酒石酸亚铁法测定茶多酚
测定茶多酚含量实验报告
一、实验目的1. 了解茶多酚的化学性质和生理功能。
2. 掌握测定茶多酚含量的实验原理和方法。
3. 通过实验操作，提高对分光光度法等实验技术的熟练程度。
4. 比较不同茶叶样品中茶多酚含量的差异。
二、实验原理茶多酚是茶叶中的主要活性成分，具有抗氧化、抗菌、抗癌、降血脂、降血压等多种保健功效。
本实验采用分光光度法测定茶叶中茶多酚的含量。
该方法基于茶多酚与特定试剂发生显色反应，根据吸光度与茶多酚含量成正比的关系，计算样品中茶多酚的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 绿茶、红茶、乌龙茶等茶叶样品- 茶多酚标准品- 乙醇、氢氧化钠、盐酸、硫酸等试剂- pH7.5磷酸盐缓冲液- 酒石酸亚铁溶液- 水为蒸馏水2. 实验仪器：- 分析天平- 分光光度计- 烧杯、试管、移液管、滴定管等玻璃仪器四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 准备一系列已知浓度的茶多酚标准溶液。
- 将标准溶液与酒石酸亚铁溶液混合，在特定波长下测定吸光度。
- 以茶多酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 称取一定量的茶叶样品，用乙醇提取茶多酚。
- 将提取液稀释至适当浓度。
- 将稀释后的样品溶液与酒石酸亚铁溶液混合，在特定波长下测定吸光度。
- 根据标准曲线，计算样品中茶多酚的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 在特定波长下，茶多酚标准溶液的吸光度与浓度呈线性关系。
- 标准曲线的线性回归方程为：A = 0.033C + 0.005，相关系数R² = 0.996。
2. 样品测定：- 绿茶、红茶、乌龙茶样品中茶多酚含量分别为：27.6%、24.2%、22.8%。
- 不同茶叶样品中茶多酚含量存在显著差异，可能与茶叶品种、产地、加工工艺等因素有关。
六、实验结论1. 本实验采用分光光度法测定茶叶中茶多酚含量，方法简便、准确、可靠。
2. 绿茶、红茶、乌龙茶样品中茶多酚含量存在显著差异，可能与茶叶品种、产地、加工工艺等因素有关。
实验报告
提取茶叶中的茶多酚
徐成郡
经济管理学院12-1班
实验名称：提取茶叶中的茶多酚
实验目的：计算茶叶中的茶多酚含量
实验器材：试管、烧杯、量筒、加热器、加压过滤器、胶头滴管、 移液管、比色皿
实验药品：磷酸氢二钾溶液、磷酸二氢钾、茶叶、酒石酸亚铁溶 液
实验原理：茶叶中含有很多的酚类，酚类会与酒石酸亚铁发生反 应生成紫蓝色络合物，通过测量器吸光度计算其含量
计算公式为：茶多酚（%）=
100**1*10002*957.1*m
V A % 实验步骤：
1.取磷酸二氢钾溶液15ml 和磷酸氢二钾溶液85ml
于
烧杯中混合均匀。
2.称取5g 茶叶，加入200ml 水煮沸，静止20分钟， 加压过滤，量取滤液体积，记为V=150ml.
