质粒的分子生物学与质粒载体
质粒的作用
质粒的作用质粒（Plasmid）是细菌及其他真核细胞的一种重要遗传物质，是一个小而圆形的DNA分子，独立于细胞核的DNA存在。
质粒具有自主复制的能力，能够在细菌或真核细胞中独立地复制和传递，起到了多种重要的生物学作用。
质粒的主要作用有以下几个方面：1. 基因的存储和传递：质粒可以携带和传递大量的外源基因，包括抗生素耐药基因、亮蓝G、绿色荧光蛋白等重要的基因。
通过将外源基因插入质粒中，可以将其导入目标细胞，实现基因的转染。
这对于基因工程、基因治疗等研究具有十分重要的意义。
2. 分子克隆：分子生物学研究中，质粒是最常用的载体。
通过质粒的复制特性，可以大量地扩增目标腺病，以满足后续实验操作的需要。
同时，质粒载体还可以通过目的基因重组、限制性内切酶消化和连接等方法实现目标基因的插入、替换和删除，为后续功能研究和基因表达提供了便利。
3. 细胞遗传工程：质粒可以在细胞内进行重组，将目标基因插入到质粒中，然后将质粒导入到目标细胞中，从而改变目标细胞的遗传特性。
例如，通过将外源基因插入质粒并导入细菌中，实现细菌的遗传改造，使其具备特殊功能，例如合成某种特殊物质、分解有毒物质等。
此外，质粒还可用于构建RNA干扰（RNAi）系统，用于基因沉默和功能分析。
4. 目标基因表达：质粒可以用于在宿主细胞中实现目标基因的表达。
通过将目标基因与适宜的启动子和调控元件连接，并将其插入到质粒中，再将质粒导入到宿主细胞内，目标基因就可以在宿主细胞内转录和翻译。
这为大规模生产重组蛋白、对基因的功能进行研究提供了有力的手段。
总之，质粒作为一种重要的遗传物质，在生物学研究和应用中具有极为广泛的应用价值。
通过质粒的存储和传递，可以实现基因的克隆、表达和改造，为疾病研究、基因治疗和农业生产等领域提供了重要的工具和平台。
质粒研究对于解析基因功能、探索生命奥秘和推动生物科技的发展具有重要的意义。
质粒载体名词解释
质粒载体名词解释
质粒载体是分子生物学中非常重要的一种实验工具。
它们制造了一种由DNA链组成的小环状结构，这种结构可以被用来储存和传输遗传物质。
这类单个元件称为“质粒”，它们是一种可以携带遗传物质的载体，以便转移到其他生物体中。
质粒载体可以在生物体内或外部制备，最常见的质粒载体类型包括重组DNA质粒、脱氧核糖核酸质粒和反转录质粒。
重组DNA质粒可以携带大量的DNA，是植物转基因的常用载体。
脱氧核糖核酸质粒和反转录质粒则可以把复杂的基因表达转换成活性的蛋白质，在细胞分裂、凋亡等过程中扮演重要角色。
质粒载体一般由三个部分组成：表达载体、质粒引物和抗性基因。
表达载体是携带转录组分子的大分子，质粒引物用来引导特定的DNA 片段，而抗性基因是防止质粒中的DNA被非特异性酶切的基因。
质粒载体的应用非常广泛，它们可以用来传输特定的DNA片段，影响基因表达，从而改变植物的外观、抵抗传染病等。
此外，质粒载体也可以用来制备特异性的抗原，用于诊断和治疗许多疾病，其中包括癌症、HIV等。
由于质粒载体的巨大潜力，现在全球科学家正在努力开发出更好的质粒载体，以帮助实现从植物转基因到药物新研发的宏伟目标。
通过不断改进分子技术，期望借助质粒载体能够研发出更多有效的药物和抗疾病的新型疫苗，从而提高人类的健康水平。
总之，质粒载体是一种重要的分子生物学实验工具，它可以携带
遗传物质并转移到其他生物体中，这样就能够产生新的基因表达，从而改变植物的外观和抵抗力。
由于质粒载体的多种功能，它已经成为实现植物转基因和新药研发的核心技术，未来仍将继续发挥重要作用。
质粒载体的知识点
质粒载体的知识点1. 什么是质粒载体？质粒载体是一种常见的DNA分子，在分子生物学研究中广泛应用。
它是一种环状的DNA分子，具有自主复制和传递的能力，能够携带外源DNA序列并在细胞内进行复制和表达。
2. 质粒载体的特点质粒载体具有以下几个特点：•自主复制能力：质粒载体可以独立于宿主细胞的染色体进行复制，从而实现外源DNA的复制。
•传递能力：质粒载体可以在细菌、酵母等微生物细胞中传递，从而实现外源DNA的表达。
•多样性：质粒载体种类繁多，可以根据实验需要选择不同的质粒载体来进行研究。
•多拷贝数：质粒载体通常具有多个拷贝数，使得外源DNA在细胞中得到高效复制和表达。
3. 质粒载体的结构质粒载体通常由以下几个部分组成：•起始子：负责启动质粒载体的复制过程。
•多个限制酶切位点：用于将外源DNA序列插入到质粒载体中。
•选择标记：帮助筛选携带质粒载体的细胞，例如抗生素抗性基因。
•表达元件：包括启动子、终止子和转录调控序列，用于控制外源DNA的表达水平。
4. 质粒载体的应用质粒载体在分子生物学研究中有广泛的应用，包括：•基因克隆：质粒载体可以用于将外源DNA序列引入到细胞中，从而克隆目标基因。
•基因表达：质粒载体可以用于外源基因的表达，从而研究其功能和调控机制。
•基因敲除：质粒载体可以用于引入RNA干扰或基因敲除工具，从而研究基因的功能。
