取得骨组织标本并保持其完整性。
可以使用钳子、锯子等工具在实验室条件下取得骨组织标本。
确保取得的标本相对完整，不要过分损伤，以保持破骨细胞的形态和活性。
2. 固定标本。
使用4%的中性缓冲福尔马林或其他适当的固定液固定标本。
固定可以使标本保存并保持其形态结构，同时也有助于切片过程。
3. 制备切片。
将固定的骨组织标本进行切片处理。
通常使用切片机或显微刀将骨组织切成较薄的片段，一般为4-10 μm。
切片的厚度可以根据实验的需要进行调整。
4. trap染色。
将切片放置在含有trap染色试剂的反应液中，通常包括硝酸钒、酒石酸和4-硝基苯胺等。
将切片和反应液放置在37℃的恒温箱中进行染色反应，通常需要1-2小时。
反应时间可以根据实验条件进行调整。
5. 停止反应。
当标本呈现所需的染色强度时，使用缓冲液将反应停止。
多数情况下，使用去离子水或含有6%硫酸的缓冲液进行停止反应。
停止反应有助于保持染色效果和标本结构。
6. 洗涤和干燥。
将标本在流动水中洗涤，去除多余的染色试剂。
然后用纯净水冲洗几次，最后用纸巾轻轻吸干。
7. 封片和观察。
将切片放在显微镜玻璃片上，使用透明的封片剂封闭标本。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
trap染色
答案：Trap染色是用于检测骨组织、骨细胞中特征物质的染色，使破骨细胞呈红色，背景呈绿色或蓝色。
抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap）为破骨细胞的标志酶，特异地分布于破骨细胞中，为破骨细胞所特有，通常作为鉴别破骨细胞的重要标志物。
在含酒石酸的酸性条件下，trap能将萘酚AS-BI 磷酸盐水解，产生的萘酚AS-BI立即与fast red或六偶氮副品红结合，在酶活性部位形成不溶性的红色染料，通过观察红色染料的形成可间接了解酸性磷酸酶的活性，进一步鉴别及分析破骨细胞的状态。
分析：
骨组织切片及trap染色实验步骤
1、骨组织脱钙：新鲜骨组织固定于4%多聚jia醛24h 以上。
将组织从固定液取出置于EDTA脱钙液内脱钙（不能用含酸的脱钙液脱钙），每3天换一次脱钙液，至骨组织针扎可以顺利通过为止。
2、取材：在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
3、脱水：将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。
75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二
甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。
4、包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。
先将融化的蜡放入包埋框，待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。
于-20°冻台冷却，蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
5、切片：将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片，片厚4μm。
切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60℃ 烘箱内烤片。
待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
6、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20m in-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
7、染液配制：A液：0.1mol/L醋酸缓冲液PH5.0：醋酸Na1.3608g+蒸馏水100ml溶解，用Bing醋酸调PH值到5.0。
B液：六偶氮副品红 4%亚肖酸Na：2g亚肖酸Na+去离子水50ml
副品红溶液：副品红2.5g+去离子水50ml+浓盐酸7.5ml，加热至90°溶解后过滤，4°棕色瓶保存。
临用前4%亚肖酸Na与副品红溶液等比例混合。
C液：萘酚AS-BI磷酸酯20mg+N,N-2甲基甲酰胺1ml溶
解。
孵育液配制：A液18ml+B液1ml+C液1ml混匀，用1M NaOH 或1M盐酸调pH至5.0，再加酒石酸钾Na0.282g，充分溶解过滤后备用即为TRAP孵育液。
8、染色：切片置于TRAP孵育液内37°孵育50min，镜下观察破骨细胞呈酒红色为止。
蒸馏水漂洗。
9、苏木素染细胞核：切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6%氨.水返蓝，流水冲洗。
10、脱水封片：将切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
11、显微镜镜检，图像采集分析。
染色结果：破骨细胞胞浆呈酒红色，核蓝色。