3.准确吸取上述试液1ml ，注入25ml 容量瓶中，加 水4ml 和酒石酸亚铁溶液5ml ，充分混匀后，再 加PH7.5的缓冲溶液至刻度线。
然后取一个干净
的25ml 容量瓶，加入4ml 水和酒石酸亚铁溶液
5ml ，充分混匀后再加PH 7.5的缓冲溶液至刻度
线制得空白溶液。
4.用两个10mm 比色皿分别取上述两种溶液，测定
吸光度（A ）=1.315
实验结果：
茶叶中茶多酚的含量 =100**1*10002*957.1*m
V A =100*5*1150*10002*957.1*315.1%= 15.44% 实验总结：在这次的实验中感受到团队合作的重要性，因为我是 一个人做的，当有些东西不懂的时候也没有人可以 问，可以的话下次找个同学搭档，另外就是自己的动
手能力还有些不行，必须加强才行。
茶多酚酒石酸亚铁比色法
====Word行业资料分享--可编辑版本--双击可删====多酚类物质的提取与含量测定一、实验原理酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。
测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。
二、实验材料、试剂与仪器材料：茶叶；仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O）,混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL；（2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取Na2HPO4·12H2O和NaH2PO4·12H2O，混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL。
三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用# 标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。
为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。
（二）样品总多酚的提取准确称取磨碎并混匀的茶叶样品于200mL三角瓶中，加入80mL沸水，并在沸水浴中保温浸提30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL。
（二）样品多酚提取液的多酚总量测定吸取1mL样品多酚提取液于25mL容量瓶中，加入4mL蒸馏水和5mL酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH 7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。
同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用比色皿在540nm波长处测定吸光度。
4.3 测定步骤试液的制备按GB 8305-87《茶水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。
实验报告
茶叶深加工与综合利用——实验报告学校：华南农业大学学院：园艺学院专业：茶学（加工与贸易）学号：201030030213姓名：骆彩萍指导老师：黄亚辉茶叶中茶多酚的提取制备技术一、实验原理：利用茶多酚在不同溶剂中的分配系数的差异来达到分离的效果。
二、实验准备：（一）材料：绿茶、没食子酸丙脂、氯仿、乙酸乙酯、蒸馏水（二）酒石酸亚铁溶液：称取硫酸亚铁（FeSO4∙7H2O）1g与酒石酸钾钠（KNaC4H4O6∙4H2O）5g，加水稀释至500ml。
（三）PH7.5的磷酸缓冲溶液：先配置以下两种溶液（A）1/15M的磷酸氢二钠溶液：称取11.876g的Na2HPO4∙12H2O，加水溶解，稀释至1L。
（B）1/15M的磷酸二氢钾溶液：称取KH2PO49.078g，加水定容至1L。
取（A）85ml和（B）15ml混合后，即为pH7.5的缓冲液。
三、实验方法：（一）没食子酸丙酯标准曲线制作（已制备好）（二）茶汤制备：称取3g茶样（稍研磨），置于三角瓶中，加入100ml沸蒸馏水（茶水比：3:100），摇匀后，沸水浴1h，每15min搅拌一次，浸提结束后，用滤纸趁热过滤与干净的三角瓶中，洗涤残渣，冷却至室温。
