6 第6章 一般毒性作用及其试验与评价方法
合集下载
[医学]第六章 化学毒物的一般毒性作用-亚慢性和慢性毒性
![[医学]第六章 化学毒物的一般毒性作用-亚慢性和慢性毒性](https://img.taocdn.com/s3/m/dc7b91635727a5e9856a6191.png)
二、蓄积作用的研究方法
目的：通过蓄积试验求出蓄积系数K，了解化学 物蓄积毒性的强弱，并作为慢性毒性试验及其 它有关毒性试验的剂量选择提供参考。 蓄积系数法 生物半衰期法
（一）蓄积系数法
蓄积系数(accumulation coefficient)：指多次染毒使半数 动物出现某种效应的总量与一次染毒的半数效量之比值。 一般采用大鼠或小鼠，以死亡作为效应指标。 K=ED50(n)/ED50(1) 或 K=LD50(n)/LD50(1) ED50(n):以慢性方式多次接触受试物时产生预期效应的 累积剂量之和。 ED50(1):一次接触该物质产生相同效应的一次剂量。
＊1. 实验动物的选择 ＊2. 剂量设计与分组 ＊3. 染毒途径与时限 ＊4. 观察指标
五、长期毒性试验的注意事项
重视实验项目管理：选择经验丰富的专业人员对项目的设计和实施 进行管理，保证仪器设备状态良好，工作人员专业培训。
实验室环境的要求：注意动物饲养和试验环境的规范化，符合 GLP 。
蓄积系数的评价
蓄积系数（Ｋ） 蓄积作用分级
<1
高度蓄积
1-
明显蓄积
3-
中等蓄积
5-
轻度蓄积
1. 固定剂量法
方法：
（1）急性毒性实验
LD50(1)
（2）1/20-1/5LD50 每日染毒
LD50(n)
（ 50%动物死亡时累计染毒的总量）
（3）计算K值：K=LD50(n)/LD50(1)
若累计染毒量已达到5个LD50，动物仍未死亡或死 亡未达到半数，可终止实验，其Ｋ值按 ＞５作为结果。
蓄积库（depot）：化学物蓄积的组织器官部位。常见 的蓄积库包括： 血浆蛋白 脂肪组织 肝脏、肾脏 骨骼
一般毒性作用
兔眼角膜上皮细胞SIRC模型，观察细胞增殖、膜 完整性等（中性红不能沉积在死细胞内，用酶标仪测定）
5.生物膜替代法等方法
受试物+立体人类皮肤+MTT，用酶标仪测定提取 液中的MTT吸光度（MTT不能沉积在死细胞内）
二、皮肤刺激试验
皮肤刺激性（dermal irritation）指皮肤接触或涂敷 受试物后，局部产生的可逆性炎性变化。
观察指标：结膜(发红、球结膜水肿和分泌物)，角膜(混 浊程度和范围)，虹膜(充血、肿胀和角膜周围充血)。
实验期限：一般为7天，必要时延长至21天(观察期能足 已评价刺激是否存在可逆性)。
注意事项：
如72h眼刺激反应仍不消退时，需另取4只白兔观察洗眼效果，即滴 入受试物后分别在4s和30s时，用生理盐水洗眼5min，观察洗眼后的眼 睛反应。（洗眼效果试验）
死亡观察为48小时，存活动物观察14天。
特点：
① 节省动物（一般6-10只动物或以上）； ② 适用于毒性反应快速的化学药物。
序贯法实验
计算公式：
LD50
1 n
xf
n
s[
x2f (
xf)2]1/2
n2(n1)
式中： n-使用动物总数； x-每个剂量组的剂量； f-每个剂量组动物数。
应用实例
（三）急性毒作用观察
某化学药物急性毒性试验剂量设置
组别
剂量对数
剂量（mg/kg）
1
2
2.821
662.2
5
3.181
1517.1
6
注：剂量对数组距，剂量组间的等比级数
LD50(或LC50)计算 1.改良寇氏 (Karber)法 –点斜 法
要求：
① 5～6个剂量组，每组动物数相等； ② 死亡率呈正态分布； ③ 最低剂量组死亡率＜20%；
