实验一急性毒性实验指南概论
急性毒性试验
试验步骤和操作要点
1
试验设计
2
确定试验物质的给药途径、剂量和
暴露时间，合理设计试验组和对照
组，以确保试验数据的可比性。
3
数据分析
4
收集和整理试验数据，进行统计分 析和结果解读，评估化学物质的毒
性潜力和危害等级。
试验准备
准备动物和试验物质，并遵守试验 室安全和伦理规定，保证试验过程 的准确性和可靠性。
试验操作
按照设定的方案进行实验操作，严 格控制剂量和暴露时间，记录动物 的毒性反应和不良效应。
试验结果的解读和评价标准
急性毒性试验结果一般以LD50值为指标进行解读，在国际上有一系列评价标准，用于评估化学物 质的毒性程度和危害等级。
试验的局限性和改进方向
1 动物模型的局限性 2 测试方法的改进
动物模型不能完全代 表人类生物反应，因 此在试验结果的解读 和评估时需要谨慎考 虑。
急性毒性试验
急性毒性试验是一种评价化学物质对生物体的短期毒性潜力的试验方法，通 过暴露一定剂量的物质给实验动物，观察其对动物的毒性反应以及产生的不 良效学物质对生物体的毒性程度及其可能产生的危害， 为了规范评估过程，国际上制定了一系列的试验方法和评价标准。
常用的试验方法和原理
需要进一步发展和改 进更精准、准确的试 验方法，以提高试验 结果的预测性和可比 性。
3 替代和替补模型
发展替代和替补模型， 例如体外细胞实验和 计算机模拟，以减少 对动物实验的依赖。
试验的应用领域和意义
急性毒性试验在化学品安全评估、药物研发、环境保护等领域具有重要意义， 为保障人类健康和环境安全提供科学依据。
LD50试验 通过确定半数致死剂量（LD50）来评估化学物质的毒性，以毫克/ 千克体重作为单位。 急性口服毒性试验 通过将一定剂量的物质通过口服给予 动物，观察其对动物的毒性反应，用于评估化学物质的毒害程度。 急性皮肤 毒性试验 通过将一定剂量的物质涂抹于动物皮肤上，观察皮肤反应和毒性症 状，用于评估化学物质的皮肤刺激和毒害作用。
急性毒性实验内容
实验动物的标记
方法一：
6
按右前肢、右肋、右后肢、颈部、背中、尾根、左
前肢、左肋、左后肢，顺序编号为1～9号，不染色 为10号。在动物相同部位涂染另一种颜色染料表示 十位，两种颜色可编1～99号。 方法二：
以头部为1号，顺时针方向依次从右耳、右前肢、右
后肢、颈部、背中、尾根、左耳、左前肢、左后肢 染色，分别为2～10号。
同一品系的实验动物、用相同染毒条件所得 到的LD50值相同或相似，但其毒作用带或致 死剂量范围却有明显的不同，表明化学物的 实际毒性存在差异。
急性毒性试验不等于LD50测定
可用少量动物测定ALD，并进行临床观 察、化验检查和病理学检查 当口服剂量大于5g/kg或注射剂量大于 2g/kg时，不产生急性毒性或死亡，则不 必准确的测定LD50
20只小鼠按随机区组设计分组表
随机分配到各组的动物
剂量选择及分组
剂量选择
广泛查阅文献资料，估计毒性中值
预试，求出待测化学物0 %~100 %或
10 %~90 %的大致致死剂量范围 设计正式试验的剂量和分组
剂量分组
i＝lgLD100-lgLD0/n-1 或i＝lgLD90-lgLD10/n-1 n：设计的剂量组数
实验动物分组
目的：减少个体差异对实验结果的影响；
原则：按统计学原则随机分组，使非处理
因素最大限度地保持一致，提高每组实验
动物间的均衡性。 常用方法：完全随机和随机区组
完全随机设计
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字，所得余数即为所属组别。如将 ２０只动物分为４组，从随机数字表的第 １１行开始，顺序取２０个数字，用４除 的余数即为组别。
(完整版)急性毒性试验
试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1.动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2.饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3.受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1.伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2.最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3.最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4.单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg 进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