（三）萃取：滤液移入分液漏斗中，用等体积的氯仿萃取1次，除去咖啡碱、树脂、脂溶性色素等，静置分层，取水层，再用等体积的乙酸乙酯萃取2次，合并上层乙酸乙酯层，于旋转蒸发器浓缩并在60℃下真空干燥，得到橙黄色粉末，真空干燥得茶多酚成品，称量重量A，回收氯仿、乙酸乙酯。
（四）茶多酚纯度测定：准确称取1份0.0500g茶多酚加入50mL的容量瓶中，加水至刻度线，摇匀至溶解，得到1mg/mL的茶多酚溶液，备用。
然后用移液管从容量瓶中吸取1mL茶多酚溶液加入25mL的容量瓶中，再加入4mL蒸馏水，加入酒石酸亚铁溶液5mL，用配制好的PH值为7.5的磷酸缓冲溶液冲稀至刻度，摇匀。
用722型分光光度计，在540nm处，用1cm比色皿，空白试剂作参比，测量吸光度，计算茶多酚纯度。
酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚
酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚
王丽珠;吴棱
【期刊名称】《光谱实验室》
【年(卷),期】1997(014)003
【摘要】采用没食子酸丙酯为基准物质酒石酸亚铁作为显色剂，光度法测定茶多酚制品中茶多酚的含量。
最大吸收波长５４０ｎｍ摩尔吸光系数２．６５×１０＾３回收率为９８％－１０１％，相对标准偏差为０．９０％。
方法简便，结果令人满意。
【总页数】3页(P52-54)
【作者】王丽珠;吴棱
【作者单位】中国科学院福建物质结构研究所;中国科学院福建物质结构研究所【正文语种】中文
【中图分类】R392－33
【相关文献】
1.降低茶多酚酒石酸亚铁比色法的误差 [J], 张凯农;肖纯
2.酒石酸亚铁法和福林酚法测定茶多酚的差异原因研究 [J], 钟兴刚;刘淑娟;郑红发;黄怀生;赵熙;粟本文;周浩
3.酒石酸亚铁-标准曲线法检测绿茶提取物中茶多酚含量 [J], 邓祥;韩伟
4.分光光度法测定茶多酚注射剂中茶多酚的含量 [J], 杨美燕;李楠;邢国秀;郭永学;宫为民
5.硫酸亚铁分光光度法测定食盐中亚铁氰化钾的方法改进 [J], 王秋菊;毕玉友;孙继春
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GB-21733中茶多酚测定方法的说明
茶饮料中茶多酚测定方法的注意事项
目前集团茶饮料品项增多，生产工厂数量不断增加，茶多酚是GB/T 21733-2008茶饮料标准中衡量茶饮料合格与否的一个重要参数，针对目前各工厂对GB/T 21733-2008 附录A中茶多酚检测方法理解存在偏差与疑问的问题，特对该方法中已发生混淆之处进行说明，以确保各生产工厂产品品质统一。
A.3.2 测定方法的说明：
（1）该步骤中测定吸光度A1、A2时的试剂空白不同。
测定A1的试剂空白为不添加产品样液，加水5mL、酒石酸亚铁溶液5mL，用pH7.5磷酸缓冲液定容的试液；测定A2的试剂空白为不添加产品样液，加水5mL，不添加酒石酸亚铁溶液，用pH7.5磷酸缓冲液定容的试液。
（2）目前集团已有的茶饮料品相在测定茶多酚时，计算时公式中的K值为1即可。
如若对该方法仍有疑问，请与研发中心联系。
茶多酚总量的测定
结果计算
测试效果
pH对测定结果有影响，在pH6.24时连位羟基和铁起 反应，而邻位几乎不起反应；在pH6.8和8.1时，连 位羟基变化不大，颜色的加深是由邻位羟基引起的。 低于pH7.0，酒石酸铁和索伦逊缓冲液会形成乳状 混浊液干扰比色结果。
酒石酸铁主要与茶多酚中的邻位羟基和连位羟基功 能团呈色，而对间位羟基和单羟基不呈色，而且与 连位羟基呈色能力比与邻位羟基呈色强3倍。由于 不同种类茶叶的多酚组成不完全相同，对酒石酸铁 的显色强度也有差异。
pH7.5的索伦逊缓冲液：
pH7.5的索伦逊缓冲液
先配制以下两种溶液
（1） 1/15M的Na2HPO4溶液：称取Na2HPO4.2H2O 11.876 克，加水溶解并稀释至1 L。 （2） 1/15M的KH2PO4溶液：称取经110℃ 烘干2 h 的KH2PO4 9.078克，加水溶解并稀释至1 L。
取溶液（1）85 ml和溶液（2）15 ml混匀，
主要仪器
分光光度计，恒温水浴，分析天平。
测定方法
