第11章 基因工程菌发酵——【发酵工程 精】
发酵工程的内容及其特点
-基因工程、细胞工程 -接种技术
- 培养基组成优化
- 灭菌技术
发酵过程控制
发酵工程组成
从广义上讲，由三部分组成： 上游工程、发酵工程、下游工程
FERMENTATION Process Control
下游工程
DOWROCESSES -产品指标测定 -产品提取分离及纯化 - 废弃液处理 -副产物综合利用
第二节 发酵工程的内容及其特点
发酵工程的内容：
发酵工程（Fermentation
Engineering）：应用微生物学等 相关的自然科学以及工程学原理上，游工程
利用微生物等生物细胞进行酶促PURPOSCTREESASEMS
转化，将原料转化成产品或U提PS供TREAM PROCESSES
社会性服务的一门科学。
二、 发酵生产的类型
发酵生产类型
1. 微生物菌体发酵——获得菌体细胞 2. 微生物酶发酵——获得微生物的酶 3. 微生物代谢产物发酵——获得微生物代谢产物 4. 微生物转化发酵——转化某一化合物结构 5. 生物工程细胞的发酵——利用基因工程菌发酵获
得产物
三、发酵工程的特点
1. 原料来源广泛易得。 2. 所需产品可通过微生物的复杂的代谢活动一次性获得。
第11章 基因工程菌发酵——【发酵工程 精】
（三）基因不稳定性
生产的目标是得到最大量的外源蛋白，但是大 量外源蛋白的形成对宿主细胞是有损害的，通常是 致死的，失去制造外源蛋白的能力的细胞一般生长 得快得多，从而能替代有生产能力的菌株，这就导 致基因的不稳定性。
基因的不稳定性原因： 分离丢失 结构不稳定性 宿主细胞调节突变
1、分离丢失
分离丢失示意图
2、质粒结构不稳定性
指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性 能的改变。
如果质粒发生突变，仍保留了抗生素抗性基因，但不合成 外源蛋白，那么这些突变株仍能在含有抗生素的培养基中生 长。
而且由于不合成外源蛋白，生长得比原来的工程菌更快， 使得在这种培养物中带有突变质粒的菌占统治地位，这种培 养情况就是结构不稳定性。
2、通过控制环境参数（温度、PH、培养基组分和溶 解氧浓度），调节比 生长速率，使工程菌生长具有优势。有 些含质粒的菌对发酵环境的改变 比不含质粒的菌反应慢，因 而间歇改变培养条件以改变这两种菌的比 生长速率，可以改 善质粒的稳定性。
（四）表达的诱导
基因工程菌的产物表达需要诱导； 诱因主要有：温度诱导、乳糖或乳糖结构类似 物诱导、氧饥饿诱导、葡萄糖饥饿诱导、甲醇诱 导等。
重组菌GY2345(pBR325)则表现不同
■质粒在不同的宿主中，有不同的稳定性 质粒pBR325在不同的宿主大肠杆菌中： 限制性基质：葡萄糖、镁盐、磷酸盐 稳定性有很大差异 葡萄糖和磷酸盐限制时最易发生质粒不稳定性 可能是它们提供合成DNA的材料和能量
（2）比生长速率μ 重组菌的μ对质粒的稳定性有很大影响
在大的反应器中含有非常多的细胞，总会存在无质粒细 胞，例如1000L发酵液，每毫升有109个细胞，总共就有1015个 细胞，那么在这个反应器中就含有109个无质粒细胞。
【课堂笔记】《发酵工程》
【课堂笔记】《发酵⼯程》《发酵⼯程笔记》笔者：赵可⽬录第⼀章绪论（p1） (1)1.1概念 (1)1.2发酵⼯程的研究内容 (1)1.3发酵过程的特点 (2)1.4发酵过程的问题 (2)1.5发酵⼯程的发展简史 (2)1.6发酵⼯程⼯程的任务 (2)1.7发展⽅向 (3)第⼆章⽣物发酵的基本过程（p36） (3)2.1发酵的基本过程 (3)2.2发酵过程的⼀般过程和操作⽅式 (3)2.3微⽣物的发酵类型 (4)2.3.1液体发酵 (4)2.3.2固体发酵 (4)2.3.3好氧发酵 (5)2.3.4厌氧发酵 (5)第三章种⼦扩⼤配培养（p44） (5)3.1概念 (5)3.2种⼦扩⼤培养⼯艺 (6)3.2.1制备流程 (6)3.2.2优良种⼦具备的条件 (6)3.2.3影响种⼦的质量因素 (6)3.2.4种⼦质量控制措施 (6)第四章发酵培养基（p48） (6)4.1⼀般特点 (6)4.2发酵培养基的组成与制备 (6)4.2.1发酵培养基的组成 (6)4.2.2发酵培养基的制备要点 (7)4.3发酵培养基的设计和优化 (8)4.3.1设计发酵培养基要考虑的因素： (8)4.3.2摇瓶实验： (8)4.3.3正交实验：多因素多⽔平 (8)第五章发酵过程产物分析（p53） (8)5.1分析项⽬按性质分可分三类： (8)5.2发酵终点的判断 (8)第六章发酵动⼒学（p59） (8)6.1发酵动⼒学概念 (8)6.2研究发酵动⼒学的⽬的 (9)6.3动⼒学 (9)6.3.1课程重点 (9)6.4⽣物反应类型 (9)6.5发酵的⽬的 (9)6.6发酵研究的关键问题 (9)6.7优化发酵过程达到⾼产⽬标的⽅法 (10)6.8发酵动⼒学研究的基本过程 (10)6.9分批发酵动⼒学 (10)6.9.1菌龄 (10)6.9.2分类 (10)6.9.3细胞⽣长动⼒学 (10)6.9.4分批发酵基质消耗动⼒学 (11)6.9.5分批发酵产物形成动⼒学 (11)6.9.6分批发酵的优缺点 (12)6.9.7重要截图（来⾃中国MOOC余龙江教授） (12)6.10讨论与问题 (13)第七章分批发酵、补料分批发酵和⾼密度发酵（p81） (14)7.1分批发酵 (14)7.1.1分批发酵的操作⼯艺 (15)7.1.2菌体⽣长规律 (15)7.1.3代谢变化 (15)7.2补料分批发酵 (16)7.2.1适⽤范围： (16)7.2.2物料流加⽅式 (16)7.2.3补料分批动⼒学 (16)7.3⾼密度发酵 (16)7.3.1影响⾼密度发酵⽣产的因素 (16)7.3.2⾼密度发酵存在的问题 (17)7.4讨论与问题 (17)7.4.1分批发酵和补料分批发酵有哪些联系和区别？ (17)7.4.2分批发酵的流程 (17)7.4.3分批发酵包括哪些时期 (17)7.5课堂问题 (17)第⼋章连续发酵（p105） (19)8.1基本概念 (19)8.2连续发酵的优缺点 (19)8.3连续发酵的类型 (19)8.4连续发酵操作⽅式 (20)8.4.1开放式连续发酵 (20)8.4.2封闭式连续发酵 (20)8.5膜连续发酵 (21)8.6连续发酵的控制⽅式 (21)8.7连续发酵的实际应⽤ (22)8.7.1连续发酵 (22)8.7.2分批发酵 (22)8.7.3补料分批发酵 (22)8.7.4连续发酵在⼯业上的应⽤ (23)第九章微⽣物的现代固态发酵（p121） (23)9.1固态发酵 (23)9.1.1固态发酵的特点 (23)9.1.2固体培养的优点 (23)9.1.3固液发酵的⽐较 (23)9.1.4传统固态发酵与现代固态发酵 (24)9.1.5固态发酵分类 (25)9.1.6适合固态发酵的微⽣物 (25)9.1.7固态发酵的界⾯作⽤ (25)9.2固态发酵反应器 (25)9.2.1静态固态发酵反应器 (25)9.2.2动态固态发酵反应器 (26)9.2.3固态发酵反应器 (26)9.3固态发酵的应⽤ (26)第⼗章基因⼯程菌株发酵（p154） (27)10.1⼯业化⽣产的基因⼯程菌应具备的条件 (27)10.2基因⼯程菌的发酵 (27)10.2.1培养操作和发酵设备 (27)10.3讨论与问题 (27)10.3.1基因⼯程菌的不稳定性 (27)10.3.2改善措施： (27)10.3.3⽣产过程: (27)第⼗⼀章发酵过程中氧的溶解、传递、测定及其影响因素（p167） (28)第⼗⼆章发酵控制⼯程（p183） (28)12.1讨论与问题 (28)第⼗三章空⽓除菌（p250） (29)13.1⼏个基本概念 (29)13.2染菌的危害 (29)13.3树⽴⽆菌概念，强调⽆菌操作 (29)13.4灭菌和除菌的基本原理 (30)13.5发酵⼯程的灭菌⼯程（p228） (30)13.5.1化学物质灭菌 (30)13.5.2⼲热灭菌法 (30)13.5.3湿热灭菌法 (31)13.5.4射线灭菌 (31)13.5.5过滤介质除菌 (31)13.5.6静电除菌 (31)13.5.7臭氧灭菌 (31)13.6名词概念 (32)13.7培养基和发酵设备的灭菌 (32)13.7.1温度和时间对培养基的影响 (32)13.7.2影响培养基灭菌的其他因素 (33)13.7.3培养基分批灭菌 (33)13.7.4发酵设备的灭菌 (34)13.8空⽓除菌 (34)13.8.1发酵⽤⽆菌空⽓的概念和质量标准 (34)第⼗四章发酵⼯程设备（p265） (35)14.1通⽓发酵罐 (35)14.1.1机械搅拌通⽓发酵罐 (35)14.1.2⾃吸式发酵罐 (35)14.2嫌⽓发酵罐 (36)14.2.1基本要求 (36)《发酵⼯程》1-14章节笔记第⼀章绪论（p1）1.1概念发酵⼯程利⽤微⽣物或动植细胞的⽣长繁殖和代谢活动以及特定功能，通过现代化⼯程技术⽣产有⽤物质或直接应⽤于⼯业化⽣产的技术体系；是将传统发酵与现代的DNA重组，细胞融合，分⼦修饰，和改造新技术结合并发展起来的现代发酵技术；它是渗透有⼯程学的微⽣物学和细胞⽣物学，是现代⽣物技术产业的基础与核⼼。
第十一章 现代发酵技术 —现代生物技术在发酵工业中应用(1)
3.市场竞争环境 国外：市场竞争激烈，但秩序较好，市场份额
多为大公司所垄断 国内：仿制与重复建设、重复生产现象非常严
3) 现代生物技术与发酵工程技术：
（1）现代生物技术70％以上的集中在生物制药 领 域 。 2000 年 全 世 界 生 物 技 术 药 物 产 值 达 1000亿美元。
（2）各国对生物技术的投资80%以上集中在医 学生物技术领域；
（3）生物技术研究开发的60～80%的力量主要 集中在医学领域
（4）总销售额超过10亿美元的生物技术产品主要 为医药生物制品；
重，出现了一哄而上的过热现象，市场恶性竞 争，无法实现规模效益。 4.产品信誉 国外：产品信誉较好 国内：产品信誉低，“出现信洋不信中，买洋 不买中”现象
5.创新与知识产权
国外：创新意识高，特别注重知识产权（主要是专 利、商标）保护
国内：创新意识低，严重缺乏自主知识产权产品， 当前，我国已产业化的几十种基因工程药物和疫 苗中只有几种拥有自主知识产权，其他均为仿制 产品。
中国生物技术药物
国产α－干扰素市场占有率已经超过进口 产品，我国首创的γ－干扰素已具备向国外 技术转让能力，新一代干扰素正在研制之中。
据有关部门预测，未来我国生物技术药物， 年增长率不低于25％，年总产值将超过30亿元 人民币以上，发展前景十分广阔。
中国生物技术药物存在的问题
1.研发投入 国外：2－3亿美元/基因药物 国内：10多年来，对生物制药的总投入仅有40 多亿元
二、现代生物技术（modern Biotechnology)
基因工程菌发酵培养的流程
基因工程菌发酵培养的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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1. 菌种复苏和激活，从菌种库中取出保藏的菌种，在无菌条件下培养，激活其生理活性。
高中生物《发酵工程及其应用》微课精讲+知识点+课件教案习题
↓重点知识：1.发酵工程:是根据生物学,化学和工程学的原理进行工业规划的经营和开发微生物,动植物细胞及其亚细胞组分,进而利用生物体所具有的功能元件来提供商品而服务于社会的一门综合性科学技术.2.发酵动力学:研究微生物生长,产物合成,底物消耗之间动态定量关系,定量描述微生物生长和产物形成的过程.3.生物反应过程特点：①发酵原料的选择和预处理②菌种的选育和扩大培养③微生物发酵和控制④产品的分离和纯化发酵工程知识点：1、菌种培育由于从自然界分离的菌种不一定能满足生产的要求，因此必须对菌种进行改造，如何改造培育优良菌种呢？第一，生产微生物直接合成的产物，即微生物的天然产品，如抗生素、氨基酸等，先从自然界分离出相应的菌种，再用物理或化学的方法进行诱变育种，从中筛选出产量高的菌株用于生产。