5.生物膜替代法等方法
受试物+立体人类皮肤+MTT，用酶标仪测定提取 液中的MTT吸光度（MTT不能沉积在死细胞内）
二、皮肤刺激试验
皮肤刺激性（dermal irritation）指皮肤接触或涂敷 受试物后，局部产生的可逆性炎性变化。
观察指标：结膜(发红、球结膜水肿和分泌物)，角膜(混 浊程度和范围)，虹膜(充血、肿胀和角膜周围充血)。
实验期限：一般为7天，必要时延长至21天(观察期能足 已评价刺激是否存在可逆性)。
注意事项：
如72h眼刺激反应仍不消退时，需另取4只白兔观察洗眼效果，即滴 入受试物后分别在4s和30s时，用生理盐水洗眼5min，观察洗眼后的眼 睛反应。（洗眼效果试验）
死亡观察为48小时，存活动物观察14天。
特点：
① 节省动物（一般6-10只动物或以上）； ② 适用于毒性反应快速的化学药物。
序贯法实验
计算公式：
LD50
1 n
xf
n
s[
x2f (
xf)2]1/2
n2(n1)
式中： n-使用动物总数； x-每个剂量组的剂量； f-每个剂量组动物数。
应用实例
（三）急性毒作用观察
某化学药物急性毒性试验剂量设置
组别
剂量对数
剂量（mg/kg）
1
2
2.821
662.2
5
3.181
1517.1
6
注：剂量对数组距，剂量组间的等比级数
LD50(或LC50)计算 1.改良寇氏 (Karber)法 –点斜 法
要求：
① 5～6个剂量组，每组动物数相等； ② 死亡率呈正态分布； ③ 最低剂量组死亡率＜20%；
第6章 一般毒性(1)
<20
<20
高 毒 5∼
20∼
20∼
中等毒 5∼500 200∼2000
200∼2000
低 毒 >500
>2000
>2000
工业毒物急性毒性分级
毒性分级
剧毒 高毒 中等毒 低毒 微毒
小鼠一次经口 LD50(mg/kg) <10 11∼100 101∼1000 1001∼10000 >10000
小鼠吸入2h 兔经皮
二、急性毒性试验方法
（一）实验动物的选择 （二）染毒途径和方式 （三）剂量选择 （四）毒性反应的观察与检查
（一）实验动物的选择
1. 物种与品系选择
（1） 敏感动物 （2） 尽可能选择对化学物的反应和代谢特点与人 或靶动物相同或相近的动物。 （3） 多种动物，至少两种，啮齿与非啮齿。
实验动物的选择
4
4. 经注射染毒
常用实验动物给予受试物的体积(ml)
注射方式 小鼠 大鼠 豚鼠 兔
腹腔 肌肉 静脉 皮下
0.2∼1.0 0.1∼0.2 0.2∼0.5 0.1∼0.5
1∼3 2∼5 0.2∼0.5 0.2∼0.5
1∼2 1∼5 0.5∼1 0.5∼2
5∼10 0.5∼1 3∼10 1∼3
狗
5∼15 2∼5 5∼15 3∼10
禁食
经口染毒时，染毒前必须禁食，但饮水不限。大 动物一般在每日上午喂食前给与受试化学物。大鼠和 小鼠主要在夜间采食，应隔夜禁食，或停食6~8h。 染毒后2~4h复食。 禁食时间不宜过长，因动物饥饿也可影响试验结果。
实验动物的喂养环境
温度、湿度要适合动物试验要求，光照应12小时 日光，12小时黑暗。 环境、饮水、饲料清洁、保持室内卫生
毒理学 第六章-一般毒性作用(人卫)
11
6. 生理与健康状况
健康、未产未孕 给药前检疫观察 大、小鼠、兔、豚鼠1周，犬、猴2~3周 ①适应新环境，减少环境和生理条件变化可 能对试验结果的影响 ②筛检健康状况不符合试验要求的动物
12
（二） 染毒方式
最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。 ❖ 工业化学物：经皮肤和呼吸道 ❖ 农用化学物：经口、经皮肤和呼吸道 ❖ 药品：经口和注射 ❖ 食品：经口 ❖ 环境污染物：经口、皮肤和呼吸道