茶汤制备：准确称取磨碎试样3 克，加450 毫升沸 水，在沸水浴中浸提 45分钟，每隔10 分钟摇瓶一 次，过滤。洗涤残渣，滤液合并于500毫升容量瓶 中，冷却后加水定容至刻度，摇匀。 测定：准确吸取茶汤1 毫升，注入25 毫升容量瓶 中，加水4 毫升、酒石酸铁溶液5 毫升，用缓冲溶 液定容至刻度，混匀。用10 mm比色皿，以试剂 空白作参比，于波长 540 nm处测吸光度，根据经 验系数求得茶汤中茶多酚含量。
茶多酚总量的测定
─酒石酸铁比色法
制作人：汪小钢
实验目的
茶多酚是茶叶中多元酚类物质的总称，具有苦 涩味，对茶叶的品质有非常重要的影响。此外， 药理学试验表明，茶多酚对心血管疾病、癌症 等具有一定的防治效果。因此，检测茶叶中多 酚类物质总量对评价茶叶的品质具有非常重要 的作用。
茶多酚的含量
酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量1．原理根据酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色配合物。
配合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比，因此可以用比色方法测定。
该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。
在一定的操作条件下，光密度为1.00时，供试液中茶多酚浓度为7.826mg/mL 。
2．仪器和试剂仪器：水浴、分光光度计、三角烧瓶、容量瓶、吸管、滴瓶等。
试剂：酒石酸铁溶液、pH7.5的磷酸缓冲溶液。
3．操作步骤（1）样品溶液的制备方法准确称取茶叶麻碎样品1g ，于200 mL 三角烧瓶中，加入沸水80 mL ，在沸水浴中浸提30min ，然后过滤、洗涤，滤液倒入100 mL 容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。
（2）测定吸取样品溶液1 mL 于25 mL 容量瓶中，加蒸馏水4 mL ，加酒石酸铁溶液5 mL ，摇匀，再加入pH7.5磷酸缓冲液稀释至刻度。
以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作为空白。
选择540nm 波长和0.5cm 的比色杯测定光密度。
4．结果计算1001000826.7⨯⨯⨯⨯=mV T A x 式中：x ——茶多酚含量，%；A ——样品溶液的光密度值；T ——样品溶液总量，mL ；V ——吸取的试剂量，mL ；m ——样品质量，g 。
5．注意事项磷酸缓冲液在常温下容易生长霉菌，以冷藏为宜。
酒石酸铁与茶多酚反应时，因连苯酚比邻苯酚显色强，所以没食子酸酯类儿茶素显色深，凡是此类儿茶素含量比例大的，显色就较深。
因此酒石酸铁比色法与高锰酸钾滴定法两者测定的结果会有所出入。
食品中锡的测定1．原理样品经消化后，在弱酸性溶液中，四价锡离子与苯芴酮形成微溶性橙红色配合物，在保护性胶体存在下，与标准系列比较定量。
2．仪器和试剂（1）仪器分光光度计（2）试剂酒石酸溶液（100g/L）；抗坏血酸溶液（10g/L）；动物胶溶液（5g/L）；酚酞指示液（10g/L）；氨水（1+1）；硫酸（1+9）；苯芴酮溶液（0.1g/L）；锡标准储备液（1.0mg/ mL）；锡标准使用液（10.0μg/ mL）。
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方法一：酒石酸亚铁法测定茶多酚
1.适用范围：茶叶、茶粉及其制品，茶饮料等。
2.原理：
在茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚性化合物，均称茶多酚。
茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，可用分光光度法测定其含量。
3.试剂：
所用试剂应为分析纯，水为蒸馏水或去离子水。
3.1酒石酸亚铁溶液：称取1g（准确至0.0001）硫酸亚铁，5g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至1L（低温保存，有效期10天）。
3.2 PH7.5磷酸缓冲溶液：
3.2.1 1/15M磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠，加水溶解后定容至1L。
