溃疡性结肠炎模型选择及评价指标

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敲低Ube2w增加葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的易感性

敲低Ube2w增加葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的易感性
选择干 扰 效 果 最 佳 的 siRNA 进 行 小 鼠 体 内 转 染 实 验ꎮ 给 10 只 C57BL / 6 雄 性 小 鼠 随 机 尾 静 脉 注 射 siRNA
( siUbe2w / si ̄control) ꎬ并用 2 5% DSS 喂养ꎬ构建两组 DSS 小鼠溃疡性结肠炎模型ꎬ即 Ube2w 敲低组和对照组各 5
中图分类号:R361 2ꎬ Q28 文献标志码:A
Knockdown of Ube2w increases
the susceptibility to dextran sodium sulfate ̄induced ulcerative colitis in mice
WANG Shao ̄xinꎬ CUI Li ̄hong ∗ ꎬ LI Xiao ̄weiꎬ LIU Xin ̄yaoꎬ LUO Zheꎬ YAN Zhi ̄hui

通信作者( corresponding author) :luckycui861@ 163.com
王少鑫 敲低 Ube2w 增加葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的易感性
947
Conclusions UBE2W is involved in the regulation of inflammatory response and Ube2w knockdown increases the
( Department of Gastroenterologyꎬ the Sixth Medical Centerꎬ Chinese Peoples Liberation Army General Hospitalꎬ Beijing 100048ꎬ China)
Abstract: Objective To investigate the effect of UBE2W on dextran sodium sulfate ( DSS)  ̄induced ulcerative co ̄

免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型之探析

免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型之探析

免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型之探析溃疡性结肠炎的发生与免疫因素有着密切联系,用免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型可与溃疡性结肠炎患者身体的病理变化更接近。

本法需要一定的设备、条件及相应的技术,实验周期长,但重复性好,较适合用于抗溃疡性结肠炎新药的筛选。

标签:免疫法;溃疡性结肠炎;模型动物实验是现代医学和生命科学研究的一个重要基础和支柱,在实验动物身上复制人类疾病,是促进医学科学发展的重要途径之一,可为医学理论以及治疗和预防疾病的研究提供必不可少的资料和研究方法。

目前复制溃疡性结肠炎动物模型的方法有多种,但尚未有一种模型与溃疡性结肠炎患者在致病因素、病理生理过程、免疫反应、临床表现、治疗手段等诸方面完全相同。

但本病的发生与免疫因素最为密切,因此我们在实验时采取了免疫与局部刺激相结合的造模方法,这样使动物模型与溃疡性结肠炎患者身体的病理变化更接近,使实验研究更靠近临床,更具有说服力。

兹就免疫法复制大鼠溃疡性结肠炎实验模型浅析如下:1免疫法造模的意义最新的研究表明溃疡性结肠炎的发生是患者遗传背景、免疫系统、肠粘膜、肠道菌群及环境等多方面交互作用的结果[1]。

除遗传及肠道菌群因素外,肠粘膜免疫系统在该病的发病机制中便占核心地位。

正常的非炎性肠粘膜的促炎细胞因子与抗炎细胞因子能保持完美的平衡,从而既能对抗肠道内病原体又不至因非致病性抗原产生过激的免疫学反应。

但是在溃疡性结肠炎患者的肠粘膜中,这种平衡则被打破而倾向于促炎反应之侧,最终导致疾病的发生。

因此现代医学实验研究中若采用免疫法复制溃疡性结肠炎病变模型,可最大程度上还原其病理本质,提高相关实验研究的科学价值。

2造膜方法[2] [3] [4]大鼠首次每只足趾内注射抗原(异体结肠粘膜)3mg,并于第10、17、24、31天分别于足趾、背部、腹股沟、腹腔内注射抗原6mg(末次注射不加福氏佐剂)。