•疫苗研究：质粒载体可以用于构建疫苗候选物，进行疫苗研究和疫苗开发。
5. 质粒载体构建的步骤质粒载体的构建通常包括以下步骤：1.选择质粒载体：根据实验需求选择合适的质粒载体，包括质粒大小、拷贝数和选择标记等因素。
2.线性化质粒载体：使用适当的限制酶切酶将质粒载体线性化，以便后续插入外源DNA序列。
3.插入外源DNA：将目标DNA序列与线性化质粒载体连接，并使用DNA连接酶进行连接反应。
4.转化宿主细胞：将质粒载体导入宿主细胞中，可以使用化学方法或电穿孔等技术实现质粒转化。
5.筛选正品系：根据质粒载体携带的选择标记进行筛选，例如使用抗生素选择培养基筛选带有抗生素抗性的细胞。
质粒分子生物学与质粒技术
图1-10 F质粒接合转移区的结构（66.6-100 kb区） 质粒接合转移区的结构（66. kb区
traA：性菌毛亚基； traA：性菌毛亚基； traS和traT：表面排斥； traS和traT：表面排斥； traY：缺口酶； traY：缺口酶； traN和traG：杂交对稳定； traN和traG：杂交对稳定； traM：转移信号； traM：转移信号； traI：DNA解旋酶 traI：DNA解旋酶； 解旋酶；
traD：驱动单链DNA转移 traJ、finO、finP： traD：驱动单链DNA转移；traJ、finO、finP：调节基因 转移；
3.2 细菌染色体的诱动
细菌的染色体与质粒的转移原点oriT序列共 细菌的染色体与质粒的转移原点oriT序列共 价连接， 染色体作为质粒DNA 的延伸部分被转 价连接 ， 染色体作为质粒 DNA的延伸部分被转 移 。 可以利用这一功能定位染色体基因 ， 以及 可以利用这一功能定位染色体基因， 获得含有染色体片段的质粒。 获得含有染色体片段的质粒。
毒力基因（22）：virA, virB1B2B3B4B5B6B7B8B9B10B11, virC1C2, 毒力基因（22）：virA, virB1B2B3B4B5B6B7B8B9B10B11, virC1C2, virD1D2D3D4, virE1E2, virG, virD1D2D3D4, virE1E2, virG, virH T-DNA基因（16）：tms1, tms2, tmr, nos, acs(2), e, 5, 6a, 6b, 21-h, DNA基因（16）：tms1, tms2, tmr, nos, acs(2), 6a, 6b, 21rolBrolB-h, 5-h, IS ORF(2), tiorf174 ORF(2), tiorf174 复制基因（3）：repA, reB, 复制基因（3）：repA, reB, repC 接合基因（20）：traCDG, traAFB, traM, traR, traI, 接合基因（20）：traCDG, traAFB, traM, traR, traI, trbBCDEJKLFGHI 其它基因（50）；未鉴定的ORF（84） 其它基因（50）；未鉴定的ORF（84） 引自：K. 引自：K. Suzuki et al. / Gene 242 (2000) 331-336 331-
现代微生物遗传学-第三章质粒课件
质粒在生物能源开发中的应用
要点一
总结词
要点二
详细描述
质粒在生物能源开发中具有重要作用，可以用于构建高效 生物燃料生产菌株。
质粒可以携带与生物燃料生产相关的基因，将其转移至微 生物中，从而构建出能够高效生产生物燃料的菌株。例如 ，可以利用质粒将油脂合成酶基因转移至酵母菌中，构建 出能够高效生产生物柴油的菌株。此外，质粒还可以用于 提高微生物对光能的利用率，从而构建出能够高效生产太 阳能的微生物。因此，质粒在生物能源开发中具有重要作 用。
详细描述
20世纪60年代，科学家们开始对质粒进行更深入的研究，探索其复制机制和遗传特性。他们发现质粒可以在细菌 细胞内独立于染色体复制，并且可以在不同细菌之间转移和遗传。这些发现为后来的基因工程和分子生物学研究 奠定了基础。
质粒的遗传学研究
总结词
质粒的遗传学研究涉及到多个方面，包括质粒的复制、转录、表达以及质粒与宿主细胞 的相互关系等。
代谢能力
质粒携带的基因可以影响细菌的 代谢能力，帮助细菌在特定环境 下生存和繁殖。
质粒与细菌的进化
基因水平转移
质粒是细菌间基因水平转移的主要载体，有 助于细菌获得新的遗传物质和进化。
协同进化
质粒上的基因与其他细菌基因协同进化，形成复杂 的基因网络，影响细菌的进化方向。
适应性进化
质粒携带的基因可以促进细菌的适应性进化 ，使其更好地适应不断变化的环境。
终止子的作用
终止子是一个特殊的DNA序列，它能够终止复制子的复 制，确保质粒的复制不会无限进行下去。
质粒的复制
复制的起始
复制的调控
质粒的复制起始于复制起始位点，该 位点通常是一个特定的DNA序列，能 够被质粒编码的复制蛋白识别并与之 结合。
质粒的分子生物学与质粒载体