37
3.急性毒性分级法 （acute toxic class method）
选用剂量(25、200、2 000 mg/kg)之一，单性别3只动物进 行试验，确定动物的生死后再进行下一步试验。 有3种可能的结局：
a. 不需进一步试验即可分级， b.下一阶段以相同剂量再做另一性别试验， c.下一阶段以较高或较低的剂量水平进行。 根据在某一染毒剂量下，死亡发生的数量来判定大致的 LD50值范围，直接进行危害评估和毒性分级。
有关急性毒性试验设计及方法
曲线拟合：概率 单位法，即Bliss 法
插值法：寇氏法
中，不正确的是
A．采用寇氏法和 Bliss 法一般 设5～8组 B．寇氏法和 Bliss 法一般以
一般设5～8个剂量 组；霍恩法固定设4 个剂量组。
i=(LD100 –LD0 )/(n-1)公式计算 组距 C．使用霍恩氏法固定设4个剂 量组
种属和品系
性别、年龄、体重
微生物学等级 饲养环境
动物数目 实验前处理
26
实验动物
种属和品系 首选大鼠 还需选择一种非 啮齿动物：狗
性别、年龄、体重
雌雄各半 刚成年、健康、未曾 交配和受孕的动物
大鼠180～240g 小鼠18～25g 家兔2～2.5kg
毒理学基础 第六章 化学物的一般毒性作用
〔四〕慢性实验设计要点
1.实验动物 2.染毒途径与期限
3.剂量分组: 高剂量组：1/5-1/2 LOAEL〔亚慢〕 中剂量组：1/50-1/10LOAEL 低剂量组：1/100 LOAEL或：1/1000-1/10LD50 阴性对照：
4.观察指标 同亚慢，但精，为亚慢显现靶的指标。
〔五〕结果评价
染毒使半数动物出现相同效应〔或死亡〕的剂量[ED50(1)]
的比值，K 即= 蓄ED5积0(n)系数。
ED50(l)
LD50(n
K
=
)
LD50(l
)
1)固定剂量法 2)剂量递增法
〔2〕生物半减期法
用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用 化学物的蓄积极限：
a.半减期的测定 b.计算蓄积极限
第六章 化学物的一般毒性作用
急性毒性 一般毒性亚慢性毒性
慢性毒性
急性毒性试验 亚慢性毒性试验 慢性毒性试验
第一节 急性毒性作用
一、急性毒性的概念
➢ 急性毒性(acute toxicity) ：是指机体〔实验动物或人〕 一次或24小时内屡次接触外源化学物后在短期内所引 起的毒性效应。
➢ 包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应 ➢ 说明： ➢ 1.接触的次数：一次/屡次 ➢ 2.毒效应出现时间： ➢ 3.中毒效应的强度：
〔二〕染毒途径
1.经消化道染毒 2.经呼吸道染毒 3.经皮肤染毒 4.经注射染毒
〔三〕剂量选择及分组
1.剂量范围确实定： 动物死亡率0％－100％ 〔或10％-90%〕的致死剂量范围
2.分组及剂量确实定： 窛氏法：6－8组为宜，各组剂量呈等比级数 霍恩氏法：4组，各组剂量呈等比级数
〔四〕毒作用观察
第六章 化学毒物的一般毒性作用
实验动物的预检
给药前检疫观察 大、小鼠、兔、豚鼠1周，犬猴2~3周 适应新环境，减少环境和生理条件变
化可能对试验结果的影响 筛检健康状况不符合试验要求的动物
实验动物的给药前禁食处理
经口途径染毒，实验动物胃肠道内食物 存留量对化学毒物的毒性可产生较明显 的干扰
大、小鼠隔夜禁食，染毒2h后提供饲料 经口多次染毒可不禁食
实验动物 染毒途径 染毒剂量 观察周期 观察指标的选择、计算方法和评价
