实验六细胞染色体的制备
染色体制备的注意事项
染色体制备的注意事项染色体制备是一项非常重要的实验步骤，用于研究染色体的形态结构、核型等内容。
在染色体制备过程中，需要注意以下几个方面的事项。
首先，实验室安全是染色体制备过程中的首要考虑因素。
染色体制备通常需要使用到一些有害物质，如醋酸、酒精等，因此在实验过程中，需要严格遵守实验室的安全操作规程和流程，佩戴好个人防护设备，避免接触到有害物质对人体产生伤害。
其次，样品的选择非常重要。
染色体制备需要选择健康的细胞，并且要确保样品中染色体的完整性。
在制备前需要对样品进行预处理，如收集样品时尽量避免细胞质与胞核的破损，防止染色体断裂或碎片化。
除此之外，还需要注意样品的保存方式和时间，以确保染色体的完整性和实验结果的准确性。
第三，依赖于实验目的，选择合适的染色体制备方法。
目前常用的染色体制备方法有悬浮细胞法、组织学切片法、干湿法等。
不同的样品和实验目的可能需要不同的方法，因此在选择染色体制备方法时需要根据实际情况来确定。
第四，要掌握好制备过程中的时间和浓度控制。
染色体制备的时间和浓度影响着实验结果的准确性。
制备时间过短或浓度过高，可能使得染色体变形、聚集或受损；制备时间过长或浓度过低，可能导致染色体解聚、散射或染色效果不佳。
因此，在染色体制备过程中，要严格控制时间和浓度，遵循实验方法的步骤和要求。
第五，要注意实验环境的净化与维护。
染色体制备是一项精细的实验，在实验过程中，任何微小的颗粒物、尘埃或杂质都可能对实验结果产生影响。
因此，在实验过程中，应保持实验台面和仪器设备的清洁和整洁，确保实验环境的净化与维护。
第六，细心、耐心和专注是进行染色体制备的重要品质。
染色体制备是一项复杂的实验，在实验过程中可能会遇到各种问题和困难。
只有具备细心观察、耐心操作和专注实验的品质，才能保证实验的顺利进行和结果的准确性。
总之，染色体制备是一项严谨而复杂的实验步骤，需要在实验室安全、样品选择、方法选择、时间和浓度控制以及实验环境净化与维护等方面进行充分考虑和注意。
外周血细胞染色体培养操作
外周血细胞染色体培养操作实验六人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备实验目的1、了解人体外周血淋巴细胞短期培养的原理及方法。
2、初步掌握人外周血淋巴染色体的制备技术。
实验用品1.设备：超净工作台（或无菌接种箱）、光学显微镜（带照相装置）、分水恒温培养箱、干燥箱、卧式离心机、冰箱、恒温水浴箱、高压蒸汽灭菌器、真空泵（或电动吸引器）、10ml刻度离心管、，10ml培养瓶（可用环磷酰胺瓶代替）、2ml注射器、吸管、滴管试管架、三角瓶、染色瓶、酒精灯、各种试剂瓶、载玻片、镊子、吸水纸、洗耳球、搪瓷板、铝饭盒、酒精棉球、消毒用碘棉球等。
2、材料：人外周血3.试剂：rpmil 640培养基（含10~20%小牛血清）、碳酸氢钠（AR）、PHA、青霉素、链霉素、肝素、5%NaHCO 3溶液、1mol/lhcl、三重蒸馏水或二重蒸馏水、0.075mol/lkcl、甲醇、冰醋酸、吉姆萨储备液、pH 6 8磷酸盐缓冲液。
实验原理根据测量，健康成年人的淋巴细胞总数约为500×109，其中约2%在外周血中循环。
外周血淋巴细胞主要为小淋巴细胞（每毫升血液中的淋巴细胞含量可达1~3）×106）。
在正常情况下，它们处于间期的G0或G1期，因此很难看到分裂的淋巴细胞。
然而，Nowell （1960）发现，植物血凝素（PHA），一种从芸豆（菜豆）中提取的能够凝集红细胞的物质，可以刺激淋巴细胞有丝分裂。
在PHA的作用下，G0期淋巴细胞可转化为淋巴细胞，重新进入增殖周期进行有丝分裂。
体外培养约72小时后，大多数淋巴细胞处于第二个增殖周期。
此时，用有丝分裂阻断剂秋水仙碱治疗细胞，可以停止中间阶段的细胞分裂，然后进行低渗固定，其他治疗可以获得更多的中期染色体用于分析。
以外周血为材料制备淋巴细胞染色体标本具有取材方便，用血量少（0.3～1.0ml即可），培养简单等优点，故该方法在临床上已得到广泛的应用。
内容和方法一、器材的清洗1.清洁培养瓶；将培养瓶在肥皂水中煮沸30分钟，趁热刷洗，然后用自来水冲洗肥皂。
实验六 人类染色体核型分析
每个染色体长度 单倍染色体长度
×100%
（2）臂指数（arm index），指长臂与短臂之比。
按Levan（1964）划分标准，臂指数在1.0~1.7之间为中部 着丝粒染色体，1.7~3.0之间为亚中着丝粒染色体，3.0~7.0 之间为亚端着丝粒染色体，＞7.0为端部着丝粒染色体。
（3）着丝粒指数（centromere index），指短臂占 该染色体长度的比率，决定着丝粒的相对位置。
实验六 人染色体核型分析
一、实 验 目 的
掌握人类染色体核型分析的方法。 了解人类染色体数目和结构特征。
二、实 验 原 理
核型（Karyotype）是指一个细胞内有 丝分裂中期所有染色体的表型，如：数 目、大小和形态特征等。 通常将显微摄影得到的照片进行剪贴， 使整套染色体按照一定的顺序排列构成 图像。以核型图(karyogram)的方式表示。 有四种方法：
A：1，2，3对染色体，体积大，易于区别，有中 央着丝粒。第2对的着丝粒略偏离中央。无随 体，1号常见次缢痕。 B：4，5两对，体积大，有亚中部着丝粒，无随 体，彼此不易区分。 C：包括6—12对常染色体和X染色体，中等大小， 为亚中部着丝粒染色体。第6对的着丝粒靠近 中央，X染色体大小接近介于第6，7对之间。 第9对染色体长臂上有一次缢痕，第11对染色 体的短臂较长，第12对染色体的短臂较短。
