质粒的分子生物学与质粒载体

第三章质粒的分子生物学与质粒载体

一、填空题

1．基因工程中有3种主要类型的载体：——-------、------------一、-----------.

2.由于不同构型的DNA插入EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA的泳动速度—----------—，OC DNA泳动速度—---------—，L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染色的方法可将不同构型的DNA分别开来。

3.质粒的复制像染色体的复制一样，是从特定的起始点区开始的。然而，质粒的复制可以是—---—向的、或是—----—向的。在杂种质粒中，每个复制子的起点都可以有效地加以使用。但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。并认为：当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下—------—的复制起点可能被苯闭。

4.就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：—-----—、—---------—、—----------------—。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。

5.如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中，则属于—---------—群，这是因为它们的——————————所致。

6.质粒拷贝数是指细胞中—------------------------—。

7.复制子由三部分组成：(1)—-----------------—---(2)——-----------————(3)—--------------—。

8.酵母的2μm质粒有------------，可以配对形成哑铃结构。

9.一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫----------------。

10.pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于----——，它的四环素抗性基因来自于—-----------—，它的氨苄青霉素抗性基因来自于—---------—。

11.质粒的消失同染色体基因的突变是不同的，前者不能恢复，后者可以通过—------—恢复该基因的性状。

12.ColEl质粒复制的起始需要三种酶，即—-----------—、一------------和一------。

13．YAC的最大容载能力是—-----------—，BAC载体的最大容载能力是—---------—。

14．pSCl01是一种---------——复制的质粒。

15．把那些没有可检测表型的质粒称为—--------------—。

16．转座子主要由下列部分组成：(1)—-----————————(2)---------------——

(3)—----------------—。

17．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过——---------和——两种质粒改造而来。它的复制子来自—----------—，Amp抗性基因则是来自—--------—。

18．在基因型的表示中，符号Ω表示—-----------—；符号△表示—--------------—。

二、判断题

1．迄今发现的质粒DNA都是环状的。

2．线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。

3．有a、b、c三个质粒，因为a和b能够共存于一个细胞，a和c也可共存于同一个细胞，所以b和c一定能够共存于同一个细胞。

4．插入元件(1S)也是一种转座元件，它除了有转座酶基因外，还有附加基因。

5．如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和群。

6．一个带有反向重复序列的双链DNA经变性后，复性时其单链可形成发夹环。

7．能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。

8．任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。

9．只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。

10．CsCl-EB密度梯度离心法纯化SC DNA原理是根据EB可以较多地插入到SC DNA中，因而沉降速度较快。

11．质粒ColEl同pSCl01共整合后，得到重组质粒pSCl34，具有两个复制起点，这两个起点在任何细胞中都是可以使用的。

12．pBR322可以用于黏性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连接，都可以用同一种酶回收外源片段。

13．所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。

14．一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。

15．ColEl是惟一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。

16．某一染色体DNA经内切酶Sal I切割后，产生了若干个具有黏性末端的DNA片段，将这些片段分别在T4 DNA连接酶的作用下自身连接成环，然后导人受体细胞，都可以进行独立地复制。

17．如果细菌的某种表型特征在UV处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的。

18．基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。

三、选择题(单选或多选)

1．线性质粒复制的引物来自于( )

(a)细胞中合成的小分子RNA

(b)自身末端的端粒序列

(c)外加的寡聚DNA

(d)自身断裂的小分子DNA

2．下面关于松弛型质粒(relaxedplasmid)性质的描述中，( )是不正确的

(a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数

(b)可以在氯霉素作用下进行扩增

(c)通常带有抗药性标记

(d)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子

3．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体

(a)pBR322 (b)pSCl01

(c)pUBll0 (d)pUCl8

4．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?( )

(a)质粒

(b)黏粒

(c)酵母人工染色体(YAC)

(d)λ噬菌体

(e)cDNA表达载体

5．反向重复序列：( )

(a)可以回折形成发夹结构 (b)可以是某些蛋白的结合位点

(c)参与转座子的转座 (d)12 1-说法都不对

6．松弛型质粒： ( )

(a)在寄主细胞中拷贝数较多 (b)可用氯霉素扩增

(c)一般没有选择标记 (d)上述(a)、(b)两项正确

7． ColEl是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒： ( )

(a)是松弛复制型 (b)具有四环素抗性

(c)能被氯霉素扩增 (d)能产生肠杆菌素

8．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( )

(a)OC DNA>SC DNP>LDNA (b)SC DNA>L DNA>OC DNA

(c)L DNA>OC DNA>SC DNA (d)SC DNA>OC DNA>L DNA