（一）实验动物的选择和要求
主要原则
急性毒性反应与人近似 易于饲养、操作方便 繁殖力较强，数量较大 价格较低，易于获得
实验动物的物种和品系
啮齿类（rodent species） 小鼠：昆明种、NIH、ICR 大鼠：Sprague-Dawley(SD)、Wistar
根据接触毒物的时间长短， 一般毒性的实验方法分为：
❖ 急性毒性 ❖ 短期重复剂量 ❖ 亚慢性毒性 ❖ 慢性毒性
第一节 急性毒性试验
In 1984, 5,000 people died and 30,000 were permanently disabled due to exposure to methyl isocyanate （ 异 氰 酸 甲 酯 ， MIC ） from an industrial accident in India
(三) 染毒方法
模拟实际接触的途径和方式 有利于不同化学物之间结果的比较 受试物的性质和用途 受试物毒性评价程序的要求
染毒途径
消化道、呼吸道、皮肤、注射
工业毒物：经呼吸道、皮肤 农用化学物：经口、皮肤、呼吸道 药品：经口、注射、皮肤 食品：经口 环境污染物：经口、呼吸道、皮肤
化学物的一般毒性及其评价
几种动物不同注射染毒途径注射量范围(ml)
注射途径 静脉
肌内 皮下 腹腔
小鼠 0.2-0.5
0.1-0.2 0.1-0.5 0.2-1.0
大鼠 1.0-2.0
0.2-0.5 0.5-1.0 1.0-3.0
豚鼠 1.0-5.0
0.2-0.5 0.5-1.0 2.0-5.0
兔 3.0-10.0
0.5-1.0 1.0-3.0 5.0-10.0
1. 经口染毒
经口染毒可分为灌胃、喂饲、吞咽胶囊 等方式 .一般来说新物质均先进行经口染毒 途径的急性毒性试验,求出LD50值,通常用该 LD50值来比较不同化学物急性毒性大小
2. 经呼吸道染毒
气管内注入：在动物麻醉情况下，将已消毒 灭菌的受试物（粉尘混悬液或液体） 注入气管，使之分布于左右肺内。 动式吸入 吸入 静式吸入
(六)观察时间和周期
• 急性毒性的观察周期一般为１４天，LD50计 算时以观察周期内各组动物的总死亡数为依 据．不同化学物其中毒体征出现的时间和特 点各有不同，而且引起动物死亡的时间也存 在很大的个体差别．如氰化物多数动物在染 毒后几分钟至几个小时内死亡；羰基镍染毒 早期出现上呼吸道体征，很快就缓解，但２ －３天后甚至更迟些又出现明显的中毒体征， 表现为严重的肺水肿，呼吸困难，然后死 亡．
静式吸入染毒
将实验动物置于一个具有固定体积的容器内(染毒 柜)，定量加入易挥发的液态或气态受试物，在容 器内形成试验设计所需要的空气浓度，在一定时 间内，使动物连续吸入并观察毒性反应。 优点：该染毒方式设备简单、操作方便、消耗受试 物较少。 缺点：实验期间，实验动物得不到氧气补充；且随 实验的进行，染毒柜内受试物的浓度会逐渐降低 为保障实验顺利进行，应注意染毒柜容积、放置实 验动物的种类与数量以及放置时间之间的关系。 小鼠最低需气量：3.45L/h, 大鼠30.5L/h
6 第6章 一般毒性作用及其试验与评价方法
2、剂量设计与分组
• 根据受试物或其近似物的物理、化学性质选择与本实 验相同动物物种或品系，相同染毒途径的LD50值作为 参考值，选择剂量系列。 • 一般分四组：高中低三个剂量组及一个阴性对照组
3、确定实验动物染毒方法： 灌胃
4、观察周期及观察内容
观察周期：一般为14天或24h，但计算出LD50时应注明
• 品种、品系的选择 • 健康状况：健康成年动物
小鼠、大鼠测半数致死量，狗观察毒性反应。
