第六章_一般毒性作用及其试验与评价方法
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[医学]第六章 化学毒物的一般毒性作用-亚慢性和慢性毒性
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二、蓄积作用的研究方法
目的：通过蓄积试验求出蓄积系数K，了解化学 物蓄积毒性的强弱，并作为慢性毒性试验及其 它有关毒性试验的剂量选择提供参考。 蓄积系数法 生物半衰期法
（一）蓄积系数法
蓄积系数(accumulation coefficient)：指多次染毒使半数 动物出现某种效应的总量与一次染毒的半数效量之比值。 一般采用大鼠或小鼠，以死亡作为效应指标。 K=ED50(n)/ED50(1) 或 K=LD50(n)/LD50(1) ED50(n):以慢性方式多次接触受试物时产生预期效应的 累积剂量之和。 ED50(1):一次接触该物质产生相同效应的一次剂量。
＊1. 实验动物的选择 ＊2. 剂量设计与分组 ＊3. 染毒途径与时限 ＊4. 观察指标
五、长期毒性试验的注意事项
重视实验项目管理：选择经验丰富的专业人员对项目的设计和实施 进行管理，保证仪器设备状态良好，工作人员专业培训。
实验室环境的要求：注意动物饲养和试验环境的规范化，符合 GLP 。
蓄积系数的评价
蓄积系数（Ｋ） 蓄积作用分级
<1
高度蓄积
1-
明显蓄积
3-
中等蓄积
5-
轻度蓄积
1. 固定剂量法
方法：
（1）急性毒性实验
LD50(1)
（2）1/20-1/5LD50 每日染毒
LD50(n)
（ 50%动物死亡时累计染毒的总量）
（3）计算K值：K=LD50(n)/LD50(1)
若累计染毒量已达到5个LD50，动物仍未死亡或死 亡未达到半数，可终止实验，其Ｋ值按 ＞５作为结果。
蓄积库（depot）：化学物蓄积的组织器官部位。常见 的蓄积库包括： 血浆蛋白 脂肪组织 肝脏、肾脏 骨骼
07第6章 一般毒性
1.2 急性毒性试验的目的
确定受试物使一种或几种实验动物死亡的剂量水平 （LD50），以初步估计该化合物对人类毒害的危险 性。为进一步的蓄积毒性试验、亚慢性与慢性毒性 试验及特殊毒性试验提供剂量和判断指标的依据。 阐明一种化合物的相对毒性、作用方式和特殊毒性 表现，找出量-效关系，以便其毒性包括临床症状、 生理生化和病理变化、毒性性质和可能的靶器官等 有初步了解。 确定机体在环境中接触的受试物侵入机体的途径， 研究受试物的代谢动力学过程。 研究受试物急性中毒的预防和急救治疗措施。
1 急性毒性作用及其评价
新外源化合物首先需必须阐明其急性毒性的
强度及特征。 1.1 基本概念 1.2 急性毒性试验的目的 1.3 急性毒性试验设计 1.4 急性毒性评价
1.1 基本概念
急性毒性（acute toxicity）是指机体一次接触或 在24小时内多次接触外来化学物后所引起的快速剧 烈的中毒效应（结构与功能变化）。 一次接触因给予途径不同定义不同：口服和注射指 瞬间将受试物给予机体；吸入和皮肤接触指在特定 期间内（24小时）机体持续接触受试物。 短期试验（Short-term test）指在数日内（7-14 天），每天使试验机体接触一次受试物的试验。以 探讨较大剂量和较短时间的毒性作用。其与急性毒 性试验不同。
1.3.5.3 经皮肤接触
液态、粉尘态和气态外来化学物均有接触皮
肤的机会。不仅与外露皮肤接触并被吸收， 有的还能穿透衣服经皮肤吸收。 外来化学物经皮肤吸收是指角质层完整的皮 肤，若皮肤破损，化学物经真皮直接吸收， 而与静脉吸收的机制相似。
1.3.6 试验周期
急性毒性试验除计算受试物的LD50/LC50外，
第六章 一般毒性3.6
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(六) 观察时间和周期
测定外源化学物的 LD50(LC50) ，一般要 求计算实验动物接触化学物之后两周 （14天）内的总死亡数 对于一些速死性化学物求其 LD50(LC50) 也可仅计算24小时的死亡率
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四、急性毒性分级和评价
急性毒性试验主要目的之一是对化学物的急 性毒性进行分级，评价化学物的急性毒性强 弱，用于比较其急性毒性大小。 WHO于2003年公布《全球化学品统一分类和 标签制度》（ GHS ）， 2005 年修订， 2008 年 GHS将全面实施。 GHS 对急性毒性分级以 LD50/LC50 值为依据 划分。
在观察期间应注意观察其体重变化。
这有助于了解受试化学物所致的中毒 效应是短暂的或较长期的效应
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4.病理检查和其它指标观察
应当重视病理组织学检查
凡中毒死亡动物应及时解剖做病理学检查，
检查器官有无充血、出血、水肿或其它改变， 并对有变化的脏器作病理组织学检查
对存活动物于观察期结束后应做病理学检查
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3.性别
急性毒性试验所用的动物应当是雌、雄