3.2.2 1/15M磷酸氢钾：称取经110℃烘干2小时的磷酸二氢钾9.08g，加水溶解后定容至1L。
取上述1/15M的磷酸氢二钠溶液85ml和1/15M的磷酸二氢钾15ml混合均匀。
4.仪器及用具：
4.1分光光度计
4.2磨碎机：由不吸收水分的材料制成；死角尽可能小，易于清扫；使磨碎样品能完全通过孔径600~1000um的筛子。
5.操作步骤：
5.1茶叶：
5.1.1试样的制备：（紧压茶以外的各类茶）先用磨碎机将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分。
如果水分含量太高，不能磨到2.2所规定的细度，必须将样品预先干燥（烘箱不超过100℃为宜）。
待试样冷却后（置干燥器内），再进行磨碎。
5.1.2试液的制备：
（1）称取3g（准确至0.001g）磨碎试样于500ml锥形瓶中。
（2）加沸蒸馏水450ml，立即移入沸水浴中，浸提45min。
若水浴无振动装置则每隔10min 摇动一次。
（3）浸提完毕后，冷却后（自然冷却或于自来水流下冷却）将样液转移到500ml容量瓶内，并定容至刻度。
（4）定容后立即常压过滤，弃去初滤液（5ml以上），收集滤液备用。
（所用滤纸为杭州新华纸业有限公司，双圈牌，定量，慢速滤纸）。
5.2茶粉：茶粉试液的制备：称取一定量的样品，用沸蒸馏水450ml冲泡，冷却后用蒸馏水稀释定容至500ml。
5.3茶饮料、茶汁：
5.3.1较透明的样液，如果味茶饮料：将样液充分摇匀后，备用。
5.3.2较浑浊的样液，如果汁茶饮料：称取充分混匀的样液25ml于50ml容量瓶中，加入95%乙醇（C2H2OH）15ml，充分摇匀，放置15min后，用水定容至刻度。
用慢速定量滤纸过滤，滤液备用。
5.3.3含碳酸气的样液：量取充分混匀的样液100ml于250ml烧杯中，称取其总质量，然后置于电炉上加热至沸腾，在微沸状态下加热10min，将二氧化碳气排除。
冷却后，用水补足原来的质量。
摇匀后，备用。
5.4测定：
5.4.1用20ml移液管精确量取20ml待测样品至100ml定量瓶中，加入蒸馏水（或RO水）稀释定容至100ml，充分振荡混匀。
5.4.2于25ml容量瓶内吸取5ml稀释液。
对于5ml移液操作，请使用5ml定量加样器（即移液枪）进行精确操作；若没有定量加样器方采用5ml移液管进行精确操作。
5.4.3 加酒石酸亚铁溶液5ml，充分混合，再加PH7.5缓冲液至刻度，摇匀。
5.4.4用10mm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A1）。
（试剂空白溶液为：5ml蒸馏水（或RO）水+5ml酒石酸亚铁溶液+磷酸缓冲液定容至25ml）5.4.5同时移取等量的试液于25ml容量瓶中，用PH7.5磷酸缓冲液定容至刻度，测定其吸光度（A2）。
（试剂空白溶液为：5ml蒸馏水（或RO）水+磷酸缓冲液定容至25ml）
6.结果计算：
6.1茶叶及茶粉中茶多酚的含量，以干态质量百分率表示，按下式计算：
式中：A1—试液显色后的吸光度；
L1—试液的总量，ml ；
L2—测定时的用液量，ml ；
M—试样的质量，g；
m—试样干物质含量百分率，%；
1.957—用1cm比色杯，当吸光度等于0.5时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。
6.2饮料中茶多酚含量按下式计算：
式中：A1—试液显色后的吸光度；
A2—试液底色的吸光度；
K—稀释倍数；
L—测定时吸取试液的体积，ml ；
1.957—用1cm比色杯，当吸光度等于0.5时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。
7.重复性：
7.1茶叶等同一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过0.5g。
7.2茶饮料等同一样品的两次测定值之差，不得超过平均值的5.0%。
8.备注：
8.1酒石酸亚铁溶液应妥善保存，若有沉淀或颜色发生变化等，应重新配制。
8.2 1.957是一个经验值，故各个操作步骤应严格要求。
8.3整个实验过程控制在3小时之内。
9.参考资料：
GB/T 8302-2002《茶取样》
GB/T 8303-2002《茶磨碎试样的制备及其干物质含量的测定》
GB/T 8313-2002《茶茶多酚测定》
GB 2499—200《茶饮料行业标准》。