例如生产用青霉菌的培育过程。
第二，生产微生物不能合成的产物，如人的生长激素、胰岛素等产品，则用细胞工程、基因工程对微生物的遗传特性进行定向的改造，构建工程菌来达到生产相应产品的目的。
例如单克隆抗体、白细胞介素—2、抗血友病因子的生产。
2、两次培养发酵工程的几个环节中有两次对微生物进行培养，第一次是对菌种的扩大培养，第二次是发酵生产产品过程时的培养。
它们有何区别呢？第一，两次培养的目的不同。
扩大培养是为了让菌种在短时间内快速繁殖，以便得到大量的菌种用于生产。
而发酵过程的培养是为了获得生物产品、单细胞蛋白或者是发酵产物。
第二，两次培养的条件不相同。
例如：酒精发酵，扩大培养要在有氧的条件下进行，让酵母菌进行有氧呼吸，获得的能量多，短时间内大量繁殖使自己在培养基中成为优势种群，发酵过程的培养要在厌氧的条件下进行才能产生酒精；又如谷氨酸发酵，谷氨酸棒状杆菌扩大培养要求C：N＝4：1，菌体大量繁殖，发酵过程的培养C：N＝3：1才能大量合成谷氨酸。
3、菌体生长规律研究微生物的生长规律是为发酵提供理论依据，是将少量的单一菌种接种到恒定容积的液体培养基中，在适宜条件下培养并定期取样测定菌体的群体生长规律，由于营养物质有限，菌体生长有调整期、对数期、稳定期、衰亡期四个阶段。
第2讲 基因工程菌的发酵
二、基因工程菌发酵所用设备
基因工程菌的培养设备
（1）发酵罐的组成：发酵罐体、搅拌器、温控、灭
菌系统、空气无菌过滤系统、参数测量与控制系统、以 及培养液配制及连续操作装置等。
（2）基因工程菌对发酵设备的要求：
既要防止外部微生物侵入罐内，还要不使培养 物外漏。
机械搅拌式发酵罐
气升式发酵罐
三、基因工程菌的培养工艺
铵、硝酸铵、氯化铵等。 ③其他：无机盐、微量元素、维生素、生物素等，营养缺陷型菌 株还要补加相应的营养物质。
2 接种量的影响
① 什么是接种量?——移入的种子液体积和培养液体积之 比。 ② 接种量的大小对发酵有什么影响?
答：影响发酵的产量和发酵周期， （1）接种量小，菌体生长的延迟期长，不利于外源基因的表达； （2）接种量大，有利于对基质的利用，可以缩短生长延迟期，但
会使菌体生长过快，代谢产物累积过多，反而会抑制后期菌体的生长；
3
温度的影响
在复制水平上 在转录水平上 在其他方面
通过调控复制改变基因剂量来影响基因表达 通过影响RNA聚合酶作用来调控基因表达 在mRNA降解和翻译水平上影响基因表达
温度还影响蛋白质的活性和包含体的形成。
例如：大肠杆菌合成青霉素酰化酶不仅受苯乙酸诱导和葡萄 糖阻碍，还受温度调控。
16℃和18℃培养时，菌体生长较慢，从而影响翻译，即酶的合 成。
4 溶解氧的影响
溶解氧（Dissolved oxygen,DO2）：是工程菌发酵培养过
程中影响菌体代谢的一个重要参数，溶解氧浓度对菌体生长和 产物生成的影响很大。
发酵前期，随DO2的下降，细胞生长减慢，ST (surface tension) 值下降； 发酵后期，随DO2的下降，ST值下降幅度更大，外源基因高水平转录和翻
《生物工艺学》基因工程菌的发酵 ppt课件
（3）使质粒稳定的措施
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3，表达效率及质粒拷贝数控制
• 在工程菌培养过程中，表达效率与质粒拷贝数有关。在质粒稳定基础上， 应尽可能提高细胞内质粒拷贝数。
• 在工业生产中易于操作的方法是在培养的不同阶段，采用不同培养温度达 到提高拷贝数目的，在前培养阶段采用低温，以减少细胞负荷，此时拷贝 数较低，而比生长速率升高，在主培养中途升高温度，质粒拷贝数增加， 目的基因产量提高。
四、工程菌的应用
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2，其它发酵产品 • 酶制剂 • 氨基酸（苏氨酸、色氨酸） • 抗生素