各半
如果在研究中发现待测化学物对雌、雄
动物的毒性大小有明显差异时，应分别 求出雌性与雄性动物各自的LD50值
如果试验是为致畸试验作剂量准备，也
可仅做雌性动物的LD50试验
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4．实验动物分组和数量
在利用不同的方法测定化学物LD50时，
实验设计中对动物数的要求不同
狗
5～15 2～5 5～15 3～10
40
0.1～0.2 0.2～0.5 0.2～0.5 0.2～0.5 0.1～0.5 1～2 0.5～1 1～5 0.5～2
食品毒理学第六章化学毒物的一般毒性作用
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二、急性毒性试验方法的要点
(一)试验动物
[原则]：
①急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢和毒效 应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。
②动物易于获得
③品系纯化
④价格较低和易于饲养等条件。
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二、急性毒性试验
试
急性毒性试验 蓄积毒性试验
急性非致死试验
了解对机体毒作用靶点和指标
亚急性毒性试验
亚慢性毒性试验
（≤3个月） （3~6个月）
确定阈值和阈下剂量
慢性毒性试验
（6个月至终身）
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§1 急性毒性作用(acute toxicity)
一、急性毒性和急性毒性试验的目的
二、急性毒性试验
③ 静脉：1ml/kg(5min以上)；
④ 肌肉注射：0.5ml/kg(一个部位)；
⑤ 眼睛：0.01ml/每眼；
⑥ 直肠：0.5ml/kg；
⑦ 阴道：大鼠0.2ml，兔lml；
⑧ 吸入：2mg/L； ⑨ 鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。
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二、急性毒性试验
（二）试验动物的饲养环境
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一、急性毒性和急性毒性试验的目的
目的
①测试和求出化学毒物对一种或几种试验动物的致死量(以 LD50表示)以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用强度。
②并通过观察动物中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作用性质、 可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性中毒资料、初步评 价对人体产生损害的危险性。
第六章 化学毒物的一般毒性作用
可反映急性阈剂量距离LD50的宽窄，
即表示引起实验动物的死亡剂量与最低毒
作用剂量之间剂量范围的宽窄。其越大，
表示化学物引起急性死亡的危险性越小。
(三) 其它上、下限指标 LD84/LD16(或LC84/LC16)： 灵敏性好、重复性强而且容易求。 剂量反应曲线斜率 ( 即剂量 - 死亡曲线的概率单位直线的斜 率)。图
2．是化学物毒理学安全性评价和危险度评 定的基础； 3．对防治化学毒物中毒、制订标准以及管 理毒理学等有重要意义。
第一节 急性毒性作用及其评价
一．基本概念 急性毒性(acute toxicity) 是指机体 ( 人或实验动物 ) 一次接触或 24小时内多次接触化学物后在短期(最长到 14天)内所发生的毒性效应，包括一般行为、 外观改变、大体形态变化以及死亡效应。
对人可能致死的剂量 g/kg <0.05 0.05~ 0.5~ 5~ >15 总量 （g/60kg） 0.1 3 30 250 >1000
剧毒 高毒 中等毒 低毒 实际无毒
表 6-3 化学物质急性毒性(LD50)剂量分级 ___________________________________________________________________ 级 别 大鼠口服 LD50 相当于人的致死剂量 (mg/kg) __________________________ mg/kg g/人 ___________________________________________________________________ 极 毒 < 1 稍尝 0.05 剧 毒 1 ～ 50 500 ～ 4000 0.5 中 等 毒 51 ～ 500 4000 ～ 30000 5 低 毒 501 ～ 5000 30000 ～ 250000 50 实际无毒 5001 ～ 15000 250000 ～ 500000 500 无 毒 > 15000 > 500000 2500 ____________________________________________________________________ 引自 GB15193.3-94 食品安全性毒理学评价程序和方法