急性毒性实验报告
急性毒性实验报告急性毒性实验报告引言：急性毒性实验是一种常见的实验方法，用于评估化学物质对生物体的毒性程度。
本实验旨在通过对小白鼠进行急性毒性实验，了解某种化学物质的毒性效应，并为人类的健康和环境保护提供参考。
实验设计：本次实验选取了20只健康的小白鼠，分为4组，每组5只。
实验组分别接受不同剂量的化学物质A的处理，对照组接受生理盐水处理。
实验过程中，观察小白鼠的行为、食欲、呼吸等生理指标的变化，并记录下来。
实验持续时间为24小时。
实验结果：在实验过程中，我们观察到以下现象和结果：1. 实验组小白鼠在接受化学物质A处理后，出现了明显的行为异常。
它们表现出活动减少、食欲下降、毛发无光泽等症状。
与对照组相比，实验组小白鼠的行为异常更加明显。
2. 呼吸方面，实验组小白鼠的呼吸频率明显增加，呼吸深度减小。
这表明化学物质A对呼吸系统产生了一定的影响。
3. 实验组小白鼠的体温有所下降，尤其是接受高剂量处理的小白鼠。
这可能是由于化学物质A对体温调节系统的干扰导致的。
4. 实验组小白鼠的心率明显加快，而对照组小白鼠的心率变化不大。
这表明化学物质A对心血管系统产生了一定的影响。
5. 实验组小白鼠的精神状态明显受到影响，它们表现出迟钝、无精打采的状态。
这可能是化学物质A对中枢神经系统的影响所致。
讨论与分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 化学物质A对小白鼠的急性毒性效应明显。
其表现为行为异常、呼吸系统受损、体温下降、心率加快以及精神状态受到影响等。
2. 小白鼠对化学物质A的毒性反应与剂量呈正相关关系。
高剂量处理的小白鼠表现出更明显的毒性效应。
3. 化学物质A可能对呼吸、体温调节、心血管和中枢神经系统产生了不同程度的毒性影响。
结论：本次急性毒性实验结果表明，化学物质A具有一定的毒性效应。
在人类的健康和环境保护方面，需要对其进行进一步的研究和评估。
同时，我们也应该加强对化学物质的监管，确保其在使用和处理过程中不对人类和环境造成危害。
急性毒性试验设计课件
案例四
总结词
急性毒性试验在食品添加剂安全性评价中具有重要意义，能够评估食品添加剂对 人体健康的潜在风险。
详细描述
急性毒性试验广泛应用于食品添加剂安全性评价中，通过给予实验动物单次或多 次剂量的食品添加剂，观察和记录动物的毒性反应和死亡情况，能够评估食品添 加剂对人体健康的潜在风险，为食品添加剂的安全使用提供科学依据。
数据清洗
去除异常值和缺失值，确保数据质量。
数据分析
采用合适的统计方法对数据进行分析，如均值 、标准差等。
数据可视化
使用图表展示分析结果，如折线图、柱状图等。
结果报告与结论
结果总结
概述试验结果，包括毒性反应类型、剂量效应关系等 。
结论
根据试验结果，得出结论并解释其意义。
建议
根据试验结果提出建议，如进一步研究必要性、安全 使用建议等。
染毒剂量
设置不同剂量组，确保剂量范围涵盖预期毒性反 应。
3
染毒频率
确定染毒频率，如单次或多次给药。
观察与记录
观察时间
设定观察周期，包括给药前、给药后短期、 中期和长期观察。
观察指标
列出需要观察的指标，如行为变化、生理参 数、病理学检查等。
数据记录
详细记录各组动物在各个时间点的数据表现 。
数据处理与分析
观察期的设置
总结词
观察期的设置是急性毒性试验中至关重要的一环，直接 关系到试验结果的完整性和准确性。
详细描述
观察期是指从给予动物受试物开始，直至观察到动物死 亡或恢复正常的这段时间。在试验设计中，应根据受试 物的毒性作用特点、动物的种属特性以及试验目的等因 素来确定合理的观察期。同时，还需根据观察到的症状 和体征以及死亡情况等数据进行详细记录和分析，以评 估受试物的毒性作用及其对动物的影响程度。
药物毒理学实验指导
药物毒理学实验指导南方医科大学药学院实验中心二0一0年八月目录实验一、药物急性毒性实验（LD50测定）实验二、急性肺损伤实验实验三、药物免疫毒性试验实验四、小鼠骨髓细胞微核试验实验五、小鼠精子畸形实验实验六、药物生殖毒性实验实验一 急性毒性试验［盐酸二甲弗林（回苏灵）LD 50测定］一、实验目的化学物急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。
本实验的目的是学习急性毒性试验的实验设计、实验原理和实验操作方法。
二、基本原理选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD 50计算的设计原料则将动物分成数个染毒组。
一次或24h 内多次给予受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计算半数致死量（LD 50）。