R带：与G带明暗相反（Reverse G-bands）
目前所用的R显带方法是RBG法 (R-band by BrdU using Giemsa)，即经BrdU处理后用 Giemsa染色。 意义： G带染色体的两末端都不显示深染，而在 R带中则被染上深色，因此R带有利测定染色体 长度和末端区域结构的变化。对揭示染色体末端 缺失、重复、易位和断裂点的异常等有很高的价 值。
细胞生物学实验材料
实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。
二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。
与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。
所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。
在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。
因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。
某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。
三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。
实验六 小鼠骨髓细胞染色体的制备与C带染色
生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室
大连理工大学
环境与生命学院
• d 以1000r/min离心8min，弃去上清。
• e 向细胞中加入5ml在37℃预热的
0.075mol/L KCl低渗溶液，用吸管轻轻抽
打均匀，臵37℃恒温水浴锅内，低渗处理 15-30min（使细胞膨胀）。
生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室
大连理工大学
4.实验步骤
（1）滴片法制备染色体
环境与生命学院
• f
沿离心管壁缓慢加入1ml新配制的固定液预固定，以1000r/min离心
8min，弃去上清。 • g 加入新配制的固定液固定20min。离心去上清。如此反复固定2—3次， • 固定的细胞经离心后，吸去上层固定液，视管底的细胞多寡加入少量 新配制的固定液0.3-0.5ml，将细胞团块轻轻吸打成悬液。 • i 用吸管在干净、湿、冷的载玻片上滴2～3滴（不要重叠）上层细胞 悬液，然后顺载玻片斜面用口轻轻吹散，在酒精灯上文火烘干（在空 气干燥的地方可晾干或用吹风机吹干）。
好标本的雌雄。
生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室
大连理工大学
4. 实验步骤
(2) C带染色
环境与生命学院
将老化3-7 d的染色体标本在室温下用0.2mol/L的盐酸处理1 h。 用蒸馏水轻轻冲洗3次。 转入50℃ 5% Ba(OH)2溶液中温育12 min左右。 立即用自来水冲洗2min，再用温蒸馏水冲洗2次，使Ba(OH)2被冲洗干净。 将标本放人60-65℃ 2×SSC溶液中处理1 h。 用蒸馏水轻轻地冲洗载玻片，空气干燥。 染色：用Giemsa染液染色5-8 min。
生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室
南开大学遗传学实验-实验六摇蚊多线染色体的制备及其斑24页PPT
Байду номын сангаас
南开大学遗传学实验-实验六摇蚊多线 染色体的制备及其斑
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法， 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样 一种的 网，触 犯法律 的人， 小的可 以穿网 而过， 大的可 以破网 而出， 只有中 等的才 会坠入 网中。 ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏，庇 护着我 们大家 ；它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
实验六 人类性染色体小体的制备与观察0
人类性染色体小体的制备与观察
实验原理
一、什么是人体X—染色体（1949，美，巴尔；1961，
英，莱昂，剂量补偿效应的X染色体失活假设 ）
常染色体和性染色体，常染色质和异染色质
二、X—染色质数目
克氏综合症XXY，特纳氏综合症XO
三、X—染色质的部位 (靠近核仁、在核质中、靠近核膜)
四、X—染色质的几种名称介绍
① 口腔颊部粘膜细胞：
取材→涂片→染色（3min）→压片
② 毛发根部细胞观察：
取材→45%冰乙酸（软化5分钟）→水洗
→染色（5min）→压片
正常女性头发毛囊细胞X－染色质
正常女性头发毛囊细胞X－染色质
作 业
绘口腔颊部粘膜细胞和毛发根部细胞
Байду номын сангаас
X—染色质，男女同学分别做对照。
①核仁卫星 ⑤X—染色质 ②性染色质 ③Barr小体 ④X—小体