即表示引起实验动物的死亡剂量与最低毒
作用剂量之间剂量范围的宽窄。其越大，
表示化学物引起急性死亡的危险性越小。
(三) 其它上、下限指标 LD84/LD16(或LC84/LC16)： 灵敏性好、重复性强而且容易求。 剂量反应曲线斜率 ( 即剂量 - 死亡曲线的概率单位直线的斜 率)。图
2．是化学物毒理学安全性评价和危险度评 定的基础； 3．对防治化学毒物中毒、制订标准以及管 理毒理学等有重要意义。
第一节 急性毒性作用及其评价
一．基本概念 急性毒性(acute toxicity) 是指机体 ( 人或实验动物 ) 一次接触或 24小时内多次接触化学物后在短期(最长到 14天)内所发生的毒性效应，包括一般行为、 外观改变、大体形态变化以及死亡效应。
对人可能致死的剂量 g/kg <0.05 0.05~ 0.5~ 5~ >15 总量 （g/60kg） 0.1 3 30 250 >1000
剧毒 高毒 中等毒 低毒 实际无毒
表 6-3 化学物质急性毒性(LD50)剂量分级 ___________________________________________________________________ 级 别 大鼠口服 LD50 相当于人的致死剂量 (mg/kg) __________________________ mg/kg g/人 ___________________________________________________________________ 极 毒 < 1 稍尝 0.05 剧 毒 1 ～ 50 500 ～ 4000 0.5 中 等 毒 51 ～ 500 4000 ～ 30000 5 低 毒 501 ～ 5000 30000 ～ 250000 50 实际无毒 5001 ～ 15000 250000 ～ 500000 500 无 毒 > 15000 > 500000 2500 ____________________________________________________________________ 引自 GB15193.3-94 食品安全性毒理学评价程序和方法
第六章-一般毒性作用
◆ 结果
举例
◆ 结果 联合作用评价结果
举例
举例
◆ 讨论 LD50 ： 四 硼 酸 钠 对 雌 、 雄 性 大 鼠
1470mg/kg 。 亚 硒 酸 钠 对 雄 性 大 鼠 14.70mg/kg ， 对 雌 性 大 鼠 6.81mg/kg 。 联 合对大鼠的急性毒性，雄性大鼠为 1727.10mg/kg，雌性大鼠1717.94mg/kg
常用大鼠
染毒方式： • 脱毛：化学或机械法脱毛（体表面积 的10%） • 染毒：局部涂敷或大鼠、小鼠浸尾法
染毒方法
经注射途径染毒 注射药品、机制研究、毒物代谢动力学 分类：
（四） 剂量选择
参考新化学物的理化性质
参考相关资料
先用少量动物，以较大的剂量间隔染毒，找 出10%-90%（或0%-100%）的致死剂量范 围，然后设计正式实验的剂量和分组
根据试验所选的LD50计算方法确定剂量组数
剂量选择
各组剂量的计算
i =（lgLD90-lgLD10）/（n-1） 或 i =（lgLD100- lgLD0）/（n-1）
i为组距，n为设计的剂量组数。以最 低剂量值（LD0或LD10）的对数剂量加上 一个i值，即是第二个剂量组的对数剂量， 依次类推直至最高剂量组
举例
1 Introduction 2 Method and materials 3 Results 4 Discussions
举例
◆ 前言 单独的硒、单独的硼均有抗氟作用，有研 究表明硼硒联合作用使氟中毒大鼠的康复 效果较好。因此，我们在硼硒抗氟药效实 验研究的基础上，为了解硼硒联合毒性作 用，为现场人群应用硼硒联合防治氟中毒 提供试验依据，我们就硼硒联合对大鼠的 急性毒性及亚慢性毒性进行试验研究
毒理学 第六章-一般毒性作用(人卫)
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6. 生理与健康状况
健康、未产未孕 给药前检疫观察 大、小鼠、兔、豚鼠1周，犬、猴2~3周 ①适应新环境，减少环境和生理条件变化可 能对试验结果的影响 ②筛检健康状况不符合试验要求的动物
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（二） 染毒方式
最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。 ❖ 工业化学物：经皮肤和呼吸道 ❖ 农用化学物：经口、经皮肤和呼吸道 ❖ 药品：经口和注射 ❖ 食品：经口 ❖ 环境污染物：经口、皮肤和呼吸道
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3.急性毒性分级法 （acute toxic class method）
选用剂量(25、200、2 000 mg/kg)之一，单性别3只动物进 行试验，确定动物的生死后再进行下一步试验。 有3种可能的结局：