据此分析受试物毒性反应与剂量的关系，并根据LD 50值对化学物进行毒性分级。
三、实验材料1、器材 1ml 注射器、烧杯、电子天平、苦味酸、镊子、剪刀、酒精棉球等。
2、药品 0.4％回苏灵注射液（经预试验后按比例稀释）。
3、动物 健康成年小白鼠若干只，体重18-22g ，雌雄各半。
四、实验方法 1、预试验（1）探索剂量范围：先找出100%与0%的致死量为实验的上下限剂量，即Dmax 和Dmin 。
取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax ；如降低一剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax 。
同法找出Dmin 。
（2）确定合适的剂量分组方案：组数（n ）以5-8组为宜，根据下面公式计算组间剂量公比r 。
r=1/1min max/ n D D各组剂量分别Dmax 、(Dmax) r 、(Dmax)r2、(Dmax)r3……。
2、正式试验（1）动物的称重、编号和分组： 每组10只动物（雌雄各半），随机分组和用苦味酸编号。
4-1 急性毒性试验概述及染毒方法
第一节急性毒性试验概述及染毒方法一、概念和试验目的(一) 急性毒性概念急性毒性是指机体(人或实验动物)一次(或24小时内多次)接触外来化合物之后所引起的中毒效应，甚至引起死亡。
但须指出化合物使实验动物发生中毒效应的快慢和剧烈的程度，可因所接触的化合物的质与量不同而异。
有的化合物在实验动物接触致死剂量的几分钟之内，就可发生中毒症状，甚至死亡。
而有的化合物则在几天后才显现中毒症状和死亡，即迟发死亡。
此外，实验动物接触化合物的方式或途径不同，“一次”的含义也有所不同。
凡经口接触和各种方式的注射接触，“一次”是指在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内。
而经呼吸道吸入与经皮肤接触，“一次”是指在一个特定的期间内实验动物持续地接触受试化合物的过程，所以“一次”含有时间因素。
(二) 实验目的1.求出受试化合物对一种或几种实验动物的致死剂量(通常以LD50为主要参数)，以初步估计该化合物对人类毒害的危险性。
2.阐明受试化合物急性毒性的剂量－反应关系与中毒特征。
3.利用急性毒性试验方法研究化合物在机体内的生物转运和生物转化过程及其动力学变化。
也可用于研究急救治疗措施。
二、实验动物和染毒方法(一) 实验动物选择在卫生毒理学领域中，体内试验以实验动物为研究对象，最终是为了阐明受试外来化合物对人的急性危害性质和危害强度。
所以选择实验动物时，要求在其接触化合物之后的毒性反应，应当与人接触该化合物的毒性反应基本一致，虽然利用任何一种或几种实验动物的急性毒性结果向人外推都必须十分慎重，但这一选择实验动物的原则仍非常重要。
1.物种选择以选择哺乳动物为主。
目前实际应用中以大鼠和小鼠为主，尤以大鼠使用很多。
需指出大鼠并非对外来化合物都最敏感。
家兔常用于研究化合物的皮肤毒性，包括对粘膜的刺激。
猫、狗也用于急性毒性试验，但因价贵不易于大量使用。
猪为杂食动物，对一些化合物的生物效应表现与人有相似之处，尤其是皮肤结构与人较近似。
但因体大、价贵，不便大量使用。
急性毒性试验设计
实验动物安全
确保实验动物在实验过程中得 到妥善照顾，避免不必要的痛 苦和伤害。
实验室安全
确保实验室安全，采取必要的 安全措施，如防火、防爆、防 毒等。
废弃物处理
按照相关规定处理实验废弃物 ，确保环境安全。
数据分析与解释
描述性统计分析
对数据进行描述性统计分析，如计算均值、中位数、标准差等，以 了解数据的分布情况。
推断性统计分析
根据实验目的和假设，选择合适的统计方法进行推断性统计分析， 如t检验、方差分析、回归分析等。
解释与推论
基于统计分析的结果，对实验结果进行解释和推论，探讨可能的机制 和原因。
结果表达与报告
摄食量
记录动物每日摄食量，分析摄食量与药物摄入量 的关系。
观察指标与记录
血液学指标
检测红细胞、白细胞等 指标，评估药物对血液
系统的影响。
生化指标
检测肝功能、肾功能等 指标，评估药物对内脏
器官的影响。
病理学检查
对动物进行尸检，观察 内脏器官的病理变化。
死亡情况
记录动物的死亡时间和 数量，分析药物的毒性
急性毒性试验设计
汇报人：可编辑 2024-01-11
目录
CONTENTS
• 急性毒性试验概述 • 实验动物与操作规范 • 急性毒性试验设计 • 数据处理与分析 • 急性毒性试验的注意事项与伦理考虑
01 急性毒性试验概述
定义与目的
定义
急性毒性试验是在短时间内对实验动物给予一定剂量的受试物，观察受试物对 实验动物产生的毒性作用和死亡情况，以评价受试物的毒性作用和安全性的试 验。
02 实验动物与操作规范
实验动物选择
实验动物种类