实验目的
实验材料
1、口腔颊部粘膜细胞
2、头发毛囊细胞
实验器具与药品
1、用具：显微镜、镊子（2）、载玻片、盖 玻片、滤纸、刀片（4）、消毒牙签、小 烧杯（1）等 2、药品：45％醋酸（每大组一瓶）、改良 品红染液 （每小组一瓶）
实验步骤
染色体的标本制作实验
实验六染色体的标本制作及其组型实验在真核生物中染色体的数量和形态具有物种的特异性一直可以作为此物种分类的基本依据之一。
染色体作为遗传物质-DNA 的载体对生物的遗传、变异、进化和个体发生以及细胞的增殖和生理过程的平衡控制等都具有十分重要的意义。
每一个物种的细胞一般都有一定数目、形状和大小的染色体。
将体细胞核中全部染色体按照其大小、着丝粒位置以至带型有序地排列起来此模式图象排列即为核型karyotype或染色体组型。
核型分析均是以中期染色体为标准对制作出的染色体标本进行照相以获得染色体的显微图象并将其剪裁排列即成。
华裔学者庄有兴Joe Hin Tjio腿鸬溲д逜.Levan合作利用低渗法研究胎儿肺组织的染色体标本制做方法终于在1956年首次确定了人类的染色体数目是46条而不是前人所主张的48条这为后来的人类核型研究奠定了基础。
1.实验目的 1.1 初步掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程了解操作步骤的原理。
1.2了解常用实验动物染色体的数目及特点。
通过组型实验掌握染色体组型的基本方法2.实验原理凡细胞处于活跃增殖状态或者经过各种处理后细胞就可进入分裂的任何动物组织均可用于染色体分析。
在正常动物体内精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。
给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期然后采用常规空气干燥法制备染色体即可得到大量可分析的染色体标本。
本方法简便、可靠不需要经体外培养和无菌操作易于推广。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
但在取材方面精巢又比骨髓要简易一些故本实验也选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成使细胞分裂停滞在中期使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀以至于在滴片时细胞被胀破使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
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▪3、器材： ▪ 显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，滴管，
擦镜纸，刀片，恒温水浴锅 ，离心机,离心管 , 小培养皿4套，剪刀和电脑等
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▪问 题 ▪ 1、什么叫染色体？
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▪ 由脱氧核糖核酸、蛋白质和少量核糖核 酸组成的线状或棒状物，是生物主要遗传 物质的载体。是细胞中可被碱性染料着色 的物质。
▪ （9)、在干净、湿、冷的载玻片上滴一滴细胞悬液 ，在酒精灯上文火烘干或晾干。
▪ （10)、染色：在载玻片的细胞悬液上滴一滴 ▪ 1：10 Giemsa磷酸盐缓冲液，染色5min。 ▪ （11)、冲洗与观察
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2、植物细胞染色体标本制备
▪ 1）实验原理
▪
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式，是
▪ (2) 预处理：将剪下的根尖置于0.1％秋水仙素溶 液中，浸泡处理2-4 h。
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▪ (3) 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定液中固定24h，转入70％乙醇中，4℃保存备用。
▪ (4) 解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入10% HCl中60℃解 离 15min，再用蒸馏水洗净。
▪ (5) 染色：苯酚品红或亚甲基蓝 染色5min。 ▪ (6) 压片：把根尖放在载玻片上，加一滴45 %醋酸，盖上盖玻
片，垂直轻压，使细胞和染色体分散。 （7）镜检
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▪ 3、实验报告
▪ 要求：1、观察小白鼠骨髓细胞染色体的形态，
▪
并绘制染色体图
▪
2、对小白鼠细胞染色体和洋葱根尖细胞
染色质紧密包装的结果，对染色体的观察在研究生物进化
、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。
▪
植物染色体标本的制备。常规压片法仍是当今观察植
物染色体常见的方法，其程序包括取材、预处理、固定、