a. 不需进一步试验即可分级， b.下一阶段以相同剂量再做另一性别试验， c.下一阶段以较高或较低的剂量水平进行。 根据在某一染毒剂量下，死亡发生的数量来判定大致的 LD50值范围，直接进行危害评估和毒性分级。
有关急性毒性试验设计及方法
曲线拟合：概率 单位法，即Bliss 法
插值法：寇氏法
中，不正确的是
A．采用寇氏法和 Bliss 法一般 设5～8组 B．寇氏法和 Bliss 法一般以
一般设5～8个剂量 组；霍恩法固定设4 个剂量组。
i=(LD100 –LD0 )/(n-1)公式计算 组距 C．使用霍恩氏法固定设4个剂 量组
种属和品系
性别、年龄、体重
微生物学等级 饲养环境
动物数目 实验前处理
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实验动物
种属和品系 首选大鼠 还需选择一种非 啮齿动物：狗
性别、年龄、体重
雌雄各半 刚成年、健康、未曾 交配和受孕的动物
大鼠180～240g 小鼠18～25g 家兔2～2.5kg
毒理学基础 第六章 化学物的一般毒性作用
〔四〕慢性实验设计要点
1.实验动物 2.染毒途径与期限
3.剂量分组: 高剂量组：1/5-1/2 LOAEL〔亚慢〕 中剂量组：1/50-1/10LOAEL 低剂量组：1/100 LOAEL或：1/1000-1/10LD50 阴性对照：
4.观察指标 同亚慢，但精，为亚慢显现靶的指标。
〔五〕结果评价
染毒使半数动物出现相同效应〔或死亡〕的剂量[ED50(1)]
的比值，K 即= 蓄ED5积0(n)系数。
ED50(l)
LD50(n
K
=
)
LD50(l
)
1)固定剂量法 2)剂量递增法
〔2〕生物半减期法
用毒物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用 化学物的蓄积极限：
a.半减期的测定 b.计算蓄积极限
第六章 化学物的一般毒性作用
急性毒性 一般毒性亚慢性毒性
慢性毒性
急性毒性试验 亚慢性毒性试验 慢性毒性试验
第一节 急性毒性作用
一、急性毒性的概念
➢ 急性毒性(acute toxicity) ：是指机体〔实验动物或人〕 一次或24小时内屡次接触外源化学物后在短期内所引 起的毒性效应。
➢ 包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应 ➢ 说明： ➢ 1.接触的次数：一次/屡次 ➢ 2.毒效应出现时间： ➢ 3.中毒效应的强度：
〔二〕染毒途径
1.经消化道染毒 2.经呼吸道染毒 3.经皮肤染毒 4.经注射染毒
〔三〕剂量选择及分组
1.剂量范围确实定： 动物死亡率0％－100％ 〔或10％-90%〕的致死剂量范围
2.分组及剂量确实定： 窛氏法：6－8组为宜，各组剂量呈等比级数 霍恩氏法：4组，各组剂量呈等比级数
〔四〕毒作用观察
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真观察和记录。 分析中毒死亡时间的分布规律，也可以提供 重要信息。
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3、体重
实验动物体重变化指标，可以反映动物中毒后
综合性整体变化，是一个比较客观简便的量化
指标。 因此在观察实验动物中毒体征的同时，对存活 动物应定期多次称量动物的体重变化，一般为 每周1次或2次。
（一）实验动物的选择和要求
尽量选择急性毒性反应与人近似的动物；
易于饲养管理、试验操作方便的动物；
繁殖生育力较强，数量较大能够保障供应；
价格较低，易于获得的动物。
实验动物的选择包括物种和品系、年龄、体重、 数量等方面，必须按照其规范要求进行。
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（一）实验动物的选择和要求
⑦吸入2mg/L；
⑧鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。
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（五）染毒方法
染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：
1. 模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的
途径和方式；
2. 有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；
3. 受试物的性质和用途；
4. 各种受试物毒性评价程序的要求等。
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（一）实验动物的选择和要求
5、实验动物的给药前禁食处理
采用经口途径染毒，实验动物胃肠 道内食物存留量对化学毒物的毒性 可产生较明显的干扰，因此在试验 给药前应作禁食处理。
大鼠在前一天傍晚下班时或晚间将 饲料撤掉。 小鼠由于其消化吸收和代谢速度较 快，可隔夜禁食也可禁食4h以上。
Wistar大鼠 特 点： 抗病力强，自 发性肿瘤发病率低， 多用于肿瘤、免疫、 药理、内分泌。
SD大鼠 特点 ：白色，产力较强，尤以对呼吸 道疾病的抵抗力强。
（一）实验动物的选择和要求
