中国药典与美英药典微生物限度比较PPT课件
最新中国药典版微生物限度检查及发展趋势PPT课件
除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温 度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～ 28℃（；控制菌培养温度为35～37℃）。
检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10cm2 为单位 报告，特殊品种可以最小包装单位报告。
中国药品生物制品检定所
11
2010年版微生物限度检查法修订
2、附录107页，检验量 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；
中国药品生物制品检定所
5
1、方法和标准的修订与完善
对供试品的前处理和一些检验方法进行了完善；
具有明显的中国特色，与国际差距显著。
计数测定体系的差异：
难以操作，检验繁琐
需气菌总数=细菌数+霉菌及酵母菌？
1000
1000 100
参见：《美英欧药典微生物限度标准的浅析》，苏德模、胡昌 勤、马越，《中国药品标准》，2005年第3期
4
总需气菌、霉菌及酵母菌计数
样品10g或10ml+缓冲液至100ml 取1ml样品液
总需氧菌TSA, 35℃ ,48-72h
真菌SDA(PDA), 20-25℃ ,5-7d
中国药典微生物限度PPT课件
《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： – 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 – 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 – 3、非无菌药品微生物限度标准
1
整体概述
概况一
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概况二
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5
1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动 检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定 的检查方法。
9
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。
6
1.1 Байду номын сангаас则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
各国药典比较ppt课件
英国药典
• 版本简介
英国 The Stationery Office出版社在 2001年五月出版发行的《英国药典 （2001）》（British Pharmacopoeia 2001） 的最新版本。收录有2760篇医药专论，其 中1305篇出自英国本土；其余1455篇套录 自欧洲药典（European Pharmacopiea） （第三版）。
内容基本介绍
• 英国药典是英国制药标准的重要来源。各
条目均以药品名称字母顺序排列，内容包 括药品性质、制法、血产品、免疫产品、 电磁药品制法及外科材料等部分。英国药 典书后附有全部内容关键词索引。不仅为 读者提供了药用和成药配方标准以及公式 配药标准，而且也向读者展示了许多明确 分类并可参照的欧洲药典专著。英国药典 出版周期不定，最新的版本为2004年的第 21版。
日本药典
• 版本简介
由日本药局方编辑委员会编纂，日本厚 生省颁布执行。分两部出版，第一部收载 原料药及其基础制剂，第二部主要收载生 药，家庭药制剂和制剂原料 。2005年11月 22日，日本厚生劳动省制定了日本药典第 15版，废除日本药典第14版。最新版本 JP15拟定生效日期为2006年4月1日。
各国药典比较
基本介绍 • 药典是通过建立国家技术标准来保证人 类和牲畜使用的药物的质量、剂量和药物纯 度和浓度标准的权威性出版物。它是在专业 的，通常是政府的权威人士的监督下进行编 辑，并且是所有药物的制造、分配和药物治 疗所必须遵照的标准 。 • 目前常用的药典标准有英国药典（BP）、 欧洲药典（EP）、美国药典（USP）、德国 药典（DAP）、日本药典（JP）、中国药典 （CP）。