解离、染色和压片等步骤，简单易操作，但是染色体易变
形、难分散开。
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2）实验步骤
▪ (1) 取材：把玉米种子预先浸泡24h，然后转入垫 有湿润纸的培养皿中，置25℃温箱中暗培养发根， 或者培养洋葱根，于上午8:30—10:00剪下根尖。
▪
▪
或玉米根尖细胞染色体计数
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思考题
▪ 1、通过对小白鼠骨髓细胞染色体的观察，它染色 体的形态属于哪一类型？为什么
▪ 2、如果在实验前不给小白鼠腹腔注入秋水仙素， 所制备的染色体制片会出现怎么样的情况？
▪ 3、植物细胞染色体制备除了压片法还有什么方法？ ▪ 值 日安 排
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置于解剖盘内，剪开后肢皮肤 和肌肉，取出动物后肢的胫骨 与股骨,剔除肌肉、肌腱，将 其置于小培养皿中，用生理盐 水洗净，剪去长骨两端；
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பைடு நூலகம்20
▪ （3)、取1.5ml 2%柠檬酸钠用注射器注入骨髓 腔中将骨髓细胞冲洗出来，然后吹打散。转入 10ml离心管中。
▪ （4)、在离心管中加8ml 0.4%KCl液，吹打散. 将离心管置于37℃水浴锅内处理20min
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1
2011级生工1班罗甜甜小组
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2
华俊豪小组2011级生工1班
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3
实验六 细胞染色体制备与观察
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一、目的与要求
▪ 1、初步掌握小白鼠染色体标本制作方法，了解其原理 ▪ 2、了解小白鼠染色体的特点 ▪ 3、掌握常规压片法制备植物染色体标本。 ▪ 4、了解染色体的生物学意义。
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▪ 中期染色体分类的形态图
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三、实验操作
▪ 1、小白鼠骨髓细胞染色体的制作与观 察
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1）、实验原理
▪ 凡细胞处于活跃增殖状态，或经过处理后细胞
可进入分裂的任何动物组织，均可用于染色体分析
。给小白鼠体内注射一定剂量的秋水仙素使分裂中
的细胞多滞留于中期阶段，染色体具有典型形态。
骨髓中具有高度分裂活性的细胞，经过秋水仙素处
理，可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期，再经低
渗处理，固定，滴片，染色等步骤，可获的染色体
标本。
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▪ 2）、实验步骤
▪ （1）、在实验前4-8小时，取20g左右的小白鼠，以 4μg/ g体重的剂量从腹腔注射秋水仙素；
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▪ （2)、 取材： ▪ 利用断颈法处死小白鼠，
▪ （5)、离心：1500转/min，离心10min
▪ （6)、弃去上清液，沿着管壁缓慢加入固定液 5ml。
▪ （7)、用吸管轻轻吹打细胞，静止固定20min ，离心，弃去上清液。重复上述再固定1次。
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▪ （8)、离心完毕，弃去固定液，依据管中细胞的量 加入少量的固定液将细胞块吹打均匀，制备成细胞 悬液。
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二、材料、试剂与器材
▪ 1、 材料 ：小白鼠18-20克、玉米根尖 ▪ 2、药品： ▪ 0．9％生理盐水; 2%柠檬酸钠溶液；秋水仙素溶液； ▪ Giemsa液；磷酸缓冲液（PH6.8);吉姆萨染液或0.1%亚甲
基蓝液 ▪ 固定液（甲醛：冰醋酸 3：1） ▪ 0.4%KCl液、Carnoy固定液、苯酚品红染液、10%HCl ▪ 45%醋酸等
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染色体模式图
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▪ 2、依据着丝粒在染色体上所处的位置 划分哪四类？
▪ 1）中间着丝粒染色体（M） 2）近中间着丝粒染色体（SM） 3）近端着丝粒染色体（ST）
▪ 4）端着丝粒染色体（T） 只有一条臂
。
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