2、实验动物的年龄和体重
通常要求刚成年的动物，且为健 康未受孕的动物。 通常大鼠180～240g、小鼠18～
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三、急性毒性试验设计
包括实验动物、染毒途径、染毒剂
量、观察周期、观察指标的选择、
计算方法和评价等。 一般来说，一个新化学物在研制初 期就要进行急性毒性试验。 如果急性毒性试验通不过，则后面
的所有试验都不必进行了。
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LgLD0
LgLD0+i
LgLD0+2i LgLD0+3i
LgLD0+4i
•••
（六）剂量选择
对未知毒性的化学物，估计毒性较低时，预试验也 可以5g/kg剂量进行摸索，来决定是否需正式求 LD50。一般来说，化学物LD50如大于5g/kg已表明 毒性不大。
我国药品的毒理研究指导原则规定要以最大容积最 高浓度给予动物后未见死亡，方可不进一步试验求 出LD50值。 急性毒性试验除设立几个剂量组外，是否设正常和 溶剂对照组，根据需要确定。
第六章 一般毒性作用及其试验与评价方法
第一节 急性毒性作用及其试验与评价
第二节亚慢性毒性作用及其试验与评价方 法 第三节 蓄积毒性作用及其试验与评价
第四节 慢性毒性作用及其试验与评价
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外来化学物在一定剂量、一定接触时间和接 触方式下对试验动物产生的综合毒效应称为 一般毒性作用。 一般毒性作用根据接触毒物的时间长短又可 分为急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性。
经皮肤染毒的方式：先使用化学法 脱毛（常用脱毛剂为硫化钡加滑石 粉1：4或硫化钠加淀粉1：4）或机 械法脱毛（剪剃去毛），将动物脊 柱两侧背毛脱去，去毛面积常为体 表面积的10％。 局部涂敷受试物并以玻璃纸覆盖固 定一定时间接触染毒。
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（五）染毒方法
4、经注射途径染毒 对注射药品或需作比较毒性观察 的药品进行急性毒性试验时，须 作经注射途径染毒。 注射途径可分为静脉注射或滴注、 腹腔注射(ip)、肌内注射(im)、 皮下注射(sc)、皮内注射(id)、椎 管内注射等。
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（六）剂量选择
一般来说，化学结构和性质比较近似的毒 物，毒性也比较近似。通过以上资料从而 对受试物毒力做出估计，以预期毒性剂量 设计预实验方案。 每个剂量组间的组距可大些，以便寻找出 受试物的致死剂量范围。
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一、急性毒性的概念
急性毒性是指机体（实验动物或人）一次或24h 内多次接触外源化学物后在短期内所产生的毒性
效应，包括一般行为和外观改变、大体形态变化
以及死亡效应。
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急性毒性概念中的几个问题
1、急性接触的次数
（一次或多次） 24h内
2、中毒效应出现的时间（一般为7-28d）
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（七）毒性作用观察
急性毒性试验一般是以死亡为主要记录内容。 除此之外还要注意： 中毒体征及发生过程； 死亡情况和时间分布； 体重 病理形态学变化。
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（七）毒性作用观察
1、中毒体征及发生过程
应详细观察和记录动物出现的中毒体征、
发生时间和体征发展的经过。
机体对毒物作用的反应可以表现出各个
系统的特征。
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2、死亡情况和时间分布
急性毒性试验中实验动物的死亡数是计算
LD50值的依据，动物死亡数量每增加或减少
一只都会对LD50值产生明显影响，因此应认
1、实验动物的物种和品系
急性毒性试验一般首先选择哺乳动物， 选择两种或两种以上的动物。包括啮齿 类和非啮齿类。啮齿类以大鼠、小鼠为 最常用。非啮齿类以犬或猴最常用。
急性毒性试验所用大鼠的品系以 Sprague-Dawley（SD）、Wistar为主， 小鼠则以昆明种、NIH、ICR为多。
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25g、家兔2～2.5kg、豚鼠200～
250g、Beagle犬4～6kg、杂种犬
8～15kg。
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（一）实验动物的选择和要求
3、实验动物的性别
通常要求为雌雄各半。
但如有资料或预试验发现试验品对
雌、雄动物毒效应有明显的性别差
异，则应单独分别试验并求出雌性