然后取血,用凝集法测定抗体,确定抗体产生后,对模型大鼠用乌拉坦麻醉(0.4ml/100g),并进行下列操作(处理前禁食24小时)。

溃结确诊金标准

溃结确诊金标准

溃结确诊金标准
溃疡性结肠炎的确诊金标准如下:
1. 临床表现:患者会出现持续数周以上的腹泻、腹痛、里急后重、便血等症状。

2. 内镜检查和组织学检查:结肠镜检查显示结肠黏膜有红肿、糜烂、溃疡、出血等改变,且范围连续。

组织学检查可见黏膜上皮破坏、白细胞浸润、肉芽组织形成等病理改变。

3. 影像学检查:结肠造影或CT、MRI等检查显示结肠壁增厚、粘膜糜烂、溃疡、狭窄等改变。

4. 排除其他疾病:需排除感染性肠炎等疾病。

以上信息仅供参考,如果您有任何疑虑或不适,建议及时就医,寻求专业医生的帮助。

溃疡性结肠炎评分标准

溃疡性结肠炎评分标准

溃疡性结肠炎评分标准溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种慢性非特异性炎症性肠病,主要累及结肠黏膜。

其主要临床表现为腹泻、腹痛、里急后重、便血等症状,严重影响患者的生活质量。

评估溃疡性结肠炎的严重程度对于制定治疗方案、监测疾病进展以及评估治疗效果至关重要。

因此,制定一套科学、准确的评分标准对于临床实践具有重要意义。

1. 临床评分标准。

(1)Mayo评分。

Mayo评分是评估溃疡性结肠炎严重程度的常用方法,包括4个方面,粪便频率、便血程度、粘液血块评分和结肠镜检查评分。

每个方面分为0-3分,总分0-12分。

得分越高,表示疾病活动越严重。

(2)Rachmilewitz评分。

Rachmilewitz评分是另一种常用的评分方法,主要包括临床症状评分和结肠镜检查评分。

临床症状评分包括腹泻次数、里急后重、便血程度等,结肠镜检查评分主要评估黏膜炎症程度。

总分0-12分,得分越高,表示疾病活动越明显。

2. 评分标准的应用。

评分标准的应用有助于临床医生对患者的病情进行客观评估,指导治疗方案的制定和调整。

通过评分标准,可以及时发现疾病的活动性变化,及时调整治疗方案,提高治疗效果。

此外,评分标准也有助于研究者进行临床试验的设计和结果评价,推动新药物的研发和临床应用。

3. 评分标准的局限性。

尽管评分标准在临床实践中具有重要意义,但也存在一定的局限性。

首先,评分标准仅反映了疾病的临床表现和结肠镜检查结果,而未考虑患者的生活质量和心理状态。

其次,不同的评分标准在评价疾病活动性时存在一定的主观性和不一致性,需要进一步完善和统一。

此外,评分标准也未考虑到个体患者的差异性,需要结合临床实际进行综合评估。

4. 结语。

溃疡性结肠炎评分标准对于指导临床治疗、监测疾病进展和评估治疗效果具有重要意义。

目前常用的Mayo评分和Rachmilewitz评分在临床实践中得到了广泛应用,但也存在一定的局限性。

未来,需要进一步完善和统一评分标准,结合患者的生活质量和心理状态进行全面评估,为溃疡性结肠炎患者提供更加个性化、精准的治疗方案。

消化系统疾病动物模型

消化系统疾病动物模型

消化系统疾病动物模型(一)胃肠疾病动物模型1、急性胃炎动物模型(1)酸制剂诱发急性胃炎模型:Wistar大鼠,雄性,300g,大鼠禁食24h,在清醒状态下,用下述试剂或物质灌胃:①水杨酸制剂(如20mmol/L阿司匹林或水杨酸溶液)按100mg/kg体重灌胃;②2ml10mmol/L的醋酸或2ml不同浓度的盐酸(1、10、100mmol/L);③2ml同种动物胆汁或2mmol/L的牛磺胆酸;④2ml15%的乙醇。

4h 后处死动物,剖检可见胃内发生急性弥漫性炎症改变。

胃粘膜表面有浅表糜烂、出血,粘膜层内见中性粒细胞浸润。

(2)胆汁反流性胃炎模型:碱性肠液倒流入胃,刺激胃粘膜可引起炎症,即胆汁反流性胃炎。

常见于原发性或继发性幽门功能紊乱或胃切除手术后。

本法取上部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种大鼠胃内,使之对胃粘膜产生持续刺激,形成胃炎。