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（4）正式试验前，均须先用少量动物进行预试试验，大 致测出受试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围，然 后安排正式试验。正式试验组数不得少于三个剂量组，一 般选用4～5个剂量组，每组动物数为10～20只。
实验一 急性毒性实验
一、目的与要求
1、学习急性毒性试验的方法，掌握LD50的测定方法。
2、观察马钱子的毒性反应。
二、实验原理
急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的 毒性反应和死亡情况。药物毒性的大小，常用动物的致死 量来表示，因为动物生与死的生理指标较其他指标明显、 客观、容易掌握。致死量的测定也较准确。在测定致死量 的同时，还应仔细观察动物是否出现耸毛、倦卧、耳壳苍 白或充血、突眼、步履蹒跚、肌肉瘫痪、呼吸困难、昏迷、 惊厥、大小便失禁等不良反应。
分组完毕和各组剂量算出后，分组灌服或注射不同剂量的 受试药物。为能得到理想的结果，实验最好从中间剂量开 始，以便从最初几个剂量组动物接受药物后的反应来判断 两端剂量是否合适，便于调整剂量和组数。为了提高实验 的精确度和节省药物，受试药物可按“低比稀释法”配置。 即使每只动物的用药体积相等（0.2ml/10g），而溶质不 等。给药后逐日观察并记录中毒反应、死亡率和死亡情况。
2、正式实验：在预试实验测得Dn和Dm的剂量范围内设4～6个剂量 组，最多10组。最理想的结果是使LD50的上下各有2～3组。组数愈 少，准确性愈差。各剂量组的动物要求相等，至少10只动物（分组时 应注意分层随机均匀化的原则）。本实验要求最大反应率为100%， 最小反应率为0%， 或至少反应率接近100%或0%。组间剂量比值（1： K），常用1：0.8或1：0.75。如实验中出现相邻剂量有重复的100% 和0%反应率时，应将靠边的组弃去不计，使大剂量组只有一个100% 的反应率，小剂量组也只有一个0%的反应率。
（1）动物：均选用体重17～22克健康小鼠（同次试验体 重相差不得超过4克），或选用体重120～150克（同次试 验体重相差不得超过10克）健康大鼠作实验动物。性别相 同或雌雄各半。
（2）给药途径：要求采用两种给药途径，其中必须有一种与临 床所采用的相同。溶于水的药物沿须测定静脉注射的LD50。 值得提出的是，临床上虽然不用腹腔注射，但动物实验因腹 腔注射给药方便，吸收迅速，颇为常用。若供试药物在腹腔 内不引起强烈刺激或局部变化（如纤维性病变等），那么啮 齿类动物腹腔注射的LD50，参数很接近于静脉给药的LD50。 口服制剂无法通过注射给药途径时，可只用胃肠给药。
四、操作方法
1、预试实验：预试实验目的是为了找出引起动物0%（Dn）和100量动 物（6～9只小鼠）进行，将动物随机分为3组，组间剂量比值一般以1： 0.5或1：0.7为宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g体重为度。预试实 验应进行到找出Dn和Dm后方可安排正式实验。
（5）报告LD50时需注明实验动物的种属及品系、性别、 体重范围、给药途径及每个剂量组动物数等，还需注明受 试药物的配制方法、给药剂量、各组剂量间的比值（一般 以0.65～0.85为宜）、给药容积、观察时间及计算方法。
还须标出LD50的95%可信限。
三、实验材料和试剂
动物：小鼠 药品：马钱子水煎液 器材：注射器、灌胃针头、鼠笼
LD50的平均可信限= LD50±（LD50高限-
LD50低限）/2
Xm：最大剂量组剂量的对数值
i：相邻两组剂量（d）对数值之差，或相邻
两组高剂量与低剂量之比的对数。
P：各组动物的死亡率，用小数表示。
ΣP：为各组动物死亡率的总和。
n：每组动物数。
Sx50：logLD50的标准误。
五、实验结果记录与计算
组 剂量 Logd(X) 死亡数 死亡率 P2
别 g/kg(d)
（P）
1
P-P2
2
3
4
公式1: （logLD50） X50=Xm-i(ΣP-05)
则LD50=log-1 X50
公式2： Sx50=i*
公式3：LD50的95%可信限=lg-1（X50±1.96S X50）
致死量的测定常以半数致死量为标准。半数致死量是指能 够引起试验动物一半死亡的剂量，妈药物致死量对数值， 用符号LD50表示。由于LD50的测定较简便、可靠，而且 稳定，现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数。 LD50测定的方法有多种，如Bliss法、改进寇氏法、简化 机率单位法、累积插值法、机率单位-加权直线加归法等 等。以上方法虽各有特点，但都有共同的要求：