该药典囊括了几千篇颇有价值医学专 题论文，其中有几百篇是医学新论。它不 仅为读者提供了药用和成药配方标准以及 公式配药标准，而且也向读者展示了所有 明确分类并可参照的欧洲药典专著。对于 制药厂和化学工业、政府管理者、医学研 究院及学习制药的学生都是一部必不可少 的工具书。
各国药典微生物方法对比
各国药典微生物方法对比本篇文章旨在比较各国药典中微生物检测方法的不同之处。
微生物检测对于保证药品的质量和安全至关重要，各国药典都提供了相应的指导和标准。
然而，由于各国的文化、法律和技术差异，各国的药典在微生物检测方法上存在一定的差异。
以下将以中括号内的内容为主题，详细介绍各国药典中微生物方法对比。
[美国药典（USP）微生物方法]美国药典（USP）是全球最主要的药典之一，其微生物检测方法有着广泛的应用。
USP推荐的微生物方法主要基于美国食品药品监督管理局（FDA）的要求，主要包括细菌计数、限度测试和特定微生物检测。
其方法的特点在于简单易行、结果可靠且易于验证。
其中，细菌计数方法主要采用菲斯特计数法或冷凝液计数法。
而在限度测试方面，则主要采用的方法是逐级稀释、涂布法和培养法。
USP还明确规定了一些特定微生物的检测方法，如大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌等，其检测方法主要依赖于PCR技术和传统的培养法。
[欧洲药典（Ph. Eur.）微生物方法]欧洲药典（Ph. Eur.）是欧洲地区药典的统一标准，其微生物方法与美国药典存在一定的差异。
Ph. Eur.对微生物检测也有着详细的规定，包括细菌计数、限度测试和特定微生物检测。
在细菌计数方面，Ph. Eur.主要采用薄膜过滤法或蔗糖凝胶法。
而在限度测试方面，Ph. Eur.则主要采用稀释平板法、滚珠法和过滤膜方法。
与USP 不同的是，Ph. Eur.也明确规定了一些特定微生物的检测方法，如霉菌和酵母菌等。
这些检测方法涵盖了PCR技术、酶联免疫吸附试验（ELISA）和传统的培养法。
[中国药典（ChP）微生物方法]中国药典（ChP）是中国主要的药典标准，其微生物方法也存在一定的特点。
ChP的微生物检测主要分为总菌落计数、限度测试和特定微生物检测。
与美欧药典不同的是，ChP对微生物检测方法的规定相对较为简洁。
在细菌计数方面，ChP主要采用的方法有薄膜过滤法、落下法和滚珠法等。
中国药典2020微生物限度检查
中国药典2020微生物限度检查【原创实用版】目录1.2020 版《中国药典》微生物限度检查概述2.非无菌产品微生物限度的检查要点3.微生物限度计数及耐胆盐革兰阴性菌4.药典委发布的相关国家标准草案5.中药饮片微生物限度检查法6.美国药典 USP 微生物限度检查正文2020 版《中国药典》微生物限度检查概述2020 版《中国药典》是药品质量标准的重要参考文献，其中包含了关于微生物限度检查的详细规定。
微生物限度检查是为了确保药品在生产、储存和使用过程中不会受到微生物污染，从而保证药品的安全性和有效性。
本文将对 2020 版《中国药典》中的微生物限度检查进行概述。
非无菌产品微生物限度的检查要点非无菌产品的微生物限度检查是药品质量控制中的重要环节。
根据2020 版《中国药典》的规定，非无菌产品的微生物限度检查主要包括以下几个方面：1.菌种及菌液制备：需要对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌等菌种进行培养，确保培养物的活性和纯度。
2.培养条件：在 35℃的条件下，将新鲜培养物用 pH7.0 的 0.9% 无菌氯化钠溶液进行处理。
3.计数方法：采用适当的计数方法对微生物数量进行测定，如平板计数法等。
微生物限度计数及耐胆盐革兰阴性菌2020 版《中国药典》对微生物限度计数进行了详细的规定，主要包括耐胆盐革兰阴性菌的计数。
在药品生产过程中，需要对耐胆盐革兰阴性菌的数量进行严格的控制，以确保药品的质量和安全性。
药典委发布的相关国家标准草案近日，国家药典委员会发布了《凡例》、《微生物限度检查法》等 5 份国家标准草案。
这些草案对于药品微生物限度检查的标准化和规范化具有重要意义。