• 年龄：大鼠180-240g，小鼠18-25g（35-50日 龄），家兔2-2.5kg，豚鼠200-250g，狗10-15kg。 • 性别：雌、雄各半，雌性实验动物要求是未 经交配和受孕的。 • 各剂量组动物数： 小动物数量为每组 10 只，大动物也应每组 6 只。
‘一次接触’
(P122)
经口接触和各种方式的注射接触，“一次接触”，是指 在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内；
而经呼吸道吸入与经皮肤接触，“一次接触”是指在一
个特定的期间内实验动物持续地接触受试化合物的过程; 此外，当化学物毒性较低时，需要给予动物较大剂量时， 可在 24 小时内分多次给予，这时的急性接触即为“多 次”。
免费茶水的重金属严重超标
一份外国学者的研究指出， 中国13个品牌的香烟重金属含量超标
第二节 蓄积毒性
一、基本概念 P138
当化学毒物连续、反复进入机体，而且进 入的速度（或总量）超过代谢转化与排出的速度 （或总量）时，物质就有可能在体内逐渐增加并 贮留的现象--蓄积作用（accumulation） 化学毒物容易蓄积的组织和器官——贮存库
急 以性 死毒 亡性 为的 终上 点限 参 数 急 非性 毒 作致 性 用死 的 为性 下 终急 限 点性 毒参 性数 ，
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
粘膜
其它
结膜或口腔中分泌物增多，充血、苍白、黄疸
直肠或脚爪部皮肤温度降低或升高；姿势异常，消瘦等
5、LD50的计算方法：
（1）改进寇氏法 P127
• 改进寇氏法：计算简便，结果可靠。
• 试验设计要求：组内动物数相等、组间剂量等比例 设计、死亡率正态分布、最低剂量组死亡率 <20% ， 最大剂量组死亡率>80% • 计算公式：logLD50=Xκ- i(Σp - 0.5)
‘一次接触’
(P122)
经口接触和各种方式的注射接触，“一次接触”，是指 在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内；
而经呼吸道吸入与经皮肤接触，“一次接触”是指在一
个特定的期间内实验动物持续地接触受试化合物的过程; 此外，当化学物毒性较低时，需要给予动物较大剂量时， 可在 24 小时内分多次给予，这时的急性接触即为“多 次”。
第一节
急性毒性作用及其评价
一、基本概念。（P122）
急性毒性（acute toxicity）是指机体(人或实验 动物)一次接触(或24小时内多次接触)受试物后， 在短期内所产生的效应及反应，包括一般行为、 外观改变及形态改变，甚至死亡效应。 观察时间：一般为7天，也可连续观察14～28天。
4日接触总剂量 （LD50）
累积接触总剂 量（LD50）
0.40
1.00
1.90
3.26
5.26
8.26
12.74
蓄积毒性试验的目的：
• 求出外源化学物的蓄积系数，了解蓄积毒性大小
• 为慢性毒性试验和其它有关毒性试验的剂量选择提 供参考依据 • 为制定有毒物质在食品中的卫生限量标准时，为安 全系数的选择提供参考 • 确定该受试物可否用于食品供人类长期食用
三、机体的耐受性
机体对化学物的耐受性：一些化学物在体内蓄积到 应该产生中毒反映的剂量时却没有出现中毒反应，必须 再加大剂量才能出现预期的中毒反应的现象。
机体对化学物的蓄积和耐受往往是同时存在的！
农药、兽药残留！
第三节 亚慢性毒性作用
一、基本概念 定义：亚慢性毒性是指实验动物连续多日接触 较大剂量的外源化学物所出现的中毒效应。
K =ED50(n) /ED50 (1) （以出现生物效应或特异性损伤为指标）