和雄性动物各自的LD50值。
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体重可以反映动物中毒后的整体变化。 对存活动物尤其是对低于LD50剂量组的存活动物。 应在观察期28天内称量其体重的变化,以便了解受 试物引起毒效应的持续时间。
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③根据预试验的死亡资料确定组距。
可根据以下公式计算出剂量分组：
i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1) 或：
i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1) 公式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n 为设计的剂量组数。
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正式试验
一般来说、根据试验设计所选用的LD50计算方法来确 定组数。例如寇氏法、几率单位法一般设6～10个剂 量组；霍恩法固定设4个剂量组。求得i值后，以最低 剂量组(LD0或LD10)的对数剂量加上一个i值，即是第 二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组， 查各自的反对数即得出各组剂量的真实值。
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（六）剂量选择
查阅文献
①了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、 熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂 溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。
②确定使用哪一种计算方法求LD50，然后再设计剂量分组。 LD50的计算方法常用改良寇氏法、概率单位法、霍恩氏法 等。 ③找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒 性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径 所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值。
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（四）染毒剂量及分组
一般推荐，染毒最大量为：
①经口20ml/kg（对空腹动物）； ②经皮2ml/kg（根据体表面积计算，限于染毒的 准确性）； ③静脉1ml/kg（5min以上）； ④肌内注射0.5ml/kg（一个部位）； ⑤每眼0.01ml； ⑥直肠0.5ml/kg；
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第一节 急性毒性作用及其试验与评价方法
一、急性毒性的概念 二、急性毒性试验的目的
三、急性毒性试验方法的要点
四、急性毒性分级和评价
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第一节 急性毒性作用及其试验与评价方法
急性毒性效应一般是指机体接触化学物后，在
较短时间内观察到的毒性症状。
3、中毒效应的强度
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二、急性毒性试验的目的
1、测试和求出毒物的致死剂量以及其他急性毒 性参数，通常以LD50为最主要的参数； 2、初步评价毒物对机体的毒效应特征、靶器官、 剂量-反应（效应）关系和对人体产生损害的危 险性； 3、研究受试物在动物体内的动力学变化规律； 4、为亚慢性、慢性毒性试验研究以及其他毒理 试验提供接触剂量和观察指标选择的依据。
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3、体重
实验动物体重变化指标，可以反映动物中毒后
综合性整体变化，是一个比较客观简便的量化
指标。 因此在观察实验动物中毒体征的同时，对存活 动物应定期多次称量动物的体重变化，一般为 每周1次或2次。
（一）实验动物的选择和要求
尽量选择急性毒性反应与人近似的动物；
易于饲养管理、试验操作方便的动物；
繁殖生育力较强，数量较大能够保障供应；
价格较低，易于获得的动物。
实验动物的选择包括物种和品系、年龄、体重、 数量等方面，必须按照其规范要求进行。
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（一）实验动物的选择和要求
⑦吸入2mg/L；
⑧鼻：猴或犬每鼻孔0.1ml。
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（五）染毒方法
染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：