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第二节 工程菌的培养
• 就生产流程而言，从发酵到分离、纯化目标产物，工程菌和常规微生物并无太多的差异。但工程菌在保存 过程中及发酵生产过程中表现出不稳定性，以及安全性等问题，使得工程菌的培养有着自身所特有的特点。
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三、工程菌应具备的条件
• 发酵产品是高浓度、高转化率和高产率的，同时是分泌型菌株。 • 菌株能利用常用的碳源，并可进行连续发酵。 • 菌株不是致病株，也不产内毒素。 • 代谢控制容易进行。 • 能进行适当的DNA重组，并且稳定，重组的DNA不易脱落。
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1，基因药物 • 红细胞生成素 • 胰岛素 • 干扰素 • 乙肝疫苗 • 生长激素 • 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
• 这些准则参照了防止病原微生物污染的措施，以及根据对实验安全度的评定， 采用物理密封(P1~P4)和生物学密封(B1和B2)两种方法。
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• 物理密封是将重组菌封闭于设备内，以防止传染给实验人员和向外界扩散。 实验规模在20L以下时，物理密封由密封设施、实验室设计和实验注意事项 组成。密封程度分为P1、P2、P3和P4级，数字越大，密封水平越高。
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G+细菌 低等真核细胞 哺乳动物细胞
1、大肠杆菌
如产品翻译后不需修饰，最普遍选用大肠杆菌作为宿主。 优点： 生理学和遗传学背景了解得深入，有利于进行复杂的基 因操作。 有相当高的生长速率，并能长到高细胞浓度（50g/l）； 能生长在简单的便宜的培养基上。
三类主要基因工程表达体系的比较
表达体系 产物 产生部位 培养方式 产物活性 浅在危险
大肠杆菌 多肽、蛋白 菌内 部分可高产 对原核好 融合蛋白
酵 母 多肽、蛋白 菌内 可高产 真核接近 不大 糖基化蛋白 胞外 天然
不大
动物细胞 完整 胞外
几乎可为 可能有
糖基化蛋白
可高产 天然产物 致癌因素
二、基因工程菌发酵的特点
（三）基因不稳定性
生产的目标是得到最大量的外源蛋白，但是大 量外源蛋白的形成对宿主细胞是有损害的，通常是 致死的，失去制造外源蛋白的能力的细胞一般生长 得快得多，从而能替代有生产能力的菌株，这就导 致基因的不稳定性。
基因的不稳定性原因： 分离丢失 结构不稳定性 宿主细胞调节突变
1、分离丢失
基因工程菌生产的产品主要有二类：
蛋白质
非蛋白质
基因工程菌发酵水平取决于：
菌种遗传特性
发酵工艺及控制
发酵罐的性能与操作
——掌握工程菌的发酵特性、过程控 制和优化及放大特点，才能保证工程菌顺利实现 产业化
基因工程菌生产的产品 细胞因子、疫苗、酶
一、宿主-载体系统
构建基因工程菌，必须选择宿主和表达系统。 要求：翻译后的修饰要简单；如果用于食品要考虑宿主
白信号肽序列的下游。
2、G+ 细菌
枯草杆菌是G+菌，没有外膜，能把蛋白分泌（excretion） 到胞外。不能使蛋白质糖基化 缺陷:
枯草杆菌产生大量的蛋白酶，会很快降解产物。而且枯 草杆菌基因构建比大肠杆菌困难，质粒稳定性也比较差
其他G+ 细菌: 链霉菌：不致病、使用安全，分泌能力强，可
将表达产物直接分泌到培养液中，具有糖基化能力， 可做理想的受体菌。
到胞外也有限。 只能简单糖基化。 当产生的外源蛋白需要复杂的糖基化和翻译后修饰时，
要用动物细胞组织培养来达到。