或K =LD50(n) /LD50 (1) （以死亡为指标） n―多次接触受试物时产生预期效应的蓄积剂量的总和 1―一次接触该物质产生相同效应的一次剂量
蓄积系数分级标准：
蓄积系数K K＜1 蓄积毒性分级 高度蓄积
1≤K＜3
Xκ--最高剂量组对数值 i -- 组距（相邻两组剂量对数值之差） Σp -- 死亡率总和
（2）霍恩法
优点：简单易行，使用动物少
缺点：可信范围大，不够精确
特点：
每组动物数是固定的，每组4只或5只
剂量是固定的，有两种系列：
…… 10，21.5，46.4 ，100，215，464，1000 ……
免费茶水的重金属严重超标
一份外国学者的研究指出， 中国13个品牌的香烟重金属含量超标
第二节
一、基本概念
蓄积毒性
P138
当化学毒物连续、反复进入机体，而且进 入的速度（或总量）超过代谢转化与排出的速度 （或总量）时，物质就有可能在体内逐渐增加并 贮留的现象--蓄积作用（accumulation） 化学毒物容易蓄积的组织和器官——贮存库
急性毒性试验的观察内容（P132） • 中毒出现的时间和症状 • 死亡时间及死亡数→计算LD50
• 剖检、生化及病理学检查
• 毒代动力学分析
啮齿类动物急性毒性试验主要的观察项目
器官系统 中枢神经系统 和躯体系统 血液循环系统 呼吸系统 胃肠系统 观察项目或中毒后的一般表现
行为：姿态改变、叫声异常。不安、活动增多或少动 动作：痉挛、震颤、运动失调、麻痹、惊厥、强制性动作 刺激反应：易兴奋，对外界刺激反应过敏或迟钝 肌肉张力：强直，迟缓
2、剂量设计与分组
• 根据受试物或其近似物的物理、化学性质选择与本实 验相同动物物种或品系，相同染毒途径的LD50值作为 参考值，选择剂量系列。 • 一般分四组：高中低三个剂量组及一个阴性对照组
3、确定实验动物染毒方法： 灌胃
4、观察周期及观察内容
观察周期：一般为14天或24h，但计算出LD50时应注明
…… 10，31.6，100，316，1000，3160，……
即每个剂量组之间的剂量差距只能是2.15倍或3.16倍
应用程序：
① 确定每组动物数，一般大小鼠5只，家兔4只 ② 确定剂量系列，常用的系列为： 1.00×10t(t=0、±1、±2) 2.15×10t 4.64×10t 10.0×10t
5、为在其它试验中发现的或未发现的毒作用提供新的信息，比较 不同动物物种毒效应的差异，为受试物毒作用机制研究和将研 究结果外推到人提供依据。
二、亚慢性毒性试验设计的要点
（一）试验动物的选择
1、物种品系：啮齿类、非啮齿类
2、性别：雌雄各半 3、年龄/体重：断乳不久的动物
如大鼠80～100g（21-23日龄），小鼠15g左右（18-21日龄）
二、急性毒性试验目的
1、测定和计算出急性毒性评价参数
• 1927 年 Trevan 引入了半数致死量的概念来评价急
性毒性，此后，该指标得到广泛应用，并成为急性 毒性的主要指标。
2、找出受试物的剂量-效应和剂量-反应关系
3、为毒作用机制研究提供线索。
急性毒性试验可以得到的毒性参数：
①绝对致死剂量或浓度(LD100或LCl00) ②半数致死剂量或浓度(LD50或LC50) ③最小致死剂量或浓度(MLD，LD01或MLC，LC01) ④最大耐受剂量或浓度(MTD，LD0或MTC，LC0) 或称为最大非致死剂量(MNLD)
• 急性毒性LD50大于人可能摄入量的10倍→该受 试物可进入下一阶段的试验
• 急性毒性LD50在人可能摄入量的10倍左右→重 复试验
•