质粒的分⼦⽣物学与质粒载体第三章质粒的分⼦⽣物学与质粒载体⼀、填空题1．基因⼯程中有3种主要类型的载体：——-------、------------⼀、-----------.2.由于不同构型的DNA插⼊EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA的泳动速度—----------—，OC DNA泳动速度—---------—，L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染⾊的⽅法可将不同构型的DNA分别开来。
3.质粒的复制像染⾊体的复制⼀样，是从特定的起始点区开始的。
然⽽，质粒的复制可以是—---—向的、或是—----—向的。
在杂种质粒中，每个复制⼦的起点都可以有效地加以使⽤。
但是在正常条件下只有⼀个起点可能居⽀配地位。
并认为：当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下—------—的复制起点可能被苯闭。
4.就克隆⼀个基因(DNA⽚段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：—-----—、—---------—、—----------------—。
另外，⼀个理想的质粒载体必须具有低分⼦量。
5.如果两个质粒不能稳定地共存于同⼀个寄主细胞中，则属于—---------—群，这是因为它们的——————————所致。
6.质粒拷贝数是指细胞中—------------------------—。
7.复制⼦由三部分组成：(1)—-----------------—---(2)——-----------————(3)—--------------—。
8.酵母的2µm质粒有------------，可以配对形成哑铃结构。
9.⼀个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养⼀段时间后，⼀部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫----------------。
10.pBR322是⼀种改造型的质粒，它的复制⼦来源于----——，它的四环素抗性基因来⾃于—-----------—，它的氨苄青霉素抗性基因来⾃于—---------—。
质粒载体测序报告
质粒载体测序报告1. 引言质粒载体是一类广泛应用于分子生物学和基因工程研究的工具。
通过质粒载体，研究人员能够将外源基因导入到目标细胞中，实现基因的表达和功能分析。
质粒载体测序报告旨在对质粒载体进行全面的测序分析，以确定其序列信息，并评估其质量和适用性。
2. 实验流程质粒载体测序通常包括以下步骤：1.质粒提取：将质粒提取出来，通常采用离心、酚-氯仿提取或商用提取试剂盒等方法。
2.质粒纯化：通过离心、凝胶电泳等方法，将质粒与其他细胞成分分离。
3.质粒测序文库制备：将质粒线性化并连接适当的测序引物，反应后通过PCR扩增文库。
4.高通量测序：将质粒文库装入Illumina或其他测序平台中进行高通量测序。
5.数据分析：对测序数据进行质量控制、序列拼接和序列注释等分析。
3. 数据质量控制在质粒载体测序过程中，数据质量控制是必不可少的一步。
常见的数据质量控制指标包括测序错误率、Q值分布和序列长度分布等。
通过对质量较低的序列进行滤除或修剪，可以提高后续数据分析的精确性和准确性。
4. 序列拼接与注释在质粒测序后，通常需要对产生的序列进行拼接和注释以获取准确的质粒序列信息。
序列拼接主要通过比对软件如Bowtie、BLAST等将测序reads 结合在一起。
而序列注释则是通过比对测序 reads 到已知的数据库，如GenBank、NCBI等，以获得质粒中的潜在功能元件。
5. 结果和讨论通过对质粒载体测序的实验和数据分析，我们得到了以下结果：1.质粒载体序列：经过拼接和注释，我们获得了质粒载体的完整序列，长度为XXX bp。
2.质量评估：通过数据质量控制，我们对测序数据进行了过滤和修剪，确保了序列的准确性和可靠性。
3.序列注释：通过将测序 reads 比对到已知基因库，我们对质粒中的潜在功能元件进行了注释，包括启动子、终止子、转录因子结合位点等。
4.比对结果：我们将质粒序列与已知质粒库进行了比对，发现该质粒与已知质粒高度相似，符合预期。
基因工程载体--质粒
• F因子是雄性决定因子，F+细胞表面可以形 因子是雄性决定因子， 因子是雄性决定因子 成一种叫做性须（pilus）的结果，它促使 成一种叫做性须（ ） 的结果， 经性须进入F 细胞。 细胞则变为F 细胞。 F+经性须进入 -细胞。F-细胞则变为 +细胞。 F因子可以通过接合作用自我转移，也能够 因子可以通过接合作用自我转移， 因子可以通过接合作用自我转移 带动寄主染色体一道转移。 F因子的这种 带动寄主染色体一道转移。但F因子的这种 整合过程是可逆的。在一定条件下， 细 整合过程是可逆的。在一定条件下，Hfr细 胞又可重新变为F+或F-细胞。 胞又可重新变为 细胞。 • 基因工程多选用非接合型质粒，主要安全 基因工程多选用非接合型质粒， 角度考虑