1. 模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的
途径和方式；
2. 有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；
3. 受试物的性质和用途；
4. 各种受试物毒性评价程序的要求等。
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（一）实验动物的选择和要求
5、实验动物的给药前禁食处理
采用经口途径染毒，实验动物胃肠 道内食物存留量对化学毒物的毒性 可产生较明显的干扰，因此在试验 给药前应作禁食处理。
大鼠在前一天傍晚下班时或晚间将 饲料撤掉。 小鼠由于其消化吸收和代谢速度较 快，可隔夜禁食也可禁食4h以上。
Wistar大鼠 特 点： 抗病力强，自 发性肿瘤发病率低， 多用于肿瘤、免疫、 药理、内分泌。
SD大鼠 特点 ：白色，产力较强，尤以对呼吸 道疾病的抵抗力强。
（一）实验动物的选择和要求
2、实验动物的年龄和体重
通常要求刚成年的动物，且为健 康未受孕的动物。 通常大鼠180～240g、小鼠18～
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三、急性毒性试验设计
包括实验动物、染毒途径、染毒剂
量、观察周期、观察指标的选择、
计算方法和评价等。 一般来说，一个新化学物在研制初 期就要进行急性毒性试验。 如果急性毒性试验通不过，则后面
的所有试验都不必进行了。
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1 2 3 4 5 6
LgLD0
LgLD0+i
LgLD0+2i LgLD0+3i
LgLD0+4i
•••
（六）剂量选择
对未知毒性的化学物，估计毒性较低时，预试验也 可以5g/kg剂量进行摸索，来决定是否需正式求 LD50。一般来说，化学物LD50如大于5g/kg已表明 毒性不大。
我国药品的毒理研究指导原则规定要以最大容积最 高浓度给予动物后未见死亡，方可不进一步试验求 出LD50值。 急性毒性试验除设立几个剂量组外，是否设正常和 溶剂对照组，根据需要确定。
第六章 一般毒性作用及其试验与评价方法
第一节 急性毒性作用及其试验与评价
第二节亚慢性毒性作用及其试验与评价方 法 第三节 蓄积毒性作用及其试验与评价
第四节 慢性毒性作用及其试验与评价
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外来化学物在一定剂量、一定接触时间和接 触方式下对试验动物产生的综合毒效应称为 一般毒性作用。 一般毒性作用根据接触毒物的时间长短又可 分为急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性。
经皮肤染毒的方式：先使用化学法 脱毛（常用脱毛剂为硫化钡加滑石 粉1：4或硫化钠加淀粉1：4）或机 械法脱毛（剪剃去毛），将动物脊 柱两侧背毛脱去，去毛面积常为体 表面积的10％。 局部涂敷受试物并以玻璃纸覆盖固 定一定时间接触染毒。
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（五）染毒方法
4、经注射途径染毒 对注射药品或需作比较毒性观察 的药品进行急性毒性试验时，须 作经注射途径染毒。 注射途径可分为静脉注射或滴注、 腹腔注射(ip)、肌内注射(im)、 皮下注射(sc)、皮内注射(id)、椎 管内注射等。
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（六）剂量选择
一般来说，化学结构和性质比较近似的毒 物，毒性也比较近似。通过以上资料从而 对受试物毒力做出估计，以预期毒性剂量 设计预实验方案。 每个剂量组间的组距可大些，以便寻找出 受试物的致死剂量范围。
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一、急性毒性的概念
急性毒性是指机体（实验动物或人）一次或24h 内多次接触外源化学物后在短期内所产生的毒性
效应，包括一般行为和外观改变、大体形态变化
以及死亡效应。
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急性毒性概念中的几个问题
1、急性接触的次数
（一次或多次） 24h内
2、中毒效应出现的时间（一般为7-28d）
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（七）毒性作用观察
急性毒性试验一般是以死亡为主要记录内容。 除此之外还要注意： 中毒体征及发生过程； 死亡情况和时间分布； 体重 病理形态学变化。
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（七）毒性作用观察
1、中毒体征及发生过程
应详细观察和记录动物出现的中毒体征、
发生时间和体征发展的经过。
机体对毒物作用的反应可以表现出各个
系统的特征。
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2、死亡情况和时间分布