丝状真菌： 很强的分泌能力；能正确进行翻译后加工，包括肽剪切
和糖基化；而且糖基化方式与高等真核生物相似；丝状真菌 （如曲霉）被确认是安全菌珠，有成熟的发酵和后处理工艺。
影响目的基因在酵母菌中表达的因素 （1）外源基因拷贝数：高度稳定、高拷贝 （2）外源基因的表达效率：启动子 （3）外源蛋白的糖基化： （4）宿主菌珠的影响：菌体生长力强；菌体内源蛋白
指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象。 为什么会出现质粒丢失呢？ 质粒可分为高拷贝质粒（>20拷贝/细胞）和低拷贝质粒 （有时低到每个细胞一至二个拷贝）。低拷贝质粒有专门的 机制保证在子代细胞中有相等的分配，高拷贝质粒通常很少 遵循二分法分配到子代细胞。对于高拷贝质粒，绝大多数子 细胞接受一些质粒，也有可能有的细胞没有接受质粒，出现 质粒丢失。虽然形成无质粒细胞的可能性是低的（每百万细 胞分裂中一个）。
酶要弱；菌株性能稳定；分泌能力强。
4、哺乳动物细胞
哺乳动物细胞在表达时有正确的氨基酸排列，而且所有转 译后处理（修饰）与在整个动物中相同，在某种情况下可能转 译后修饰有些不同，但它可提供最接近于天然副本的产物，此 外多数产物可以分泌到胞外。
但动物细胞生长缓慢，培养基价格昂贵，蛋白表达水平较 低。用于重组DNA 生产蛋白的最常用的宿主是CHO（中国仓 鼠卵巢细胞）。
（一）外源基因的多样性
基因工程菌带有外源基因，外源基因可能在质粒上也可能 整合到染色体上，这些基因可能不稳定。 丢失外源基因的菌往往比未丢失质粒的菌生长快得多，这 样就会大大降低产物的表达。 为了抑制基因丢失的菌的生长，一般在培养中加入选择压 力，如抗生素。
Hale Waihona Puke （二）培养过程分两个阶段基因工程菌的培养一般分两段。 前期是菌体生长，生长到某一阶段，加入诱 导因子，诱发产物表达。
3、低等真核细胞
酵母菌 酿酒酵母是第一个被人利用的生物，现在发展了其他的酵
母如甲醇营养型酵母等。 优点 生长快 最大生长速率是大肠杆菌的25% 个体大 酵母比最大的细菌大，容易从发酵液中回收。不产 内毒素 有简单糖基化能力和分泌蛋白的能力。
缺点 酵母达到高表达水平比大肠杆菌困难，外源蛋白分泌
第十一章 基因工程菌发酵
主要内容
第一节 概述 第二节 基因工程菌的稳定性 第三节 影响外源基因表达的因素 第四节 基因工程菌发酵过程的工艺控制 第五节 重组大肠杆菌的培养策略 第六节 甲醇营养型酵母的生长与表达 第七节 培养装置与产物的提取
第一节 概 述
近年来，重组DNA技术已由实验室研究走向生产应用。 它不仅提供了一种有效的菌种改良技术，也为攻克医学 上的疑难杂症 (癌、遗传病及艾滋病等) 的治愈提供了可能； 为农业的第三次革命提供了基础；为深入探索生命的奥秘提 供了有力的手段。 由工程菌产生的珍稀药物，如胰岛素、干扰素、人生长 激素、乙肝表面抗原等已先后面市。
在大的反应器中含有非常多的细胞，总会存在无质粒细 胞，例如1000L发酵液，每毫升有109个细胞，总共就有1015个 细胞，那么在这个反应器中就含有109个无质粒细胞。
真核基因在大肠杆菌中的表达方式 （1）以融合蛋白的形式表达药物基因：融合蛋白氨基端
是原核序列，羧基端是真核序列。 优点：操作简便，蛋白质在菌体内比较稳定；易高
效表达；但只能做抗原。 不做人体注射用药。 （2）以非融合蛋白的形式表达药物基因：易被蛋白酶破
坏；N端有甲硫氨酸，易引起免疫反应。 （3）分泌型表达蛋白药物基因：外源基因融合到原核蛋
大肠杆菌作为宿主的主要问题是
分泌(secretion)的蛋白通常在胞内，当这些蛋白达到高浓 度时，会被水解或形成不溶的包含体；包含体蛋白是不折叠的， 必须重新溶解并使它复性。
大量的外源蛋白会触发热冲击响应；增加蛋白水解酶的活 性；使蛋白的降解速率几乎等于产生的速率。
翻译常从甲硫氨酸的AUG密码子开始，故目的蛋白质N端 常多一个甲硫氨酸残基，引起免疫反应。