大肠杆菌质粒分子的结构示意图
环形质粒分子 环形质粒分子
环形染色体DNA 环形染色体DNA
大肠杆菌细胞 抗菌素抗性基因
质粒DNA 质粒
控制质粒DNA转移的基因 控制质粒DNA转移的基因 质粒DNA
质粒主要包括几个组成部分
• • • • • 复制子（ 复制子（reilcator） ） 复制起始位点(replication origin site) 复制起始位点 多克隆位点（ 多克隆位点（Polylink）(MCS) ） 辅助序列(COS位点等 位点等) 辅助序列 位点等 选择标记(LacZ,抗性等 抗性等) 选择标记 抗性等
基 因 工 程 载体
南 京 农 业 大 学
陈 溥 言
概
述
基因工程是利用酶学方法将不同来源的 DNA或cDNA，在体外切割、修饰、连接插 或 ，在体外切割、修饰、 入到不同目的的基因工程载体中，进行扩 入到不同目的的基因工程载体中， 增和表达，研究基因结构和功能， 增和表达，研究基因结构和功能，基因和 蛋白质关系的一种分子生物学技术。 蛋白质关系的一种分子生物学技术。
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第三章质粒的分子生物学与质粒载体一、填空题1．基因工程中有3种主要类型的载体：——-------、------------一、-----------.2.由于不同构型的DNA插入EB的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA的泳动速度—----------—，OC DNA泳动速度—---------—，L DNA居中，通过凝胶电泳和EB染色的方法可将不同构型的DNA分别开来。
3.质粒的复制像染色体的复制一样，是从特定的起始点区开始的。
然而，质粒的复制可以是—---—向的、或是—----—向的。
在杂种质粒中，每个复制子的起点都可以有效地加以使用。
但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。
并认为：当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下—------—的复制起点可能被苯闭。
4.就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：—-----—、—---------—、—----------------—。
另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
5.如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中，则属于—---------—群，这是因为它们的——————————所致。
6.质粒拷贝数是指细胞中—------------------------—。
7.复制子由三部分组成：(1)—-----------------—---(2)——-----------————(3)—--------------—。
8.酵母的2μm质粒有------------，可以配对形成哑铃结构。
9.一个带有质粒的细菌在有EB的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫----------------。
10.pBR322是一种改造型的质粒，它的复制子来源于----——，它的四环素抗性基因来自于—-----------—，它的氨苄青霉素抗性基因来自于—---------—。
11.质粒的消失同染色体基因的突变是不同的，前者不能恢复，后者可以通过—------—恢复该基因的性状。
12.ColEl质粒复制的起始需要三种酶，即—-----------—、一------------和一------。
13．YAC的最大容载能力是—-----------—，BAC载体的最大容载能力是—---------—。
14．pSCl01是一种---------——复制的质粒。
15．把那些没有可检测表型的质粒称为—--------------—。
16．转座子主要由下列部分组成：(1)—-----————————(2)---------------——(3)—----------------—。
17．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。
pUC系列的载体是通过——---------和——两种质粒改造而来。
它的复制子来自—----------—，Amp抗性基因则是来自—--------—。
18．在基因型的表示中，符号Ω表示—-----------—；符号△表示—--------------—。
二、判断题1．迄今发现的质粒DNA都是环状的。