中药饮片微生物限度检查法中药饮片微生物限度检查法用于检查中药材及中药饮片的微生物污染程度。
检查项目包括需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、耐热菌总数、耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌、沙门菌等。
中药饮片微生物限度检查的试验环境应符合微生物限度检查的要求，全过程必须严格遵守无菌操作。
美英欧药典微生物限度标准与中国药典的比较
细菌数分的档次有10档
（10，102，2×102, 3×102，5×102，103，104， 105，106，107）。
霉菌和酵母菌数有11档
（ 10 ， 2×10, 5×10 ， 102 ， 15×10 ， 2×102 ， 3×102，5×102，103，104，105）。
菌数的档次分得如此精细，值得研讨。
• USP多数品种检查细菌和霉菌和酵母菌， 少数品种不检查细菌和霉菌和酵母菌。 细菌数、霉菌和酵母菌数分档过多。BP 和EuP多数品种只检查细菌，不检查霉 菌和酵母菌；少数品种检查细菌、霉菌 和酵母菌。细菌数、霉菌和酵母菌数分 档适度。
表2 药物制剂的微生物质量 (BP2002、EuP2002)
不包括抗菌制剂，有关当局同意的原料微生物 污染活菌超过103/g或ml，4类规定的草药除外。
• a.活菌总数，细菌不超过104、霉菌和酵 母菌不超过102/g或ml。
• b.肠道菌和某些其他革兰阴性菌不超过 102/g或ml
• c.不得有沙门菌（10g或10ml）
• d.不得有大肠埃希菌(1g或1ml)
• BP和EuP
• 原料和口服制剂品种绝大多数规定检查 大肠埃希菌，
• 有28个品种规定大肠埃希菌和沙门菌，
• 有6个品种（干燥氢氧化铝、复合-镁加 铝口服干混悬剂等）还规定1g或1ml肠道 菌及某些革兰阴性菌小于102。
• 英欧药典先收载了肠杆菌科及某些革兰 阴性菌的检查方法，而品种项下无限度 规定，直至2002版有6个品种规定了肠杆 菌科及某些革兰阴性菌的限度要求。
类别及要求
• 1类 要求无菌的制剂，按有关专论剂型和其他标准 灭菌的制剂，应符合无菌检查的规定。
• 2类 局部用和呼吸道用制剂，并要求无菌者外
中国药典2015年版微生物限度检查法计数法修订解析PPT课件
适用性检查 白色念珠菌、黑曲霉于20～25 ℃培养不大于5天
与标准培养基比较，恢复率在50% ～200%之间。
备注：该培养基用于控制菌白色念珠菌检查时，同时满足控制菌项下培养基适 用性检查要求。
四、培养基适用性检查
培养基名称 沙氏葡萄糖琼脂+抗生素 （当细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标时用）
无菌性检查 取已灭菌的SDA注皿，于20～25 ℃ 培养不少于5～7天，应无菌生长。
2、供试品前处理
需前处理
供
试
品
不需前处理
①方法适用性试验前处理方法 对污染菌生长、检出的影响。
中和剂 灭活剂
有抑菌作用
去除抑菌作用
②可以通过方法 适用性试验判断
③验证抑菌活性去除的有 效性，以及方法对污染菌 生长、检出的影响
无抑菌作用
检查
三、通用要求
3、微生物计数法适用范围
（1）微生物计数法适用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 （2）明确规定本法不适用于活菌制剂的检查。 （3）明确规定本检查法可采用替代检查方法，包括自动检测方法，但必须
一、修订背景
2、方法科学性和灵活性 （1）准确度：方法适用性试验模拟样品污染
微生物后进行方法试验性验证。 （2）精密度：结果判定以变化范围进行规定，
符合微生物计数规律。 （3）培养体系：采用更适宜的培养体系。 （4）偏差调查：微生物检验结果偏差调查的
引入。 （5）与微生物指导原则、理念有机统一。
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌最适生长温度为37 ℃，白 色念珠菌和黑曲霉最适生长温度为28 ℃，均为嗜温型微生物。
修订前
修订后
细菌数：营养琼脂 30℃～35 ℃ 3天
中、日、美、英四国药典有关药品微生物限度标准的比较