动物选取雄性Wistar大鼠,体重180~220g,制备上部小肠液,向胃内注入小肠液,2 ml/只(正常对照组注入2 ml生理盐水)。

缝合腹壁,腹腔注射阿托品5 mg/kg体重,以抑制胃液分泌,利于胃粘膜损伤模型的形成。

处死大鼠,开腹,结扎贲门,取出胃,沿胃大弯剪开。

用滤纸吸干表面水分,立即称量胃重,以胃湿重/体重之比(胃系数)表示胃水肿程度。

肉眼观察并计数整个胃粘膜出血点数,作为损伤指数。

模型组动物胃系数和损伤指数明显增加,肉眼观察模型组胃粘膜充血、水肿,皱襞减少,颜色暗红,并有大量散在出血点。

2、慢性胃炎动物模型(1)大鼠慢性萎缩性胃炎模型酗酒、用药不当、饮食习惯不良、幽门螺杆菌感染、自身免疫等是此病的主要病因。

组织病理学是评价造模成功的最主要指标,主要观察和测量胃粘膜厚度、粘膜肌层厚度、腺体数量、壁细胞数量、固有层炎细胞浸润程度和肠化生发生率等。

综合法一:胆汁(去氧胆酸钠)+热水+主动免疫综合法二:去氧胆酸钠+热糊+主动免疫综合法三:去氧胆酸钠+酒精+氨水+吲哚美锌3、动物胃粘膜肠上皮化生模型(1)X线胃局部照射诱发胃粘膜肠化生模型:选用5~8周龄的Wistar 或JCL/SD大鼠。

炎症模型的研究进展

炎症模型的研究进展

炎症模型的研究进展【摘要】炎症是临床疾病当中最为常见的病理过程,具有血管系统的活体组织对各种损伤所发生的以防御反应,即表现为红、肿、热、痛。

可发生于任何组织和任何部位。

但随着社会的发展,有很多新药物也被应用在炎症反应中,可如今的抗炎药物在炎症反应中有着很多不稳定的因素,而导致一些副作用。

因此,寻找安全有效的抗炎药物也仍是需解决的问题,如何选择合适的动物模型来初步评价抗炎药物的效果及其作用机制也成为共同关注的问题。

根据炎症发病的原因可分为感染性炎症、无菌性炎症 (非特异性炎症 ) 及变态反应性炎症。

感染性炎症是用病毒、细菌或细菌产物造成的炎症; 无菌性炎症是用某种致炎因子于动物体内或体外引起炎症或其某个阶段的细胞组织反应; 变态反应性炎症是多种变态反应的最终表现[1]。

因此, 根据炎症的发病制作的不同,动物模型也大体分为以下几种。

【关键词】模型探讨 ;炎症模型 ;致炎药物1.非特异性炎症模型非特异性炎症反应是以局部血管扩张、毛细血管通透性增加为特征的急性期阶段; 以血小板黏附、白细胞和巨噬细胞浸润为特征的亚急性阶段; 以组织增生、纤维化和肉芽屏障形成为特征的慢性增殖期[1]。