2．线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。
3．有a、b、c三个质粒，因为a和b能够共存于一个细胞，a和c也可共存于同一个细胞，所以b和c一定能够共存于同一个细胞。
4．插入元件(1S)也是一种转座元件，它除了有转座酶基因外，还有附加基因。
5．如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和群。
6．一个带有反向重复序列的双链DNA经变性后，复性时其单链可形成发夹环。
7．能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。
8．任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。
9．只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。
10．CsCl-EB密度梯度离心法纯化SC DNA原理是根据EB可以较多地插入到SC DNA中，因而沉降速度较快。
11．质粒ColEl同pSCl01共整合后，得到重组质粒pSCl34，具有两个复制起点，这两个起点在任何细胞中都是可以使用的。
12．pBR322可以用于黏性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连接，都可以用同一种酶回收外源片段。
13．所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。
14．一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。
15．ColEl是惟一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。
16．某一染色体DNA经内切酶Sal I切割后，产生了若干个具有黏性末端的DNA片段，将这些片段分别在T4 DNA连接酶的作用下自身连接成环，然后导人受体细胞，都可以进行独立地复制。
17．如果细菌的某种表型特征在UV处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的。
18．基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。
三、选择题(单选或多选)1．线性质粒复制的引物来自于( )(a)细胞中合成的小分子RNA(b)自身末端的端粒序列(c)外加的寡聚DNA(d)自身断裂的小分子DNA2．下面关于松弛型质粒(relaxedplasmid)性质的描述中，( )是不正确的(a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数(b)可以在氯霉素作用下进行扩增(c)通常带有抗药性标记(d)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子3．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体(a)pBR322 (b)pSCl01(c)pUBll0 (d)pUCl84．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?( )(a)质粒(b)黏粒(c)酵母人工染色体(YAC)(d)λ噬菌体(e)cDNA表达载体5．反向重复序列：( )(a)可以回折形成发夹结构 (b)可以是某些蛋白的结合位点(c)参与转座子的转座 (d)12 1-说法都不对6．松弛型质粒： ( )(a)在寄主细胞中拷贝数较多 (b)可用氯霉素扩增(c)一般没有选择标记 (d)上述(a)、(b)两项正确7． ColEl是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒： ( )(a)是松弛复制型 (b)具有四环素抗性(c)能被氯霉素扩增 (d)能产生肠杆菌素8．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( )(a)OC DNA>SC DNP>LDNA (b)SC DNA>L DNA>OC DNA(c)L DNA>OC DNA>SC DNA (d)SC DNA>OC DNA>L DNA9． pBR322是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自：( )(a) ColEl (b)Ri质粒 (c)pSCl01 (d)pUCl810．关于质粒的相容性，下面哪一种说法不正确? ( )(a)不同相容群的质粒能够共存于同一个细胞(b)质粒可以分成若干个不相容群，但不能分成若干个相容群(c)如果a、b两种质粒不相容，说明它们的复制机制相同(d)属于同一个不相容群中的质粒，不仅复制机制相同，而且拷贝数和分子量也相同11．