LD50虽然是评价急性毒性的最重要指标，但仅凭LD50 进行急性毒性评价是不完善的。因为仅仅LD50一个指 标只能反映急性毒性的大小，并不能反映毒性的其他 特征。因此，在评价和报告化学物急性毒性时，除 LD50外，还应报告LD5095%可信限范围、急性毒作用 带等指标，并尽可能详尽描述中毒特征、症状表现、 出现时间、死亡前兆、毒性作用的发生、发展、恢复 经过，以及体重、剖检和病理学变化等。从而较全面 地对急性毒性做出评价。
物质蓄积（material accumulation）：
指机体少量反复多次接触毒物后，该毒物在
蓄积 作用
机体内逐渐积累。
功能蓄积（functional accumulation）：
指机体少量反复多次接触毒物后，每次引起
的轻微功能损害逐渐积累，当积累到一定程度时
出现毒性效应。
蓄积作用的毒理学意义：
3≤K＜5 K≥5
明显蓄积
中等蓄积 轻度蓄积
K =ED50(n) /ED50 (1) 或K =LD 50(n) /LD50 (1)
蓄积系数法常用的实验方案：
• 固定剂量法
• 剂量递增法 • 剂量固定的20天蓄积法
试 验 方 法
分
组
染毒时间
剂 量 （LD50）
染毒 终 止
观察期 25 ∼ 100天
4、动物数：大小鼠每组≥20只，犬猴每组≥6只； 5、环境要求：应使用SPF及以上等级动物；符合国家 实验动物标准的实验环境。
（二）染毒方式
一般采用经口、经呼吸道、经皮肤染毒
经口染毒多采用掺入饲料法
两个基本原则： –尽量模拟人类在环境中接触该化学物的 途径或方式； –应与预期进行慢性毒性试验的接触途径 相一致。
（三）剂量分组
至少设四组：3个剂量组和1个阴性对照组
高剂量组
• 以急性毒性试验的阈剂量或以LD50为参考 • 应能引起明显的毒性或少量动物死亡（<10%）
2 - 4组 固 定 （含对照组） 剂量法 雌雄各半 剂 量 递增法 实验组 对照组
每日一次 同一时间
同上 4天为一期 每日一次 同一时间 连续20天
1/20∼ 1/5
见表
染毒剂量累计达到 5个LD50剂量
实验组累积半数死 亡或21天结束
21天Leabharlann 随机分5组 20 天 （含对照组） 蓄积法 雌雄各半
对照 1/20 1/10 1/5 1/2
③ 预试验：如采用10，100，1000mg/kg的剂量
↓ ↓ ↓ 全部死亡 LD50可能在100-1000mg/kg 不见死亡
④ 正式试验：选择100，215，464，1000mg/kg（t=2）四个剂量组
观察并记录死亡数、死亡时间及中毒症状等。 如 死亡数为1，1，3，4 ⑤ 查表：根据动物死亡数查表（P366）求得LD50 LD50＝2.78×102＝278（125-619）mg/kg
四、急性毒性的分级与评价（P134）
急性毒性评价的最主要的依据就是LD50
急性毒性评价
• 剂量达10g/kg体重以上，仍不引起死亡→认为 该受试物的急性毒性试验是安全的
• 急性毒性LD50或7天在喂养试验的最小有作用剂 量小于人的可能摄入量的10倍→表面该受试物 急性毒性较大，应予以放弃，不再继续试验
第六章
一般毒性作用及其
试验与评价方法
一般毒性作用
（急性毒性、亚慢性毒性、慢性毒性）
毒性作用
特殊毒性作用
（ 致突变作用、致癌作用、 致畸作用、遗传毒性）
• 一般毒性作用(general toxicity)，也称基础 毒性(basic toxicity) ：是人和动物单次或 反复接触食品毒物或有害因素后在躯体及靶部 位所发生或表现出的急性或长期的一般性中毒 症状、生理生化变化、组织病变及死亡现象。 即毒物对动物机体产生的综合毒效应。 • 根据毒物接触次数和效应发生时间长短，一般 毒性作用可划分为急性毒性、（蓄积毒性）、 亚慢性毒性和慢性毒性。