根据模拟炎症不同时期的病理表现来制作动物炎症模型。

1.1毛细血管通透性增高动物模型:属早期急性炎症时期,诱导毛细血管通透性升高,会使血浆蛋白从毛细血管壁渗出,引起组织水肿。

根据渗出部位的不同还可有皮肤毛细血管通透性增高和腹腔毛细血管通透性增高。

实验当中致炎物有二甲苯、冰醋酸、乙酸、组胺等。

王宇翎等[2]在白花蛇舌草总黄酮抗炎及抗菌作用实验中,用100%二甲苯0.03ml诱导的小鼠耳肿胀和0.6%醋酸0.2ml/只造模小鼠模型成功。

高雨嫣等[3]在六灵解毒丸对急性咽炎的治疗实验中用100%二甲苯40μL所致小鼠耳肿胀和0.6%冰乙酸0.2ml/只造模、所致的小鼠腹腔毛细血管通透性显著升高。

刘晋华等[4]在鼻炎口服液抗炎作用的实验中用新鲜配制的0.01ml/L磷酸组胺溶液每侧50μl滴鼻,成功诱发大鼠毛细血管通透性增高。

常用溃疡性结肠炎动物模型的及比较

常用溃疡性结肠炎动物模型的及比较

介质的分泌所产生的综合效应。
或脓血便及精神萎糜,活动减少,毛发色泽暗淡等全身改变。
UC 动物模型的建立对研究 UC 病因、病变发展规律、诊断、治 Allgayer 等[3]提出溃疡性结肠炎模型的发作、缓解期的大致分界点为
疗以及新药研发等方面具有重要意义。目前国内外学者对 UC 动物 3 周左右。该模型有操作简便、重复性好、经济实用、造模时间短等
模型的建立进行了较为深入的研究,包括化学物诱导、免疫-化学物 特点,而且与人类 IBD 类似,比较适合于对防治药物的筛选和研究。
Immunization and chemistry model are good at the research of immunization and chronic period. The operations of ACOH model and TNBS model are
sasy, and DNCB model and Immunization and chemistry model need more longer cycle.
性炎症反应链造成了组织损伤,可概括为两个阶段:第一阶段为肠 后,在直肠 6~8cm 处注入含三硝基苯磺酸(25~150mg·kg-1)的 25%
道黏膜的原发性损害,第二阶段为炎症反应扩大。可以认为 UC 的 乙醇溶液,倒置 30s。
炎症和组织损伤是由免疫反应的扩大、各种细胞的活化和多种炎性
造模后引起慢性炎症性肠疾病(IBD)。造模后 1~3 天出现稀便
2 二硝基氯苯法
累及直肠和乙状结肠,也可遍及整个结肠,主要侵犯大肠黏膜与黏
二硝基氯苯是一种有毒的有机化学试剂,与细胞组织蛋白结合
膜下层,呈阶段性和弥漫性分布。以腹泻、腹痛及黏液脓血便等消化 时起半抗原作用,能诱发免疫反应。方法以大鼠为例,大鼠颈背部剃

MAWBP在急性溃疡性结肠炎模型中的作用

MAWBP在急性溃疡性结肠炎模型中的作用

MAWBP在急性溃疡性结肠炎模型中的作用陈声波;刘逸;智发朝;赵芯梅【摘要】目的:探讨MAWBP在溃疡性结肠炎急性模型中的作用。

方法40只BALB/c小鼠随机分成4组,每组10只,分别为正常对照组、Mock组、MAWBP组和MAWD组;Mock、MAWBP和MAWD组饮用4%DSS制作急性溃疡性结肠炎模型,正常对照组饮用高压过的饮用水。

造模第1天,正常对照组、Mock组、MAWBP组和MAWD组分别注射慢病毒稀释液、慢病毒空载体、含MAWBP基因慢病毒液、含MAWD基因慢病毒液。

造模期间进行疾病活动指数评分;造模结束检测各组小鼠肠道MAWBP蛋白和mRNA表达水平,病理切片评估肠道炎症程度。

结果与正常小鼠相比,急性溃疡性结肠炎模型小鼠MAWBP蛋白表达水平明显降低;与Mock组相比,MAWBP组MAWBP蛋白和mRNA表达水平明显升高;MAWBP组小鼠疾病活动指数评分和低于Mock组;病理切片显示MAWBP组肠道炎症水平低于Mock组。

