生物选修一大肠杆菌的培养和分离
实验1 大肠杆菌的分离和培养
（1）（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
五、大肠杆菌的培养和分离实验操作
（一）培养基的配置与灭菌
取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB
液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，
尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线 结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线 时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末 端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时 菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
划线结束灼烧接种环，能及时杀死接种环上 残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2.在进行第二次以及其后的划线操作时，为什 么总是从上一次划线的末端开始划线？
注意事项:
1.接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位 置连续划线多次。
2.划线首尾不能相接。 3.划线后，培养皿倒置培养12~24h。
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前 都要灼ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环吗？为什么？
操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环 上可能存在的微生物污染培养物；
不能使用脱 脂棉，否则 容易吸水， 造成污染。
5、将试 管口通过 火焰，并 塞上棉塞。
6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手 将沾有菌种的接种环迅速伸入平板 内，划三至五条平等线，盖上皿盖。 注意不要划破培养基。
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达 到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成 规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长， 会形成一个条状的菌落。
• 自养菌:
光能自养型:光合细菌
高二生物《大肠杆菌培养和分离》教案
高二生物《大肠杆菌培养和分离》教案一、教学目标•了解大肠杆菌的形态、生理功能和培养条件；•掌握培养大肠杆菌的方法；•学会分离与鉴定大肠杆菌。
二、教学重点•培养大肠杆菌的方法；•分离与鉴定大肠杆菌的技巧。
三、教学难点•有效分离和鉴定大肠杆菌。
四、教学内容1. 大肠杆菌基本介绍大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性、无芽孢的棒状细菌。
它是人类和其他动物的肠道中常见的微生物之一，也是生物学研究中最常用的细菌之一。
大肠杆菌具有以下特征：•形态：革兰氏阴性杆菌，单株长度大约为2-3微米，直径约为0.5微米；•生理功能：大肠杆菌是一种嗜氧菌，可以利用葡萄糖进行发酵，并产生酸性代谢产物；•培养条件：大肠杆菌在37℃下生长最佳，pH值在6.5-7.5之间。
2. 培养大肠杆菌的方法大肠杆菌的培养方法主要包括液体培养和固体培养两种。
2.1 液体培养液体培养是将大肠杆菌悬浮于含有营养物质的液体培养基中进行培养的方法。
步骤如下：1.准备培养基：选用适当的液体培养基，如LB培养基；2.取少量大肠杆菌菌液接种于培养基中；3.震荡培养：将接种好的培养基放置于恒温摇床中，在37℃条件下震荡培养一定时间。
2.2 固体培养固体培养是将大肠杆菌悬浮于含有琼脂的固体培养基中进行培养的方法。
步骤如下：1.准备培养基：选用适当的固体培养基，如LB琼脂培养基；2.取少量大肠杆菌菌液接种于培养基中；3.均匀涂布：将接种好的培养基倒入培养皿中，用棉签均匀涂布；4.孵育：将培养皿倒置放置于37℃恒温培养箱中孵育一定时间。
3. 分离与鉴定大肠杆菌的技巧为了分离与鉴定大肠杆菌，可以采用以下技巧：1.纯培养：将大肠杆菌培养于LB琼脂培养基上，筛选出纯种菌落；2.形态特征：观察菌落形态特征，如形状、颜色等；3.革兰氏染色：对菌液进行革兰氏染色，观察细菌颗粒的染色情况；4.代谢特征：利用生化试剂进行代谢特征测试，如产气性、产酸性等。
五、教学过程1. 导入（5分钟）教师简要介绍大肠杆菌的基本特征和在生物学研究中的重要性。
实验1大肠杆菌的分离和培养
接种方法有：
平板划线法和稀释涂布平板法
平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.
在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.
微生物的接种技术
2、纯化大肠杆菌
平板划线的操作方法 交叉划线法 连续划线法
9．倒平板:
倒平板技术
培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
问题讨论
4.培养基的用途
液体培养基：增菌 固体培养基：纯化，增菌 半固体培养基：动力检测，保种
二、无菌技术
无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。
将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。
8．灭菌:
待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。
真菌
培养基
实验1 大肠杆菌的培养和分离
（2）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行 诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步骤2:制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意＿和 ＿，加琼脂后灭菌，制成
本图来自十一学校
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
细菌的分离方法
1.种类: 划线分离法和涂布分离法。 划线分离法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操 作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 划线时不能划破培养基
2.作用: 是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表 达量菌株的最简便方法之一。
实验一
大肠杆菌的培养和分离
微生物
定义:结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有 细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生 生物和某些真菌。
曲霉
酵
母
菌
草履虫
细菌：是单细胞的原核生物。 结构组成：细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，拟核 分裂方式：二分裂
菌落：由单个细菌（或其他微生物）在适宜固体培养 基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有 一定形态结构等特征的子细胞的群落。
为什么要倒置培养？
培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，正放培养 皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并 且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落间相互 影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。
1.下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接 种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》教案1 浙科版选修1
第一部分微生物的利用
一、课标内容：
进行微生物的分离和培养
二、教学要求
本部分“实验2：分离以尿素为氮源的微生物”与“实验3：观察土壤中能水解纤维素的微生物”不作要求，只要求学生做1个实验，即“实验1：大肠杆菌的培养和分离”。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
基本要求 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作
2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基本进行细菌的划线培养。
发展要求说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
说明
三、教学建议
1.课时建议（共计9课时）
实验室守则的学习1课时
生物技术概述3课时
大肠杆菌的培养和分离2课时
复习与检测3课时
2.实验建议
在大肠杆菌的培养和分离的实验中，要特别强调无菌操作，这是进行微生物实验中必备的操作要求，也是本模块多数实验的基本要求，应该让学生形成无菌操作的行为习惯。
无菌操作，既包括各种器皿必须是无菌的，也包括各种培养基也必须是无菌的，同时还要求在接种时，不能带有其它杂菌，所以在实验过程中，应时刻让学生保持这种无菌意识。
在菌落和菌种种类的辩认时，要教会学生能大致区分细菌、放线菌与酵母菌菌落，有些用肉眼不能判断的菌落也可借助显微镜进行观察推断。
用心爱心专心- 1 -。
实验1大肠杆菌的培养和分离
否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差 可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而 发生污染，甚至使容器爆炸。 烘箱 灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80 ℃_____ 中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_____ 污染 。
⑤倒平板、制斜面 操作平台：超净台 灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开 紫外线 和___________ 过滤风 ，灭菌30min. _________ ６０ ℃时，将每只培 倒平板：待培养基冷却至_____ 10～12 养皿倒入_________ml 未凝固的固体培养基，置 水平 位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底 于_____ 部，待凝，使之形成平面。_______ 倒置 备用。 制斜面：将未凝固的固体培养 斜 放，冷却待凝使即 基的试管____ 成为斜面。
思考题
C、为何要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养 基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠 落培养基，造成污染。 D、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在 皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微 生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上 滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 E、如何检查培养基是否受杂菌的污染？ 将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若无菌落产生 则未受杂菌污染。
3.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
4.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从 上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每 次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划 线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁 殖而来的菌落。 5、如何判断接种操作是否符合无菌要求？ 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一 致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是 符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明 接种过程中，无菌操作还未达到要求。