四国药典有关药品微生物限度标准的比较[日期：2005-2-21] 来源：作者：胡敏[1] 胡昌勤* 刘文英2 [字体：大中小]四国药典有关药品微生物限度标准的比较微生物限度规定的作用，是为药品生产提供一个标准或指导，以确保药品使用的安全。
各国药典标准分为强制性的和非强制性的可达到的限度标准，这些指标正确、有效地规范了药品生产、检定和监督的程序。
药品要能反映不引起生物降解物和没有药源性污染的微生物存在是必要的，严格控制条件致病菌及致病菌。
一、CP、USP、BP、JP的微生物限度要求的特点及其发展趋势⒈各国药典收载微生物限度检查法的时间不同(见表1)表1 各国药典收载微生物限度检查法的时间各国药典CP USP BP JP收载微生物限度检查法的时间1995版* 1975（19）1973---方法1988---品种**第十三改正版****1978年颁布第一个药品卫生标准；1986年颁布了修改的药品卫生标准；1989年下发药品卫生标准补充规定和说明1995年版中国药典收载微生物限度检查法（标准仅为少数剂型）**品种98版43个，其中原料药品种38个，制剂品种仅5个。
***仅有6个品种。
⒉品种不断扩大USP版本（年代）19（1975）22（1990）23（1995）24（2000）微生物限度品种数35 140 150 217**217种包括原料药品种72个（占1/3）；制剂品种（占2/3）。
⒊活菌数要求各有特点活菌数（个/1g或1ml）CP BP JP USP需气菌102~3×104 102~107 102~103 10~104真菌0~102 102~105 5×10~5×102 10~103⒋控制菌的要求各有特点CP BP JP USP大肠杆菌+ b + b + b + a沙门菌+ b +a + b + a铜绿色假单胞菌+b + b + b +a金黄色葡萄球菌+b + b + b + a破伤风杆菌+ b梭菌+c肠道菌及其他某些革兰阴性杆菌+ c支原体+分枝杆菌+病毒的其他因子+活螨+ da 10g或10ml样品不得检出。
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pH7.2 磷 酸 盐 缓 冲 液, 大豆酪蛋白消 化培养基, 乳糖液 体培养基
非水溶性 的制剂 （膏剂、 油剂）
其他
司盘80、单硬 脂酸甘油酯、 吐温-80 十四烷酸异丙 酯
不溶于水的膜 剂 肠溶胶囊制备
5 克 吐 温 -20 或 吐 温-80 十四烷酸异丙酯
供试液最终pH调 至7.0
吐温-20 其他助溶剂
乳糖液体培养基 35~37℃24~48h Mac 、 EMB 琼 脂 平板 35~37℃24~48h
+
2021/3/9
授课：XXX
8
7.大肠菌群
CP
BP
USP
检验量（g或 ml） 稀释剂
预增菌
1
pH7.0无菌氯化钠-蛋 白胨缓冲液
1 乳糖肉汤 35~37℃2~5h
增菌 分离 生化试验
0.1g,0.01g0.001g BL 培养基 35~37℃18~24h
气雾剂制备法 样品加稀释剂至培 养基时间不超过 1hr
2021/3/9
授课：XXX
4
4.制剂抑菌作用的确定（阳性对照试验）
CP
BP
控制菌阳 性菌加量 需气菌及 真菌计数
抑菌作用 处理方法 中和法
10~102个
50~100 回收率大小于 70%判断是否
有抑菌作用
+
102个
25~200个金葡、白念、枯 草、大肠菌在有无制剂存 在下生长的稀释级差别大 小判断是否有抑菌作用
+
凝固酶、
授课：XXDXNA酶
大豆酪蛋白消化培养 基
大豆酪蛋白消化培养 基 35~37℃24~48h
VJ(甘露醇氯化锂)琼 脂、MS(甘露醇氯化 钠 ) 琼 脂 、 BP 琼 脂 平 板 35~37℃24+~48h
11
10.沙门菌
CP
BP
USP
检验量
1 （g或ml）
稀释剂 增菌
09%氯化钠溶液、 pH7.0氯化钠蛋白
EMB或Mac.C琼脂平板
35~37℃ 18~24h
+
0.1g,0.01g,0.001g 乳 糖肉汤培养基 35~37℃24~48h VRB.琼脂平板 35~37℃ 18~24h
-
2021/3/9
授课：XXX
9
8. 铜绿假单胞菌
CP
BP
USP
检验量 稀释剂 增菌 分离
1 （g或ml）
09%氯化钠溶液 pH7.2 磷 酸 盐 缓 冲液
胨缓冲液
营养肉汤培养基 35~37℃18~24h
二 次 增 TTB培养基
菌
35~37℃18~24h
分离
生化试 验 2021/3/9