急性毒性试验中实验动物的死亡数是计算
LD50值的依据，动物死亡数量每增加或减少
一只都会对LD50值产生明显影响，因此应认
1、实验动物的物种和品系
急性毒性试验一般首先选择哺乳动物， 选择两种或两种以上的动物。包括啮齿 类和非啮齿类。啮齿类以大鼠、小鼠为 最常用。非啮齿类以犬或猴最常用。
急性毒性试验所用大鼠的品系以 Sprague-Dawley（SD）、Wistar为主， 小鼠则以昆明种、NIH、ICR为多。
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25g、家兔2～2.5kg、豚鼠200～
250g、Beagle犬4～6kg、杂种犬
8～15kg。
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（一）实验动物的选择和要求
3、实验动物的性别
通常要求为雌雄各半。
但如有资料或预试验发现试验品对
雌、雄动物毒效应有明显的性别差
异，则应单独分别试验并求出雌性
和雄性动物各自的LD50值。
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体重可以反映动物中毒后的整体变化。 对存活动物尤其是对低于LD50剂量组的存活动物。 应在观察期28天内称量其体重的变化,以便了解受 试物引起毒效应的持续时间。
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③根据预试验的死亡资料确定组距。
可根据以下公式计算出剂量分组：
i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1) 或：
i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1) 公式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n 为设计的剂量组数。
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正式试验
一般来说、根据试验设计所选用的LD50计算方法来确 定组数。例如寇氏法、几率单位法一般设6～10个剂 量组；霍恩法固定设4个剂量组。求得i值后，以最低 剂量组(LD0或LD10)的对数剂量加上一个i值，即是第 二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组， 查各自的反对数即得出各组剂量的真实值。
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（六）剂量选择
查阅文献
①了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、 熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂 溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。
②确定使用哪一种计算方法求LD50，然后再设计剂量分组。 LD50的计算方法常用改良寇氏法、概率单位法、霍恩氏法 等。 ③找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒 性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径 所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值。
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（四）染毒剂量及分组
一般推荐，染毒最大量为：
①经口20ml/kg（对空腹动物）； ②经皮2ml/kg（根据体表面积计算，限于染毒的 准确性）； ③静脉1ml/kg（5min以上）； ④肌内注射0.5ml/kg（一个部位）； ⑤每眼0.01ml； ⑥直肠0.5ml/kg；
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第一节 急性毒性作用及其试验与评价方法
一、急性毒性的概念 二、急性毒性试验的目的
三、急性毒性试验方法的要点
四、急性毒性分级和评价
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第一节 急性毒性作用及其试验与评价方法
急性毒性效应一般是指机体接触化学物后，在
较短时间内观察到的毒性症状。
3、中毒效应的强度
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二、急性毒性试验的目的
1、测试和求出毒物的致死剂量以及其他急性毒 性参数，通常以LD50为最主要的参数； 2、初步评价毒物对机体的毒效应特征、靶器官、 剂量-反应（效应）关系和对人体产生损害的危 险性； 3、研究受试物在动物体内的动力学变化规律； 4、为亚慢性、慢性毒性试验研究以及其他毒理 试验提供接触剂量和观察指标选择的依据。