结论 MAWBP对溃疡性结肠炎急性模型具有保护作用,可通过上调MAWBP表达改善溃疡性结肠炎病情。

%Object To study the effect of MAWBP on acute colitis model in mice. Methods Forty BALB/c mice were assigned randomly into four groups (Normal Control, Mock, MAWBP and MAWD group) with 10 mice per group. Mock, MAWBP and MAWD group drank 4%DSS solution while Normal Control group received autoclaved drinking water. On the first day of the model, Normal Control, Mock, MAWBP and MAWD group received lentivirus diluents, lentivirus vector, lentivirus with MAWBP gene and lentivirus with MAWD gene respectively. Meanwhile,Disease Activity Index was evaluated. At the end of the model, the pro-tein and mRNAexpression of MAWBP were detected and histological colitis severity were determined in colonic tissue. Results Mice with acute colitis had a lower protein expression of MAWBP than healthy mice. Mice in MAWBP group had a higher protein and mRNA expression of MAWBP than mice in Mock group. Mice in MAWBP group had a lower score of Disease Activity Index than mice in Mock group. Mice in MAWBP group developed a less severe inflammation than mice in Mock group. Conclusion MAWBP has a protective effect on acute colitis model in mice and up-regulation of MAWBP alleviates ulcerative colitis.【期刊名称】《现代消化及介入诊疗》【年(卷),期】2016(021)003【总页数】4页(P375-378)【关键词】MAWBP;溃疡性结肠炎;动物模型【作者】陈声波;刘逸;智发朝;赵芯梅【作者单位】510515 广东省胃肠疾病重点实验室,南方医科大学南方医院消化内科;510515 广东省胃肠疾病重点实验室,南方医科大学南方医院消化内科;510515 广东省胃肠疾病重点实验室,南方医科大学南方医院消化内科;510515 广东省胃肠疾病重点实验室,南方医科大学南方医院消化内科【正文语种】中文【Abstract】Object To study the effect of MAWBP on acute colitis model in mice.Methods Forty BALB/c mice were assigned randomly into four groups(Normal Control,Mock,MAWBP and MAWD group)with 10 mice per group.Mock,MAWBP and MAWD group drank 4%DSS solution while Normal Control group received autoclaved drinking water.On the first day of the model,Normal Control,Mock,MAWBP and MAWD group received lentivirus diluents,lentivirus vector,lentivirus with MAWBP gene and lentivirus with MAWD gene respectively.Meanwhile,Disease Activity Index was evaluated.At the end of the model,the protein and mRNA expression of MAWBP were detected and histological colitis severity were determined in colonic tissue.Results Mice with acute colitis had a lower protein expression of MAWBP than healthy mice. Mice in MAWBP group had a higher protein and mRNA expression of MAWBP than mice in Mock group. Mice in MAWBP group had a lower score of Disease Activity Index than mice in Mock group.Mice in MAWBP group developed a less severe inflammation than mice in Mock group.Conclusion MAWBP has a protective effect on acute colitis model in mice and up-regulation of MAWBP alleviates ulcerative colitis.【Key word】MAWBP;Ulcerative colitis;Animal model炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一类原因不明,以肠道慢性非特异性炎症为特征的肠道疾病,主要包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn′s disease,CD)两个类型。

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溃疡性结肠炎模型选择及评价指标
1,实验候选模型:葡聚糖硫酸钠(DSS)致动物溃疡性结肠炎模型。

DSS UC模型的特点: ①采用自由饮用或者定量灌胃DSS溶液的方法建立模型,实验条件和操作方法简单,损伤易复制,便于掌握和推广;②可通过改变DSS溶液的浓度和作用时间建立急性、慢性和急慢性交替性模型,模型持续时间长,体现了急性向慢性转化的动态过程,解决了UC的慢性化和维持问题,这是以前许多模型无法比拟的;③已证实DSS模型是由1型/2型辅助性T细胞( Th1/ Th2) 型细胞反应介导的,其发病与TNF-α、IFN-γ和IL-10等有关,这与人类UC 的免疫学反应很相似;④不同种系动物对DSS的敏感性不同,为揭示遗传因素与UC 的关系提供了新的依据;⑤DSS UC模型的组织学特点和临床表现与人类UC极为相似,如病变从肛门侧自下而上连续性发展,急性期可见黏膜充血水肿、散在溃疡和中性粒细胞浸润,慢性期可见腺体萎缩、结肠缩短和巨噬细胞浸润,临床表现主要为腹泻、体重减轻、血便等。

2,实验候选动物:C3H/HeJ Bir小鼠或者BALB/c小鼠
动物种系: DSS UC模型适用于多种动物,包括各种大鼠、小鼠、仓鼠和豚鼠等,但各种系对DSS的易感性和病变部位存在差异,其中大鼠、小鼠的病变主要以直肠和左半结肠为主,而仓鼠、豚鼠则以盲肠和右半结肠较为明显。