EMB 、 Mac.C 、 DHL 、 SS 琼 脂 平 板
35~37℃1+8~24h
10 （g或ml）
pH7.0氯化钠蛋白 胨缓冲液
大豆酪胨肉汤 35~37℃18~24h
预增菌
增菌
分离
生化试验
1
09%氯化钠溶 液
BL增菌培养基 35~37℃18~24 h
M-I
35~37℃5、24h
MI及IMViC
1
pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液
大豆酪胨肉汤 35~37℃18~48h Mac 肉汤 43~45℃18~24h Mac.琼脂平板 35~37℃18~72h
+
10 乳糖液体培养基
大豆酪蛋白 消化琼脂
含抗生素的沙 氏葡萄糖琼脂
大豆酪蛋白 消化琼脂
沙氏葡萄糖 琼脂
授课：XXX
6
5.需气菌和真菌计数(续)
稀释级的选 择 培养温度
3个连续稀释级 30~35℃23~28℃
培养时间 （天） 需气菌
2(5~7)
1个 30~35℃20~25 ℃
5
真菌
3(5~7)
5
计数结果
需气菌 真菌
结果报告
胆盐乳糖增菌培 养基 35~37℃18~24h
溴化十六烷基三 甲铵琼脂平板 35~37℃18~24h
生化试
5种
验 2021/3/9
1 （g或ml）
pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液
大豆酪蛋白消化培养基 35~37℃18~48h
Cetrimide琼脂，培养18~72h 大 豆 酪 蛋 白 消 化 培 养 基 41~43℃ 18~48h。薄膜过滤 大豆酪蛋白消化培养基18~48h， Cetrimide琼脂平板
四硫酸盐肉汤培养基
41~43℃18~24h
DC、XLD、BG.琼 脂平板 35~37℃18~72h
中国药典与美英药典微生物限 度检查法的比较
苏德模
2021/3/9
授课：XXX
1
1.收载的检查项目
CP BP
USP
需气菌
+
+
+
真菌
+
+
+
大肠埃希菌
+
+
+
沙门菌
+
+
+
铜绿色假单胞菌
+
+
+
金黄色葡萄球菌
+
+
+
梭菌
+
+
大肠菌群
+
+
+
肠杆菌科及其他某些革兰阴性杆菌
支原体
+
肠道菌、肠杆菌
+
科
分枝杆菌
+
病毒的其他因子
09%氯化钠溶液 pH7.0氯化钠-蛋白
胨缓冲液
pH7.0氯化钠 -蛋白胨缓冲 液
营养肉汤（或含亚 大豆酪蛋白
碲酸甲）培养基
消化培养基
35~37℃18~24h
35~37℃18~4
甘 露 醇 氯 化 钠 琼 脂 8BhP琼h 脂平板 平 板 、 卵 黄 氯 化 钠 35~37℃18~7
琼脂平板
2h
35~37℃24~48h
+
稀释法
+
+
薄膜过滤
+
法
离心沉淀
+
法
2021/3/9
* 0.4%l卵磷脂，4.0%吐温
+
授课：XXX
USP 105~106个 根据控制菌阳 性菌生长的结
果判断
+* + +
5
5.需气菌和真菌计数
方法 平皿法 试管法 薄膜过滤法 培养基
2021/3/9
CP
BP
USP
+
+（浇碟、涂
+
抹）
+
+
+
+
营养琼脂 玫瑰红钠琼脂
+
2021/3/9
授课：XXX
2
活螨
+
2.检验量 CP 取10g或10ml供试品 BP、USP 10g或10ml供试品数份
2021/3/9
授课：XXX
3
3.供试液制备
CP
BP
USP
一般制剂
0.9% 的 氯 化 钠 溶 液 pH7.0 无菌氯化钠蛋白胨缓冲液
乳糖肉汤 pH7.0 氯 化 钠 - 蛋 白胨缓冲液 其他合适培养基
一般30~300
30~100
不 生 长 按 〈10 个 /1g 或ml报告
1g或ml
〈300 〈100
1g或ml
2021/3/9
授课：XXX
2个 30~35℃20~25
℃
2~3 5~7
30~300 不生长按〈10个
/1g或ml报告
1g或ml
7
6.大肠埃希菌
CP
BP
USP
方法
MI法
I法
IMViC法
检验量（g或 ml） 稀释剂
1种（42±1）
授课：XXX
10 （g或ml）
大豆酪蛋白 消化培养基
大豆酪蛋白消 化培养基 35~37℃24~48 h
Cetrimide琼 脂 35~37℃72h
3种
10
9.金黄色葡萄球菌
CP
BP
USP
检验量
1 （g或ml）
1 （g或ml）
10 （g或ml）
稀释剂 增菌 分离
凝固酶 试验2021/3/9