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( )(a)在不同的宿主中具有不同的复制机制(b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点(c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶(d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率12．能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( )(a)charomid (b)plasmid (c)cosmid (d)phagemid13．第一个作为重组DNA载体的质粒是( )(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl814．Ti质粒：( )(a)可从农杆菌转到植物细胞中(b)作为双链DNA被转移(c)在植物中导致肿瘤(d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素(e)需要细菌的vir基因帮助转移(f)在植物细胞中作为染色体外质粒四、简答题1． YAC载体具有什么样的功能性DNA序列?为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性？2．列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
3．什么叫穿梭载体?4．说明减少质粒和噬菌体载体上某种酶的识别位点的方法和原理。
5．虽然质粒的带动转移给质粒载体的安全性带来一定的困难，但是通过带动转移将质粒转移到特定的受体菌中也是基因工程中常用的实验技术。
请举一例说明之。
6．为什么来自HfrⅹF-的重组体几乎总是F-?7．解释为什么不同的Hfr菌株具有不同的转移起点和方向?8．怎样从一个E．coli的Hfr菌株中分离到一个F′gal+的菌株?9．你已经分离了一个新的F因子，怎样用最简便的方法知道最初的F因子的部分DNA已经被切除，并被一个外源DNA(也就是细菌DNA)所替代?10．你能用哪一种基因转移的方法确定(1)Kcoli染色体上一个新发现的基因座在其染色体上的位置；(2)一个新分离的突变在基因内的位置。
11．用加有注释的图表说明F质粒是怎样从一个P细胞转移到F细胞。
并简要说明转移复制如何不同于营养体的复制。
五、问答题1．什么是复制子(replicon)?2．什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么?3．什么是质粒的带动转移?4．说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。
5． ColEl衍生质粒拷贝数调节机理的机理是什么?6． R1质粒拷贝数受到怎样的调节控制?7．质粒如何维持在细胞中的稳定?8. 引起质粒不相容性的主要原因是什么?9．由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。
请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面?10．请指出质粒pSCl01的一些生物学特性(包括结构和遗传)及在基因工程中的作用。
11．自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是ColEl和pSCl01这两个自然质粒也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容?12．质粒改造的发展过程如何?13．在质粒中如何增减酶切点?14．有人用限制性内切核酸酶EcoRl分别切割松弛型质粒ColEl和严紧型质粒pSCl01(各有一个切点)，然后重组连接形成一个杂种质粒pSCl34，请推测这种质粒有什么特性和用途。
15．现分离了4种新的大肠杆菌Hfr菌株，通过中断接合实验，针对每一菌株确定了高频转移的标记基因和它们进入F受体的时间分别为：Hfrl Hfr2 Hfr3 Hfr4man 13min mal 29 lys 16 pur 6标记基因和第一 trp 6 met 14 arg 9 trp 3次进入的时间 his 23 thr 4 mal 2 thr 31pur 3 uvr 20 his 32 lac 23gal 14(gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖；arg、his、met、trp：生长需要精氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸；uvr：紫外线敏感)。