Mahler 等将3.5% DSS(分子量为Mr 36000~46000) 溶于饮用水,予9只不同种系的小鼠饮用以诱导UC,结果临床和组织病理学表现各不相同,C3H/HeJ Bir小鼠对DSS 最敏感,病变主要位于远端结肠和回盲部;C57BL/6J小鼠的中段和远端结肠易发生炎症;大部分NON/LtJ小鼠对DSS不敏感;BALB/c小鼠对DSS 敏感,病变主要位于结肠远端。

溃疡性结肠炎是一种局限于结肠粘膜及粘膜下层的炎症过程。

病变多位于乙状结肠和直肠,C3H/HeJ Bir小鼠和BALB/c小鼠对DSS致溃疡性结肠炎敏感,且病灶部位与人类相似(乙状结肠和直肠),因此可作为实验研究理想动物。

3,D SS分子量及浓度:Mr=40000,浓度=3%-5%
1%~10%DSS浓度可用于UC 模型。

DSS诱导肠黏膜急性损伤的程度呈浓度依赖性,已在BALB/c小鼠中得到了证实。

Granger等研究了DSS摄取量的计算公式,DSS用量(mg/g) =总饮水量(ml)×[DSS (mg)/100 ml]/小鼠初始体重( g),指出诱导可靠和重复性好的UC模型[以组织髓过氧化物酶(MPO) 的活性和组织病理变化为标准),DSS总摄取量的最低阈值为30mg/g体重,只要DSS的负荷量达到30mg/g这一关键剂量,其总摄入量的差异不会影响炎症反应的严重程度。

DSS 浓度是制摸成功的最关键因素,可影响造模时间和临床表现。

据报道,小鼠饮用含1% DSS溶液90天后,仅出现大便隐血试验阳性。

Egger等应用不同浓度的DSS( 0%、2.5%、5%、7.5%) 溶液喂养BALB/c小鼠7天,结果发现结肠腺体损伤评分随DSS浓度的提高呈线形增加,但与DSS总摄取量无相关性,由此推断DSS诱导黏膜损伤的程度依赖于DSS 浓度,而非总摄取量。

但DSS浓度过高,动物死亡率也会升高。

予无胸腺小鼠饮用含5% DSS溶液,与饮用1.5%、2.5% DSS 溶液( 各浓度的分子量相同)组比较,其致死率明显升高。

目前,实验中中最常采用3%或5%的DSS溶液进行造模。

4.评价指标
4.1 疾病活动度用大便情况作为疾病活动度(DAI)评价,评价细则如下见表-1.
表-1 DAI评分细则
评分大便性状隐血或血便
0正常阴性
1软便阴性
2软便隐血阳性
3腹泻隐血阳性
4腹泻血便
4.2 结肠病灶病理组织显微镜检查并评分(CMDI),评分标准如下:
溃疡:分三级,0—无,1—小溃疡(小于3mm),2—大溃疡(大于3mm)
炎症:0—无,1—轻度,2—重度
肉芽组织:0—无,1—有
病变深度:0—无,1—粘膜下层,2—肌层,3—浆膜层
纤维化:0—无,1—轻度,2—重度
4.3 对免疫器官的影响:1)免疫器官脏器系数①脾脏,②胸腺;2)
4.4 免疫指标1)抗人中性粒细胞胞质抗体(P-ANCA):蛋白水解酶(PR3)、组织蛋白酶G(CG)。

2)抗结肠抗体(ACA),
3)免疫球蛋白IgA和IgG,局部免疫反应已证实结肠粘膜产生大量IgA和IgG,焦君良等以人体结肠粘膜为抗原,用之攻击大鼠后,大鼠结肠粘膜出现典型溃疡,病变部位大量淋巴、单核和嗜中性细胞浸润,全部造型动物血清抗大肠抗体阳性,免疫球蛋白IgA 和IgG明显增高,淋巴细胞转化率显著降低。

以上结果均支持溃疡性结肠炎的自身免疫发病学说。

4)细胞免疫指标:CD4、CD8、T淋巴细胞和可溶性白细胞介素2受体(SIL-2R)作为细胞免疫的主要指标被认为与溃疡性结肠炎的严重程度有关
5)炎症细胞因子:TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-4、IL-10
4.5 其他生化指标:MPO,SOD,MDA。

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